桃儿七内生真菌分离及其抑菌活性初步研究

目的 探明桃儿七内生真菌资源多样性及其抑菌活性特征.方法 通过组织块法对内生真菌进行分离,并选择5种植物病原真菌和4种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性.结果 从桃儿七根、茎、叶中分离出49株内生真菌,根部最多,22株,其次为茎部,18株,叶部最少,9株;经形态学分类鉴定归于2个目,3个科,9个属,梭孢霉属为优势菌属;有22株菌对1种或多种供试植物病原真菌有不同程度的抑制作用,占分离菌株数的44.8％,有8株菌对2种或多种供试植物病原真菌有明显的抑制作用,其占所分离菌株总数的16.3％,有3株菌对4种或多种供试植物病原真菌有明显抑制作用,2株内生真菌分别对2种供试指示细菌具有明显的抑制作用.结论 桃儿七内生真菌具有多样性和明显的抗外源真菌活性,抑菌活性菌株主要分布在曲霉属、单孢枝霉属、梭孢霉属,其内生真菌的研究和开发具有重要的生态和经济意义.     

泰山黄精内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

目的 研究泰山黄精内生真菌的分布及其多样性,并筛选具有抑菌活性的内生真菌.方法 采用平板分离法分离黄精内生真菌,采用滤纸片扩散法测试黄精内生真菌培养物抗耐药菌活性,同时采用分子生物学方法对筛选出的活性菌株进行鉴定.结果 从泰山野生黄精的根、茎、叶和果实中共分离出32株内生真菌,分属于7个属,分布最广的类群是镰刀菌属Fusarium sp.,占总菌株的31.3％,其次是不产孢真菌Sterile mycelia (28.1％)和链格孢属Alternaria sp.(21.9％).各组织中内生真菌的分布存在一定的组织差异性,根中内生真菌的分离率最高,茎和叶中次之,果实中最少.共有来自5个属的14株内生真菌至少对1种供试菌株有抗菌活性,其中8株具有广谱抗耐药菌活性.对活性最强、抑菌谱最广的不产孢菌株HJG-10进行分子生物学鉴定,将其确定为裂褶菌Schizophyllum commune.结论 泰山黄精中蕴含着大量具有抑菌活性的内生真菌,为寻找和开发新型抑菌生物制剂开辟了一条新途径.     

见血封喉内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

目的 分离和鉴定见血封喉Antiaristoxicaria根韧皮部中的内生真菌,并检测其抑菌活性.方法 以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌methicillin-resistant Staphylococcus gtureus (MRSA)和白色念珠菌Candida albicans作为指示菌,采用杯碟法对内生真菌发酵上清液进行抑菌试验.结果 从见血封喉根的韧皮部中分离出6株内生真菌,经形态鉴定分属于聚端孢霉属(Trichothecium LK.ex Fr.)、枝顶孢霉属(Acremonium LK.ex Fr.)和丝核菌属(Rhizoctonia DC.ex Fr.).其中内生真菌J6的发酵上清液对MRSA有抑菌活性,抑菌圈直径为18 mm.结论 首次对见血封喉内生真菌进行了研究,内生真菌J6对MRSA有明显的抑菌活性,其抑菌活性成分值得进一步研究.     

川麦冬内生真菌分离和鉴定及抑菌活性初步研究

目的深入研究川麦冬内生真菌分布的多样性和特异性,并考察其抑菌活性。方法分别对野生川麦冬和大田栽培川麦冬的根部和叶部利用组织块法分别进行分离纯化,利用形态学和ITS序列聚类分析等分子生物学方法对所得内生真菌进行鉴定,利用菌饼法对其抑菌活性进行初步研究。结果从川麦冬中共分离得到27株内生真菌,其中野生麦冬内生真菌(22株)明显较大田栽培麦冬内生真菌(5株)丰富,根部内生真菌(17株)明显较叶部内生真菌(10株)丰富。此外镰刀菌属和曲霉菌属为麦冬优势菌属,且镰刀菌属有根部专一定植特性,曲霉菌属却广泛分布于根部和叶部。同时,40%的麦冬内生真菌对白色念珠菌具有抑制活性,对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和粪肠球菌抑制菌株较少。结论川麦冬具有丰富的内生真菌多样性,并且其内生真菌分布具有明显的环境和部位特异性。所分离的内生真菌具有一定的抑菌活性,其中H5、031p和H8 3株菌表现出较强抑菌活性,值得进一步研究。     

