用于临床移植的不同时期人胚胎嗅鞘细胞的形态学变化

目的 建立体外培养纯化人胚嗅鞘细胞的模型,观察不同时期人胚嗅鞘细胞形态学变化. 方法 采用无血清培养技术,差速贴壁+免疫吸附的纯化方法 ,培养并纯化取自 3～ 7个月人胚嗅球的嗅鞘细胞.根据 GFAP免疫组化染色结果统计培养所得嗅鞘细胞纯度. 结果 此培养方法可获得大量、高纯度的嗅鞘细胞. 结论 成功培养了人胚嗅鞘细胞,为进一步临床移植应用研究提供纯度较高的人胚嗅鞘细胞.     

人胚胎嗅鞘细胞与神经干细胞联合移植修复大鼠脊髓全横断损伤的研究

目的：探索人胚胎嗅鞘细胞（hOECs）与神经干细胞（hNSCs）联合移植修复大鼠脊髓全横断损伤的可行性。方法：制作Wismr大鼠脊髓全横断模型，9-10d后，分别将取材自人胎脑的hOECs和hNSCs移植到脊髓损伤处（联合移植组），并设hOECs移植组、hNSCs移植组和对照组，移植术后第1、2、4、6、8、10周进行BBB运动功能评分．取材行荧光化学（Hoechst33342）和免疫组织化学染色（P75、NF-200、GFAP、Synaptophysin）观察。结果：术后4-10周．hNSCs组、hOECs组和联合移植组的BBB评分较对照组明显提高（P〈0．05），其中，联合移植组的运动功能改善更显著。免疫组化染色显示，hNSCs可以在损伤脊髓内存活10周以上。并分化为神经元或星形胶质细胞．联合移植组和hOECs组P75染色呈阳性反应。hOECs与hNSCs联合移植可促进神经突触的形成，恢复神经元之间的联系。结论：hOECs和hNSCs联合移植可促进脊髓全横断损伤大鼠神经突触的再生．改善其肢体运动功能。     

嗅鞘细胞移植治疗中枢神经系统损伤的理论研究及临床应用

进行中枢神经系统损伤修复的候选胶质细胞包括嗅鞘细胞、少突胶质前体细胞和许旺细胞.少突胶质前体细胞很难获得大量移植用供体细胞,许旺细胞很难穿透胶质瘢痕,从应用方面均不如嗅鞘细胞.离体培养中嗅鞘细胞极强的可塑性可能会使嗅鞘细胞适时改变自身形态,以适应体内复杂的微环境,有利于神经再生.嗅鞘细胞移植后对脊髓后根损伤后再生有一定作用,其作用大小可能与嗅鞘移植物的成分有关,细胞制备技术和混合细胞移植能影响嗅鞘细胞移植物的效果.虽然胎脑的免疫原性很低,但合理应用免疫抑制剂会使嗅鞘细胞的移植效果有所改观.嗅鞘细胞除了重建损伤通路外,还可能通过轴突发芽、在非突触部位释放单胺类物质、改善病变部位环境并帮助附近的残余神经纤维保存功能和活性等机制对中枢神经的助能发生作用.嗅鞘细胞的细胞生物学和移植后行为学的深入研究都会加快人们对脊髓损伤的理解,并对脊髓损伤的修复治疗产生重要的理论指导意义.     

嗅成鞘细胞移植对中枢神经系统脱髓鞘疾病的治疗作用

中枢神经系统(central nervous system，CNS)中的白质对各种有害因素诸如感染、中毒、退行性变及营养缺乏产生的典型反应是脱髓鞘性变。对脱髓鞘疾病的病理机制及转归、应用嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells．OECs)治疗该疾病的实验研究和临床应用前景、嗅鞘细胞同目前另两个热点细胞即雪旺氏细胞和少突胶质细胞作用的比较等一一进行阐述。针对该项成鞘细胞移植技术仍存在的不足，有必要对嗅鞘细胞的分子生物学基础进行更深入的研究。     

