干扰素α-2b联合5-氟尿嘧啶对人肝癌细胞生物学行为的影响

目的检测干扰素(IFNα-2b)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)在体外对肝癌细胞株HepG2的杀伤抑制作用,并探讨可能的作用机制。方法体外复苏、培养人肝癌细胞,并单用IFNα-2b或5-FU,以及不同浓度的IFNα-2b联合5-FU对其进行干预。用MTT法测定IFNα-2b联合5-FU对体外培养的人肝癌细胞生长的抑制率;用HOECHST染色法检测药物对人肝癌细胞凋亡的影响;用免疫细胞化学法检测用药后人肝癌细胞中突变型p53、c-myc表达的变化。结果 IFNα-2b和5-FU都能抑制HepG2细胞生长,并随着作用时间的延长而增强,IFNα-2b与5-FU联合用药比单用IFNα-2b或5-FU抑制效果更明显,并随着浓度的增加和作用时间的延长而增强;IFNα-2b和5-FU均能诱导肝癌细胞凋亡,二药联用时细胞凋亡更明显,可呈剂量依赖性地诱导肝癌细胞凋亡,不同浓度下的凋亡率均明显高于对照组;IFNα-2b和5-FU均可明显抑制突变型p53、c-myc蛋白的表达,二药联用抑制作用更明显。结论IFNα-2b和5-FU联用可呈剂量和时间依赖性地抑制肝癌细胞的增殖,呈剂量依赖性地诱导肝癌细胞凋亡,下调突变型p53、c-myc蛋白的表达,表现出协同作用。这些可能是IFNα-2b和5-FU联合抗癌的部分机制。     

彩色多普勒超声对经动脉灌注碳酸氢钠和维拉帕米提高肝癌肝动脉栓塞化疗疗效研究

目的　研究二维及彩色多普勒血流显像 (CDFI)在对肝癌患者进行肝动脉化疗及栓塞术 (TAE)中 ,经动脉灌注碳酸氢钠和维拉帕米的可行性和临床价值 ,评价对白细胞介素 -2 (IL -2 )、干扰素 (IFN -α 2b)和阿霉素(ADM )、丝裂霉素 (MMC)等药物的增效作用。方法　 3 8例肝癌患者在进行肝动脉化疗及栓塞术时联合碳酸氢钠、维拉帕米、IL -2IFN -α 2b介入治疗。Seldinger技术穿刺经股动脉进入肝动脉血管 ,药物按一定比例稀释后灌注 ,二维及彩色多普勒超声分别于治疗前后测量肿瘤位置、大小、回声情况、肿瘤周边及内部血供情况 ,肝动脉血流动力学改变 ,全程跟踪上述新的治疗方法 ,并结合临床资料综合判断疗效。同期肝癌患者TAE治疗未加碳酸氢钠和维拉帕米作为对照组。结果　经动脉灌注碳酸氢钠和维拉帕米治疗肝癌患者部份缓解率高于对照组 ,二维及彩色多普勒超声表现为肝癌肿块减小 ,肿瘤内部及周边动脉血供和肝动脉血流量明显减少 ,α -FP下降 ,生存时间延长。结论　肝癌患者行TAE治疗时向肿瘤组织灌注碳酸氢钠、维拉帕米可提高IL -2、IFN -α 2b、ADM、MMC等疗效 ,而二维及彩色多普勒超声能对上述新的TAE的疗效和预后提供重要指标 ,给下一步重复治疗提供依据 ,是目前肝癌肝动脉化疗及栓塞治疗前后良好影像学检?     

rIFNα-2b对小鼠脾脏NK细胞活性的影响

目的　研究重组干扰素 α- 2 b(r IFNα- 2 b)对小鼠脾脏 NK细胞杀伤活性的影响 ,了解该干扰素的生物学活性。方法　采用皮下给药的体内实验及 3 H- Td R掺入抑制法检测小鼠脾脏 NK细胞活性。结果　 r IFNα- 2 b能显著提高小鼠脾脏 NK细胞杀伤活性 ,且呈剂量依赖性 ,其高、中、低剂量各组的 NK活性分别为 65 .19± 17.5 6、44 .19± 14.30、35 .46± 17.49,与空白对照及阴性对照均有显著性差异。结论　 r IFNα- 2 b能提高 NK细胞活性 ,并有剂量依赖性。     

