TLR2和TLR4在人颈动脉硬化斑块中的表达

目的 探讨Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在人颈动脉硬化斑块中的表达及其与斑块形成的关系.方法 根据术后组织病理学报告选择性收集36例新鲜颈动脉硬化斑块,其中软斑组12例,硬斑组12例,混合斑组12例,以及12例正常脾动脉组织作为对照组,采用RT-PCR检测标本组织中TLR2及TLR4 mRNA的表达水平;应用免疫组化检测TLR2和TLR4蛋白在标本组织中的表达.比较不同性质颈动脉硬化斑块组织TLR2和TLR4的mRNA及蛋白表达水平.结果 RT-PCR结果显示颈动脉硬化斑块组织中TLR2和TLR4相对水平分别为(0.926±0.047)和(1.040±0.056).显著高于脾动脉组织的(0.646±0.033)和(0.691±0.031)(P＜0.05);免疫组化结果显示TLR2和TLR4在颈动脉硬化斑块中相对水平分别为(135.295±17.787)和(130.368±14.969),显著高于脾动脉组织的(82.396±6.668)和(98.898±9.089)(P＜0.05);且TLR2和TLR4mRNA及蛋白表达上调水平相关,TLR2和TLR4mRNA及蛋白表达水平与斑块性质有关,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TLR2及TLR4在颈动脉硬化斑块组织中高表达;TLRs信号通路可能促进了颈动脉硬化程度的进展.     

外周血TLR2及TLR4表达与血管性痴呆的相关性

目的探讨中国汉族人群Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)外周血表达水平及其与血管性痴呆(VaD)的相互关系。方法采用病例-对照研究的方法,选择性别、年龄等相关因素相匹配的中国汉族VaD病人和健康人(对照组)各200例,应用聚合酶链反应(PCR)技术和流式细胞仪定量检测外周血单核细胞表面TLR2和TLR4蛋白和mRNA的表达水平。结果 VaD组TLR2和TLR4的mRNA与蛋白表达水平均明显高于对照组(t=12.30~63.50,P<0.05)。多元线性回归分析显示,两组TLR2蛋白表达水平及TLR4的mRNA和蛋白表达水平与VaD之间存在显著相关(P<0.05)。结论外周血中TLR2和TLR4的表达水平与VaD的发病之间存在相关关系。     

烧伤患者外周血单个核细胞TLR2和TLR4表达的变化

目的观察烧伤患者外周血单个核细胞表面TLR2、TLR4表达的变化。方法选取深II度以上烧伤30%~50%TBSA烧伤患者23例,伤后48 h取外周血20 mL,同时抽取健康献血者(设为对照组)12例,外周血20 mL。常规方法分离出单个核细胞,用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的小鼠抗人TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的小鼠抗人TLR4抗体对外周血单个核细胞进行免疫染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞率及其平均荧光强度(MFI)。结果烧伤后48 h,患者外周血单个核细胞TLR2-FITC阳性细胞数量上升,为(57.57±18.56)%,与对照组的(26.32±10.31)%相比,P<0.05;细胞表面TLR2-FITC荧光强度下降,TLR2-FITC MFI为58.5±18.76,低于对照组(69.79±23.42);TLR4-PE阳性率为(29.84±13.28)%,与对照组的(12.75±5.18)%相比,P<0.05;TLR4-PE MFI减弱,与对照组相比,P<0.05。结论烧伤患者外周血单个核细胞TLR2/4阳性数量均升高,而TLR2/4表达强度降低。     

LPS信号转导分子TLR4表达与小鼠肝损伤的关系

目的 :探讨脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)信号转导分子TLR4(Toll likereceptor 4 ,TLR4)与肝脏损伤的关系。方法 :小鼠腹腔注射LPS后不同时间点取肝脏组织 ,HE染色观察病理改变 ,RT PCR法检测肝组织TLR4mRNA的表达。结果 :腹腔注射LPS后 2 4h小鼠肝脏出现明显炎性浸润、坏死 ,肝组织TLR4mRNA的表达在注射LPS后 6 ,1 2h明显抑制 ,2 4h则基本恢复。结论 :LPS致肝损伤呈时间依从性 ;LPS信号转导分子TLR4在介导LPS肝损伤中起重要作用     

