基于Probit回归的核酸检测系统分析灵敏度验证

目的:基于Probit回归,计算核酸血液检测系统所能检测到的分析物最低浓度,以验证核酸检测试剂在血站实验室常规使用中的分析灵敏度与试剂说明书中声明的一致性,保证核酸检测的质量。方法:使用核酸试剂对核酸系列分析灵敏度血清盘进行检测,统计HBV-DNA,HIV-RNA,HCV-RNA等每个浓度样本的重复检出率,应用SPSS统计学软件的Probit模块,计算出每个项目的95%检出限。结果:HBV-DNA的95%检出限为4.568IU/ml,HIV-RNA的95%检出限为46.000IU/ml,HCV-DNA 95%检出限为46.600IU/ml,均优于试剂说明书中声明的95%检出限。结论:基于Probit回归,使用核酸试剂对核酸系列分析灵敏度血清盘进行检测,能够准确计算出检测项目的95%检出限,直观判断实验室分析灵敏度是否在可接受范围之内。     

定值核酸质控品用于血液核酸筛查分析灵敏度验证结果分析

目的:通过采用定值核酸质控品进行相应稀释形成低、中、高3种浓度规格的样本进行核酸混样检测,以验证核酸筛查系统分析灵敏度是否符合要求。方法:通过对购置的商品化定值核酸室内质控品进行适当稀释制备成相应核酸检测系统检测下限(LOD)0.5倍LOD、1倍LOD、4倍LOD 3种低、中、高浓度规格,进行和献血者检测模式相同的混样检测,统计3种规格下HBV-DNA、HCV-RNA、HIV 1-RNA阳性检出率,阳性结果 Ct值平均值、标准差、变异系数以评价验证选用核酸检测系统的分析灵敏度。结果:0.5LOD范围的样本HBVDNA、HCV-RNA、HIV 1-RNA阳性检出率分别达50%、100%、95%,1LOD和4LOD范围的样本HBV-DNA、HCV-RNA、HIV 1-RNA检出率均达到100%。阳性样本的Ct值统计变异系数均小于5%。结论:采用定值核酸质控品进行核酸筛查系统分析灵敏度验证结果是可行的,对保证血液核酸筛查的质量是有意义的。     

血站核酸检测系统的性能验证方法探讨

目的:探讨中小血站核酸检测系统的性能验证方法,验证其检测和操作性能能否满足日常检测要求。方法:通过通量测试、压力测试、分析灵敏度验证、不同系统间平行试验、抗交叉污染试验、室间质量评价正确率等方面评估检测系统的性能。结果:浩源核酸检测系统6 h完成一批满负荷384份标本的8混样检测,压力测试试验过程设备软硬件均未发生故障。分析灵敏度验证中0.5检出限(LOD)的质控品标本HBV DNA、HCV RNA、HIV1 RNA阳性检出率分别为100%、75%、60%,1.0 LOD和2.0 LOD的质控品标本HBV DNA、HCV RNA、HIV1 RNA检出率均为100%,反应性标本的Ct值变异系数均小于5%。平行试验、抗交叉污染试验结果均与预期结果一致。EQA正确率为100%。结论:浩源核酸检测系统的操作性能、分析灵敏度、抗交叉污染能力、检测能力均能满足预期要求,该确认方法可作为中小血站核酸检测系统性能验证的参考。     

SARS病毒核酸检测中不同引物对灵敏度的影响

目的筛选灵敏、特异的SARS病毒核酸检测方法。方法采用世界卫生组织(WHO)和中国疾病预防控制中心(中国CDC)推荐的9对SARS病毒核酸检测引物，同时又选择市售的2种SARS荧光定量PCR试剂，分别对不同稀释度的SARS病毒核酸进行RT—PCR、巢式PCR和荧光定量PCR扩增，比较其检测灵敏度和特异性。结果两种荧光定量PCR试剂可检测SARS病毒核酸灵敏度均为0．1TCID50，与普通RT—PCR方法检测灵敏度(0.1TCID50)相同，而较巢式PCR法(0．01TCID50)略低；采用RT—PCR方法扩增SARS核酸时，以WHO推荐的SAR1s／SAR1as、BNIinS／BNIAs、BNIoutS/BnoutAs与中国CDC推荐的CDC-P1 ／P1-灵敏度最高。结论RT—PCR扩增时各引物对之间存在明显差异；荧光定量PCR可作为SARS疑似样本检测的首选方法，必要时再采用RT—PCR和巢式PCR法加以确认。     

科华核酸检测系统的性能验证方法探讨与应用

设备系统性能验证是证实检测系统的基本分析性能符合临床要求,或者与厂商或文献提供的资料一致,才可以将检测系统用于常规检测工作.《血站技术操作规程》《医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》都对系统的性能验证做出了规定和要求,目前核酸系统的性能验证没有统一的标准方法[1].我实验室对检测系统的测定下限、特异性...     