α2a或α2b基因工程干扰素对CD4+/CD8+的比值和NK活性的影响

目的　研究不同品牌IFNα2a或IFNα2b的免疫调节作用。方法　采用MTT法进行NK细胞的细胞毒试验和用流式细胞仪测定淋巴细胞CD抗原表达。结果　 2 0 0IU/ml不同品牌的IFNα2a或IFNα2b能促进NK细胞杀伤K562 细胞 ,其杀伤效率可达 35 %左右 ,比不加干扰素对照组NK细胞杀伤效率约 14%均提高了近 2 .5倍 (P <0 .0 5 ) ,可使CD4 /CD8 的比值升高 (P <0 .0 5 )。结论　进口和国产的不同品牌IFNα2a和IFNα2b具有同等的免疫调节功效。     

三氧化二砷及干扰素联用对K562及K562/ADM耐药细胞系的作用

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对K562及其耐药细胞K562／ADM细胞株几种耐药机制的作用，以及干扰素(IFNα-2b)与之联用的效应。方法 采用免疫细胞化学染色及TUNEL原位末端标记检测不同浓度As2O3作用不同时间或与IFNα-2b联用，对K562及K562／ADM细胞相关耐药基因蛋白(P-gp、GST-x、Bcl-2)表达的影响及凋亡诱导作用。结果 K562、K562／ADM细胞表面P-gp蛋白表达无明显改变；As2O3(5，10，20μmol／mL)作用72h可降低K562、K562／ADM细胞GST-π的表达，与对照组比较P＜0．05；As2O3抑制K562、K562／ADM细胞Bcl-2蛋白的表达，诱导细胞凋亡，并有计量时间效应；IFNα-2b与As2O3联用可增强对K562细胞的作用，对K562／ADM细胞未见明显增强效应。结论 As2O3具有抑制K562、K562／ADM细胞GST-π、Bcl-2蛋白的表达及诱导细胞凋亡作用；对P-gp蛋白表达无明显影响；IFNα-2b可增强其对K562细胞的这种作用。     

rhIFNα2a、IFNα2b和IFNα1b、IFNα1b突变体的抗病毒效应的对比分析

目的 进一步研究不同亚型不同品牌基因工程干扰素的抗病毒效应。方法 采用微量细胞病毒（CPE）抑制法进行抗病毒试验。结果 不同品牌IFNα2a或IFNα2b500、50、5IU／ml在Vero细胞上分别可抗1000、100、10TCID50的I型和Ⅱ型单纯疱疹病毒感染细胞;500、50、5IU／ml IFNα1b或IFNα1b突变体,在Vero细胞上分别也可抗8、4、2TCID50的I型和Ⅱ型单纯疱疹病毒感染细胞。结论 进口和国产不同品牌的IFNα2a或IFNα2b对上述2种病毒具有同等抗病毒作用。IFNα1b突变体抗病毒效果和IFNα1b无明显差别。     

细胞因子激活的脐血单核细胞对K562细胞株杀伤作用的观察

[目的 ]观察及评价白细胞介素 2 (IL - 2 )及干扰素 -α(IFN -α)激活的脐血单核细胞对白血病细胞株K5 6 2的杀伤作用。 [方法 ]将细胞因子激活后的各组单核细胞 (Mφ)与K5 6 2细胞株按一定效靶比作用 4 8h ,采用MTT法检测各组的细胞毒效应。 [结果 ]单用IL - 2和单用IFN -α刺激的脐血单核细胞与K5 6 2细胞株作用 (效靶比 2 0∶1) ,其杀伤率分别为 (8.31± 1.32 ) %、(8.75± 0 .85 ) %。IL - 2联合IFN -α激活脐血单核细胞对细胞株的杀伤作用明显增强 ,效靶比 2 0∶1与5 0∶1时 ,杀伤率为 (4 1.5 2± 2 .33) %、(5 2 .6 6± 3.5 0 ) % ,与单用IL - 2及单用IFN -α组比较 ,具有显著性差异 ,P <0 .0 1,并提示杀伤率随效靶比的增加而增加。 [结论 ]IFN -α和IL - 2两者联合激活后的脐血Mφ对白血病细胞株的杀伤作用明显增强 ,杀伤率呈效靶比依赖关系。采用激活的脐血Mφ可用于干细胞移植时清除自体骨髓和外周血内的微小残留病变。     