嗅鞘细胞移植治疗中枢神经系统疾病的基础研究

中枢神经系统疾病可以导致人们的神经功能缺损.同时,损伤区出现轴突受损,形成胶质瘢痕、空腔和裂隙.嗅鞘细胞作为自体移植最佳的候选细胞,它可以分泌神经营养因子等起到不同程度地神经保护作用,刺激血管再生,促进未受损和受损害轴突的生长.嗅鞘细胞还可以改变损伤后内源性神经胶质的应答情况,并且在受到一定程度的脱髓鞘损害时能够将轴突再髓鞘化.近几年来,嗅鞘细胞移植逐渐成为了一种临床治疗手段应用于人类的中枢神经系统疾病.因此,嗅鞘细胞移植可以成为由细胞介导的神经修复策略,治疗许多中枢神经系统疾病.文章通过该研究领域大量的实验结果来阐述嗅鞘细胞移植治疗中枢神经系统疾病基础研究目前的情况.     

胚胎嗅鞘细胞移植治疗脊髓炎后遗症:32例应用ASIA评分自身对照

背景:动物实验研究已证实,采用细胞移植、神经营养因子注入或移植等方法可改变损伤脊髓局部环境,促使损伤脊髓恢复部分功能。目的:开展嗅鞘细胞移植治疗脊髓炎后遗症的临床实验,观察其对脊髓损伤的恢复作用。设计:非随机自身对照。单位:山东省泰安荣军医院外二科病房。对象:选择2004-06/2007-07来源于全国各地的陈旧性脊髓炎患者32例,伤后时间为0.5～7年。患者经各种传统治疗及肢体功能锻炼后神经功能无明显改善,并遗留各种感觉运动及植物神经功能障碍。男21例,女11例,年龄5～48岁,急性病毒性脊髓炎18例,急性化脓性脊髓炎8例,结核性脊髓炎6例,发病后均曾给予大剂量甲基强地松龙、地塞米松、抗炎、抗免疫及各种神经营养药物治疗。26例临床表现均为完全性损伤。6例为不完全性损伤,患者对治疗知情同意,治疗方案经过医院伦理委员会批准。胚胎嗅球来自流产胚胎,由患者或家属自愿捐献。方法:取胚胎嗅球,经细胞分离、培养、纯化7～14 d,最后消化成单细胞混悬液,然后在手术显微镜下移植到患者损伤脊髓区域的上下方。术后2周～2个月,采用2000年美国脊髓损伤学会制定的ASIA评分标准进行术后评定,并进行手术前后对比。主要观察指标:①感觉功能变化。②运动功能变化。结果:嗅鞘细胞移植术后0.5-2年,32例患者感觉和运动功能均有明显改善(运动功能:51.53±13.41,55.72±10.50;轻触觉:63.06±15.98,69.53±11.68;疼痛觉:64.03±15.01,69.50±12.20,P均<0.01)。结论:嗅鞘细胞移植能够有助于脊髓炎后遗症患者的神经功能恢复,但长期疗效有待于进一步观察。     