中华地鳖虫肠道内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

目的:研究中华地鳖虫肠道内生真菌及其抑菌活性,为发现新型活性天然产物提供一条重要的途径。方法:采用平板分离法从地鳖虫肠道内分离内生真菌,利用滤纸片法对其进行抑菌活性研究,并对菌株的总DNA进行提取,利用通用引物ITS1和ITS4对菌株18S rDNA ITS序列进行扩增和测序,将测序结果进行同源性比对分析,确定活性菌株的分类地位。结果:从中华地鳖虫肠道中共分离出8株内生真菌。其中,菌株DB-1对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色念珠菌都有一定的抑制作用,经比对分析后鉴定菌株DB-1为深绿木霉Trichoderma atroviride。结论:中华地鳖虫肠道内具有抑菌活性的内生真菌资源可做进一步研究利用。     

一株分离自新疆细虫草菌核的弯颈霉鉴定及抑菌研究

目的：开发利用新疆细虫草资源,为新疆细虫草相关真菌的研究和开发利用提供基础资料。方法：研究从新疆细虫草菌核中分离得到一种白色菌株,编号为SFYT002,采用形态学观察和ITS以及18SrDNA测序,在GenBank比对,进行系统进化树分析,并采用滤纸片法研究其体外抗菌作用。结果：菌株SFYT002主要的特征为菌落白色棉绒状,瓶梗长在分枝的分生孢子梗上,瓶梗基部膨大,顶部急剧变细,部分颈部弯曲,孢子小且透亮,孢子有出芽现象,常形成聚集孢子头,分生孢子球形,亚球形至椭圆形。ITS和18SrDNA序列分析表明,弯颈霉属为单系发生,菌株SFYT002与膨大弯颈霉聚为一支。研究其抑菌作用表明,菌株SFYT002发酵液及其不同极性的提取物对4种常见致病菌,均有很强的抑制作用。结论：通过形态学和分子生物学特征将菌株SFYT002鉴定为膨大弯颈霉,具有较强的抑菌活性。     

杜仲叶和果实中内生真菌的分离及抑菌活性

目的从杜仲Eucommia ulmoides叶和果实中分离具有抑菌作用的内生真菌。方法采用平板培养法从杜仲叶片和果实中分离内生真菌,通过对峙法和生长速率法考察这些内生真菌的抑菌活性,并通过HPLC法考察其具有代谢产生杜仲有效活性成分的能力。对具有良好抑菌效果和能够代谢杜仲活性成分的内生真菌进行ITS序列测定,鉴定其归属。结果从健康叶片和果实中分离到52株内生真菌,其中2个菌株的提取液中含有绿原酸,11个菌株至少对4种病原菌具有抑制作用,其中29号菌株(链格孢属Alternaria sp.)对芽孢杆菌Fusarium graminearum的抑制效果最好,其抑制率高达82.6%。通过与Gen Bank数据比对,这些内生真菌分别属于链格孢属Alternaria、黑孢属Niqrospora和座囊菌纲(Dothideomycetes)。结论从杜仲叶和果实中分离到11株具有抑菌作用的内生真菌,这些具有抑菌作用的内生真菌可用于生物制药和农业产业。     

杜仲内生细菌的分离鉴定及活性检测

目的 从杜仲Eucommia ulmoides的树皮、叶片和果实中分离出具有活性的内生细菌.方法 采用平板培养法分离内生细菌,扩增16S rDNA序列并测序,在GenBank上Blast鉴定其归属;通过菌丝速率生长法和纸片琼脂扩散法检测抑菌活性,通过T-AOC试剂盒检测抗氧化活性.结果 获得内生细菌37株,其中21株鉴...     

