SphK1和FAK对人结肠癌HCT116细胞上皮间质转化的影响

 目的: 研究鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase l,SphK1)和黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)对人结肠癌HCT116细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法: 将人结肠癌HCT116细胞分成3组:采用SphK1抑制剂N,N-二甲基鞘胺醇(N,N-dimethylsphingosine,DMS)、FAK抑制剂PF573228和相同体积的培养基分别处理细胞。MTT法检测细胞活力,Western blot方法检测SphK1、FAK、E-cadherin、N-cadherin、vimentin和基质金属蛋白酶2(MMP2)蛋白的表达,real-time PCR检测SphK1、鞘氨醇1-磷酸(S1P)、FAK、E-cadherin和vimentin mRNA的表达,并应用细胞划痕实验检测肿瘤细胞的迁移能力。结果: PF573228和DMS均明显抑制人结肠癌HCT116细胞的活力,并呈时间剂量依赖性。DMS抑制SphK1的表达,同时下调FAK、N-cadherin、vimentin和MMP2蛋白的表达,而上调E-cadherin蛋白表达上调。PF573228明显抑制FAK的表达,同时抑制SphK1、N-cadherin、vimentin和MMP2的表达,上调E-cadherin蛋白的表达(P<0.01)。划痕实验显示PF573228和DMS显著抑制HCT116细胞的迁移能力(P<0.01)。与对照组比较,PF573228组和DMS组FAK、SphK1、S1P以及vimentin mRNA的表达明显下调,而E-cadherin mRNA的表达则明显上调(P<0.05)。结论: SphK1和FAK信号通路可能在结肠癌HTC116细胞上皮间质转化过程中发挥重要作用。     

沉默Twist基因对胃癌BGC-823细胞上皮-间质转化的影响

目的探讨干扰Twist基因表达对胃癌细胞株BGC-823细胞上皮-间质转化的影响。方法采用干扰技术并构建质粒、生物信息学软件、qRT-PCR技术、划痕实验、Transwell实验和Western blot法对BGC-823细胞进行体外实验。结果 Twist在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P0.05),且与胃癌患者的预后呈负相关性(P0.05)。干扰Twist表达后,胃癌细胞株的迁移、侵袭能力减弱(P0.05);E-cadherin的相对表达量增高(P0.01),而N-cadherin的相对表达量降低(P0.05)。结论胃癌细胞株BGC-823中Twist的表达可促进胃癌细胞发生上皮-间质转化,Twist在胃癌发生发展中起癌基因的作用。     

上皮-间质转化与肿瘤的浸润和转移

上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)是指上皮细胞失去极性,经过细胞骨架重塑,转变成具有迁移能力的间充质表型的过程,是多细胞生物胚胎发生发育过程中的基础。细胞因子TGF-β、转录因子Snail、基质金属蛋白酶MMPs、病毒癌基因可以诱导EMT。肿瘤细胞EMT与肿瘤细胞的浸润、转移、信号转导有关,研究肿瘤细胞EMT将为寻找抗肿瘤治疗靶点奠定基础。     

透明细胞肾细胞癌中FOXD1的表达及其对786-O细胞增殖侵袭、上皮-间质转化的影响

目的 探讨转录因子FOXD1在透明细胞肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma, CCRCC)组织和细胞系中的表达及其对786-O细胞增殖侵袭、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 采用qRT-PCR技术检测CCRCC组织和细胞系中FOXD1基因表达,并分析FOXD1表达与CCRCC临床病理特征及预后的关系;检测敲低FOXD1表达对786-O细胞生物学行为和EMT相关标志物表达的影响。结果 CCRCC组织中FOXD1的表达量(0.917 2±0.096 58)高于对照组(0.556 9±0.074 82),差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤TNM分期、淋巴结转移及FOXD1高表达均为CCRCC患者预后相关的独立危险因子(P<0.05)。下调FOXD1基因发现,CCRCC细胞系786-O的体外侵袭与增殖活性明显减弱(P<0.05)。与对照组相比,敲低FOXD1表达后N-cadherin、Ki-67和vimentin表达下调(P<0.05),E-cadherin...     

