miR-421下调Bcl-XL诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的作用机制

目的探究miR-421在宫颈癌中的表达情况及其对细胞凋亡的作用机制。方法通过实时荧光定量核酸扩增检测miR-421在宫颈癌组织和癌旁正常宫颈组织中的表达情况。选取宫颈癌Hela细胞,并将miR-421 inhibitor、空白对照及miR-421 inhibitor+Bcl-XL转染Hela细胞,采用流式细胞术检测miR-421对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响,双荧光素酶实验验证miR-421与B淋巴细胞瘤-XL(B cell lymphoma-XL, Bcl-XL)蛋白的靶向调节关系,Western Blot检测miR-421对Bcl-XL蛋白表达的影响。结果实时荧光定量核酸扩增检测结果显示,宫颈癌组织及癌旁正常宫颈组织的miR-421表达量分别为3.13±0.26、1.23±0.11,比较差异有统计学意义(P0.05)。流式细胞术检测结果显示,miR-421 inhibitor组与对照组细胞凋亡率分别为(2.63±0.13)%、(12.31±0.29)%,比较差异有统计学意义(P0.05)。双荧光素酶检测结果及Western Blot实验显示,抑制miR-421表达后,野生型Bcl-XL的荧光素酶活性受到明显抑制,而突变型Bcl-XL的荧光素酶活性影响不大,同时抑制miR-421表达后,Bcl-XL的蛋白表达水平也显著降低。结论 miR-421通过下调Bcl-XL以诱导宫颈癌Hela细胞凋亡。     

miR-202在膀胱癌细胞中的表达水平及其对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

【目的】探讨miR-202在膀胱癌细胞中的表达水平及其对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。【方法】实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测膀胱细胞中miR-202的相对表达水平;转染技术将miR-202和miR-NC质粒转染至UM-UC-3细胞中,并设置为miR-202组和NC组。细胞增殖实验、细胞侵袭实验和凋亡实验分别检测两组细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡情况,比较两组裸鼠移植瘤体积和重量,Western blot实验检测两组细胞中PIK3CA蛋白的表达情况。【结果】膀胱癌细胞中miR-202的相对表达水平分别低于正常膀胱上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-202组与NC组相比细胞的OD值、迁移和发生侵袭的细胞数降低,凋亡率增加,差异有统计学意义(均P<0.05)。miR-202组移植瘤的体积和重量均低于NC组,差异有统计学意义。miR-202组PIK3CA蛋白的表达低于NC组,差异有统计学意义。【结论】miR-202可能通过抑制PIK3CA蛋白的表达从而抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭并诱导细胞凋亡。     

miR-181a-5p对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的探究miR-181a-5p对T淋巴细胞白血病(T lymphocytic leukemia, TLL)Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。方法采用miR-181a-5p mimic、pc-B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2, BCL-2)不同组合方式转染Jurkat细胞,并将细胞分为Jurkat组、mimic-scramble组、miR-181a mimic组、pc-BCL-2组和mimic+pc-BCL-2组。RT-PCR检测miR-181a-5p的表达及pc-BCL-2 mRNA水平,Western Blot检测BCL-2蛋白表达,CCK8和流式细胞学检测细胞增殖和凋亡情况。结果与mimic-scramble组比较,miR-181a mimic组miR-181a-5p表达水平显著升高,BCL-2 mRNA水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。与Jurkat组比较,miR-181a mimic组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数降低,细胞凋亡率明显升高,pc-BCL-2组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P0.01);与miR-181a mimic组比较,mimic+pc-BCL-2组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数升高,细胞凋亡率显著下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论 miR-181a-5p通过靶向抑制BCL-2表达以抑制TLL细胞系Jurkat细胞增殖、诱导细胞凋亡。     

二羟异黄酮诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的分子机制

目的:分析植物雌激素二羟异黄酮诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的分子机制和信号途径。方法:①实验于2005-11/2006-01在解放军第四军医大学军事预防医学系营养与食品卫生学教研室完成。②用十二孔培养板于细胞培养箱培养乳腺癌MCF-7细胞株(本实验室冻存)至对数生长期,施加终浓度分别为0,5,10,20,40μmol/L的二羟异黄酮(购自Sigma公司,4℃储存),作用24h后收集细胞,采用反转录聚合酶链反应方法检测cyclinE1,cdk2和p21表达水平。③计量资料差异比较采用单因素方差分析。结果:二羟异黄酮终浓度为0,10,20,40μmol/L时,细胞周期素cyclinE1和cdk2与β-actin基因条带的A值比值依次下降(P<0.05);p21与β-actin基因条带的A值比值依次上调(P<0.05);二羟异黄酮终浓度为0,5μmol/L时,cyclinE1,cdk2,p21与β-actin基因条带的A值比差异不明显(P>0.05)。结论:二羟异黄酮诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡可能是通过p21-cyclinE1/CDK2这条信号通路,且这种诱导呈剂量依赖性。     