pH值对端粒酶基因反义核苷酸促进ADM、DDP抑制人肝癌细胞BEL-7404增殖的影响

目的 观察不同pH值对人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡核苷酸(ASODN)促进盐酸阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)抑制人肝癌细胞增殖作用的影响。方法 96孔培养板上进行增殖抑制实验，用不同pH值的RPMI-1640培养液的BEL-7404细胞悬液接种于96孔细胞培养板，第1天加端粒酶基因的反义寡核酸5μmol／L，24、48h后再分别加入2．5μmol／L，24h分别加入DDP、ADM5μmol／L。各pH值下分设hTERT基因的ASODN对照组、DDP组、hTERT基因的ASODN DDP组、ADM组、hTERT基因的ASODN ADM组、BEL-7404细胞对照组，每组各设8个复孔，置37℃恒温箱培养4dMTT法测定结果。结果在培养液pH6．8时，hTERT基因的ASODN能提高DDP和ADM对肿瘤细胞增殖抑制作用，在pH7．3培养液时，hTERT基因的ASODN更能提高DDP和ADM对肿瘤细胞增殖抑制作用更强。结论 在体外，pH值对hTERT基因的ASODN促进ADM、DDP抑制BEL-7404细胞增殖有一定的影响，hTERT基因的ASODN促进ADM、DDP抑制BEL-7404细胞的作用需有培养液的最适pH值。     

不同pH值条件下多柔比星对胃癌BGC823细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的 探讨在不同pH值培养条件下多柔比星(doxorubicin,ADM)对胃癌BGC823细胞增殖、凋亡能力的影响及初步机制研究。 方法 采用细胞活性测定试剂盒(CCK-8)法检测不同pH值培养条件下多柔比星对胃癌细胞BGC823增殖活性的影响;应用Annexin V/PI双染法,在荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态,用流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡率;采用qRT-PCR法检测p-AKT、BCL-2和NF-κB基因在胃癌细胞中的表达。 结果 ①ADM对胃癌BGC823细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)值为5.277 μg/mL,考虑化疗药物毒性及后续实验,ADM剂量选择该细胞株IC₅₀值1/4的浓度(即1.319 μg/mL)用于进行后续实验;②随着pH值升高,ADM对BGC823细胞增殖活性的抑制作用增强,当pH达到7.4时,抑制增殖作用最明显;③随着pH值升高,ADM对BGC823细胞凋亡水平明显增加,当pH达到7.4时,促凋亡作用最明显,再提高pH浓度,促凋亡作用能力不明显;④不同pH(pH 6.8～7.6)环境下,ADM处理后,随着pH升高,BCL-2、NF-κB和p-AKT基因表达水平明显降低。 结论 升高细胞外pH值能明显提高ADM对BGC823细胞抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的能力,这种与pH值相关的ADM抗肿瘤效果可能是通过抑制AKT的磷酸化,阻止NF-κB、Bcl-2等抗凋亡基因表达来实现的。      

rhIFNα2a、IFNα2b和IFNα1b、IFNα1b突变体的抗病毒效应的对比分析

目的进一步研究不同亚型不同品牌基因工程干扰素的抗病毒效应.方法采用微量细胞病变(CPE)抑制法进行抗病毒试验. 结果不同品牌IFNα2a或IFNα2b500、50、5 IU/ml在Vero 细胞上分别可抗1000、100、10 TCID50的Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒感染细胞;500、5 0、5 IU/ml IFNα1b或IFNα1b突变体,在Vero细胞上分别也可抗8、4、2 TCI D50的Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒感染细胞.结论进口和国产不同品牌的IFNα2a或IFNα2b对上述2种病毒具有同等抗病毒作用 .IFNα1b突变体抗病毒效果和IFNα1b无明显差别.     