腹膜透析液对腹膜间皮细胞TLR2和TLR4表达的影响

目的：观察不同浓度葡萄糖（dextrose）腹膜透析液、艾考糊精（icodextrin）腹膜透析液对人腹膜间皮细胞 Toll 样受体2（TLR2）和 TLR4表达的影响。方法体外培养人腹膜间皮细胞株第5～10代（HMrSV5,DMEM ／F12培养基含10％胎牛血清）用于实验研究。 M TT 检测细胞活力,实验分为5组：阴性对照组、1．50％ dextrose 组、2．50％ dextrose 组、4．25％ dextrose 组、7．5％ icodextrin 组,应用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 TLR2和 TLR4的表达水平。结果不同浓度 dextrose 腹膜透析液作用24 h 对腹膜间皮细胞 TLR2和 TLR4的表达无明显影响。作用48 h ,1．50％ dextrose 组、2．50％ dextrose 组、4．25％ dex-trose 组 TLR2分别降低（5．5±2．8）％、（31．4±7．5）％、（54．9±1．9）％,TLR4分别降低（32．9±17．6）％、（47．7±13．5）％、（66．4±13．5）％;作用72 h ,1．50％ dextrose 组、2．50％ dextrose 组、4．25％ dextrose 组 TLR2表达分别降低（29．4±14．7）％、（38．9±9．9）％、（63．5±16．5）％,TLR4表达分别降低（59．5±16．8）％、（63．1±9．5）％、（79．2±14．0）％;7．5％ icodextrin 组TLR2和 TLR4表达与阴性对照组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 dextrose 透析液下调 HM rSV5 TLR2和 TLR4的表达;icodextrin 透析液对 TLR2和 TLR4的表达无显著影响。     

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔腹主动脉TLR2、TLR4、NF-κB表达的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)易损斑块兔Toll样受体2(toll like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)、核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)变化的影响,探讨其可能的作用机制。方法将60只普通级新西兰兔随机分为空白组、模型组、直接灸组、隔药饼灸组、药物组,每组12只。通过高脂饲养+腹主动脉球囊损伤制作兔AS易损斑块模型。采用免疫组化法观察腹主动脉TLR2、TLR4、NF-κB的抗原活性;透射电镜观察腹主动脉超微结构。结果与空白组比较,模型组、直接灸组、隔药饼灸组和药物组TLR2、TLR4、NF-κB灰度值均显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,直接灸组、隔药饼灸组和药物组TLR2、TLR4、NF-κB灰度值均显著升高(P<0.05或P<0.01);与直接灸组相比,隔药饼灸组和药物组TLR2、TLR4、NF-κB灰度值明显升高(P<0.05或P<0.01)。电镜下观察,模型组较空白组主动脉内皮细胞病变更严重,内皮细胞内含大量脂质;直接灸组、隔药饼灸组、药物组内皮细胞大多形态正常,有少量脂质沉积。结论隔药饼灸稳定AS易损斑块的机制可能是通过降低TLR2、TLR4、NF-κB的抗原活性,下调其表达,以延缓AS的形成。     