反义miR-21抑制宫颈鳞状细胞癌CaSki细胞系生长体外研究

目的探讨敲低miR-21表达对宫颈鳞状细胞癌细胞系CaSki增殖活性与凋亡的影响。方法实时荧光定量RT-PCR法检测正常宫颈组织、CaSki细胞转染前后miR-21的表达水平,采用MTT法、流式细胞术等技术检测转染后CaSki细胞增殖活性与凋亡的变化。结果 miR-21在CaSki细胞中表达水平为正常宫颈组织的3.25倍。CaSki细胞中转染反义miR-21(AS-miR-21)可显著抑制其表达。转染后24h、48h、72h、96h,MTT检测提示10nmol与20nmolAS-miR-21转染组中细胞增殖率较对照组明显降低(P<0.05),自48h抑制作用显现,且随着转染浓度增加,抑制作用增强,呈现剂量依赖性。细胞周期检测结果显示AS-miR-21转染组的G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少(P<0.05)。AnnexinⅤ联合PI技术检测细胞凋亡,结果显示AS-miR-21转染组早期凋亡细胞率[(23.40±2.16)%]明显高于空白对照组[(5.1±2.16)%]、阴性对照组[(6.87±0.55)%](P=0.000)。结论 AS-miR-21转染可敲低CaSki细胞中miR-21表达,并有效抑制细胞增殖活性,促进细胞凋亡。     

直流小电场诱导乳腺癌细胞凋亡及其机制的初步研究

目的研究直流小电场对于乳腺癌细胞凋亡的诱导作用及其可能机制。方法应用体外直流小电场作用于乳腺癌细胞系MCF7,观察其对乳腺癌细胞凋亡和重要基因 p5 3、Rb以及E2F1表达的影响。 结果直流小电场对乳腺癌细胞有明显的诱导作用 ,2 0 0mV/mm组癌细胞大量脱落 ,电场组凋亡癌细胞数目随电场强度升高而增多 (P <0 0 1)。电场组p5 3、Rb基因mRNA表达明显升高 ,E2F1基因mRNA表达明显下降。结论直流小电场对乳腺癌细胞具有明显的凋亡诱导作用并可能与 p5 3、Rb以及E2F1基因的表达相关。     

二羟异黄酮诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的分子机制

目的：分析植物雌激素二羟异黄酮诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的分子机制和信号途径。 方法：①实验于2005—11／2006-01在解放军第四军医大学军事预防医学系营养与食品卫生学教研室完成。②用十二孔培养板于细胞培养箱培养乳腺癌MCF-7细胞株（本实验室冻存）至对数生长期，施加终浓度分别为0，5，10，20，40μmol/L的二羟异黄酮（购自Sigma公司，4℃储存），作用24h后收集细胞，采用反转录聚合酶链反应方法检测cyclin E1，cdk2和p21表达水平。③计量资料差异比较采用单因素方差分析。 结果：二羟异黄酮终浓度为0，10，20，40μmoL／L时，细胞周期素cyclin E1和cdk2与β—actin基因条带的A值比值依次下降（P〈0．05）；p21与β—actin基因条带的A值比值依次上调（P〈0．05）；二羟异黄酮终浓度为0，5μmol／L时，cyclin E1，cdk2，p21与β-actin基因条带的A值比差异不明显（P〉0．05）。 结论：二羟异黄酮诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡可能是通过p21-cyclin E1／CDK2这条信号通路，且这种诱导呈剂量依赖性。     

miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响及机制

目的探讨miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法设置miR-con组、miR-219a-5p组、anti-miR-con组、anti-miR-219a-5p组、miR-219a-5p+pcDNA组、miR-219a-5p+pcDNA-SMC4组、miR-con+SMC4-WT组、miR-con+SMC4-MT组、miR-219a-5p+SMC4-WT组、miR-219a-5p+SMC4-MT组,转染均用脂质体法。qRT-PCR检测miR-219a-5p和SMC4 mRNA表达水平;Western Blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于人正常皮肤细胞HaCaT,皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2、Colo-16、SCL-1中SMC4 mRNA和蛋白表达水平显著升高,miR-219a-5p表达水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;促进Caspase-3蛋白表达,抑制Cyclin D1蛋的表达;抑制Wnt/β-catenin信号通路激活。miR-219a-5p靶向负调控SMC4的表达,转染SMC4野生型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而转染SMC4突变型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性差异不显著。且过表达miR-219a-5p,SMC4表达水平显著降低;抑制miR-219a-5p表达,SMC4表达水平显著升高。过表达SMC4能逆转miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2的增殖抑制和凋亡促进的作用。结论miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin及SMC4信号通路有关,将为皮肤鳞状细胞癌的预防和治疗提供新靶点。     

乳康饮抑制乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖和诱导凋亡的作用研究

目的 探讨复方中药乳康饮对体外培养的人乳腺癌MDA-MB-435S 细胞增殖及诱导凋亡的作用.方法 乳康饮不同浓度(1.125、2.25、4.5、9.0 和18.0 mg/ml)处理MDA-MB-435S 细胞至对数生长期.MTT 法筛选最佳药物处理浓度和时间的组合,计算抑制率.流式细胞技术检测MDA-MB-435S 细胞的凋亡.结果 乳康饮对MDA-MB-435S 细胞增殖的抑制率随浓度的增加而增高(P ＜0.01),同时可以阻滞细胞周期于G2 ～M 期,而且随剂量的增大,作用时间的延长,阻滞作用也增强.乳康饮诱导MDA-MB-435S 细胞凋亡率较对照组显著增加(P ＜0.01).结论 乳康饮可抑制乳腺癌MDA-MB-435S 细胞增殖,促进细胞凋亡.     

乳腺癌间质干细胞对紫杉醇诱导MCF-7细胞凋亡的作用

目的分离、培养、鉴定乳腺癌及癌旁组织来源的间质干细胞(BC-MSCs,BN-MSCs),探讨其对紫杉醇诱导的乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响。方法采用组织贴壁法分离培养MSCs,成骨成脂诱导法检测其分化能力,流式细胞术分析其表面标记。收集MSCs 48 h的培养上清液(BC-MSCs-CM,BN-MSCs-CM),分别与紫杉醇共同处理MCF-7细胞,MTT实验检测各不同处理组MCF-7细胞的抑制率及细胞生长状况,细胞分析仪检测MCF-7细胞凋亡及细胞活力情况。结果乳腺癌及癌旁组织中能够分离培养出MSCs,显微镜下观察细胞呈长梭形,诱导后可分化为脂肪细胞和成骨细胞,该MSCs高表达CD29、CD90,不表达CD14、CD45表面分子标志;BC-MSCs-CM+紫杉醇处理组的细胞抑制率低于紫杉醇处理组;紫杉醇+BC-MSCs-CM处理组MCF-7细胞凋亡率(27.60%±2.12%)低于紫杉醇组(47.80%±2.59%),差异有统计学意义(P<0.05);紫杉醇+BC-MSCs-CM处理组MCF-7细胞活力(72.07%±2.09%)高于紫杉醇组(51.30%±2.35%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论乳腺癌组织中能够分离培养出BC-MSCs,和BN-MSCs相比,BC-MSCs能够显著减少紫杉醇诱导MCF-7细胞的凋亡,增加其活力。     