上皮-间质转化的信号转导机制

上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)出现在各种生理和病理情况下,在胚胎发生与器官发育、肿瘤形成和转移以及纤维化过程中均有表现。TGF-β是EMT的一个重要诱导因素,其通过Smad和非Smad依赖通路对EMT的发生进行调节,对肿瘤的形成、转移和扩散起到了重要的作用。本文综述了近年来EMT信号转导机制的研究进展。     

模拟低氧微环境中基质硬度对结肠癌细胞上皮-间质转化的影响

目的 通过模拟人结肠癌组织微环境,研究基质硬度和低氧协同对结肠癌细胞SW480上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 制备硬度分别为4.5、20、40 kPa聚乙烯醇(polyvinyl alcohol, PVA)凝胶模拟结肠癌组织各部位的刚度范围。以氯化钴(CoCl₂)模拟低氧微环境,在不同硬度基底上检测细胞形态变化;利用Western blot检测低氧诱导因子(hypoxia inducible factor, HIF-1α)以及EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、转录因子Snail 1表达;通过实时荧光定量PCR检测HIF-1α、E-cadherin、Vimentin、Snail 1、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)和MMP-9基因表达。结果 模拟低氧微环境中,随基质硬度增加,细胞铺展面积增大,由圆形逐渐变为纺锤形;通过上调Vimentin、Snail-1、MMP-2、MMP-9表达以及下调E...     

食管鳞癌中Klf17蛋白表达及其对Eca109细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨KLF17与临床病理特征的关系;探讨KLF17对Eca109细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法采用免疫组化法,检测KLF17在食管鳞癌及癌旁正常食管上皮中的表达;构建KLF17慢病毒过表达载体感染Eca109细胞,细胞分组为转染组(CON)、空载体转染组(Ad-GFP)和慢病毒转染组(Ad-KLF17)。Real timePCR检测KLF17 mRNA的表达、Western blot检测KLF17、E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达;细胞划痕实验及体外Transwell实验观察Eca109细胞迁移和侵袭能力。结果 KLF17蛋白表达与侵袭深度、TNM分期显著相关(P0.05);real time-PCR及Western blot结果显示Ad-KLF17组KLF17及上皮标志物E-cadherin表达明显高于Ad-GFP组及对照组(P0.05),而间质标志物N-cadherin表达明显低于Ad-GFP组及对照组(P0.05);划痕实验与体外Transwell实验结果显示Ad-KLF17组细胞迁移距离及细胞数量明显短于和少于Ad-GFP组和对照组(P0.05)。结论 KLF17能抑制Eca109细胞发生上皮-间质转化,与其迁移、侵袭能力相关。     

PTTG1通过上皮-间质转化促进非小细胞肺癌的迁移和侵袭

目的 研究PTTG1在非小细胞肺癌侵袭转移中的作用.方法 应用免疫组织化学染色法检测80例NSCLC组织中PTTG1、E-cadherin和Vimentin的表达,并分析其相关性.细胞分组:1)A549/con,转染空载的A549,2)A549/PTTG1,转染目的基因的A549,3)Scr/H1299,转染空载的H1299,4)SiPTTG1/H1299,敲除PTTG1的H1299;用Western blot检测细胞中PTTG1、E-cadherin、Vimentin蛋白的表达情况.结果 NSCLC组织中PTG1蛋白的阳性表达率为85％与E-cadherin的表达呈负相关(P＜0.05)而与Vimentin的表达呈正相关(P＜0.05).Western blot结果显示在SiPTTG1/H1299细胞中PTTG1蛋白表达水平明显降低,Vimentin蛋白表达水平降低而E-cadherin蛋白表达水平升高.同时在A549/PTTG1细胞中Vimentin蛋白表达水平升高而E-cadherin蛋白表达水平降低.结论 PTG1能促进NSCLC EMT的发生,从而促进NSCLC的侵袭和转移.     

