大鼠骨髓内皮祖细胞移植对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏损伤的修复

目的 探讨大鼠骨髓内皮祖细胞移植对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的修复作用.方法 应用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,内皮祖细胞选择性培养液培养后移植到单侧输尿管梗阻大鼠.应用PAS、HE、Masson染色方法判断梗阻大鼠损伤和修复情况,应用免疫组织化学检测α-SMA和HIF-1α表达,应用Western blot检测HIF表达.结果各组间肝功能、肾功能无显著性差异;与假手术组比,UUO组肾脏病理积分显著增加,移植组肾脏病理积分显著低于UUO组(P<0.05);UUO组α-SMA在14、21d显著高于假手术组(P<0.05),移植组α-SMA在14、21d显著低于UUO组(P<0.05);假手术组仅有少量HIF表达,且主要表达在胞质,UUO组HIF表达随病程进展逐渐增加(P<0.05),移植组HIF表达显著低于UUO组(P<0.05).结论 EPCs移植改善了UUO大鼠梗阻肾脏的损伤、纤维化和低氧状况.     

肾小管周毛细血管丢失与肾脏损害

肾小管周毛细血管(peritubular capillaries, PTCs) 又称球后毛细血管(postglomerular capillary),是肾间质毛细血管的主要组成部分,是维持肾小管正常结构和功能的关键因素.正常的肾血流灌注不仅与肾单位的完整性有关,而且肾小管周毛细血管的开放畅通更具重要的意义.肾小管周毛细血管丢失(peritubular capillary loss)是肾脏慢性进行性病变过程中的一个重要事件.研究毛细血管内皮细胞的病理生理变化,保护肾脏的毛细血管、改善肾脏微循环在治疗慢性肾脏病已越来越受到重视.     

内皮祖细胞移植对扩张型心肌病大鼠血管新生的影响

目的 探讨内皮祖细胞（EPC）对扩张型心肌病大鼠心肌内血管新生的影响。方法 50只雌性SD大鼠于腹股沟皮下注射异丙肾上腺素,250mg/kg,连续2d,制作扩张型心肌病（DCM）模型。随机分为EPC治疗组和对照组;心脏彩超评估心功能情况免疫组化方法检测心肌细胞内的血管密度。结果 细胞移植3个月后EPC组心肌内血管密度高于对照组。结论 心肌内移植EPC是治疗扩张型心肌病的有效方法,安全,可行。     

血管内皮生长因子对大鼠骨髓内皮祖细胞生物学特性的影响

目的 观察内皮祖细胞(EPC)在不同浓度血管内皮生长因子(VEGF)作用下的生物学特性,探讨VEGF对EPC生物学特性的影响.方法 采用密度梯度离心法获取鼠骨髓单个核细胞,培养7 d后收集贴壁细胞鉴定EPC,用含不同浓度VEGF(0、10、50 ng/ml)的培养基继续培养.采用MTT比色法、Transwell小室实验观察EPC的增殖和迁移能力,应用纤维蛋白凝胶观察EPC体外血管形成能力,流式细胞术检测EPC的分化能力.结果 培养7 d的细胞CD133和CD34阳性率分别为69.44%和81.05%.MTT实验显示,10 ng/ml组细胞的吸光值明显大于0 ng/ml组和50 ng/ml组,0 ng/ml组的吸光值明显大于50 ng/ml组(P＜0.05);迁移实验、体外血管形成实验及诱导分化实验显示,50 ng/ml组和10 ng/ml组较0 ng/ml组更能促进EPC的迁移、体外血管形成及诱导分化,且50 ng/ml组强于10 ng/ml组(P＜0.05).结论 VEGF能够提高EPC迁移能力、体外血管形成能力及促进诱导分化,且随着VEGF浓度的升高而增强.VEGF能够提高EPC增殖能力,但随着浓度的升高而减弱.     