基于核酸检测诊断结核分枝杆菌感染的研究进展

结核病是由结核分枝杆菌感染而引起的传染性疾病。实验室诊断技术的不断进步,为结核病的诊断及治疗提供了多种选择方案。核酸检测是利用分子生物学的理论和技术,通过直接探查核酸的存在状态,从而对人体的状态与疾病做出诊断的方法。近年来,核酸诊断技术的发展极大地推动了实验室的快速诊断,本文就结核杆菌感染后细菌核酸及宿主微小核糖核酸检测方面的新方法、新技术进行综述。     

丙型肝炎核酸检测现状

核酸检测是丙型肝炎病毒（HCV）感染确诊的金标准,对指导HCV感染者治疗、改变随访策略有重要意义,近年来其检测技术也日益成熟。通过分析国内外文献,对HCV核酸检测必要性和检测现状进行综述,旨在为我国制定消除丙型肝炎的相关政策提供参考性依据。     

HCV核酸检测方法

HCV核酸检测可以直接检测HCVRNA，灵敏度和特异度高。其已经基本取代RIBA（Recombinant Immunoblot Assay重组免疫印迹检测）作为确诊HCV感染更为有效的方法。HCVRNA检测已广泛用于临床，诊断急性和慢性丙肝、评价治疗效果，     

军团菌核酸检测的进展

军团菌核酸检测的进展朱利平，综述，石尧中，审校军团病的确诊有赖于实验室检查，主要包括细菌的分离培养、直接免疫荧光染色测定（ＤＦＡ）和间接免疫荧光抗体测定（ＩＦＡ），但是仍缺乏一种快速、简便、特异、敏感的早期诊断方法。近年来，随着从分子生物学水平对军团...     

基于CRISPR的埃博拉病毒核酸检测方法的建立

目的建立一种基于CRISPR-Cas13a的埃博拉病毒快速、现场核酸检测方法。方法根据埃博拉病毒基因组保守区序列设计合成特异性RT-RAA引物及crRNA,采用荧光法CRISPR检测技术筛选灵敏度高的crRNA;利用"消线法"CRISPR试纸读取CRISPR检测结果;通过检测梯度稀释的埃博拉病毒核酸及其他病原体核酸评价该方法的灵敏度及特异性。结果从5条靶向埃博拉病毒NP基因保守序列的crRNA中筛选出1条检测灵敏度高的crRNA。利用该crRNA建立了基于"消线法"试纸的CRISPR-Cas13a埃博拉病毒核酸检测方法,其灵敏度为1拷贝/μL,与荧光法CRISPR和RT-qPCR法一致,优于普通RT-PCR法(10~1拷贝/μl)和RT-RAA扩增法(10~2拷贝/μl)。采用该方法检测7种其他病原体核酸,结果均为阴性。结论建立的试纸法CRISPR埃博拉病毒核酸检测方法快速、灵敏、特异,且无需专业核酸检测设备,为实现痕量埃博拉病毒核酸的现场检测提供了新方法。     

基于LASSO回归的膝关节结核早期诊断模型的构建及验证

目的:建立基于LASSO回归的膝关节结核早期诊断模型并进行验证。方法:选择2019年1月至2022年1月成都市公共卫生临床医疗中心收治的136例膝关节结核患者,作为病例组;选择同期就诊的136例非结核性膝关节病变患者作为对照组进行建模;再选择2022年2—10月就诊的72例疑似膝关节结核患者作为验证组,其中13例经病理学确诊为膝关节结核。收集患者一般资料、实验室检查及MRI检查结果。比较两组患者各项指标,以LASSO回归筛选可能影响膝关节结核的因素并进行多因素logistic回归,根据多因素分析结果建立列线图模型并进行内部验证。结果:LASSO回归模型筛选出11个潜在诊断因素,分别为性别、年龄、γ-干扰素(IFN-γ)释放水平、脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)抗体、GeneXpert MTB/RIF、骨髓水肿、半月板损伤、软骨损伤、周围组织肿胀、骨质破坏及关节周围脓肿形成。多因素分析结果显示：年龄(OR=0.977,95%CI:0.955～0.999)、IFN-γ释放水平(OR=1.005,95%CI:1.001～1.009)、LAM抗体(OR=15.348,95%CI:6.344～37.1...     