人胚胎嗅鞘细胞的分离培养与纯化

目的：大量的实验证实，嗅鞘细胞是能促进已损伤的中枢神经重新恢复功能最有效的种子细胞之一。实验拟建立一种简便易行、省时、经济，临床应用更安全，临床效果更好的培养和纯化嗅鞘细胞的方法。 方法：实验于2004—12／2006—12在山东省泰安荣军医院细胞实验室完成。流产胚胎（4～6个月，由家属自愿捐献）。实验方法：在无菌条件下，用显微外科器械将胚胎的嗅球取出，在解剖显微镜下仔细剥离嗅球表面的软膜和血管，尽量保持嗅球完整性，然后用眼科剪反复剪碎，剪成0．5～1．0mm^3大小的组织块，将组织块移人离心管内，加入含有13％胎牛血清的D／F12培养液，用弯头吸管来回轻轻吹打组织块制成细胞悬液，用含有阿糖胞苷的无血清纯化液纯化嗅鞘细胞，胰蛋白酶消化收集细胞，制成单细胞悬液并进行计数。 结果：胚胎嗅鞘细胞在24h后开始部分贴壁，胞体呈球形、星形，有一个甚至多个突起，但突起短小。贴壁3d后，大部分细胞迅速生长，突起延伸变长。贴壁5～7d后，随着培养时间的延长，嗅鞘细胞成簇密集排列生长，细胞突起相互交织越来越多，形成网状。可见3种比较典型的嗅鞘细胞：双极或梭形、多突起形和扁圆或油煎蛋形。主要以梭形和多突起形细胞为主。细胞培养至7～14d时细胞数量不再有明显增加，但是细胞仍生长旺盛，活性好，细胞纯度高达95％～98％。 结论：实验建立的人胚胎嗅鞘细胞培养的方法简便易行，经济，细胞纯度较高。     

胚胎嗅鞘细胞移植治疗晚期脊髓损伤影响功能恢复的因素

目的：探讨胚胎嗅鞘细胞移植晚期脊髓损伤患者后，影响其功能恢复的因素b。方法：①取胚胎嗅球，消化成单个嗅鞘细胞后培养12-17d待用。②选择2001—11／2004—01首都医科大学附属北京朝阳医院和北京西山医院收治的脊髓损伤、志愿接受胚胎嗅鞘细胞移植的患者300例。其中完全性损伤222例。不完全性损伤78例。病程0．5-31年，平均3．1年。将胚胎嗅鞘细胞移植到脊髓损伤部位的上下处。③所有患者在胚胎嗅鞘细胞移植手术前和手术后2-8周按ASIA标准评价和随访，比较年龄、受伤时间、性别、损伤程度和损伤水平对胚胎嗅鞘细胞移植后功能恢复的影响。。结果：①按ASIA标准评价神经功能有部分功能快速恢复，其中运动功能由术前（39．1&;#177;20．6）分提高到（45．9&;#177;20．3）分（P〈0．001）。轻触觉由术前（51．7&;#177;24．9）分提高到（63．4&;#177;23．0）分（P〈0．001），痛觉由术前（53．0&;#177;24．21分提高到（65．3&;#177;22．7）分（P〈0．001）。②手术前ASIA级别为A级者222例。术后38例改善为B级。46例为C级。（萤除损伤水平中颈段运动和轻触觉分数高于胸段外，年龄、受伤时间、性别、损伤程度和损伤水平等因素比较没有显著性差异。结论：胚胎嗅鞘细胞移植能快速帮助晚期脊髓损伤患者恢复部分神经功能。但除损伤水平中颈段运动和轻触觉分数高于胸段外，年龄、受伤时间、性别、损伤程度和损伤水平并不是影响胚胎嗅鞘细胞移植后功能恢复的因素。     

不同来源嗅鞘细胞移植治疗脑出血的比较

背景:嗅鞘细胞是目前已知用于移植细胞中惟一可以跨越周围神经系统与中枢神经系统边界的细胞.在众多的国内外文献中,大多以嗅球来源嗅鞘细胞作为观察对象;但采用嗅黏膜嗅鞘细胞移植具有来源方便、损伤小、可自体取材等优势.目的:比较嗅球来源嗅鞘细胞和嗅黏膜嗅鞘细胞移植对脑出血后神经功能损伤恢复作用的差异.设计、时间及地点:免疫组织化学水平的随机对照动物实验,于2005-10/2007-10在无锡市第三人民医院细胞实验室完成.材料:选用健康雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为3组,对照组、嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组各10只.方法:分别获取人鼻中隔黏膜、人胚嗅球,进行嗅鞘细胞的分离培养纯化,取培养10 d的细胞用作细胞移植.取SD大鼠制备尾状核出血模型.嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组各取10 μL细胞悬液在立体定向下引导微量注射器向大鼠脑组织内匀速注射(1 μL/min),对照组注入等量培养基,注射点为右侧尾状核.主要观察指标:观察两种来源嗅鞘细胞的体外培养情况.嗅鞘细胞移植后对动物行定期行为学评定,功能损伤越重,得分越高;并观察组织切片靶区域免疫细胞化学分析结果.结果:从体外培养结果看,无论在形态上还是表型上,两者无明显区别.嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组大鼠的Longa 5分制法及前肢放置试验评分在移植后第14,28,56天显著低于对照组(P<0.05),两移植组差异无显著性意义(P>0.05),移植组各时间段差异无显著性意义(P>0.05).结论:用于移植修复神经功能的两种嗅鞘细胞在细胞特性、移植效果方面均无明显差异.     