益气活血法对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

[目的]观察益气活血法中药方剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、果蝇MAD类似基因2/3(Smad2/3)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的调节,探讨其对肾小管上皮细胞转分化的影响。[方法]采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。将30只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组、西药组。术后14d,观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化方法检测肾组织TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达。[结果]益气活血法能减轻肾间质纤维化程度,并能下调TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达。[结论]益气活血法可通过下调TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达,从而抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化。     

内皮祖细胞移植修复大鼠颈总动脉内皮损伤

 [目的]探讨内皮祖细胞修复动脉内皮损伤的作用.[方法]建立大鼠颈总动脉内皮损伤模型,16只大鼠随机等分为内皮祖细胞移植组和对照组.体外诱导大鼠外周血单个核细胞为内皮祖细胞.在动脉损伤后,将5-溴脱氧尿苷标记的内皮祖细胞注入损伤动脉段,14 d后取损伤动脉段和对侧正常动脉段.采用病理学方法、免疫组织化学和图像分析技术评价内皮祖细胞的修复效果.[结果]内皮祖细胞移植组的损伤动脉段5-溴脱氧尿苷免疫组化为阳性.内皮祖细胞移植组损伤动脉段的新生内膜厚度较对照组明显减轻（43.5±5.5）μm vs（90.7±12.7）μm,P＜0.05;内皮祖细胞移植组的再内皮化程度明显高于对照组77.8%±0.1%vs52.2%±0.1%,P＜0.05.[结论]内皮祖细胞具有修复动脉内皮细胞损伤的作用,内皮祖细胞可作为心血管疾病细胞移植疗法的种子细胞.     

糖尿病对外周血循环内皮祖细胞的影响

糖尿病是由多种病因引起的,以慢性高血糖为特征的代谢紊乱综合征。动脉粥样硬化是糖尿病患者的主要并发症,并且有患病率高、发病年龄轻和病情发展快的特点。作为内皮的前体细胞,内皮祖细胞在成人受损血管内皮的修复、新生血管发生/生成中起重要作用。因此,外周血循环内皮祖细胞与糖尿病大血管并发症关系日益为研究者关注。糖尿病患者在内皮祖细胞的数目,动员、迁移、归巢、分化能力明显减低,这可能是引起糖尿病大血管并发症的主要原因之一。本文主要就糖尿病对外周血循环内皮祖细胞的影响予以综述。     

血管内皮祖细胞移植对脓毒症大鼠的保护作用研究

目的:探讨血管内皮祖细胞移植对脓毒症大鼠的保护作用.方法:盲肠结扎穿孔法构建脓毒症大鼠模型,尾静脉移植血管内皮祖细胞,观察假手术组、模型组及血管内皮祖细胞移植组大鼠的尾动脉平均动脉压、体温、呼吸频率及脉率等主要生命体征,HE染色法检测肺部损伤情况、PAS染色法检测肾脏损伤情况,并用荧光显微镜观察大鼠肺部及肾脏血管内皮祖细胞的聚集情况.结果:盲肠结扎大鼠的尾动脉平均动脉压下降,体温、脉率及呼吸频率上升,但血管内皮祖细胞移植大鼠的生命体征都得到改善;肺部HE染色及肾脏PAS染色显示血管内皮祖细胞移植组肺部炎症细胞浸润及肾小球基底膜损伤均较模型组减轻,追踪血管内皮祖细胞的定位发现,在肺部及肾脏都有血管内皮祖细胞的聚集.结论:血管内皮祖细胞移植可以迅速聚集在血管损伤部位,对脓毒症大鼠的器官功能受损具有保护作用.     