乳腺癌中miR-134的表达及其与上皮-间质转化的关系

目的：探讨miR-134在乳腺癌中的表达及临床意义,分析其表达与上皮-间质转化（ epithe1ia1-mesenchyma1 transition, EMT）标志物的相关性。方法采用原位分子杂交法检测97例乳腺癌组织中miR-134的表达,同时应用免疫组化MaxVision两步法检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达,并分析三者表达与临床病理特征的关系。结果 miR-134在乳腺癌中的阳性率随组织学分级的升高而降低,其表达与HER-2表达呈负相关。miR-134的阳性率随E-cadherin表达下调及N-cadherin、vimentin表达上调而降低;E-cadherin在乳腺癌中表达下调以及N-cadherin、vimentin在乳腺癌中表达上调均与组织学分级升高、淋巴结转移和HER-2阳性以及ER、PR阴性有关。结论 miR-134在乳腺癌组织中的表达随肿瘤恶性程度的升高而下调,并与EMT关系密切,是乳腺癌的潜在生物学标志物。     

舌鳞状细胞癌中Survivin的表达及与上皮细胞-间质转化的关系

目的探讨Survivin在舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)中的表达及其与上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系。方法采用免疫组化EnVision法检测63例TSCC及相应癌旁正常组织中Survivin和EMT标志物的表达,分析Survivin表达与TSCC临床病理特征的关系及其与EMT标志物的相关性。应用Western blot法检测8例TSCC新鲜组织中Survivin、E-cadherin和N-cadherin的表达。结果TSCC组织中Survivin阳性率为81.0%,明显高于相应癌旁正常组织中(15.9%);Survivin表达与TSCC临床分期、病理分级及淋巴结转移有明显相关性。E-cadherin和N-cadherin在TSCC组织中阳性率分别为42.9%和69.8%;Survivin与E-cadherin的表达呈负相关,与N-cadherin表达呈正相关。Western blot实验结果也证实,Survivin和N-cadherin在TSCC组织中呈高表达,而E-cadherin呈低表达。结论Survivin表达与TSCC组织EMT标志物有关,Survivin可能通过诱导TSCC细胞发生EMT,从而促进TSCC的侵袭和转移。     

Notch信号通路与Slug在调控宫颈鳞状细胞癌上皮-间充质转变中的意义

目的探讨Notch信号通路与Slug在宫颈鳞状细胞癌上皮-间充质转变(EMT)中的作用机制。方法收集临床慢性宫颈炎及宫颈鳞状细胞癌标本,分别用免疫组化及Western blot检测Notch1、NICD1、Slug、E-cadherin、α-SMA蛋白表达情况,Real-Time PCR检测Notch1、SlugmRNA表达情况。结果与慢性宫颈炎比较,Notch1、NICD1、Slug和α-SMA在宫颈鳞状细胞癌中表达增加(P<0.01),E-cadherin蛋白在癌组织中的表达降(P<0.01)。结论 Notch信号通路和Slug可能通过调控EMT在宫颈鳞状细胞癌的侵袭转移过程中发挥作用     

食管鳞状细胞癌间质细胞中podoplanin的表达及临床意义

目的观察食管鳞状细胞癌间质细胞中podoplanin的表达及与临床病理特征的关系,探讨podoplanin阳性间质细胞在食管鳞状细胞癌进展中的作用。方法应用免疫组化En Vision法检测69例食管鳞状细胞癌中podoplanin的表达,分析阳性间质细胞中podoplanin表达与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系。结果 69例食管鳞状细胞癌中,间质细胞podoplanin阳性者43例,阳性率为62.3%。食管鳞状细胞癌中间质细胞podoplanin阳性者淋巴管密度(lymphatic vessel density,LVD)为45.72±14.36,明显高于间质细胞podoplanin阴性者(21.23±10.49),差异有统计学意义(P<0.01);有淋巴管侵犯的食管鳞状细胞癌间质细胞podoplanin表达明显高于无淋巴管侵犯者(P<0.05)。间质细胞podoplanin表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、分化程度、淋巴结转移和临床分期均无关(P>0.05)。结论 podoplanin阳性间质细胞可促进食管鳞状细胞癌淋巴管形成和淋巴管侵犯。     