嗅鞘细胞移植修复大鼠脊髓损伤的组织病理学变化

背景:对于脊髓损伤,目前临床尚无有效的治疗对策,近年来嗅鞘细胞移植对脊髓损伤修复取得了一定的进展.目的:观察嗅鞘细胞移植在缓解损伤脊髓的病理反应和超微结构变化,及其在发生发展中的作用.方法:60只大鼠随机分为空白组,模型组,嗅鞘胞移植组和DF12组,每组15只.空白组:仅切开T_(10)全椎板及T_9,T_(11)部分椎板,对脊髓未作其他处理,明胶海绵轻柔压迫止血;模型组:仅切断脊髓,未作特殊处理;嗅鞘细胞移植组和DF12组:切断脊髓后用微量注射器分别注射嗅鞘细胞和DF12培养液,随后缝合切口.脊髓损伤后1,3,7,14,28,42,56 d每组麻醉2只受检大鼠,取材做光镜观察和电镜观察.结果与结论:单纯脊髓横切损伤后,发生了出血、水肿、变性、坏死以及囊腔形成,胶质细胞增生和神经纤维再生.嗅鞘细胞移植后,明显减轻了神经元和神经纤维的坏死变性程度,减轻病理反应,并能对损伤神经元实施保护;防止了胶质细胞过度增生形成瘢痕屏障,明显增加了再生神经纤维的数量.提示嗅鞘细胞移植对损伤脊髓具有减轻病理反应和促进修复的作用.     

人类胚胎嗅球嗅鞘细胞质量标准

为严格控制人类胚胎嗅鞘细胞培养和临床使用准备过程中诸多环节的质量,制定了人类胚胎嗅球嗅鞘细胞培养操作规范.因为完善的操作流程,可以最大限度的减少人为因素,确保细胞质量的稳定性.所以对嗅鞘细胞来源的标本要求,要严格规定人类胚胎嗅球嗅鞘细胞培养过程中的实验室条件以及细胞培养的规范,对操作中关键步骤进行严格规范要求,质控嗅鞘细胞冻存和复苏过程,提出细胞培养中微生物污染的检测方法,减少应用风险,为人类胚胎嗅球嗅鞘细胞临床使用提供高质量保证.     

不同培养条件人嗅黏膜嗅鞘细胞生长情况比较

目的：研究鼻黏膜嗅鞘细胞在不同条件尤其在正常脑脊液中的生长情况,以利于实施自体嗅鞘细胞移植。方法设置5种不同培养条件进行比较,了解脑脊液培养条件下细胞的贴壁、增殖、形态学及细胞纯度的变化。结果普通培养基培养一周后改用脑脊液培养对细胞的增殖能力不造成很大影响,细胞形态及纯度也无明显变化。结论使用脑脊液培养作为自体细胞移植前的过渡将规避伦理学风险,临床是可行的。     