bMSCs移植对单侧输尿管结扎大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(bMSCs)移植对单侧输尿管结扎(UUO)模型大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响.方法 自Wistar大鼠股骨和胫骨分离bMSCs,经体外传代培养、成脂诱导及鉴定后制备细胞悬液.54只Wistar大鼠随机分为假手术对照组(n=18)、bMSC注射组(bMSC组,n=18)和生理盐水注射组(PS组,n=18).bMSC组和PS组大鼠于UUO模型建立的同时经下腔静脉分别注入bMSCs和等体积生理盐水.于建模后第3、7和14天分批处死大鼠并采集肾脏组织标本,RT-PCR技术检测肾小管细胞FasL mRNA表达,免疫组化染色检测FasL蛋白表达及分布;TUNEL法检测肾小管细胞凋亡,计算凋亡指数.结果 与假手术组比较,bMSC组和PS组建模后各时间点FasL mRNA及蛋白表达均明显上调,肾小管细胞凋亡指数显著增加(均P<0.05).建模后第3、7天时,bMSC组FasL mRNA和蛋白表达的上调幅度及肾小管细胞凋亡指数的增加程度均明显低于PS组(P<0.05);至建模后第14天时,bMSC组与PS组各项检测指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 静脉注入bMSCs对UUO模型大鼠肾小管上皮细胞凋亡有短期抑制作用.     

滋肾调冲法对大鼠外周血内皮祖细胞影响的实验研究

[目的]观察滋肾调冲法代表方功血宁Ⅱ号方对骨髓单个核细胞移植大鼠外周血内皮祖细胞(EPCs)数量的影响,探讨该法对骨髓EPCs的动员作用。[方法]受鼠雌性大鼠经137Cs全身照射后,从尾静脉输注雄性大鼠标记4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光的骨髓单个核细胞。受鼠随机分为移植对照组、功血宁Ⅱ号组和乌鸡白凤丸组,另取未照射大鼠尾静脉输注等量培养液为假孕对照组。骨髓移植24 h后各组给予相应药物或等容积的生理盐水。受鼠造血重建后,各组均制备假孕模型。在黄体早中晚期各组处理1/3数的大鼠,眼内眦取血,流式细胞术检测外周血EPCs的数量。血液涂片,荧光显微镜观察DAPI标记细胞的分布。[结果]荧光显微镜下显示,移植各组黄体各期血液涂片可见DAPI标记细胞,且早期数量为多,功血宁Ⅱ号组尤为明显。各组黄体早期外周血EPCs数目最多,中期略有下降,晚期明显减少(P<0.05或P<0.01)。功血宁Ⅱ号组、乌鸡白凤丸组黄体各期EPCs数目较假孕对照组显著增多(P<0.05或P<0.01);功血宁Ⅱ号组早期较移植对照组和乌鸡白凤丸组显著增多(P<0.05)。[结论]滋肾调冲法能够动员骨髓EPCs,提高外周血中EPCs数量,对EPCs进一步归巢至卵巢黄体,促进黄体血管新生具有重要作用。     

内皮祖细胞自体移植联合阿托伐他汀治疗大鼠急性心肌梗死效果观察

目的:探讨内皮祖细胞(EPCs)自体移植联合阿托伐他汀治疗对急性心肌梗死(AMI)大鼠心功能的影响.方法:30只SD大鼠随机分为心肌梗死对照组(组I)、单纯EPCs移植组(组Ⅱ)和阿托伐他汀联合EPCs移植组(组Ⅲ).每组10只.大鼠无菌心脏采血,应用密度梯度离心法分离单个核细胞,体外培养,获得较纯的EPCs.3组大鼠均结扎左冠状动脉前降支,制造大鼠AMI模型.组Ⅱ、组Ⅲ在模型制备后,于梗死周边庆注射5-溴-2'-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的EPCs,组I注射等量培养液.24 h后.组III以阿托伐他汀50 mg/(kg·d)灌胃.8周后观察大鼠心功能及血流动力学指标的改变,并以免疫组化方法检测心肌组织内EPCs及修复情况.结果:8周后,3组左室短轴缩短率、射血分数、左室收缩压、左室舒张末压及压力变化速率最大值比较,差异均有统计学意义(F分别为95.7、296.5、844.9、67.6、127.0,P均<0.001).组Ⅲ大鼠心功能及血流动力学指标较组Ⅱ和组I改善(P均<0.05),缺血区域的移植细胞部分分化为血管内皮细胞.组I大鼠心肌组织结构紊乱,心肌细胞被瘢痕组织替代;组Ⅱ和组III心肌结构排列明显有序.结论:EPCs移植联合阿托伐他汀治疗AMI效果优于单纯EPCs移植.     