人参病害生防细菌分离鉴定及其抑菌活性测定

目的:筛选对人参黑斑菌、人参菌核菌、人参立枯丝核菌等有抑菌活性的微生物菌剂产品,有效解决人参生产过程中的农残超标问题,为人参病害绿色防控提供参考依据。方法:采用稀释平板法从微生物菌剂中分离活体菌株,室内对峙培养验证菌株的抑菌活性;根据菌落形态特征、显微结构及gyr A、gyr B基因序列鉴定菌株的归属。结果:从"KDL"复合微生物菌剂中分离出12株细菌(编号:Y1～Y12),除Y12外,其余菌株对七种人参致病菌均有抑菌活性。其中,Y4对人参菌核菌的抑菌率最高(68. 42%),Y9对人参立枯丝核菌的抑菌率最高(54. 07%),Y2对人参疫病菌、人参黑斑菌、人参灰霉菌和人参锈腐菌的抑菌率最高(分别为68. 25%、52. 58%、49. 46%和40. 65%),Y3对人参根腐菌的抑菌率最高(47. 37%)。经鉴定,Y1、Y2和Y8为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,Y3～Y7、Y9～Y11为解淀粉芽孢杆菌B. amyloliquefaciens。结论:分离自"KDL"复合微生物菌剂的绝大部分菌株对七种人参致病菌均有较好的抑菌活性,推测该菌剂可能对人参病害具有生防潜力,可尝试用于人参病害防控。!     

藏药黑果枸杞内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

 目的 从藏药黑果枸杞中分离和鉴定内生真菌,并对其抑菌活性进行研究,旨在从该植物中获得强抑菌活性的菌株,为寻找新型抑菌活性物质提供新的资源。方法 以新鲜黑果枸杞为材料,采用组织分离法从其根、茎、叶中分离内生真菌,依据形态进行初步鉴定;采用滤纸片法测定黑果枸杞内生真菌次生代谢产物的抑菌活性。结果 从黑果枸杞的根、茎、叶中,共分离得到内生真菌81株,其中常态下分离得到60株,高盐条件下分离得到21株。81株内生真菌经鉴定属于7目,10科,13属,抑菌活性测试表明,高盐条件下得到的内生真菌代谢产物活性明显高于一般条件下的,特别是E21菌株平均抑菌圈直径为26～31 mm。结论 采用模拟植物生长环境的方法分离内生真菌,对于特异性菌株的分离具有十分重要的意义。     

南美蟛蜞菊花挥发油GC-MS分析及抗菌活性研究

目的：分析新鲜南美蟛蜞菊花挥发油中的化学成分,进行抑菌活性测试。方法：采用水蒸气蒸馏法提取南美蟛蜞菊花挥发油,运用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）对其成分进行分析;微量稀释法测试所得挥发油对6种菌株（大肠菌、蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、四联球菌、藤黄八叠球菌、白色葡萄球菌）的抑菌活性。结果：南美蟛蜞菊花挥发油提取收率为0.72‰,检测到61个化合物,鉴定出57个,含量占总挥发油的92.92%;该挥发油对枯草芽孢杆菌、藤黄八叠球菌具有良好的抑制活性,最小抑菌浓度分别为0.39,0.78 mg·L^-1。结论：从南美蟛蜞菊花中提取挥发油并鉴定化学成分,发现其富含结构多样的倍半萜类化合物,为南美蟛蜞菊的开发利用提供实验依据。     

基于多元统计学方法的亚香棒虫草与冬虫夏草化学差异研究

目的采用高分辨质谱分析鉴定亚香棒虫草Cordycepshawkesii与冬虫夏草Cordycepssinensis间差异性成分。方法结合PeakView、SIMCA-P等软件、在线数据库(Human Metabolome Database、Pub Chem、Metlin)及二级碎片裂解规律分析鉴定区分2种虫草的显著差异性成分。结果通过正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)发现区分亚香棒虫草与冬虫夏草的显著差异性成分共12个,其中11个为氨基酸及其衍生物以及1个磷脂酰胆碱。结论通过差异分析并未鉴定出如虫草素、腺苷等特征成分,从化学层面证明了亚香棒虫草或可作为冬虫夏草的补充资源,为亚香棒虫草深入开发应用提供科学支撑。     

金莲花总黄酮抗菌作用的实验研究

目的:观察金莲花总黄酮(FTLR)体内外的抗菌活性。方法:体外抗菌实验,采用营养肉汤对金黄色葡萄球菌等14个菌株进行试管连续稀释法和营养琼脂扩散法测定FTLR的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。体内实验采用金黄色葡萄球菌26002-6标准株感染昆明种小鼠作为模型,模型小鼠被随机分为FTLR 440,220,110 mg.kg-1剂量组,金莲花片2 400 mg.kg-1对照组(金莲花片2 400 mg.kg-1与FTLR 440 mg.kg-1的生药剂量相等)及模型对照组,以感染后24,48 h小鼠的死亡率为指标,观察对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性。结果:在体外抑菌实验中,FTLR对13个细菌标准菌株和10个临床株均有抑制作用,其MIC和MBC均低于双黄连口服液;在体内抑菌实验中,FTLR各剂量组金黄色葡萄球菌感染小鼠48 h死亡率均明显低于模型对照组,440 mg.kg-1组死亡率低于金莲花片2 400 mg.kg-1组。结论:对多种细菌有明显的抑制作用。相等生药量的总黄酮对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用强于金莲花片。     