胚胎嗅鞘细胞移植治疗晚期脊髓损伤影响功能恢复的因素

目的:探讨胚胎嗅鞘细胞移植晚期脊髓损伤患者后,影响其功能恢复的因素。方法:①取胚胎嗅球,消化成单个嗅鞘细胞后培养12～17d待用。②选择2001-11/2004-01首都医科大学附属北京朝阳医院和北京西山医院收治的脊髓损伤、志愿接受胚胎嗅鞘细胞移植的患者300例,其中完全性损伤222例,不完全性损伤78例。病程0.5～31年,平均3.1年。将胚胎嗅鞘细胞移植到脊髓损伤部位的上下处。③所有患者在胚胎嗅鞘细胞移植手术前和手术后2～8周按ASIA标准评价和随访,比较年龄、受伤时间、性别、损伤程度和损伤水平对胚胎嗅鞘细胞移植后功能恢复的影响。结果:①按ASIA标准评价神经功能有部分功能快速恢复,其中运动功能由术前(39.1±20.6)分提高到(45.9±20.3)分(P<0.001),轻触觉由术前(51.7±24.9)分提高到(63.4±23.0)分(P<0.001),痛觉由术前(53.0±24.2)分提高到(65.3±22.7)分(P<0.001)。②手术前ASIA级别为A级者222例,术后38例改善为B级,46例为C级。③除损伤水平中颈段运动和轻触觉分数高于胸段外,年龄、受伤时间、性别、损伤程度和损伤水平等因素比较没有显著性差异。结论:胚胎嗅鞘细胞移植能快速帮助晚期脊髓损伤患者恢复部分神经功能,但除损伤水平中颈段运动和轻触觉分数高于胸段外,年龄、受伤时间、性别、损伤程度和损伤水平并不是影响胚胎嗅鞘细胞移植后功能恢复的因素。     

人胚嗅球成鞘细胞的体外培养

目的：评估人胚嗅球成鞘细胞的分离与培养方法。方法：试验于2005-03／2005-08在昆明总医院中心实验室完成。选取自愿捐献自然流产3～5个月的胚胎，分离原代嗅球成鞘细胞，利用延迟差速贴壁法结合阿糖胞苷抑制法对细胞进行纯化，采用免疫组织化学方法鉴定细胞并计算其P75阳性率。结果：①人胚嗅球成鞘细胞的形态学观察：原代培养5d的人胚嗅球成鞘细胞胞体呈长梭形，多极状，立体感强，折光性好。8d后，胞体变大，突起变长，并逐渐相互交织成网。14d后细胞主要表现为双极、三极形态。②人胚嗅球成鞘细胞免疫细胞化学染色及纯度鉴定：贴壁第2天，第7天的细胞染色。P75阳性达到95％以上。第14天细胞染色阳性率降至90％。25d则仅为50％。结论：应用延迟差速贴壁法与阿糖胞苷化人胚嗅鞘细胞的方法，分离培养人胚嗅球成鞘细胞是一种较为稳定可靠的方法。     

人胚胎嗅鞘细胞植入鼠半横断脊髓的初步观察

目的 观察人胚胎嗅鞘细胞(olfactory ensbeathing cells,OECs)移植对成鼠脊髓轴突再生的影响。方法 将分离、纯化、培养2周的人胚胎OECs，移植于10只成年SD大鼠半横断胸髓(T10)的两端；对照组10只同样方法给予等量的DMEM培养液。6周后组织切片，行HE染色、嗜银染色以及髓鞘碱性蛋白(MBP)和抗神经生长因子受体抗体(NGFR)免疫组化检查。结果 OECs移植组6周后脊髓大体标本显示初步愈合现象；组织学观察，OECs呈NGFR阳性表达，显示OECs仍然存活，且与宿主组织整和良好；部分再生轴突长人断端间组织，呈MBP阳性表达。结论 人胚胎OECs对成鼠胸髓损伤后的轴突再生有促进作用。     