丁酸钠对内毒素血症小鼠肝脏TLR4表达的影响

【摘要】目的 探讨丁酸钠对内毒素血症小鼠肝脏Toll 样受体4(toll like receptor 4, TLR4)表达的影响。方法 将180只健康小鼠（体重20±5g）随机分成正常组、模型组、阳性对照组、丁酸钠低剂量组、丁酸钠中剂量组、丁酸钠高剂量组, 每组30只。腹腔注射戊巴比妥(40mg/kg)麻醉小鼠, 后5组小鼠给予腹腔内注射LPS4mg/kg诱导建立内毒素血症肝脏损伤模型。注入LPS前1、12、24、36h和注入后12、24、36h,对此5组动物分别给予生理盐水、10mg/kg盐酸地塞米松、0.4mg/kg丁酸钠溶液、2mg/kg丁酸钠溶液和10mg/kg丁酸钠溶液, 正常组给予同等体积生理盐水。在LPS注入后48h解剖肝脏, 观察肝细胞形态学改变, 分光光度法测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶 (ALP)的含量, real-time PCR和ELISA分析TLR4、核转录因子- КB(nuclear factor- κB, NF- КB)和肿瘤坏死因子- α(tumor necrosis factor- α, TNF- α)的表达。结果 与模型组相比, 丁酸钠处理组小鼠肝细胞损伤程度减轻, 以丁酸钠高剂量组最为显著;与模型组比较, 丁酸钠高剂量组血清中ALT、AST和ALP含量分别减少了54.03%、61.72%和46.15%(P<0.01);TLR4、NF- κB和TNF- αmRNA水平分别减少了61.48% 、64.51%和50.34 % (P＜0.01);ELISA结果显示, TLR4、NF- κB和TNF- α 蛋白水平分别减少了57.82%、46.17%和61.5 % (P＜0.01)。免疫组化结果表明, 丁酸钠处理组TLR4表达水平较模型组明显降低, 其中以高剂量组最为显著。结论 丁酸钠对内毒素血症小鼠肝损伤具有保护作用, 其机制可能与下调TLR4的表达有关。     

Hp感染性胃癌组织TLR2、TLR4表达及其临床意义

<正>我国是胃癌的高发国家之一,年新发病例约40万例,2009年数据统计显示,胃癌年新发病例约占全部癌症的7.8%,约99万例^[1]。既往研究证实,胃黏膜长期慢性炎症刺激是导致胃癌发生发展的独立危险因素之一^[2-3]。幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)可介导CagA基因及对上皮细胞保护层具穿透能力的HtrA的蛋白酶等毒性因子表达,参与激活胃黏膜组织免疫及炎症反应引发黏膜受损,甚至萎缩,     

多柔比星对乳鼠心肌细胞TLR2、TLR4表达的影响

目的:观察Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(TLR4)在多柔比星(doxorubicin,DOX)损伤乳鼠心肌细胞中的表达,探讨多柔比星在心肌损伤中的可能发病机制。方法:体外培养乳鼠心肌细胞,将培养的乳鼠心肌细胞随机分为2组,对照组将心肌细胞悬液换用无血清培养基继续培养,未加任何药物;多柔比星组在培养液中加入多柔比星1 mg/L。作用6 h后免疫组织化学法检测心肌细胞TLR2、TLR4蛋白表达;分别作用2,6 h后用蛋白质印迹法对TLR2、TLR4在心肌细胞的表达水平进行半定量分析。结果:多柔比星组心肌细胞TLR2、TLR4的表达较对照组明显增加(P<0.01)。结论:TLR2、TLR4作为模式识别受体可能介导了多柔比星心肌细胞损伤的固有免疫反应,是多柔比星心肌细胞损伤的机制之一。     

调肝导浊方对apoE-/-小鼠血脂及主动脉斑块面积的影响

[目的] 观察调肝导浊方对apoE^-/-小鼠血脂及主动脉斑块的影响。[方法] 将apoE^-/-小鼠随机分成模型组和调肝导浊组并予以高脂饮食12周,C57BL/6L小鼠作为对照组给予普通饮食,12周后,检测各组小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)的水平;油红O染色评估主动脉斑块的范围;小动物超声仪检测主动脉的斑块面积及狭窄程度。[结果] 模型组与对照组相比,TC、TG、HDL-C、LDL-C均升高(P<0.05或P<0.01);调肝导浊组与模型组相比,LDL-C水平降低(P<0.05),TC、TG、HDL-C无明显差异。油红O染色显示模型组的斑块范围最大,其次是调肝导浊组,最后是对照组。B超结果显示与对照组相比,模型组主动脉的斑块面积及狭窄程度明显增大(P<0.01);调肝导浊方干预后,斑块面积减小(P<0.05),狭窄程度明显减轻(P<0.01)。[结论] 调肝导浊方可以降低apoE^-/-小鼠的血清LDL-C水平,减少主动脉的斑块面积,并改善血管的狭窄程度。     