rhIFNα_(2a)、IFNα_(2b)和IFNα_(1b)、IFNα_(1b)突变体的抗病毒效应的对比分析

目的　进一步研究不同亚型不同品牌基因工程干扰素的抗病毒效应。方法　采用微量细胞病变 (CPE)抑制法进行抗病毒试验。结果　不同品牌IFNα2a或IFNα2b5 0 0、5 0、5IU/ml在Vero细胞上分别可抗 10 0 0、10 0、10TCID50 的Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒感染细胞 ;5 0 0、5 0、5IU/mlIFNα1b或IFNα1b突变体 ,在Vero细胞上分别也可抗8、4、2TCID50 的Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒感染细胞。结论　进口和国产不同品牌的IFNα2a或IFNα2b对上述 2种病毒具有同等抗病毒作用。IFNα1b突变体抗病毒效果和IFNα1b无明显差别。     

重组人干扰素对手足口病大鼠的治疗作用及对Toll样受体/髓样分化因子相关信号分子的影响

目的观察重组人干扰素(rh IFN)α-2b对手足口病大鼠的治疗作用及其对Toll样受体(TLR)/髓样分化因子(MyD88)相关信号分子的影响。方法取郑州儿童医院感染性疾病科分离的肠道病毒71-BJ(EV71-BJ),测定EV71-BJ毒株对7日龄无特定病原级Sprauge Dawley(SD)大鼠的半数致死量(LD50)。另取7日龄无特定病原级SD大鼠60只,随机分为对照组、模型组及rh IFNα-2b低、中、高剂量组,每组12只。模型组及rh IFNα-2b低、中、高剂量组大鼠一次性腹腔注射15倍稀释的LD50EV71-BJ毒株100μL,对照组一次性腹腔注射生理盐水100μL,根据各组大鼠的表现进行临床评分,染毒第4天临床评分3～4分者即为建模成功。取rh IFNα-2b低、中、高剂量组建模成功的大鼠,分别给予2、4、8万单位rh IFNα-2b溶入0. 2 m L生理盐水中肌肉注射,对照组、模型组大鼠肌肉注射0. 2 m L生理盐水,每日1次,连续给药3 d。末次干预后24 h脱颈处死各组大鼠,取腹主动脉血,检测各组大鼠全血T淋巴细胞亚群CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+及血清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-4、IL-10水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测各组大鼠脑组织中TLR2、My D88、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子相关因子6(TRAF-6) mRNA相对表达量; Western blot法检测各组大鼠脑组织中TLR2、My D88、NF-κB、TRAF-6蛋白相对表达量。结果各组大鼠全血CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+、血清IFN-γ、IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、My D88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量比较差异均有统计学意义(F=72.310、57.107、98.928,F=161.175、28.874、22. 637,F=108. 493、122. 121、120. 966、154. 783,F=151. 001、194. 357、89. 442、210. 210,P <0. 05)。与对照组比较,模型组及rh IFNα-2b各剂量组大鼠全血CD4~+、CD4~+/CD8~+及血清IFN-γ水平均显著降低(P <0. 05),全血CD8~+、血清IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、My D88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量均显著升高(P <0.05)。与模型组比较,rh IFNα-2b各剂量组大鼠全血CD4~+、CD4~+/CD8~+及血清IFN-γ水平均显著升高(P <0.05),全血CD8~+、血清IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、MyD88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量均显著降低(P <0. 05)。与rh IFNα-2b低剂量组比较,rh IFNα-2b中、高剂量组大鼠全血CD4~+、CD4~+/CD8~+及血清IFN-γ水平均显著升高(P <0. 05),全血CD8~+、血清IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、MyD88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量均显著降低(P <0. 05)。与rh IFNα-2b中剂量组比较,rh IFNα-2b高剂量组大鼠全血CD4~+、CD4~+/CD8~+及血清IFN-γ水平均显著升高(P <0. 05),全血CD8~+、血清IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、MyD88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量均显著降低(P <0. 05)。结论 rh IFNα-2b可有效改善手足口病大鼠的症状和免疫状态,其中高剂量rh IFNα-2b效果最佳,其作用可能与抑制TLR/MyD88信号通路中相关基因和蛋白表达有关。     

