姜黄素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对前列腺癌细胞的抑制作用

目的:探讨姜黄素(curcumin,Cur)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)对前列腺癌细胞的抑制作用。方法:CCK-8法测定Cur、TRAIL及Cur联合TRAIL作用于PC-3细胞后的细胞生存率,流式细胞技术测定细胞周期及凋亡率,光学显微镜下观察细胞形态,Western blot检测凋亡蛋白caspase-3表达水平的变化。结果:与对照组比较,Cur联合TRAIL组能显著抑制PC-3细胞增殖(P<0.05),呈时间依赖性,且使PC-3细胞阻滞于G2/M期比例明显增多(P<0.05)。镜下可见联合应用Cur和TRAIL处理的PC-3细胞凋亡形态改变明显,凋亡率较对照组高(P<0.05),凋亡蛋白caspase-3表达也增强。结论:Cur与TRAIL联用可明显增强PC-3细胞抑制效果和诱导凋亡作用,其凋亡作用机制可能与其上调caspase-3表达有关。     

人骨髓间充质干细胞条件培养液对前列腺癌PC-3细胞生长的影响

目的:探讨人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)条件培养液(conditioned medium,CM)对前列腺癌PC-3细胞生长的影响。方法:从健康成人骨髓中分离、培养并扩增MSCs。第3代(P3)MSCs融合达80%时更换培养液,继续培养24h后收集上清液,即MSCs-CM。PC-3细胞分别在常规培养液(对照组)和含50%MSCs-CM的培养液(CM处理组)中培养。使用透射电子显微镜观察细胞超微结构,采用WST-8法检测细胞增殖活性,采用FCM法分析细胞周期变化。结果:培养第4天时,透射电子显微镜观察发现,与对照组相比,CM处理组细胞核质比更小,细胞质中细胞器更为丰富。培养第1、3、5和7天时,WST-8法检测显示,2组间除第1天的吸光度(D)值无统计学差异(P>0.05)外,其余3天实验组的D值均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。培养第4天时,FCM法检测显示,与对照组相比,CM处理组处于G0/G1期的细胞比例降低[(56.200±0.78)%vs(68.535±1.21)%],同时处于S+G2/M期的细胞比例升高[(43.80±0.77)%vs(31.46±1.20)%],差异有统计学意义(P<0.01)。结论:MSCs-CM可通过加快G1/S细胞周期转换而促进PC-3细胞增殖。     

藤黄酸抑制前列腺癌PC-3细胞增殖并诱导其细胞凋亡

目的:研究中药藤黄的有效成分藤黄酸(gambogic acid,GA)对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度的GA作用前列腺癌PC-3细胞后,在体外通过CCK-8比色法分析细胞的增殖情况,吖啶橙/溴化乙啶(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)双重染色法和FCM法分析细胞的凋亡情况;蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白P53、Bax和Bcl-2的表达变化。结果:GA不仅能抑制PC-3细胞的增殖,而且能有效诱导其细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且其抑制增殖和促凋亡作用呈浓度依赖性。CCK-8法检测结果表明,GA浓度>1μmol/L时,细胞的增殖能力受到明显抑制。AO/EB染色法显示,GA处理后的前列腺癌PC-3细胞核呈致密浓染橘红色,并伴有核浓缩和偏向。FCM法检测结果显示,GA处理后的前列腺癌PC-3细胞凋亡峰明显。蛋白质印迹法进一步表明,GA能够上调PC-3细胞中Bax和P53的表达水平,下调Bcl-2表达水平。结论:GA对前列腺癌PC-3细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用。     

浅蓝菌素对前列腺癌细胞株PC-3生长抑制的研究

目的:探讨脂肪酸合成酶(FAS)的抑制剂浅蓝菌素对前列腺癌细胞株PC-3的生长抑制作用。方法:采用人前列腺癌细胞株PC-3在体外实验中用MTT法观察浅蓝菌素对细胞株的生长抑制作用;流式细胞术(FCM)对细胞株的凋亡及细胞周期的变化进行检测;蛋白免疫印迹(W estern b lotting)法检测浅蓝菌素对PC-3细胞中FAS蛋白水平表达的影响。结果:PC-3细胞在浅蓝菌素的作用下,细胞增殖被明显阻遏,并呈现剂量效应关系,在浓度为2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L的浅蓝菌素作用下,PC-3细胞24h的抑制率分别为(34.78±2.47)%、(46.76±3.18)%、(58.13±3.55)%、(65.31±2.81)%,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪显示,细胞经浅蓝菌素作用后,细胞凋亡增多,PC-3细胞在浅蓝菌素浓度5.0mg/L三个时间组(24h,48h,72h)的细胞凋亡率分别为(28.29±1.88)%、(44.73±2.69)%、(61.25±1.43)%;且G0/G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例减少。蛋白免疫印迹实验中,随着浅蓝菌素作用时间的延长,PC-3细胞中的FAS蛋白水平表达量明显减少,药物作用时间与细胞中蛋白水平表达量呈负相关。结论:浅蓝菌素能抑制PC-3细胞生长,且其呈现时间和浓度依赖性。     