加味二陈汤对ApoE-/-小鼠脂质代谢及肝细胞形态的影响

目的观察加味二陈汤对Apo E-/-小鼠血脂的影响。方法 44只Apo E-/-小鼠以高脂饲喂养4周构建AS小鼠模型,分别用辛伐他汀、加味二陈汤对小鼠灌胃给药,8周后处死小鼠,酶法检测血清血脂;每周称取并记录小鼠体重;油红O染色观察小鼠主动脉管腔内粥样斑块;HE染色观察小鼠主动脉管腔内粥样斑块沉积及肝细胞形态。结果加味二陈汤可显著降低小鼠血清中TCHOL、LDL-C水平(P<0.01);各组小鼠体重均有所增加,但模型组小鼠体重略高于空白对照组和加味二陈汤组;油红O染色结果显示加味二陈汤可显著减少Apo E-/-小鼠主动脉管腔内粥样斑块的面积;小鼠主动脉HE染色示加味二陈汤组小鼠主动脉内有脂质沉积斑块较模型组明显减少;肝细胞切片HE染色发现加味二陈汤组小鼠肝细胞的病变程度较轻,肝小叶结构较清晰。结论加味二陈汤能有效降低Apo E-/-小鼠血清中有关脂质的含量,调节小鼠脂质代谢,缓解动脉粥样硬化进程。     

缬沙坦对大鼠颈动脉球囊损伤后血管内膜增生和TLR4表达的影响

目的:观察缬沙坦对大鼠颈动脉球囊损伤后血管内膜增生及Toll样受体4(toll like receptor4,TLR4)表达的影响。方法:以1.5F球囊导管建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,SD大鼠随机分为假手术组(n=6)、球囊损伤组(n=12)、缬沙坦组(n=12)。造模后第1天开始给予缬沙坦10mg.kg-1.d-1灌胃,假手术组及球囊损伤组灌胃等量蒸馏水,14d后取损伤血管段,组织形态学观察并测定内膜增生情况,实时定量PCR检测血管TLR4mRNA的表达。结果:术后14d,球囊损伤组和缬沙坦组可见明显内膜增生,内膜面积及内膜和中膜面积比均显著大于假手术组,而缬沙坦组上述指标均低于球囊损伤组(P<0.05);球囊损伤组和缬沙坦组TLR4mRNA的表达较假手术组升高,与球囊损伤组比较,缬沙坦可降低球囊损伤诱导的TLR4高表达。结论:缬沙坦可抑制大鼠颈动脉球囊损伤引起的血管内膜增生,其作用可能是通过下调损伤血管TLR4的过表达而实现。     

颈动脉结构改变与冠状动脉病变关系的研究

目的评价颈动脉结构的改变与冠状动脉病变及其严重程度的关系。方法根据冠状动脉造影结果,将152名临床怀疑或已确诊为冠心病的患者(男性119名,女性33名)分为冠心病组(117人)和正常对照组(35人),用高分辨率超声心动仪检测所有患者的双侧颈动脉(CCA)内径、内中膜厚度(IMT)、斑块及其数量,计算几何形状改变(R/IMT)。用SPSS 10.0软件进行数据分析。结果颈动脉斑块发生率、内径、IMT、颈动脉半径和IMT的比值(R/IMT)均和年龄增长显著相关。冠心病患者的CCA斑块发生率、斑块数和IMT显著高于正常对照组(P值分别为0.000、0.001和0.007),R/IMT显著低于对照组(P=0.000),斑块对诊断冠心病敏感性为74.1％,特异性为71.4％,OR=7.167;CCA斑块发生率和斑块数在多支冠脉病变者显著高于单支病变者(P=0.000及P=0.004),CCA斑块发生率(r=0.098,P=0.050)和IMT(r=0.258,P=0.003)和冠脉Gensini积分显著相关。结论颈动脉结构改变与年龄增长显著相关。CCA斑块、IMT对预测冠心病危险性有益。     