干扰素α-2b联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎的临床研究

目的探讨干扰素α-2b（IFNα-2b）联合病毒唑治疗慢性丙型病毒性肝炎（CHC）的疗效。方法122CHC随机分为2组：A组IFNα-2b联合利巴韦林，B组IFNα-2b。疗程24wk，治疗结束后随访24wk。结果A组的终末病毒学应答（ETVR）率、持续病毒学应答（SVR）率、终末生化应答率、持续生化应答率分别为75．8％、58．1％、83．9％、74．2％，B组分别为31．7％、13．3％、36、7％、16．7％。A组与B组ETVR率、SVR率、终末生化应答率、持续生化应答率经χ^2检验，P值均小于0．01，两组间差异有非常显著性。结论IFNα-2b联合利巴韦林治疗CHC明显优于单独使用IFNα-2b。     

曲妥珠联合干扰素α-2b对肾癌细胞株的影响

目的：了解曲妥珠（Trastuzumab）联合干扰素α-2b（IFN-α-2b）对肾癌细胞在体外的杀伤抑制作用,同时检测肾癌细胞在药物作用前后人表皮生长因子2（HER2）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）的表达情况.方法：肾癌细胞系通过细胞培养技术进行培养,用单四唑（MTT）法和Western blot技术观察曲妥珠联合IFN-α-2b对该细胞系的抑制杀伤效果,进而运用链霉抗生物素-过氧化物酶免疫组化（S-P）法对HER2、ICAM-1表达情况进行测定.流式细胞仪检测用药前后细胞凋亡情况.结果：曲妥珠联合IFN-α-2b对肾癌细胞的生长抑制及黏附性呈时间和剂量依赖性.经药物处理后,HER2、ICAM-1表达差异明显（P＜0.05）.结论：曲妥珠能有效抑制肾癌细胞的生长,对增加瘤细胞的黏附性也有一定影响.     

干扰素α-2b联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎的临床研究

目的 探讨干扰素α-2b(IFNα-2b)联合病毒唑治疗慢性丙型病毒性肝炎(CHC)的疗效.方法 122CHC随机分为2组A组IFNα-2b联合利巴韦林,B组IFNα-2b.疗程24wk,治疗结束后随访24wk.结果 A组的终末病毒学应答(ETVR)率、持续病毒学应答(SVR)率、终末生化应答率、持续生化应答率分别为75.8%、58.1%、83.9%、74.2%,B组分别为31.7%、13.3%、36.7%、16.7%.A组与B组ETVR率、SVR率、终末生化应答率、持续生化应答率经χ2检验,P值均小于0.01,两组间差异有非常显著性.结论 IFNα-2b联合利巴韦林治疗CHC明显优于单独使用IFNα-2b.     

干扰素对慢性乙型肝炎肝纤维化的疗效观察

目的观察干扰素（IFNα-1b）在治疗慢性乙型病毒性肝炎时的抗肝纤维化的疗效,并探讨其机制。方法40例慢性乙型病毒性肝炎患者随机分为治疗组及对照组,治疗组应用IFNα-1b治疗,对照组应用一般护肝治疗。用放免法测定治疗前后3～6个月的肝纤维化血清学指标：血清透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）、层连素（LN）。结果HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN在治疗后3至6个月均较治疗前明显下降,尤以6个月更明显。结论IFNα-1b治疗慢性乙型病毒性肝炎确有抗肝纤维化作用,且随治疗的时间延长而增加疗效。     

干扰素α-2b对青光眼滤过手术的影响

为了解干扰素α-2b(interferon alpha-2b,IFNα-2b)在青光眼滤过手术后抗滤过泡瘢痕形成的作用,将36例患者(42眼)分为治疗组和对照组,每组21只眼.治疗组在小梁切除术当时及术后3、7、14 d注射4×105IU IFNα-2b约0.6 ml,对照组注射等量的生理盐水.术后追踪4～8个月,平均5.8个月.结果发现治疗组和对照组的手术成功率分别为90.5%,66.7%(P＜0.01),平均眼压为(2.02±0.64)kPa,(2.80±0.94)kPa(P＜0.01);功能性滤过泡数为18眼、12眼(P＜0.01).两组均无明显的术后并发症.提示IFNα-2b能改善滤过泡功能,提高青光眼滤过手术成功率.     