美国CDC推荐HIV核酸检测策略与核酸定量检测替代策略

美国疾病控制和预防中心(CDC)2014年发布艾滋病病毒(HIV)核酸检测策略以来,已经在实验室应用,该策略简化了检测流程,使检测结果更加准确。但同时也存在诸多不便于临床推广普及的影响因素。随着核酸检测技术的应用与普及,在2019年艾滋病诊断大会上,美国CDC专家发表了HIV-1核酸定量检测替代策略的研究报告,临床验证了核酸定量检测替代策略的准确性、可行性与快速便利性,提高了HIV核酸定量检测结果在临床工作中的使用价值。     

核酸检测无效结果分析

目的:在血液中心现行的单人份核酸检测(ID-NAT)的模式下,对核酸检测无效结果进行初步分析和探讨。方法:对南京地区无偿献血者的70 231份血液标本进行核酸单人份检测(包括联合检测和鉴别检测)。结果:总测试数为78 866,无效测试率为0.09%。2台仪器的无效测试率相近,但不同项目的无效测试率差异有统计学意义,鉴别检测的无效测试率显著高于联合检测(P0.01)。在无效结果的原因分布中,联合检测较平均,而鉴别检测分布不均,其中样品原因和其他硬件原因的出现频率,鉴别检测均高于联合检测。结论:核酸检测人员只有通过重视样品的检测前质量控制和仪器的日常维护保养,才能减少无效结果的出现,避免浪费。     

丙型肝炎病毒核酸定量检测的临床意义

目的　研究丙型肝炎患者血清中的丙型肝炎病毒核糖核酸 (HCVRNA)载量与抗丙型肝炎病毒抗体 (抗 HCV)之间的相关性。方法　用荧光定量 (FQ PCR)法检测 2 0 8例疑诊丙型肝炎患者血清中的HCVRNA ,酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗 HCV。结果　 2 0 8例血清样本中HCVRNA阳性率为 81.3 %。HCVRNA平均载量为 4.63× 10 5Copies/ml。结论　FQ PCR法检测HCVRNA是判定HCV感染的直接证据 ,是反映病毒复制与传染性的直接指标 ,有确诊价值与抗病毒治疗疗效评估价值。HCVRNA与抗 HCV具有高度正相关。HCVRNA较抗 HCV检出率有显著性差异     

快速高通量的病原体核酸检测技术

对于任何传染性疾病的出现,及时检测和鉴定病原体是有效控制疫情及选择合理治疗方案的关键。随着生物技术的高速发展,以核酸杂交、核酸扩增和核酸序列分析为代表的分子诊断／检测技术在病原体鉴定和确认中越来越多地发挥了重要作用。相对于传统的以病原分离培养为核心的手段,新型检测技术不再局限于依靠纯培养分离病原,     

简便的HIV核酸检测方法研究进展

HIV的核酸检测在早期诊断、监测抗病毒治疗效果以及HIV感染婴儿的诊断中具有重要作用,但现有的HIV核酸检测方法操作复杂、耗时长且成本高.发展简便的HIV核酸检测方法成为近年来的研究热点,其中焦磷酸化激活性聚合反应(PAP)具有较高的特异性,且无需反转录酶处理即可实现RNA的扩增;重组酶聚合酶扩增(RPA)利用人体温度...     

血站核酸检测工作的质量控制

<正>2012年1月卫生部发布了《血站技术操作规程(2012版)》(以下简称《规程》)。新版《规程》在可经输血传播感染的检测项目及检测方法中规定,人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染标志物的检测方法,除现行的2种ELISA试剂检测外,还可选择1种ELISA试剂检测与1种试剂检测核酸的方法。该项规定是基于我国血站核酸检测试运行成功进行的基础     

Panther核酸检测无效结果分析

目的:对血站Panther系统的无效结果进行分析,以找到应对措施。方法:使用Panther系统对标本进行病毒核酸检测,统计无效结果并分析。结果:Panther系统的无效测试率为3.57%。①不同标本类型(常规标本、IQC、Calibrator)的无效测试率:IQC显著高于常规标本和Calibrator(P0.01);②不同无效模式(散发、五联、成批)的无效发生频率相近,但其中成批无效的测试数占比最高(82.4%);③主要无效信息(样本问题、硬件和软件问题)在不同标本类型中的分布不同(P0.01),IQC无效以样本问题多见;④主要无效信息在不同无效模式中的分布不同(P0.01),成批无效以硬件和软件问题多见,而散发无效以样品问题为主;⑤无效列表率在Panther系统运行初期较高,但其无效信息在不同无效模式中的分布情况与后期相似。结论:只有通过NAT实验室的质量监控和风险管理,采取针对样品问题和仪器问题的措施,才能减少无效结果的发生,降低质量风险。     

不同DNA探针检测疟原虫的灵敏度比较

本文通过分子杂交技术,以恶性疟原虫为靶DNA,对从恶性疟基因文库中筛出的含有高度重复顺序的pBF_4DNA探针和含单考贝基因的pBF_(13)DNA探针以及恶性疟原虫全基因组DNA探针进行了杂交比较,结果pBF_(13)DNA探针比全基因组DNA探针敏感度低10倍,比pBF_4DNA探针敏感度低100倍,全基因组DNA探针可检到的DNA含量为100pg。