人脐血CD34^ 内皮祖细胞的体外分化

目的：研究人脐血CD34^ 细胞群体中内皮祖细胞在体外分化为内皮细胞的过程中,干细胞标志以及内皮细胞表型随时间的变化。方法：将免疫磁珠细胞分选法（MACS）得到的CD34^ 细胞体外培养于纤连蛋白和无纤连蛋白处理的培养皿中,以免疫细胞化学鉴定贴壁细胞的内皮标志Flk-1和vWF,并以流式细胞仪分析其干细胞标志AC133。结果：贴壁细胞的内皮标志Flk-1和vWF是逐步出现的,d3时有27.0%贴壁细胞表达Flk-1,vWF不表达,d7时已100%表达vWF和Flk-1,纤连蛋白促进贴壁细胞内皮标志Flk-1和vWF的表达,d3时的表达百分率分别为34.0%和47.0%,d7时Flk-1和vWF的表达均为100%,在培养过程中,AC133阳性细胞的比例迅速下降,但纤连蛋白对AC133的表达无显著影响。结论：在内皮祖细胞分化的过程中,干细胞标志迅速消失,向内皮细胞分化,内皮细胞的表型是逐步出现的,纤连蛋白促进内皮祖细胞的分化。     

人脐血CD34+造血干细胞的分离和体外扩增培养问题

目的通过细胞形态学观察以及计数法对分离得到的脐血CD34+造血干细胞进行研究,掌握脐血CD34+造血干细胞的生长规律和体外培养方法。方法采用Isolex50免疫磁珠法分离纯化脐血CD34+造血干细胞。在体外扩增培养中,将细胞因子SCF、IL-3、IL-6、G-CSF、EPO组合成不同实验组进行诱导,以检测单个核细胞数和集落形成单位(CFU)的形成率来找到细胞培养较好的细胞因子组合。结果本研究中使用细胞因子的细胞培养孔的单个核细胞数明显大于无细胞因子的细胞培养孔,使用此5种细胞因子联合对脐带造血干细胞培养效果最好。结论研究结果表明,不同的细胞生长因子组合会对培养CD34+造血干细胞产生不同的作用效果,对单个核细胞的增殖与扩增有明显的促进作用。     

刺梨提取物CL1对胃癌SGC-7901细胞增殖和人脐血CD34+造血干/祖细胞增殖分化能力的影响

目的观察刺梨提取物CL1对胃癌SGC-7901细胞增殖和人脐血CD34+造血干/祖细胞(HSPC)增殖分化能力的影响.方法采用MTT法测定活细胞OD值,计算CL1对胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率.免疫磁珠分选人脐血CD34+造血干/祖细胞,细胞记数、双色直接免疫荧光标记法和流式细胞仪分析细胞增殖分化能力变化.结果MTT检测法显示,0.01～10 μmol·L-1的CL1处理,剂量依赖性和时间依赖性地抑制胃癌SGC-7901细胞生长.经 14 d 的培养,与细胞对照组相比,10、1 μmol·L-1的CL1细胞数有下降趋势,但差异无显著性;表达粒系/单核巨噬系细胞表型CD15和CD11b的细胞百分数无显著差异.经 14 d 的培养,与培养 0 d 比较,CD15显著增高(P＜0.05),CD11b有增高趋势,但无显著性差异.结论CL1对胃癌SGC-7901细胞的体外生长具有抑制作用,但对人脐带血CD34+ HSPC的增殖、和向粒细胞、单核巨噬细胞分化无明显影响,表明CL1在抗肿瘤作用剂量下,不会明显抑制造血干/祖细胞向粒-单细胞的增殖分化,提示CL1可能不会引起明显的造血抑制.     

脐血CD34+细胞向巨核系定向扩增的初步探讨

目的探讨不同细胞因子组合定向诱导CD34 细胞向巨核系分化的能力。方法利用免疫磁珠法(MACS)分离纯化脐血CD34 细胞,在无血清培养体系中以1×105/ml每孔接种,经不同细胞因子组合诱导培养。结果收集5份脐血标本,平均体积为95ml,CD34 细胞的比例为2.18%±0.89%,经过MACS分选后,CD34 细胞纯度平均可达81.55%。在细胞生长因子的刺激培养下,MK3组有核细胞数,CD34 细胞数,CD41a 细胞数在培养第16天分别达277.4倍、6.89倍、66.79倍,高于其它各组。结论脐血CD34 细胞体外在相关细胞生长因子的刺激下可向巨核细胞系定向分化。     

生长抑素抑制大肠癌细胞增殖及机制的研究进展

生长抑素是一种广泛存在于中枢神经系统、胃肠道和胰腺组织内的,具有广泛抑制作用的胃肠激素。大量研究表明生长抑素及其类似物具有抗肿瘤活性,能抑制内分泌肿瘤的增殖,且表现出对许多实体肿瘤,尤其是消化系统肿瘤有抑制作用。本文将对近几年关于生长抑素及其类似物影响大肠癌细胞增殖机制的研究进展作一综述。     

