NO和H2O2在沙打旺抗黄矮根腐病反应中的互作

本研究以沙打旺(Astrgalus adsurgens)感病品种宁夏彭阳为试验材料,接种沙打旺埃里砖格孢(Embellisia astragali)后分别施加外源NO及H2O2清除剂抗坏血酸,测定H2O2含量和H2O2代谢酶SOD、POD和CAT活性,以此来探讨H2O2在由NO诱导的防御反应中发挥的作用。与对照相比,外源NO显著降低(P0.05)沙打旺发病率和病情指数,在开始阶段,外源NO可以诱导内源H2O2产生,在后期,当H2O2浓度相对较高,外源NO会延迟H2O2积累,但用NO和H2O2清除剂同时处理H2O2含量与对照并无显著差异(P0.05)。NO处理能够诱导SOD、POD和CAT活性增加,H2O2清除剂抑制了NO对3种酶的调控作用。施加外源NO能增强沙打旺抗病性,NO通过调控内源H2O2含量发挥作用。     

外源H2O2处理对燕麦种子活力的影响

试验以燕麦种子为材料,通过不同浓度H₂O₂(0,0.24,0.48,0.96,1.92和3.84 mol·L^-1)处理0(CK),3,6,9和12 h后,分析其发芽率(G_p),发芽指数(G_i),平均发芽时间(MGT)及幼苗活力指数(SVI)的变化,以探讨外源H₂O₂处理对种子活力的影响。结果表明,高浓度的H₂O₂处理降低了燕麦种子的G_p、G_i及SVI,且提高了其MGT。H₂O₂浓度、处理时间及两者之间的交互作用对燕麦种子G_p、G_i、MGT和SVI的影响差异极显著。浓度为3.84 mol·L^-1的H₂O₂处理12 h后,燕麦种子G_p、G_i和SVI最小,而其MGT则最大。这表明H₂O₂浓度越高,处理时间越长,燕麦种子活力的丧失就越严重。因此,高浓度H₂O₂处理造成的脂质过氧化损伤可能是导致种子活力丧失的主要原因,在农牧业生产中外源H₂O₂预处理的应用要谨慎。     

ABA， H2O2与NO对木枣果实成熟生理的影响

在木枣白熟期分别用ABA、H2O2与NO供体硝普纳（SNP）喷洒果实,对其调控木枣果实成熟的生理基础进行了研究。结果显示用不同浓度的ABA,H2O2与SNP处理,枣果实中丙二醛（MDA）的含量明显升高,其中100 mg?L-1浓度时MDA含量为最高;Ca、Vc和β-胡萝卜素含量呈现先降低后升高再下降的趋势,其中75 mg?L-1浓度时Vc和β-胡萝卜素含量最高,50 mg?L-1时Ca含量最高;CAT和APX活性的变化呈现先升高后降低的趋势,75 mg?L-1时CAT和APX活性均最大;DNA含量的变化呈现先缓慢降低后升高再下降的趋势,ABA比H2O2、SNP处理对DNA含量影响更明显,100 mg?L-1时DNA含量最高。结论：ABA、H2O2与SNP对木枣果实发育成熟的影响效果较为明显,其生理效果在多方面表现基本一致,有加快木枣果实成熟衰老的作用。     