HIF-2琢对自噬介导的肝癌细胞顺铂耐药的影响及机制

目的探究低氧诱导因子-2琢（HIF-2琢）对自噬介导的人肝癌阿霉素耐药细胞株（HepG2/ADM）顺铂（cisplatin）耐药的影响及机制,以期为疾病的临床治疗提供新思路。方法将人肝癌细胞HepG2和HepG2/ADM分为7组并加入相应试剂：（1）HIF-2琢-siRNA＋cisplatin组;（2）HIF-2琢-siRNA组;（3）NC-siRNA组;（4）3-甲基腺嘌呤（3-MA）＋cisplatin组;（5）cisplatin组;（6）3-MA组;（7）对照组。采用Westernblot法检测微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）、Beclin1、HIF-2琢蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率。结果cisplatin组HepG2、HepG2/ADM细胞中LC3-Ⅱ、Beclin1、HIF-2α蛋白表达水平及细胞凋亡率较对照组均显著升高（均P＜0.05）。3-MA组HepG2/ADM细胞中LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达水平较对照组均显著下降（均P＜0.05）。3-MA＋cisplatin组HepG2/ADM细胞凋亡率较cisplatin组、3-MA组和对照组均显著升高（均P＜0.05）;cisplatin组HepG2/ADM细胞凋亡率较3-MA组和对照组均显著升高（均P＜0.05）。HIF-2琢-siRNA组HepG2/ADM细胞中HIF-2琢、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达水平较NC-siRNA组均显著下降（均P＜0.05）。HIF-2琢-siRNA＋cisplatin组HepG2/ADM细胞凋亡率较HIF-2琢-siRNA组、NC-siRNA组和cisplatin组均显著升高（均P＜0.05）;HIF-2琢-siRNA组和NC-siRNA组HepG2/ADM细胞凋亡率较cisplatin组均显著降低（均P＜0.05）。沉默HIF-2琢表达后,随cisplatin处理浓度增加,HepG2/ADM细胞增殖抑制率升高。结论HIF-2琢可能通过调节自噬影响肝癌细胞HepG2/ADM的cisplatin耐药性,因此临床上可通过降低HIF-2α表达水平,提高cisplatin对肝癌细胞HepG2/ADM的杀伤作用,为晚期肝癌治疗提供新思路。     

IFN替换或加IFN方案治疗核苷(酸)类似物耐药的慢性乙型肝炎患者疗效比较

目的:比较IFN替换或加IFN两种方案治疗核苷(酸)类似物(NAs)耐药的慢性乙型肝炎(CHB)患者的疗效及安全性。方法:选择我院85例对NAs耐药的CHB患者,随机分为两组,IFNα-2b组(40例)肌肉或皮下注射600万U IFNα-2b,隔日1次;IFNα-2b+NAs组(45例)在原NAs治疗基础上,肌肉或皮下注射600万U IFNα-2b,隔日1次,疗程均为12个月。治疗前和治疗后3、6、12个月检测各组患者肝功能(AST、ALT、TBil、ALB)、血清HBV DNA和HBV标志物定量,并观察不良反应。结果:与IFNα-2b组比较,治疗3个月后,IFNα-2b+NAs组AST、ALT、TBil水平降低,治疗6个月和12个月后,AST、ALT水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),两组HBV DNA水平、ALT复常率、HBV DNA不可测率、HBe Ag阴转率和HBe Ag转换率差异无统计学意义(P>0.05)。治疗期间IFNα-2b不良反应发生率高,但不严重,安全性良好。结论:IFNα-2b对NAs耐药的CHB患者具有一定疗效,安全性好;与NAs联合在改善患者肝功能方面优于IFNα-2b单药。     

α干扰素-2bH is58的分子构建、表达及纯化

目的通过定点突变,构建α干扰素-2bHis58(IFNα-2bHis58),以期获得高效的新型药物分子。方法采用PCR体外定点突变技术,使α干扰素-2b基因的第58位密码子由GAA突变为CAC。将扩增片段克隆入pET23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。表达的IFNα-2bHis58经包涵体变复性、DEAE层析和CM层析纯化后,用WISH-VSV系统进行生物活性测定。结果IFNα-2bHis58主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,IFNα-2bHis58的纯度>95%,比活性>3.4×108IU/mg。结论构建了IFNα-2bHis58的表达载体,并成功在大肠杆菌中表达,获得了高活性突变分子IFNα-2bHis58,建立了IFNα-2bHis58的纯化工艺。