替代微量脐血CD34+造血干细胞含量公认检测方法的分析

脐血CD34^＋造血干细胞含量的测定一般采用流式细胞仪进行检测,而同一份脐血采用不同的实验方法可能得出不同的结果。ISHAGE方法是一种公认的准确性高、重复性好的检测造血干细胞含量的方法，但是所需费用较高，国内使用这种方法的实验室还不多。因此，文献另外选择4种检测方法对同一样品的检测结果与ISHAGE方法进行比较，     

CD34-造血干细胞的研究进展

随着研究的深入,人们发现了多种骨髓 ,外周血或脐带血等的CD34 -的细胞群都有造血干细胞的特点 ,认识到CD34 -造血干细胞的存在,并且开始研究这类细胞生物学特性以及可能的临床和研究的治疗价值。1CD34 -造血干细胞的发现1996年 ,Osawa等[1]人用抗CD34的单克隆抗体RAM34,发现成年小鼠体内CD34 -造血干细胞能够在经过致死量射线照射的小鼠体内重建造血功能 ,这些细胞是CD34 -Lin -Sca -1 +c -kit +骨髓细胞。随后Morel发现有造血干细胞功能的细胞是同时存在CD34 +和CD34 -细胞群。Goodell等人在其他一些哺乳动物中通过双色细胞流式…     

金水宝胶囊对PNS患者CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋的影响研究

目的探讨金水宝胶囊对于原发性肾病综合征（PNS）患者体内CD4^＋、CD4^＋/CD8^＋影响的临床疗效。方法40例原发性肾病综合征患者随机分成两组,治疗组20例金水宝胶囊加激素药物治疗,对照组20例单以激素治疗,1年后观察疗效。结果金水宝胶囊治疗组治疗后CD4^＋细胞的比例、CD4^＋/CD8^＋的比值有明显提高,与治疗前相比较有显著性差异,对照组CD4^＋细胞比例、CD4^＋／CD8^＋的比值治疗后低于治疗前,但无显著性统计学差异。结论从分子水平证实虫草制剂金水宝胶囊对于PNS治疗有着积极作用。     

不同剂量IVIG对川崎病患儿CD4^＋／CD8^＋的影响

目的研究不同剂量免疫球蛋白(IVIG)对川崎病急性期治疗前后CD4+/CD8+功能平衡的影响.方法采用流式细胞仪检测A、B两组川崎病患儿治疗前及治疗后4天CD4+、CD8+的值.结果治疗前A、B两组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+无显著差异(P＞0.05),治疗后B组与对照组有显著差异,A组与对照组差异无显著性;A组退热时间比B组明显缩短(P＜0.01).结论川崎病患儿急性期,IVIG 2 g/kg一次输入对CD4+/CDs+功能失衡能迅速纠正,缩短发热时间.     

不同时期移植人脐血 CD34+细胞对大鼠脊髓损伤修复的对比研究

目的 研究不同时期移植人脐血 CD34⁺细胞修复大鼠脊髓损伤的效果和机制。方法 免疫磁珠法从人新鲜脐血中分离得到 CD34⁺细胞。雌性 Wistar 大鼠 96 只, 以 IMPACTOR MODEL-Ⅱ脊髓损伤打击器建立 T10 脊髓损伤模型, 随机均分为免疫抑制剂应用组、 损伤后急性期移植组和损伤后亚急性期移植组, 对各组后肢功能恢复情况进行 BBB 评分, 损伤中心行双重免疫荧光染色、 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色和血管明胶墨汁灌注观察。结果 损伤后第 8～56 天, 细胞急性期移植组的 BBB 评分高于其余 2 组(P < 0.05); TTC 染色示组织活力降低区域比例小于其余 2 组(P < 0.01); 明胶墨汁灌注示脊髓损伤中心血管密度大于其余 2 组(P < 0.01); 亚急性期移植组的细胞存活密度大于急性期移植组（个/视野： 7.51±1.00 vs 5.51±0.89, t=6.051, P < 0.01）, 2 组均未观察到移植细胞的神经分化。结论 人脐血 CD34⁺细胞急性期移植可通过提高脊髓损伤中心血管密度促进微循环恢复, 增加组织活力,促进大鼠脊髓损伤后肢体功能恢复。     