胚胎嗅鞘细胞再移植治疗晚期脊髓损伤1例

目的:对晚期脊髓损伤患者开展嗅鞘细胞再移植治疗,探讨其对神经功能的继续改善效果。方法:①患者男性,27岁,哈萨克斯坦籍,2001年9月20日遭霰弹枪击急诊手术后,双下肢不能运动及感觉消失,尿便失禁,右下肢阵发性钝痛。诊断为陈旧性完全性脊髓损伤(T12),美国脊髓损伤协会标准脊髓功能分级为A级。2002年9月30日第1次行脊髓胚胎嗅鞘细胞移植术,2007年2月5日行第2次脊髓胚胎嗅鞘细胞移植术。治疗方案患者知情同意。②取4个月流产胚胎(孕妇及其家属均知情同意)的嗅球,消化成单个嗅鞘细胞后培养2周,细胞浓度约2×1010L-1。于患者相应脊髓损伤上端(平T11椎体)做1个锁孔,直径约3cm,在脊髓损伤部位与正常脊髓交界处沿中线于无血管区,分两点用4.5号细针共注入100μL(第1次手术)、50μL(第2次手术)嗅鞘细胞悬液,细胞数均为1×106个。第2次移植术前进行供、受体细胞HLA配型,术后口服FK506胶囊2mg,2次/d,共42d。结果:①第1次术后3个月,排尿能控制6h,双足运动功能改善,性功能改善,阴茎勃起功能改善,疼痛减轻。②第2次术后10d,双下肢双足皮肤泌汗功能改善,右下肢疼痛减轻,腹部皮肤感觉稍有好转,针刺觉左侧由术前T10皮节消失好转至T10减退。较第2次移植前椎旁躯体感觉诱发电位有所改善,双侧椎旁电位从T10下降到T12。结论:胚胎嗅鞘细胞二次移植能继续改善晚期脊髓损伤患者的神经功能。但移植的细胞数量、容积、注射点位置等需深入探讨。     

嗅鞘细胞移植治疗额颞叶痴呆1例

目的:观察人胚胎嗅鞘细胞移植治疗额颞叶痴呆的有效性。方法:选择2006-04-04于北京市虹天济神经科学研究院和北京市西山医院暨北京康复中心神经外科就诊患者1例,男性,57岁,因“行为异常,性格及言语改变2年4个月”入院。患者知情同意并签署知情同意书。入院查体双侧Hoffmann征可疑阳性,双侧Babinski征未引出。头颅MRI示双侧额颞叶脑沟、侧裂池增宽,脑实质萎缩明显,诊断为额颞叶痴呆。局麻下对患者进行人胚胎嗅鞘细胞移植术,于双侧额叶放射冠位置分别注射人胚胎嗅鞘细胞约100万个。移植前后使用日常生活活动量表评价患者神经功能。量表包括吃饭、穿衣、购物等20个日常行为活动项目。评分分4级:1级-可由自己完成,无困难;2级-完成有些困难;3级,需要帮助;4级-能力丧失,根本无法完成;如受试者从未做过的项目或无从了解的项目,则记为9,不计入总分。总分20分为正常;>20分为功能低下。结果:术后无任何并发症及不良反应。移植术后3周患者情感、认知方面有所改善。日常生活活动量表与术前比较,分数由43分下降至32分。术后6周电子邮件随访,神经功能继续改善。结论:人胚胎嗅鞘细胞移植后近期可部分改善额颞叶痴呆患者神经系统功能,提高生活质量,其恢复机制和长期效果有待进一步观察。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的临床研究现状