冷藏期家蚕滞育卵和即时浸酸卵的H2O2含量及过氧化氢酶基因表达的变化

将产下后48h的家蚕滞育卵和即时浸酸卵进行低温(5℃)冷藏处理30d以上,滞育卵孵化率显著上升,而即时浸酸卵孵化率显著下降。为了探讨低温处理对滞育卵和即时浸酸卵的孵化产生不同影响的分子机制,测定了冷藏期间2种卵中的H2O2含量、过氧化氢酶(CAT)基因mRNA转录水平和CAT活性变化。结果表明:2种卵在冷藏期间随着卵中的H2O2含量显著增加,CAT基因mRNA转录水平也上调;虽然冷藏后的10～70d,2种卵中的H2O2含量、CAT基因mRNA转录水平及CAT活性都显著上升,但滞育卵的H2O2含量仍显著高于即时浸酸卵,而CAT基因mRNA转录水平和CAT活性则显著低于即时浸酸卵。即时浸酸卵在冷藏过程中H2O2含量显著增加,可能造成了对胚胎的氧化伤害,从而降低其孵化率。然而,滞育卵在冷藏过程中的CAT基因mRNA转录水平及CAT活性相对较低,H2O2相对较高,胚胎却未受到氧化伤害,推测低温处理可能诱导了滞育卵中其它抗氧化反应。     

外源H2O2对沙打旺抗黄矮根腐病的影响

本研究以沙打旺抗病和感病品种为材料,接种埃里砖格孢孢子悬浮液后分别施加外源H₂O₂及其清除剂AsA,通过统计发病率、病情指数及测定POD、PPO、CAT、SOD、Glu和Cht六种病程相关蛋白酶活性,研究H₂O₂对沙打旺抗黄矮根腐病的影响。结果表明,接种埃里砖格孢后2种沙打旺H₂O₂含量高于未接种植株,且感病品种在38 h H₂O₂含量最高,为929 μmol/g,抗病品种最高值出现在24 h,为986 μmol/g。抗病、感病沙打旺发病率、病情指数在H₂O₂处理后最低,施加AsA最高。H₂O₂处理各种酶活性都有不同程度的增加,且对抗病品种酶活性提高大于感病品种,表明外施H₂O₂可以减缓沙打旺黄矮根腐病的发生和侵染。表明H₂O₂与沙打旺抗病性紧密相关,并通过调节病程相关酶活性来增强沙打旺对黄矮根腐病的抗性,减少侵染率。     

H2O2与Fe2+、Cu2+、Zn2+协同作用对桑自由基伤害和保护酶活性的影响

研究了H2O2与Fe2+等金属离子产生的自由基胁迫对桑树生理特性的影响,旨在为桑树的抗逆栽培提供理论参考。以桑树叶片为材料,研究H2O2与Fe2+、Cu2+、Zn2+协同作用对桑自由基伤害和保护酶活性的影响。结果表明:经H2O2-Fe2+、H2O2-Cu2+和H2O2-Zn2+3种体系溶液处理的桑.OH含量分别提高34.38%、8.14%和5.43%;O2.-含量分别降低78.77%、54.75%和63.84%;1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)清除率分别降低44.60%、57.34%和54.64%;超氧化物歧化酶(SOD)活性分别提高44.45%、36.02%和28.28%;多酚氧化酶(PPO)活性分别降低68.18%、86.58%和54.78%;过氧化氢酶(CAT)活性分别降低97.46%、96.57%和68.02%;过氧化物酶(POD)活性分别降低22.22%、提高7.42倍和66.67%。H2O2与Fe2+等的协同作用破坏了桑细胞内自由基动态平衡,导致自由基含量提高,保护酶活性受到显著影响。     

H5N1和H9N2禽流感病毒HA抗原性对比分析和基因免疫研究

根据H9N2和H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因序列,设计合成全基因扩增引物．将RT—PCR扩增2个毒株的HA基因进行序列测定．对推导的氨基酸序列通过MIF Bioinformatics软件进行抗原表位分析和糖基化位点进行分析。构建2个基因的真核表达质粒．检测2个毒株的HA基因疫苗免疫后外周血中HA特异性抗体的效价．并比较HA2个亚型免疫应答特异性的差异。结果表明,2株毒株禽流感病毒血凝素抗原表位和糖基化位点存在较大差异,重组质粒免疫后成功地诱导了体液免疫反应。两种亚型禽流感的HA基因免疫诱导的对本亚型病毒的抗体应答水平明显高于另一亚型．     

牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛辅助蛋白AP1、AP2主要抗原域串联表达及其免疫活性鉴定