左旋棉酚体外诱导人前列腺PC-3细胞凋亡的研究

目的:研究左旋棉酚对人前列腺癌PC-3细胞体外增殖和凋亡的影响。方法:MTT法检测左旋棉酚对PC-3细胞增殖的影响,透射电镜观察细胞超微结构的改变,TUNEL染色观察细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期的改变,半定量RT-PCR检测Bcl-2及Bak mRNA的表达水平。结果:左旋棉酚能显著抑制PC-3细胞的体外增殖,并呈浓度-时间依赖性。左旋棉酚可以诱导PC-3细胞发生典型的凋亡形态学改变和G0/G1期阻滞,RT-PCR显示Bcl-2 mRNA表达水平降低,Bak mRNA表达水平升高。结论:左旋棉酚能诱导前列腺癌细胞的体外凋亡,主要可能与Bak mRNA的表达升高及Bcl-2 mRNA的表达下调有关。     

雷帕霉素对人前列腺癌PC-3细胞的作用及其机制

背景与目的：哺乳动物细胞中雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号途径调节细胞生长、增殖、存活和凋亡。本实验是研究雷帕霉素对前列腺癌PC-3细胞的作用及其机制。方法：培养前列腺癌PC-3细胞,采用MTT法检测雷帕霉素1nmol／L作用24h、36h、48h、72h后PC-3细胞增殖的改变,流式细胞术检测作用不同时间细胞周期的改变,Western blot检测雷帕霉素作用PC-3细胞24h、36h、48h、72h后raptor、rietor、Akt、pS6k1-T389、pAkt-s473的表达情况。结果：MTT结果显示雷帕霉素在作用24h时,促进了PC-3细胞增殖,但在36h显著抑制PC-3细胞增殖（P〈0．01）,72h时抑制作用更明显。FCM结果显示雷帕霉素作用24h时S期细胞有所增加,但作用36、48、72h后PC-3细胞的G1期细胞逐渐增加,使PC-3细胞周期主要阻滞在G。期。Western blot检测结果显示雷帕霉素作用24h时显著抑制raptor和pS6k1-T389的表达（P〈0．01）;rictor、Akt表达并没有显著变化;pAkt-s473表达在雷帕霉素作用24h时反而显著增加（P〈0．01）,但在36h后即被显著抑制,72h几乎完全被抑制（P〈0．01）。结论：延长雷帕霉素作用时间可抑制PC-3细胞增殖,其机制可能与雷帕霉素阻滞细胞周期、抑制Akt磷酸化有关。     

dsP21-625 通过激活P21 基因表达抑制前列腺癌细胞的增殖

目的:探讨人工合成小分子双链RNA-625（double-stranded RNA-625,dsP21-625）对前列腺癌细胞P21 基因的激活作用及对细胞增殖的影响。方法: 将人工合成的dsP21-625（dsP21-625 组）和dsCtrl 质粒（dsCtrl 组）分别转染至前列腺癌细胞株PC-3 和DU-145。用实时荧光定量PCR和Western blotting 分别检测转染后各组前列腺癌细胞中P21、细胞周期素E（Cyclin E）和细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）mRNA及蛋白的表达水平,流式细胞术、MTT实验和克隆形成实验分别检测细胞周期分布、细胞增殖和克隆形成能力。结果: 与dsCtrl 组比较,dsP21-625 组PC-3 和DU-145 细胞中P21 mRNA水平升高(均P<0.01),Cyclin E和CDK2 mRNA表达水平下调（均P<0.01）;dsP21-625 组PC-3 和DU-145 细胞中P21 蛋白表达上调(均P<0.01),Cyclin E和CDK2 蛋白表达下调（均P<0.01）;dsP21-625 组细胞S 期和G2/M 期的细胞比例减少（均P<0.05）,G0/G1 期的细胞比例增加（均P<0.01）;dsP21-625 组细胞增殖活力降低（均P<0.05）、克隆形成数减少（均P<0.05）。结论: dsP21-625 上调前列腺癌细胞中P21 mRNA及蛋白的表达,下调Cyclin E和CDK2 mRNA及蛋白的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖能力。     