目的:对嗅鞘细胞生物学特性、培养纯化、嗅鞘细胞移植的可能机制及嗅鞘细胞移植在临床的应用等方面进行分析,介绍嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状.资料来源:以olfactory ensheathing cells,spinal cord injury,嗅鞘细胞,脊髓损伤为检索词检索PubMed数据库(2000/2009),中国期刊全文数据库(2000/2009).资料选择:纳入标准:①文章所述内容应与嗅鞘细胞及脊髓损伤密切相关.②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章.排除标准:①重复性研究.②Meta分析.结局评价指标:嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展.结果:嗅鞘细胞具有与许旺细胞和星形胶质细胞相似的特征.目前嗅鞘细胞移植的动物实验主要致力于提高轴突再生能力、替代细胞成分、阻止脱髓鞘病变和促进髓鞘再生等方面,移植的嗅鞘细胞具有促进感觉及运动功能恢复的客观结果,有些移植研究甚至已经进入了临床试验阶段.不过嗅鞘细胞移植由动物实验转化到临床应用还受到很多因素的影响,诸如移植剂量、细胞生长因子的活力,细胞移植的风险等,尤其是嗅鞘细胞移植后的近期及远期效果还需要进一步深入研究、评价,并且需要长时间的随访.有研究已经把用基因转染的嗅鞘细胞用于移植,在动物试验身上已经取得了满意的效果.结论:随着基因工程技术发展以及嗅鞘细胞移植修复神经机制的深入研究,嗅鞘细胞移植必将为临床治疗脊髓损伤的患者带来康复的希望.     

人胚嗅球成鞘细胞的体外培养

目的:评估人胚嗅球成鞘细胞的分离与培养方法。方法:试验于2005-03/2005-08在昆明总医院中心实验室完成。选取自愿捐献自然流产3～5个月的胚胎,分离原代嗅球成鞘细胞,利用延迟差速贴壁法结合阿糖胞苷抑制法对细胞进行纯化,采用免疫组织化学方法鉴定细胞并计算其P75阳性率。结果:①人胚嗅球成鞘细胞的形态学观察:原代培养5d的人胚嗅球成鞘细胞胞体呈长梭形,多极状,立体感强,折光性好。8d后,胞体变大,突起变长,并逐渐相互交织成网。14d后细胞主要表现为双极、三极形态。②人胚嗅球成鞘细胞免疫细胞化学染色及纯度鉴定:贴壁第2天,第7天的细胞染色,P75阳性达到95%以上。第14天细胞染色阳性率降至90%。25d则仅为50%。结论:应用延迟差速贴壁法与阿糖胞苷化人胚嗅鞘细胞的方法,分离培养人胚嗅球成鞘细胞是一种较为稳定可靠的方法。     

嗅鞘细胞移植损伤脊髓组织的超微结构变化

背景:脊髓损伤后神经功能难以自行恢复,嗅鞘细胞具有外周性和中枢性两种胶质细胞的成鞘功能,是修复受损神经最有前途的种子细胞.嗅鞘细胞移植到受损脊髓后的组织学和超微结构的变化可能帮助解释嗅鞘细胞发挥修复作用的机制.目的:验证嗅球源性嗅鞘细胞移植对脊髓损伤功能恢复的促进作用,并观察移植的嗅鞘细胞对神经元和轴突组织和超微结构的影响.方法:将已制备脊髓模型的Wistar大鼠随机分为3组,对照组不做任何注射操作,DMEM/F12组注射DMEM/F12培养基,嗅鞘细胞组注射嗅鞘细胞悬液.每周进行肢体活动BBB评分,8周后取脊髓标本进行组织学和免疫组织化学观察,评价脊髓损伤的修复情况,并观察嗅鞘细胞移植对脊髓组织和超微结构的影响.结果与结论:3组动物均出现后肢运动功能的恢复,嗅鞘细胞组优于对照组和DMEM/F12组,在4周后更为明显.组织学观察可见,在嗅鞘细胞组可见有神经纤维通过损伤处.损伤处附近,嗅鞘细胞组脊髓腹侧的神经纤维和神经元形态较好,损伤较轻.而对照组和DMEM/F12组神经纤维和神经元损害严重.嗅鞘细胞组的caspsase.3阳性细胞数少于对照组和DMEM/F12组.超微结构观察可见,嗅鞘细胞组的神经纤维和细胞形态均优于对照组和DMEM/F12组.结果表明嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤修复有明显的促进作用,并可恢复损伤神经的部分功能,对受损神经纤维和神经元有保护作用.