利用DNAStar Protean功能筛选AP1和AP2主要抗原结构域,引入15位柔性多肽,通过重叠延伸PCR技术串联融合AP1、AP2主要抗原域基因,PCR扩增串联体基因片段,将其克隆至pET-30a(+)载体,转化BL21(DM3)细胞,进行高效表达,目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定。PCR扩增出320bp的AP1和759bp的AP2主要抗原域,经重叠延伸PCR获得了1 065bp的AP1、AP2串联体基因片段,DNA测序结果表明,无碱基的缺失、突变和移码。构建的重组表达载体经诱导能够可溶性表达,目的蛋白相对分子质量大小约46 000,纯化后重组蛋白的纯度96%,Western blot分析重组融合蛋白结果表明,能够被兔源抗无乳链球菌阳性血清所识别。重叠延伸PCR获得了AP1、AP2主要抗原域串联体,构建了pET-30a(+)/AP1+AP2重组表达载体,诱导目的蛋白呈可溶性表达,表达产物具有良好的免疫反应原性,为进一步研究基于AP1、AP2蛋白的致病机制,检测制剂及疫苗奠定了试验基础。     

茶多酚对H2O2诱导U251细胞氧化损伤的保护作用

为研究茶多酚（TP）对H2O2诱导U251细胞氧化损伤的保护作用,试验分为正常组、氧化损伤模型组、TP低（25 mg/mL）剂量组、中（50 mg/mL）剂量组、高（100 mg/mL）剂量组,分别通过MTT法、Hoechst 33342染色法、流式细胞分析法和ELISA法测定TP对H2O2诱导下U251细胞存活率、细胞形态、凋亡率和胞内活性氧（ROS）水平、丙二醛（MDA）和胞内抗氧化酶活性的影响。结果表明：选择H2O2浓度和处理时间分别为400 μmol/L和24 h来构建U251细胞氧化损伤模型|TP浓度为0 ~ 100 mg/mL对U251细胞无毒性作用|中、高剂量组TP能显著抑制H2O2造成的U251细胞存活率降低（P < 0.05）|低、中、高剂量组TP能显著降低细胞凋亡率、MDA、胞内ROS水平和荧光强度（P < 0.05）|同时中、高剂量组TP能显著提高胞内总抗氧化能力（T-AOC）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性。TP对H2O2诱导U251细胞氧化损伤具有保护作用,其作用可能与增强细胞内抗氧化酶活性,减少脂质发生过氧化,清除细胞内过量的ROS及抑制细胞凋亡有关。[关键词] 茶多酚|U251细胞|H2O2|氧化损伤|保护作用     

H3N2亚型猪流感病毒HA1、HA2基因的原核表达及抗原性分析

血凝素（hemagglutinin,HA）蛋白是猪流感病毒（swine influenza virus,SIV）的一个重要蛋白,在疾病预防和治疗中具有重要作用。本试验旨在克隆和表达H3N2亚型猪流感病毒A/swine/Henan/1/2010（H3N2）的HA1和HA2基因。用含有H3N2亚型SIV的鸡胚尿囊液提取RNA,RT-PCR扩增后将目的基因定向克隆到pET-28a（+）原核表达载体上,并将其转入宿主菌BL21（DE3）pLyS进行表达,IPTG诱导后经SDS-PAGE检测并用该病毒重组HA蛋白制备的特异性单克隆抗体1C10作为一抗对两种蛋白进行Western blotting分析。SDS-PAGE结果显示,得到HA1和HA2大小分别为34.8、23.2 ku的重组蛋白,Western blotting结果表明,HA1蛋白与1C10单克隆抗体具有良好的反应原性,且1C10单克隆抗体表位在HA1蛋白上。本试验结果为进一步研究血凝素蛋白的结构和功能,以及建立快速诊断方法和基因工程疫苗提供材料。     