BAY 11-7082对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨BAY 11-7082对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响.方法:选择PC-3细胞分别加入不同浓度(2.5μmol/L、5μmol/L)的Bay 11-7082培养2h(实验1组与实验2组),同时选择空白对照组,检测三组细胞增殖、凋亡与细胞周期变化情况.结果:实验1组与实验2组的细胞存活率分别为(65.14±13.26)%和(55.81±14.55)%,明显低于空白对照组(85.45±12.33)%(P<0.05).空白对照组、实验1组与实验2组的细胞凋亡率分别为(0.56±0.11)%、(10.12±2.37)%和(17.23±2.46)%,对比差异都有统计学意义(P<0.05).实验组的G 0/G1期细胞数目较对照组明显增加(P<0.05),同时实验组的S、G 2/M期细胞数目较对照组明显减少(P<0.05),实验1组与实验2组之间对比差异也有统计学意义(P<0.05).结论:BAY 11-7082能明显抑制人前列腺癌PC-3细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡,其部分机制可能是通过调节细胞周期实现的.     

德士康对前列腺癌激素非依赖型细胞株细胞周期的抑制作用

目的探讨中草药混合制剂德士康(暂定名)对雄激素非依赖型前列腺癌细胞株PC 3、DU145细胞周期的抑制作用和机制.方法MTT法检测用药后细胞增殖的改变,流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的改变,Western blot方法分析细胞周期相关蛋白表达的改变.结果德士康可抑制PC-3、DU145细胞的生长,PC-3、DU145分别主要受阻于G1期和G2/M期.用药组p16Ink4a蛋白表达增高,Rb磷酸化蛋白表达降低,伴有非磷酸化Rb蛋白的相应增多;而p21waf1、p27Kip1和细胞周期蛋白cyclin D1的表达均无明显改变.结论德士康可能是通过影响p16Ink4a蛋白的表达,改变细胞周期蛋白依赖蛋白激酶的活性,最后作用于Rb,抑制其磷酸化而发挥作用,从而抑制PC-3、DU145细胞的生长,具有应用于临床治疗的前景.     

NS-398对胰腺癌细胞株PC-3放射增敏作用及其机制的研究

目的:应用选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398作用于胰腺癌细胞株PC-3,观察其放射增敏作用,并对其可能机制进行初步探讨。方法:体外培养胰腺癌细胞株PC-3;以流式细胞术(FCM)单抗标记技术检测PC-3细胞的COX-2表达水平;以MTT实验检测细胞增殖抑制情况及NS-398对细胞放射敏感性的影响;以FCM分析细胞周期变化以RT-PCR及FCM分析凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达变化。结果:FCM显示PC-3细胞存在COX-2的异常高表达;MTT实验显示,与单纯照射组比较,联合NS-398照射组的细胞生存率显著降低〔(78.45±3.46)%vs(57.42±2.58)%,χ2=5.52,P=0.016〕;FCM显示,NS-398联合放射组S期细胞比值显著下降(χ2=4.91,P=0.029),而G2～M期细胞比值显著增加(χ2=3.92,P=0.041),NS-398和放射线可协同作用,使PC-3细胞的周期再分布显著变化;RT-PCR及FCM显示,NS-398可致细胞内Bcl-2/Bax比值下降。结论:选择性COX-2抑制剂NS-398可增强胰腺癌细胞PC-3的放射敏感性,其机制可能与改变细...     

肿瘤细胞之间的交流

一个肿瘤细胞的产生并不意味着肿瘤发生.多个肿瘤细胞之间的对话使肿瘤成为一个异常的组织或器官.细胞接触、挤出、纠缠、迁移和变异维持着肿瘤细胞间的有序组织和肿瘤的持续生长.阻断肿瘤细胞之间的对话可能成为新的肿瘤治疗策略.     