他莫昔芬对肾间质纤维化影响的实验研究

目的：探讨他莫昔芬对肾组织纤维化的影响及作用机制.方法：雌性SD大鼠,建立单侧输尿管梗阻模型（UUO）,设置3组：①模型组（n=6）,行左侧输尿管结扎术,0.3ml无菌等渗盐水灌胃,每天2次;②治疗组（n=6）,他莫昔芬5mg/kg （0.3ml无菌等渗盐水配置） 灌胃,每天2次;③假手术组（n=6）.术后第9d处死各组大鼠.采用光镜和免疫组化观察肾间质纤维化、炎细胞浸润和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的变化.结果：①治疗组大鼠肾间质纤维化程度较模型组明显减轻.②模型组第9d时大鼠肾组织α-SMA表达明显增强,采用他莫昔芬治疗后,肾组织α-SMA表达的异常增强能得到有效抑制,肾组织炎细胞浸润明显减少.结论：昔芬类药物具有减轻肾间质纤维化的作用,而这一作用与其能有效阻抑肾组织上皮细胞-间充质细胞转分化和减少肾间质炎细胞浸润有关.     

他莫昔芬对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用

目的:探讨他莫昔芬对肾组织纤维化的影响及作用机制.方法:雌性SD大鼠,建立单侧输尿管梗阻模型(UUO),设:①模型组(n=6),行左侧输尿管结扎术,0.3 ml无菌生理盐水灌胃,每天2次;②治疗组(n=6),他莫昔芬5 rmg/kg(0.3 ml无菌生理盐水配置)灌胃,每天2次;③假手术组(n=6).术后第9天处死各组大鼠.采用光镜和免疫组化观察肾组织纤维化和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的变化.结果:①治疗组大鼠肾间质纤维化程度较模型组明显减轻.②UUO模型第9天时大鼠肾组织α-SMA表达明显增强,采用他莫昔芬治疗后,肾组织α-SMA表达的异常增强能得到有效抑制.结论:昔芬类药物具有减轻肾组织纤维化的作用,而这一作用与其能有效阻抑肾组织上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)有关.     

内脏脂肪素对内皮祖细胞血管形成能力的影响

目的 内脏脂肪素(visfatin)是一种能够促进血管新生的新型脂肪细胞因子.血管内皮生长因子(VEGF)是血管新生中非常关键的因子.本文在培养的内皮祖细胞(EPCs),探讨visfatin对EPCs血管新生的影响.方法 密度梯度离心法分离人脐血的单个核细胞.利用EGM-2细胞培养基(含EPCs分化所需各种生长因子)进行培养,诱导单个核细胞贴壁向EPCs分化.流式细胞术测定早期EPCs干细胞分子标志CD133/CD34;Dd-ac-LDL和FITC-UEA-1双染鉴定正在分化的EPCs.不同浓度的重组visfatin(0.01-10nM)处理EPCs 24h.Tube形成和迁移实验评价EPCs血管新生能力;荧光定量实时PCIL检测VEGF mRNA水平.结果 0.1 nM和1 nM的visfatin能增加EPCs形成管腔样结构(与对照组比,P＜0.01),10 nM的visfatin组EPCs形成管腔样结构能力和迁移能力却显著降低(与1 nM visfatin组比,P＜0.01).0.1 nM和1 nM visfatin组细胞VEGF mRNA水平明显升高(与对照组比,P＜0.01),而10 nM visfatin组细胞VEGF mRNA明显降低(与1 nM visfatin组比,P＜0.01).结论 生理浓度visfatin能促进EPCs的血管形成,病理浓度其血管形成能力降低,其机制可能与VEGF的表达有关.     