H2O2胁迫下豌豆初生根及抗氧化酶系统对外源 Ca2＋的响应

以豌豆品种“陇豌一号”为材料,通过对豌豆种子萌发初期初生根生理特性的研究,探索提高豌豆初生根外源H2 O2胁迫条件下抗性能力的途径。运用生理生化方法,测定 H2 O2胁迫下豌豆初生根在外源 Ca2＋处理后的弯曲率和根系活力,并对豌豆初生根内的丙二醛（MDA）含量、相对膜透性、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）和抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性进行测定。结果显示,80 mmol／L 的 H2 O2处理下的豌豆初生根正常生长受到显著抑制,但是经过 Ca2＋处理后,根系生长抑制作用得到缓解,根系活力得以恢复。外施10 mmol／L Ca2＋初生根 MDA 值较 CK1降低了37．32％,并显著地提高了 POD,SOD,CAT 和 APX 的活性,其值分别为51．946 U／（mg·min）,865．174 U／g FW,1．9739 mmol／（L·g·min）和2．569μmol／（L·g·min）。总之,外源施加 Ca2＋能够有效降低 H2 O2造成的氧化胁迫,缓解对初生根细胞膜的伤害,降低质膜透性,增强初生根系抗氧化酶活性,达到抵抗逆境胁迫的目的。     

大肠杆菌O157:H7 rfbE基因和fliC基因的克隆与序列分析

根据已发表的E．coli O157：H7 EDL933株的rfbE基因和fliC基因，设计了两对引物，分别对两个O157：H7，菌株的rfbE基因和一个菌株的fliC基因进行PCR，并将PCR产物克隆于pMD18-T栽体质粒。测序结果表明，获得到了与理论相符的582bp rfbE基因片段和802bp fliC基因片段。一株菌的rfbE基因存在无意义突变（两个）。而另一株菌fliC基因有一个有意义突变（aac→gac）     

PRL和O2对HC11细胞氧化应激状态下乳蛋白合成的影响

为探明催乳素（PRL）和氧气（O2）对大鼠乳腺上皮（HC11）细胞氧化应激的影响及作用机制,试验以大鼠HC11细胞为载体,研究了在有氧和缺氧条件下催乳素对由过氧化氢（H2O2）诱发的HC11细胞氧化应激的影响。结果表明：催乳素有利于改善氧化应激对乳腺乳蛋白基因表达的影响,其作用是通过增加抗氧化基因的表达、激活炎症因子的表达和维持葡萄糖转运因子的正常运转而实现的。[关键词] 催乳素|乳腺上皮细胞|基因表达|氧化应激|H2O2     

锰中毒对鸡肝脏细胞色素P450酶系及CYP2H1 mRNA转录水平的影响

本研究旨在探讨锰对公鸡肝脏细胞色素P450酶系的影响。50日龄海兰褐公鸡400只,随机分为4组,分别在饲料中添加0、600、900、1 800 mg.kg-1MnCl2建立亚慢性锰中毒模型,于30、60、90 d采取肝脏检测肝微粒体细胞色素P450酶系活性以及CYP2H1基因转录水平的变化。结果显示,细胞色素P450、b5含量,氨基吡啉-N-脱甲基酶(AND)和苯胺-4-羟化酶(AH)活性在各个时间点随染锰剂量的增加,基本呈降低趋势,且高剂量组均极显著(P0.01)低于正常组,低、中剂量组有高于正常组的情况。NADPH-细胞色素C还原酶(CR)和红霉素-N-脱甲基酶(ERND)的活性的变化规律不明显,30和60 d NADPH-细胞色素C还原酶活性呈降低趋势,而90 d时呈升高趋势,且高剂量组极显著(P0.01)高于正常组。红霉素-N-脱甲基酶在30 d时呈升高趋势,60和90 d时呈波动性降低变化,且高剂量组均极显著(P0.01)低于正常组。在各个时间点,CYP2H1 mRNA的转录水平除30 d低、高剂量组,60 d中剂量组,90 d低剂量组高于正常组外,其他组均低于正常组。结果提示,锰中毒可影响鸡肝脏细胞色素P450酶系以及CYP2H1 mRNA的转录水平。     