APE1表达变化对人非小细胞肺癌细胞A549增殖的影响

目的:探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1,APE1)对人非小细胞肺癌细胞A549增殖能力的影响,为肺癌的个性化靶向治疗提供理论依据。方法:使用脂质体转染法将重组表达质粒pSIREN-RetroQ-APE1-shRNA和pOZN-HA-APE1导入A549细胞,免疫印迹检测APE1表达情况。MTT、平板克隆实验、免疫印迹检测APE1对非小细胞肺癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:重组载体pSIREN-RetroQ-APE1-shRNA转染细胞后,显著抑制A549细胞中APE1蛋白的表达,与对照组相比,增殖速率明显下降(P＜0.05),平板克隆形成显著减少(P＜0.05),并阻止细胞周期G0/G1期向S期转化,降低CDK2表达。而过表达APE1可增加A549细胞活力,促进细胞增殖,促进细胞周期G0/G1期向S期转化。结论:APE1表达下调对非小细胞肺癌细胞A549生长具有抑制作用,为临床抑制肿瘤生长提供了新的作用靶点。     

Inhibition of Glioma Cell Proliferation by Neural Stem Cell Factor

Summary Neural stem cells (NSC) have unique differentiation-, proliferation-, and motility properties. To investigate whether they secrete factors that interfere with the proliferation of glioma cells, we grew glioma cells in conditioned medium (CM) obtained from cultures of neurospheres including neural stem / progenitor cells (NSPC) isolated from embryonic (E14)- or adult mouse brain or fetal human brain. 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and BrdU-labeling assays showed that CM from NSPC (NSPC/CM) contained factor(s) that inhibited the proliferation of glioma cells by 28–87%. Filter-fractionation of NSPC/CM revealed that the 50,000–100,000 nominal molecular weight limit (NMWL) fraction contained the inhibitory activity. On the basis of these observations we transplanted 203G glioma cells and/or NSPC into the intrathecal space of the cisterna magna of mice to investigate whether NSPC interfere with the proliferation of glioma cells in vivo. Mice transplanted with both 203G and NSPC survived significantly longer than did mice transplanted only with 203G. We concluded that NSPC secrete factor(s) that may control glioma cell proliferation.     

红色胶状肾透明细胞癌的临床及病理特点——附2例报告

目的探讨大体标本为红色胶状肾透明细胞癌的临床特点。方法报告2例临床发现的特殊肾透明细胞癌的诊治情况,并回顾肾癌相关文献。结果临床2例肾透明细胞癌大体标本表现为均一红色,质软,胶状的特殊特点,其影像学及病理表现为典型肾透明细胞癌。结论在肾透明细胞癌大体标本可以表现为特殊的均一红色特点,其影像学为典型肾癌,大体标本与病理分期关系不明显。     

造血细胞与内皮细胞的相互关系及其研究现状

 造血细胞和内皮细胞的相互关系已越来越为人们所重视,成为目前研究十分活跃的领域。造血细胞与内皮细胞表达某些共同的表面标记和基因,且两者能相互促进发育,内皮细胞在诱导造血细胞归巢方面也有一定作用,研究两者关系有较高的科研及临床应用价值,文章介绍了造血细胞和内皮细胞相互关系的研究现状。     

白血病细胞来源胞外体的生物学特性及其致敏DC的抗白血病效应

目的:探索白血病细胞来源的胞外体(leukemia cell-derived exosome,LEX)的生物学特性及其致敏DC的抗白血病免疫效应.方法:超速离心分离纯化BCR-ABL阳性的白血病K562细胞来源的胞外体(LEXK562),采用免疫电镜及Western blotting检测LEXK562中热激蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)及BCR-ABL的表达,采用激光扫描共聚焦显微镜及流式细胞术检测LEXK562靶向结合DC的动力学,采用LDH释放法以及小鼠模型体内实验检测LEX及其致敏DC的抗白血病免疫效应.结果:与其他细胞来源的胞外体相似,K562细胞来源的胞外体LEXK562为直径50 ～ 100 nm的囊状结构,且表达K562细胞特异性的BCR-ABL和HSP70分子.LEXK562在体外可靶向结合DC,3～4h到达高峰,并能在DC中稳定存在72 h以上.LEXK562致敏DC(DC/LEXK562)诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)可有效杀伤K562靶细胞,效靶比为50:1时,其杀伤活性显著高于LEXK562诱导的CTL[(68.6±5.7)％vs(22.5±2.9)％,P＜0.01];体内实验进一步证实,白血病L1210细胞来源的胞外体(LEXL1210)免疫后小鼠接种L1210细胞的成瘤率明显高于LEXL1210致敏DC(DC/LEXL1210)免疫小鼠的成瘤率[(54.17±8.33)％vs(16.67±4.18)％,P＜0.05].结论:LEX表达白血病细胞相关抗原,LEX体外可靶向结合DC,其致敏的DC能诱导更强的抗白血病免疫效应.     