假益智果实挥发油成分分析及其抑菌活性

目的:对假益智果实挥发油进行化学成分研究,并进行抗菌活性测试,为进一步研究开发假益智提供实验依据。方法:使用水蒸气蒸馏法从假益智的果实中提取出挥发油,运用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术进行分析;使用微量稀释法测试挥发油的抗菌活性。结果:假益智果实挥发油提取率为0.17%,检测到42个化合物,鉴定出31个,占挥发油总成分的94.18%。挥发油对四联球菌具有很好的抑菌作用,最小抑制浓度为12.5 g·L-1,对白色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌细菌具有中等强度的抑制作用。结论:本文对假益智果实进行挥发油提取鉴定,其主要成分为萜类、长链烃类化合物。抗菌实验结果表明假益智果实挥发油对四联球菌具有较好的抗菌活性。     

冬虫夏草产地土壤中耐砷细菌的分离、鉴定及耐砷能力测定＊

目的 分析冬虫夏草产地土壤中的耐砷细菌，为研究冬虫夏草砷超富集机制提供依据。方法 对西藏、四川五个冬虫夏草产地土壤中耐砷细菌进行分离、纯化，筛选出一批耐砷细菌，对其中两株优势菌株XB和XNQ进行形态、生理生化、16S rRNA鉴定，并利用硝酸银溶液（AgNO₃）与三价砷As（Ⅲ）、五价砷As（Ⅴ）的颜色反应，检测两株细菌对砷的氧化还原性，最后对菌株的耐砷能力进行测定。结果 通过菌落形态特征分析，菌株XB和XNQ均为革兰氏阴性菌，主要脂肪酸均为C18:1 ω9c、C16:0、Summed Feature 3（C16:1 ω7c /C16:1 ω6c）和C12:0；通过16S rRNA基因的序列分析，菌株XB的16S序列与已知种Acinetobacter guillouiae 的序列APOS01000028相似性为99.72%，菌株XNQ与已知种Acinetobacter nosocomialis的序列APOP01000014相似性为99.86%；定性硝酸银染色实验证明菌株XB、XNQ具有砷还原性，都是As（Ⅴ）还原细菌；菌株XB和XNQ对As（Ⅲ）的耐受性为20 mmol?L^-1，对As（Ⅴ）的耐受性为70 mmol?L^-1。结论 分离鉴定的两株优势细菌XB和XNQ分别为不动杆菌属的A. guillouiae和A. nosocomialis，均为革兰氏阴性菌，为砷还原细菌，对As（Ⅲ）和As（Ⅴ）的耐受性相同，对As（Ⅴ）的耐受性略高于As（Ⅲ）。     

中药冬虫夏草和所含多种冬虫夏草菌拉丁名混用的历史和现状

中药冬虫夏草是冬虫夏草菌和蝠蛾科幼虫尸体的物种混合体。但冬虫夏草和冬虫夏草菌使用同一拉丁名Ophiocordyceps sinensis(≡Cordyceps sinensis),导致特指概念不清和争议,甚至影响政府的政策法规的制订和大众的市场消费心理。该文综述了冬虫夏草(虫菌复合体)和冬虫夏草菌拉丁名混用的历史考证和现状,以及文献中有关天然冬虫夏草更名的建议。有学者建议O.sinensis用于多种冬虫夏草菌,而中药冬虫夏草改用Chinese cordyceps,不设拉丁名。另有学者建议中药冬虫夏草更名为OphiocordycepsHepialidae。这些建议有待学界达成共识。该文也分析2011年世界菌物学会IMA颁布《阿姆斯特丹宣言》以来学界在争议中实施"One Fungus=One Name",进一步加剧了拉丁名特指概念的混乱。IMA为解决争议设立了争议解决机制。解决这一拉丁名的混用和争议需要菌物、动物和中药分类学家通力合作,共同努力。     