食管鳞状细胞癌中VEGF与肿瘤浸润性树突状细胞的关系

目的探讨食管鳞癌中血管内皮细胞生长因子(vascu lar endothelial growth factor,VEGF)与肿瘤浸润性树突状细胞(tumor infiltrated dendritic cell,TIDC)的关系。方法运用原位杂交和免疫组化方法检测食管鳞癌组织中VEGF蛋白和mR-NA的表达、S-100蛋白标记的TIDC的密度。结果(1)46例食管鳞癌组织中VEGF蛋白在不同浸润深度、不同转移状态的肿瘤中表达阳性率差异有显著性。(2)食管鳞癌中S-100蛋白阳性树突状细胞(dendritic cell,DC)平均密度为(19.83±13.91)个/HP;不同分化肿瘤之间S-100蛋白阳性TIDC密度分别为(18.50±17.27)个/HPF、(28.08±14.05)个/HPF、(15.740±10.38)个/HPF,差异有显著性;不同浸润深度的肿瘤之间TIDC密度分别为(32.78±16.60)个/HPF、(15.20±11.96)个/HPF、(19.83±13.92)个/HPF,差异有显著性;VEGF阳性组TIDC密度为(14.93±12.83)个/HPF,显著低于VEGF阴性组的(26.79±12.61)个/HPF,VEGF表达与DC密度之间存在显著的负相关性(r=-0.462)。结论(1)VEGF蛋白表达和食管鳞癌浸润转移之间有一定的相关性。(2)首次探讨了食管鳞癌中DC密度与VEGF蛋白表达之间的关系,发现VEGF影响鳞癌组织中DC的密度,可能影响宿主的抗肿瘤免疫能力和肿瘤的浸润转移。     

PINCH expression and its significance in esophageal squamous cell carcinoma

Particularly interesting new cysteine-histidine rich protein (PINCH), as a newly discovered protein of LIM family members, may play a role in signal transduction of integrin and growth factor, and involved in the incidence and development of tumors. PINCH protein is overexpressed in tumor-associated stroma of several types of tumors. However, there is no study of the PINCH in esophageal cancer, therefore we investigated PINCH expression in esophageal squamous cell carcinomas and its clinicopathological significance in the patients. PINCH expression was immunohistochemically examined in 20 normal esophageal samples and 64 esophageal squamous cell carcinomas. The results showed that PINCH expression in the stroma of cancers was heterogeneous, and its positive rate (56%) was higher than that of normal esophageal mucosa (5%, p<0.0001). The stronger staining was observed at the invasive edge of tumor when compared to the inner area of tumor. The rate of positive PINCH (90%) in the cases with lymph node metastasis was higher than that (41%) in the cases without metastasis (p<0.0001). PINCH expression was not correlated with patients' gender, age, tumor location, size and differentiation (p>0.05). The results suggest that PINCH protein may be a marker of tumor associated-stroma involving tumor development, and predicting the ability of invasion and metastasis of esophageal squamous cell carcinoma.     

食管鳞癌特殊亚型的临床病理和免疫表型分析

目的：探讨食管鳞癌特殊亚型的临床病理和免疫表型的特点。方法：采用HE染色、AB／PAS染色和免疫组化方法对12例组织学较特殊的食管鳞癌进行分型标记。结果：腺样鳞癌、印戒细胞鳞癌、梭形细胞鳞癌和基底细胞样鳞癌分别具有腺腔样结构、印戒细胞、梭形细胞肉瘤样成分和基底细胞样癌成分,以及相对特定的组化、免疫表型。结论：这4种鳞癌亚型有特殊的形态结构及生物学行为。     

PTK7在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的研究酪氨酸蛋白激酶-7（PTK7）在食管鳞状细胞癌、癌旁组织中的表达及其与食管鳞状细胞癌的发展、侵袭、淋巴结转移的关系,分析其在食管鳞癌中的诊断价值及预后变化。方法收集食管鳞状细胞癌标本80例及癌旁组织63例,采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连结（SP）法检测PTK7蛋白的表达,结合临床相关因素进行x2检验及Kaplan—meier等统计学分析。结果80例患者食管鳞状细胞癌组织中有45例PTK7蛋白表达阳性（X2=50．17,P〈0．01）,食管癌旁非典型增生及正常鳞状上皮中PTK7蛋白表达均阴性。PTK7表达与食管鳞癌的年龄、性别、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、浸润长度、临床分期等比较差异无统计学意义（P〉0．05）;与5年生存率比较差异亦无统计学意义（X2=0．2,P〉0．1）;当肿瘤组织PTK7蛋白表达综合免疫组化评分≥5分时,5年生存率有下降趋势（X2=3．35,P=0．06）。结论PTK7表达与食管鳞癌有关,当PTK7综合免疫评分≥5分时,5年生存率有下降趋势。利用检测PTK7的表达,有助于综合判断食管鳞癌的相关性和临床预后。