Role of Fbxw7 in the maintenance of normal stem cells and cancer-initiating cells

In addition to the properties of self-renewal and multipotency, stem cells are characterised by their distinct cell cycle status. Somatic stem cells are maintained in a quiescent state but switch reversibly from quiescence to proliferation as needed. On the other hand, embryonic stem cells and induced pluripotent stem cells proliferate rapidly until the induction of differentiation results in inhibition of cell cycle progression. Uncovering the mechanisms underlying cell cycle control in stem cells should thus provide insight into regulation of the balance between self-renewal and differentiation, a key goal of stem cell biology. Recent research has shown that cancer-initiating cells (CICs), a cell population with stem cell-like properties in cancer, are also quiescent, with this characteristic conferring resistance to anticancer therapies that target dividing cells. Elucidation of the mechanisms of CIC quiescence might therefore be expected to provide a basis for the eradication of cancer. This review summarises our current understanding of the role of F-box and WD40 repeat domain-containing 7 (Fbxw7), a key regulator of the cell cycle, in the maintenance of normal stem cells and CICs, as well as attempts to define future challenges in this field.     

Hsa-miR-498对肾上腺皮质癌细胞SW-13增殖及凋亡的影响

目的：探索微小核糖核酸（micro RNA）Hsa-miR-498对肾上腺皮质癌细胞（SW-13）增殖及凋亡的影响,并初步预测其靶基因。方法将SW-13细胞分为3组,空白对照组（A组）为未接受转染细胞,阴性对照组（B组）为无意义寡聚核苷酸和LipofectamineTM2000转染试剂按1∶1混合转染,敲低组（C组）为转染Has-miR-498 in-hibitor组。使用RT-PCR检测各组中Has-miR-498的表达情况;应用MTT法测定各组细胞的生长曲线;采用An-nexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞的凋亡率;并用miRDB初步预测与Hsa-miR-498相关的靶基因。结果经RT-PCR检测发现C组细胞中Hsa-miR-498表达下降;MTT结果显示,与A、B组相比,C组细胞增殖能力下降（P﹤0.05）;Annexin V-FITC/PI双染法结果显示,A、B组相比,C组细胞凋亡率增加,但差异无统计意义（P﹥0.05）。经miRDB初步预测Has-miR-498与细胞增殖及凋亡最相关的靶基因为CD93和JHDM1D。结论降低Hsa-miR-498在SW-13中的表达可抑制SW-13的增殖并促进其凋亡。表明Hsa-miR-498可能与SW-13的增殖及凋亡相关。     

塞来昔布对SK-N-SH细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:探讨特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞生长的影响及其分子生物学作用机制。方法:不同浓度塞来昔布(12.5、25、50和75μmol/L)用不同时间(24、48和72h)处理SK-N-SH细胞,MTT法检测细胞增殖,DNA ladder法及AO/EB染色法分析细胞凋亡,Western blot检测COX-2、Bcl-2蛋白表达。结果:MTT法显示,12.5、25、50和75μmol/L组在3个时间点对细胞的抑制率分别为(7.38±1.12)%、(10.33±1.97)%和(25.16±5.58)%;(34.46±6.76)%、(30.12±6.71)%和(57.54±3.06)%;(61.85±4.01)%、(50.78±2.85)%和(85.67±2.17)%;(83.85±5.56)%、(90.06±5.71)%和(98.04±4.43)%。组间差异均有统计学意义,P<0.05。结论:塞来昔布抑制SK-N-SH细胞的生长并诱导其凋亡,其机制除了抑制COX-2外还可能与抑制Bcl-2有关,有一定的临床应用价值。     

The important role of radiotherapy in patients with non-melanoma skin cancer and other cutaneous entities

Non-melanoma skin cancer is the commonest malignancy worldwide and a significant public health issue. Although most non-melanoma skin cancers are small and easily excised or ablated, a recommendation of definitive radiotherapy is often made in patients where the outcome (cosmetic and/or functional) will probably be better with radiotherapy compared to surgery. The aim of adjuvant radiotherapy is to reduce the risk of loco-regional recurrence and the role of palliative radiotherapy is important in improving the quality of life in patients with advanced and/or incurable disease. The aim of this review article is to broadly discuss the various clinical settings in which a recommendation of radiotherapy may be made and also includes a discussion on less frequently encountered cutaneous entities (e.g. in situ squamous cell carcinoma, keratocanthoma, lentigo maligna, cutaneous lymphomas and malignant fibrous tumours).