miR-200b-5p、ATAD2在宫颈癌组织中的表达水平及其与患者预后的关系

【目的】探讨miR-200b-5p、三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)在宫颈癌组织中的表达水平及其与患者预后的关系。【方法】收集2019年1月至2020年3月在本院行手术治疗且经病理确诊的124例宫颈癌组织和癌旁组织(距癌组织≥5cm)标本,检测并比较癌组织、癌旁组织中的miR-200b-5pmRNA、ATAD2 mRNA的表达水平;随访18个月,统计宫颈癌患者预后情况,并依据预后情况分为死亡组和生存组,比较两组患者临床资料;采用Logistic多因素回归分析影响宫颈癌患者预后的危险因素;制作受试者工作特征(ROC)曲线,以曲线下面积(AUC)分析宫颈癌组织miR-200b-5p、ATAD2表达对宫颈癌患者预后的预测效能。【结果】宫颈癌组织中miR-200b-5pmRNA水平低于癌旁组织(P<0.05),ATAD2mRNA水平高于癌旁组织(P<0.05)。随访18个月,宫颈癌患者死亡发生率为17.74%。死亡组临床分期为Ⅲ/Ⅳ期占比、淋巴结转移、低分化程度占比、肌层浸润深度>1/2占比及宫颈癌组织ATAD2mRNA水平高于生存组(P<0.05),宫颈癌组织miR-200b-5p水平低于生存组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示:临床分期为Ⅲ/Ⅳ期、低分化程度及宫颈癌组织中低miR-200b-5pmRNA水平、高ATAD2mRNA水平均是影响宫颈癌患者预后的危险因素(OR=2.835、2.793、3.080、3.364,P<0.05)。ROC分析结果显示:宫颈癌组织中miR-200b-5p mRNA、ATAD2mRNA水平预测宫颈癌患者死亡的AUC分别为0.793、0.860。【结论】miR-200b-5pmRNA在宫颈癌组织中呈低表达,ATAD2mRNA则呈高表达;宫颈癌组织miR-200b-5pmRNA、ATAD2mRNA对宫颈癌患者死亡的预测效能较高,可作为评估该类患者预后的重要参考指标。     

抑制Yes-相关蛋白表达促进芬太尼诱导乳腺癌细胞凋亡的研究

目的 探讨芬太尼调控Yes-相关蛋白(YAP)在乳腺癌细胞增殖凋亡中的作用及机制.方法 细胞增殖试验(MTT)检测乳腺癌细胞MCF-7增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blots检测相关蛋白表达,荷瘤小鼠体内验证芬太尼及YAP对乳腺癌生长的作用,Student t检验用于比较两组间的差异.结果 芬太尼(2μ...     

iASPP抑制p53诱导的细胞凋亡

iASPP(inhibitor of ASPP family)是p53凋亡刺激蛋白家族ASPP(apoptosis stimulating protein of p53)中唯一的一个抑制因子,能够抑制p53诱导的细胞凋亡。iASPP基因在癌组织中表达上调,对肿瘤发生、发展起重要促进作用,具有早期诊断价值。进一步的研究显示iASPP基因沉默后,肿瘤细胞凋亡增强,使其有望发展成为肿瘤治疗的新靶点。     

miR-122介导肝癌细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨微小RNA-122(mi R-122)介导肝癌细胞凋亡的分子作用机制。方法将人工合成的mi R-122类似物、对照片段NC转染到肝癌细胞Hep G2(p53wt)、MHCC97H(p53 mutation)后,mi R-122组(转染mi R-122)、对照组(转染对照无意片段)和空白对照组均应用RT-PCR检测mi R-122,Western blot检测p53、Bax蛋白,MTT法检测肝癌细胞增殖变化,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡率。结果在Hep G2中,mi R-122组的mi R-122的表达、p53蛋白和Bax蛋白表达量明显高于对照组和空白对照组,三组间差异均有统计学意义(χ~2=13.41,F分别=15.35、16.88,P均<0.05)。在MHCC97H中,mi R-122组mi R-122的表达和Bax蛋白表达量明显高于对照组和空白对照组,三组间差异均有统计学意义(χ~2=12.98,F=18.91,P均<0.05),而三组的p53蛋白测定值比较,差异无统计学意义(F=2.82,P>0.05)。在Hep G2和MHCC-97H细胞中,与对照组和空白对照组比较,mi R-122组细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(χ~2分别=8.53、7.81、11.64、12.45,P均<0.05)。对照组和空白对照组的细胞增殖和细胞凋亡率无明显变化,差异均无统计学意义(χ~2=0.08、0.05、0.12、0.09,P均>0.05)。结论 mi R-122可通过p53依赖途径及非p53依赖途径促进肝癌细胞凋亡。     