津力达对高脂诱导的胰岛素抵抗ApoE-/-小鼠骨骼肌甘油三酯相关酶的影响

目的 探究津力达对高脂诱导的胰岛素抵抗ApoE^-/-小鼠骨骼肌甘油三酯相关基因的影响。方法 将8只雄性C57BL/6J小鼠设为正常组(A组);40只雄性ApoE^-/-小鼠喂养16周后分为模型组(B组)、罗格列酮组(C组)、 津力达低剂量组(D组)、津力达中剂量组(E组)、津力达高剂量组(F组),开始灌胃给药,连续8周。采用酶法、BCA蛋白浓度法测定骨骼肌TG含量;OGTT评价小鼠的胰岛素抵抗程度; RT-PCR和Western blot测定小鼠骨骼肌HSL、ATGL、PPARγ mRNA和蛋白表达。结果 津力达能够不同程度降低小鼠的FBG、TC、TG和LDL-C,升高HDL-C;下调FIns水平,提高ISI,明显改善小鼠糖耐量异常;津力达能够不同程度的上调小鼠HSL、ATGL、PPARγ mRNA和蛋白表达。结论 津力达能够通过调节骨骼肌甘油三酯相关酶的表达,改善高脂诱导的ApoE^-/-小鼠的胰岛素抵抗。     

ApoE-/-高脂模型小鼠肝脏转录组铁死亡潜在分子网络互作的初步探讨

目的：对ApoE^-/-高脂模型小鼠肝脏中铁死亡相关差异基因的生物过程和信号通路进行分析,构建肝脏内铁死亡的分子调控网络,从转录水平揭示高脂血症的发病机制。方法：C57BL/6J小鼠7只作为空白对照组,ApoE^-/-小鼠7只作为模型组,对照组和模型组分别给予普通饲料和高脂饲料,16周后检测小鼠的甘油三酯(triglyceride,TG)、胆固醇(cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL-C)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL-C)血清水平,并对肝脏取材进行HE染色及转录组分析。应用Graph-Pad Prism 8.0.2软件分析铁死亡相关差异基因分布情况,通过STRING11.0平台构建蛋白-蛋白相互作用网络模型,DAVID数据库进行GO生物功能富集和KEGG通路富集,Cytoscape的ClueGO插件对铁死亡相关差异基因的功能及代谢通路进行可视化分析。结果：与对照组TG(1.19±0.09)、TC(2.31±0.15)、LDL-C(0.29±...     

颈总动脉压迫试验在鉴别颈内动脉虹吸部中的价值

目的探讨颈总动脉压迫试验在对单侧或双侧颞窗不透声的患者进行经颅多普勒超声（TCD）检查颈内动脉虹吸部时的鉴别价值。方法对473例单侧或双侧颞窗不透声的患者进行TCD检查,经眼窗探查眼动脉和颈内动脉虹吸部,通过压迫同侧或对侧颈总动脉,鉴别经探头所在侧眼窗探查到的眼动脉、颈内动脉虹吸部是否与探头所在侧一致。结果 TCD所检测的946支颈内动脉虹吸段中,884支与探头所在侧一致,62支与探头所在侧不一致,经分析,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论对单侧或双侧颞窗不透声患者通过眼窗进行TCD检查颈内动脉虹吸部时,存在一定的误差,颈总动脉压迫试验在对其进行鉴别时具有重要价值     