内皮祖细胞对大鼠睾丸扭转复位后生精功能的影响

目的 探讨内皮祖细胞(EPC)移植对睾丸扭转复位后生精功能的影响.方法 获取大鼠骨髓源性EPC,采用携带增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒(Ad-eGFP)转染EPC.将大鼠分3组,每组各6只.假手术组:左侧睾丸未扭转;缺血再灌注损伤(IRI)组:睾丸扭转复位后经股静脉注射1 ml生理盐水;EPC组:睾丸扭转复位后注射1 ml EPC悬液(EPC数为1.0×106个).另外对3只睾丸扭转复位后大鼠进行Ad-eGFP转染后的EPC移植.术后5 d,观察移植EPC的归巢特征,并检测各组睾丸组织病理变化以及凋亡细胞/生精小管情况.结果 重复感染倍数(MOI)=50时,Ad-eGFP对EPC的转染效率>73.7%.Ad-eGFP EPC移植后5 d,可在左侧睾丸组织中发现绿色荧光细胞.假手术组生精细胞结构正常,凋亡细胞/生精小管为0.09±0.02.IRI组生精细胞稀少,凋亡细胞/生精小管为2.82 ±0.81.EPC组生精上皮较IRI组显著增厚,EPC组凋亡细胞/生精小管为0.32±0.09,低于IRI组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 EPC移植可改善睾丸扭转导致的生精功能障碍,对生精细胞产生保护作用.

Abstract：

Objective To investigate the effects of transplanted endothelial progenitor cells (EPCs) on the spermatogenic functions in testicular detorsion. Methods Bone-marrow-derived EPCs were obtained from rats and transfected by enhanced green fluorescent protein adenovirus (Ad-eGFP). The rats were divided into 3 groups (n=6 each). In the sham group, left testis was not twisted. In the ischemia reperfusion injury (IRI) group, 1 ml saline was injected into the femoral vein of each rat after testicular detorsion. In the EPCs group, 1 ml EPCs suspension (1.0×106 EPCs) was injected into each rat after testicular detorsion. The Ad-eGFP transfected EPCs were injected into the 3 additional rats of testicular torsion-detorsion. At Day 5 post-transplantation, the characteristics of transplanted EPCs homing were detected. And the pathological changes and apoptotic cells/seminiferous tubules in left testis were examined. ResultsWhen the value of multiplication of infection (MOI) was at 50, the transfection rate of EPCs by Ad-eGFP exceeded 73.7%. At Day 5 post-treatment, the cells exhibiting green fluorescence were detected in left testis. The germ cells in rats of the sham group were normal. And the ratio of apoptotic cells to seminiferous tubules was 0.09±0.02. The germ cells in rats of the IRI group were much fewer. And the ratio of apoptotic cells to seminiferous tubules was 2.82±0.81. As compared with the IRI group, seminiferous epithelium was thicker in the EPCs group. And the ratio of apoptotic cells to seminiferous tubules was 0.32±0.09 in the EPCs group. It was much smaller than that in the IRI group. There was significant difference (P<0.01). Conclusion The transplantation of EPCs is effective for treating the spermatogenic dysfunctions caused by testicular torsion so as to greatly enhance the spermatogenic functions.     

山奈酚对糖尿病大鼠骨髓来源内皮祖细胞管腔形成的影响

目的观察山奈酚对糖尿病大鼠骨髓来源内皮祖细胞管腔形成能力的影响,为2型糖尿病的治疗提供参考依据。方法体外原代培养内皮祖细胞,采用牛血清白蛋白糖基化终末产物(BSA-AGEs)(100mg/L)与山奈酚(2μM,10μM,50μM)分别作用于内皮祖细胞24h,M~atrigel胶上观察其管腔形成能力。结果山奈酚(2μM,10μM,50μM)三组的EPCs管腔形成数目分别是4.7/×100视野,5.2/×100视野和6.1/×100视野,与AGEs组(4.3/×100视野)比较,组间比较差异有统计学意义(F=55.58,P0.05)。结论山奈酚能够改善糖尿病内皮功能障碍,提高微血管管腔形成的能力,对2型糖尿病性心肌病的治疗和糖尿病血管并发症的预防有效。