线叶菊抗耐药性细菌感染有效部位的抗菌活性谱效关系

目的:建立线叶菊指纹图谱,阐明共有峰所代表的化学成分对抗菌药效贡献的大小,揭示其药效物质基础。方法:采用HPLC建立线叶菊的指纹图谱,流动相乙腈-PBS(0.1 mol·L~(-1)磷酸二氢钠与2%冰乙酸1∶1混合)梯度洗脱,检测波长360 nm。通过线叶菊不同批次样品对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色葡萄球菌、副乙型伤寒杆菌和耐药金黄色葡萄球菌的抑制作用来反映其抗菌活性,利用多元线性回归与灰色关联分析方法建立谱效关系。结果:多元线性回归法可知对耐药性金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和副乙型伤寒杆菌有作用的峰共有9个。灰关联度分析得出异鼠李素3-O-芸香糖苷、异荭草素、异杜荆苷与耐药金黄色葡萄球菌相关;异鼠李素3-O-β-D-葡萄糖苷、东莨菪内酯、杨梅素、木犀草苷、圣次草苷、异槲皮苷与大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌相关;木犀草素和槲皮素3-O-芸香糖基-7-O-葡萄糖苷与白色葡萄球菌相关;圣次草苷、芒果苷、杨梅素、芦丁、东莨菪内酯、异鼠李素3-O-β-D-葡萄糖苷与副乙型伤寒杆菌相关,上述抑菌关联度均达到了0.8以上。结论:所建立的HPLC指纹图谱方法简便、重复性良好。     

尖瓣海莲叶内生真菌Penicillium sp. B21代谢产物挥发油成分及抑菌活性

目的:对尖瓣海莲叶内生真菌Penicillium sp.B21的发酵液挥发油成分进行分析,并对其抑菌活性进行初筛。方法:水蒸气蒸馏法提取海桑叶内生真菌Penicillium sp.B21的发酵液挥发油,GC-MS鉴定挥发油成分,96孔板酶标法对挥发性组分抑菌活性初筛。结果:水蒸气蒸馏法提取的挥发性组分,每100 g发酵产物得到挥发油1.82 g。GC-MS共鉴定出挥发油组分39个,占挥发油总质量的93.89%。抑菌活性测试表明,在质量浓度20 mg·L~(-1)下,挥发油对大肠埃希菌和白色葡萄球菌具有较好的抑菌活性。结论:尖瓣海莲叶内生真菌Penicillium sp.B21发酵液挥发油成分具有一定的抑菌活性,拓展了其在医药、食品等领域的应用和研究。     

忍冬叶总黄酮的测定及其体外抗菌活性

目的:研究忍冬叶总黄酮的分离工艺及其对9种常见病原菌的体外抗菌活性。方法:以河南封丘忍冬叶为研究对象,以总黄酮为主要考察指标,通过大孔树脂柱色谱分离得到忍冬叶总黄酮,并对其进行最小抑菌浓度(MIC),最小杀菌浓度(MBC),抑菌圈活性等体外抗菌评价。结果:建立了忍冬叶总黄酮简便、有效的分离工艺,证实了忍冬叶总黄酮对9种供试病原菌具有较好的广谱抑菌性(MIC为1.95~62.5 g·L~(-1),MBC几乎均为125 g·L~(-1))。此外,当忍冬叶总黄酮部位同时含有较多绿原酸(4.2%)时,不仅得率高(10.5%),活性也更强。结论:忍冬叶总黄酮具有较好的广谱抗菌性,可以将其开发抗畜禽病原菌药物或者饲料添加剂,这也为忍冬叶资源的合理开发利用奠定了坚实的基础。     

药用植物三尖杉内生真菌的分离鉴定及抗菌活性

目的：研究药用植物三尖杉Cephalotaxus fortunei内生真菌的分离鉴定及抗菌活性。方法：用组织培养方法从野生三尖杉的根、茎、叶中分离内生真菌,采用滤纸片扩散法对分离得到的内生真菌的代谢产物做抑菌活性研究。结果：分别从三尖杉根、茎、叶中共分离得到30株内生真菌;抑菌活性研究显示,有20株内生真菌的代谢产物至少对1种靶标菌有抑制活性,占总分离菌株的66.7%,其中菌株CFEF013对所有靶标菌均有抑制作用;经形态学和分子生物学鉴定,对7株具有较强抑菌活性的菌株分属镰孢菌属Fusarium 4株,壳囊孢属Cytospora 1株,拟盘多毛孢属Pestalotiopsis 1株,毛霉菌属Mucor 1株。结论：药用植物三尖杉内生真菌种类具有一定的多样性,内生真菌代谢产物抑菌活性良好。