p53基因诱导白血病细胞凋亡的机制研究

目的：探讨p53基因诱导白血病细胞凋亡过程中内源性TGF-β1、TNF-α、端粒酶活性、Bcl-2表达的改变及其意义。方法：利用脂质体将温敏型p53基因[pN53cG(Val135)]导入p53基因缺失的白血病细胞系HL-60、K562细胞，经G418筛选，获得稳定表达p53蛋白的抗性克隆细胞HL-60pN53cG，K562-pN53cG细胞。采用缺口末端标记法、片段化DNA分析、RT-PCR、定量PCR、ELISA、PCR-ELISA、流式细胞术等方法检测外源性p53基因诱导白血病细胞凋亡过程中TGF-β1、TNF-α、bcl-2、端粒酶反转录酶(hTERT)mRNA表达变化、细胞上清TGF-β1水平和端粒酶活性及。TGF-β1、TNF-α反义PS-ODNS对白血病细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达的影响。结果:①外源性野生型p53基因诱导细胞凋亡过程中内源性。TGF-β1和TNF-α mRNA表达上调，bcl-2及hTERT mRNA表达下调，细胞培养上清TGF-β1蛋白水平明显升高，端粒酶活性水平下降；②TGF-β1、TNF-α反义PS-ODNS能够明显抑制野生型p53基因诱导细胞凋亡的发生，并使细胞bcl-2 mRNA及蛋白表达恢复到处理前的水平。结论：p53基因诱导白血病细胞凋亡可通过上调内源性TGF-β1和TNF-α水平，下调hTERT mRNA表达及端粒酶活性，抑制bcl-2基因表达而发挥作用。     

乳腺癌细胞来源外泌体miR-181a-5p对恶病质肌肉萎缩的影响

目的 探讨乳腺癌细胞来源外泌体miR-181a-5p对恶病质肌肉萎缩的影响及可能机制。方法 小鼠乳腺癌细胞4T1、小鼠正常乳腺细胞HC11分别采用条件培养基培养并从中分离纯化外泌体,采用Western blot法检测4T1细胞、HC11细胞外泌体肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101, TSG101)、CD63、CD9、高尔基体基质蛋白(Golgi matrix protein, GM130)相对表达量,采用实时荧光定量PCR法检测miR-181a-5p相对表达量。小鼠成肌细胞C2C12分化为肌管细胞后分为对照组(正常培养)、条件培养基组(与4T1细胞培养基共培养)和细胞松弛素D(cytochalasin D, cytoD)组(胞吞抑制剂cytoD处理细胞后与4T1细胞培养基共培养),采用Western blot法检测肌球蛋白重链(myosin heavy chain, MHC)、肌萎缩蛋白-1(Atrogin-1)蛋白相对表达量。取人胚胎肾细胞HEK293T,采用荧光素酶报告基因实验验证miR-181a-5p与N-myc下游调节基因2(N-my...     

黄芩苷诱导HL-60细胞凋亡的分子机制研究

本研究旨在探讨黄芩苷对急性髓系白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。CCK-8法检测黄芩苷对HL-60细胞增殖抑制情况;普通光学显微镜和Hoechst 33342染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达;Westernblot检测Bcl-2、Bax、caspase-8及caspase-3剪切片段的蛋白表达。结果表明,黄芩苷对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性;在光学显微镜和荧光显微镜下细胞均呈凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI法检测到细胞早期凋亡;caspase-3、caspase-9、Bax基因mRNA表达水平呈上升趋势,Bcl-2 mRNA表达水平呈下降趋势,Bax、caspase-8及capsase-3剪切片段蛋白表达上调,同时Bcl-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值降低。结论:黄芩苷显著抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,激活线粒体凋亡途径及死亡受体途径有关。     

EPA与ISA联合应用对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的作用研究

【目的14g讨二十碳五烯酸（EPA）联合2,3-吲哚醌（ISA）对人乳腺癌细胞毒活性的作用及可能机制。【方法】联用不同浓度的EPA与ISA孵育人乳腺癌细胞MDA-MB-231不同时间,采用CCK-8法检测IsA对乳腺癌细胞MDA～MB-231的增殖抑制率;以TBA法测定细胞抽提物中脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量,用亚硝酸盐分光光度法测定一氧化氮（N0）含量,考察EPA与ISA对人乳腺癌细胞MDA-M13-231的影响。[结果]ISA对MDA-MB-231细胞增殖有明显的抑制作用,EPA与ISA联用可加强ISA对细胞的增殖抑制,同时伴有MDA水平的增加及N0含量的降低。[结论]EPA能明显增加IsA对MDA-MB-231细胞的细胞毒活性,机制之一是EPA增强了肿瘤细胞内的脂质过氧化作用。     

微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的：以人成骨肉瘤细胞系为研究对象，探讨微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡及其适宜作用剂量、作用时间。方法：以微波不同作用剂量和时间，作用于人成骨肉瘤细胞。采用形态学观察，四唑兰显色法．软琼脂集落形成实验，FCM等方法观察微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡。结果：寻找到了微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡的最佳作用剂量和时间，分别为100W／m^2和1h。结论：微波辐射可诱导成骨肉瘤细胞凋亡。