革兰阳性菌肽聚糖对人嗜碱性粒细胞中TLR3、TLR9mRNA的上调作用

目的:探讨Toll样受体(TLR)的配体肽聚糖(PGN)、聚肌苷酸_聚胞苷酸(PolyI_C)、脂多糖(LPS)和含有去甲基化的寡核苷酸序列(CpGDNA)对嗜碱性粒细胞中TLR2～4和TLR9mRNA表达的调节作用。方法:用实时定量_逆转录聚合酶链反应检测PGN、PolyI_C、LPS和CpGDNA刺激人嗜碱性粒细胞系(KU812)后,TLR2～4和TLR9mRNA表达的变化。结果:PGN刺激KU812细胞后,TLR3和TLR9mRNA的表达与未刺激组比有统计学意义(P<0.05);而PolyI_C、LPS和CpGDNA刺激KU812细胞后,细胞中TLR2～4和TLR9的mRNA与未刺激组比无统计学意义(P>0.05)。结论:革兰阳性菌的感染可能增加人嗜碱性粒细胞对病毒或其它细菌感染的敏感性。     

柿叶总黄酮对apoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变中粘附分子表达的影响

目的 探讨柿叶总黄酮对载脂蛋白E基因敲除小鼠胸腹主动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)斑块中粘附分子表达的影响.方法 ApoE-/-小鼠随机分为模型组和黄酮组,C57BL/6小鼠作为对照,胸腹主动脉近心端连续冷冻切片,苏木素伊红(HE)染色观察组织形态学变化,血清检测观察血脂变化,免疫组化染色观察粘附分子在病变部位的表达分布.结果 HE染色结果显示,正常对照组血管内膜平滑,无AS病变,模型组大部分斑块面积较大,突入管腔致管腔明显狭窄,黄酮组大部分病变较轻,无明显管腔狭窄;血脂检测表明,模型组和黄酮组之间血脂水平无显著性差异;免疫组化结果显示,正常对照组小鼠主动脉无阳性染色颗粒表达,模型组斑块的肩部、纤维帽部有较多阳性染色颗粒表达,而黄酮组阳性染色颗粒较少,主要表达于血管内膜,且模型组显著低于黄酮组,差异有显著性(P＜0.05).结论 柿叶总黄酮可在一定程度上抑制P-Selectin、ICAM-1、VCAM-1等粘附分子表达,从而减缓AS病变,但并不依赖于其对血脂的降低作用.     

养阴活血方对高脂饮食诱导的ApoE-/-小鼠Treg/Th17失衡及动脉粥样硬化的影响

探讨养阴活血方(YHF)对高脂饮食诱导的ApoE^-/-小鼠Treg/Th17失衡及动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响。小鼠给予高脂饮食诱导AS,YHF低剂量(18 g/kg,以生药计)、YHF高剂量(36 g/kg,以生药计)灌胃给药20周进行干预。油红O脂肪染色法观测主动脉斑块面积变化;生化分析血脂水平;流式细胞术检测外周血Treg、Th17比例;荧光实时定量PCR(qRT-PCR)、免疫组化(IHC)及Western blot检测主动脉Foxp3、RORγt mRNA及蛋白表达。分离小鼠脾脏CD4⁺T细胞并用anti-CD3/CD28活化,再经LPS刺激和YHF干预后,qRT-PCR与免疫荧光(IF)检测CD4⁺T细胞Foxp3、RORγt表达。结果显示,YHF显著减小主动脉斑块面积,降低血脂水平,增加Treg/Th17比值;上调主动脉Foxp3表达而下调RORγt表达;且在体外上调CD4⁺T细胞Foxp3表达而下调RORγt表达。本研究表明,YHF可以调节高脂饮食诱导的ApoE^-/-小鼠Treg/Th17比例失衡,减弱LPS对CD4⁺T细胞的炎性刺激影响,从而改善AS。