不同生境冷蒿花期激素动态及对成花的影响

以典型草原与荒漠草原冷蒿植株为供试材料,在花期内测定不同居群冷蒿营养枝、生殖枝内源激素吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)含量的动态变化。结果表明:在花期发育过程锡林浩特市与鄂托克旗冷蒿中IAA、A9.BA、GA3含量变化均差异显著。其中三者的浓度关系为:GA3>IAA>ABA。两试验区进入花期内源ABA浓度都呈上升趋势,可以确定其对冷蒿而言是促进成花的激素。IAA与GA3进入花期总体呈下降的趋势,表明二者对于成花具有抑制作用。内源激素比例分析表明,两试验区ABA/IAA和ABA/GA3比值进入花期呈上升的趋势,到盛开期达到顶峰,之后迅速降低,反映出激素的平衡对于其成花亦起着重要的调控作用。     

油菜素内酯和赤霉素处理对荔枝抗寒性及成花的影响

【目的】探讨油菜素内酯和赤霉素处理对荔枝抗寒性的影响。【方法】对田间‘桂味’盆栽树分别喷施赤霉素（Gibberellin,GA3）208 μM,24-表油菜素内酯（24-EBR） 0.5 μM、 1 μM、2 μM和蒸馏水,利用2015-2016年冬季的自然低温,特别是2016年一月下旬发生的极端低温天气,研究处于花芽分化期间的‘桂味’荔枝在经历极端低温后,不同激素处理的植株叶片和花芽发生寒害的情况以及成花状况。【结果】极端低温对GA3处理和对照植株的“白点”（花序原基）和叶片造成伤害,并观察到冷害症状,但GA3处理植株的伤害程度比对照植株大,表现为树体逐渐衰弱,甚至死亡。24-EBR处理植株没有明显的冷害症状。24-EBR处理减缓了因低温引起的叶片相对电导率的增加,提高超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）的活性。【结论】外源油菜素内酯处理可以提高‘桂味’荔枝的抗寒性,而赤霉素则降低了荔枝的抗寒性。     

大肠杆菌刺激和LPS诱导条件下猪小肠上皮细胞FUT1和FUT2基因表达变化

本实验运用Real-time PCR方法检测分析α-(1,2)岩藻糖转移酶1(FUT1)和α-(1,2)岩藻糖转移酶2(FUT2)基因在大肠杆菌(E.coli)F18ab、F18ac感染以及内毒素(LPS)诱导小肠上皮细胞(IPEC-J2)前后的mRNA表达差异,在细胞水平上进一步验证FUT1、FUT2基因的功能并探讨其在抗E.coli F18侵染过程中的作用机制。结果表明:FUT1、FUT2基因在E.coli感染和LPS诱导细胞后的mRNA表达水平均极显著升高(P0.01),且FUT2基因的上升趋势要高于FUT1基因。由此推测,FUT1和FUT2基因的表达水平与仔猪抵抗E.coli F18感染的能力密切相关,FUT2基因可能发挥着比FUT1基因更重要的调控作用。     

猪链球菌2型SS2—1和SS2—H的培养稳定性检测

将猪链球菌2型制苗候选菌株SS2－1和SS2－H在血平板上连续传代至第41代，并分别检测第1代，第11代，第21代，第31代和第41代菌株的菌落及细菌形态，生化特性，溶菌酶释放蛋白（MRP)几胞外因子（EF0等指标。结果，从第1代至第41代，2株细菌的菌落及细菌形态，生化特性，MRP和EF均没有发生变异，这表明SS2－1和SS2－H菌株培养稳定性较好，使用限定代次至少可达41代，可作为理想的疫苗生产菌株。