生长抑素类似物抑制胆管癌细胞增殖的研究

目的探讨生长抑素类似物奥曲肽(OCT)对人胆管癌细胞细胞株QBC939的抑制作用及可能的作用机制。方法四氮唑蓝(MTT)法检测OCT对人胆管癌细胞株QBC939增殖的影响,流式细胞仪检测OCT对细胞周期变化的作用,免疫组织化学法研究OCT对人胆管癌细胞株QBC939P27KIP1蛋白表达变化的影响。建立胆管癌裸鼠模型,进一步探讨生长抑素的作用。结果MTT法检测不同浓度OCT(5、0.5、0.05、0.005mg/L)作用于QBC93948h后,实验组0.5、5mg/L组和对照组吸光度(A)值比较差异有统计学意义(P<0.05)。细胞生长率分别为83.80%,80.28%,77.53%,65.32%。流式细胞仪分析显示不同浓度OCT作用于QBC93948h后,G0/G1期细胞明显增多(P<0.05)。免疫组织化学P27KIP1蛋白表达随OCT浓度的增加而增强(P<0.05)。建立胆管癌裸鼠模型后,OCT干预21d后实验组瘤重明显小于对照组(P<0.05)。结论OCT可抑制人胆管癌细胞的增殖。在一定范围内呈剂量依赖性,其抗肿瘤作用机制主要是通过细胞周期阻滞来实现的,而这一作用的实现可能与P27KIP1蛋白表达的上调有关。     

生长抑素及其拮抗剂对小鼠吗啡镇痛的影响

AIM: To study the effects of somatostatin (SST) and its antagonist cyclo-(7-aminoheptanoyl-Phe-D-Trp-Lys-Thr [Bzl]) (SSA) on morphine-induced analgesia. METHODS: The pain assays were the hot plate and the tail flick test. RESULTS: SST or SSA per se administered intracerebrally at the doses of 0.1 and 1 mg/mouse did not change the pain threshold of mice both in the hot plate and in the tail flick test. However, at the higher dose (10 mg/mouse), SST and SSA decreased the pain threshold in the tail flick test only. SST and SSA administered at the dose of 0.1 mg/mouse did not change morphine-induced analgesia. By contrast, SST and SSA at the doses of 1 and 10 mg/mouse reduced morphine analgesia effects both in the hot plate as well as in the tail flick test. CONCLUSION: Our results indicate that SSA as well as SST may be useful in studying pain mechanisms.     

转HOXB4基因人骨髓MSC促进脐血CD34~+细胞体外扩增

目的 研究转HOXB4基因的人骨髓间充质干细胞(MSC)对脐血CD34~+细胞体外扩增的支持作用.方法 用病毒载体质粒转染包装细胞293T,收获病毒上清(VCM)感染MSC后,用潮霉素筛选获得转HOXB4的MSC(MSC-HOX).分别将MSC(对照组)与MSC-HOX细胞(实验组)作为CD34~+细胞体外扩增的饲养层细胞,结合细胞因子Fh3/Flk3配体(FL)、促血小板生成素(TPO)、干细胞因子(SCF)和粒细胞-集落生长因子(G-CSF)体外扩增脐血CD34~+细胞10 d,收集所有脐血细胞,检测细胞总数、CD34~+细胞总数,集落细胞形成单位(CFU)数.结果 生产重组逆转录病毒可有效将HOXB4基因转入靶细胞内并表达.脐血CD34~+细胞经体外扩增10 d后,细胞总数和CFU数两组间差异无统计学意义(P>0.05),脐血CD34~+细胞总数和比例高于对照组(P<0.05).结论 转HOXB4基因的人骨髓MSC在脐血CD34~+细胞体外扩增中,可保持CD34~+细胞未分化状态,有潜在的应用价值.     

巨细胞病毒感染对定向干细胞增殖的影响及黄芪的干预作用

目的:探讨巨细胞病毒(CMV)感染对定向干细胞(CFU-Gm、CFU-E、BFU-E、CFU-Mk及CFU-TL)体外增殖抑制的影响及黄芪的干预作用。方法:采用造血细胞培养技术,培养、观察、计数CMV-AD169感染CFU-Gm、CFU-E、BFU-E、CFU-Mk及CFU-TL后各祖细胞集落及维持时间;用聚合酶链反应(PCR)和荧光定量PCR技术检测集落细胞内CMV-AD169DNA;根据细胞毒性实验结果,将黄芪作用于CMV感染的CFU-Gm、CFU-E、BFU-E、CFU-Mk及CFU-TL祖细胞,再分别计数集落、峰期及维持时间。结果:(1)CMV感染组CFU-Gm、CFU-E、BFU-E、CFU-Mk及CFU-TL集落数较对照组明显减少(P<0.01);集落维持时间CMV感染组较对照组明显缩短;(2)用PCR在感染组集落细胞内检测到HCMV-DNA的存在;(3)黄芪作用于CMV感染的定向干细胞后,与病毒组比较集落数明显提高(P<0.01),集落增殖提高率分别为CFU-GM27.2%;CFU-E45.2%;BFU-E49.1%;CFU-Mk11.9%,CFE-TL55.2%,且集落维持时间明显延长;(4)荧光定量PCR技术检测集落细胞内CMV-DNA复制较CMV感染组明显减少(P<0.01)。结论:CMV-AD169株在体外能明显抑制CFU-Gm、CFU-E、BFU-E、CFU-Mk及CFU-TL集落细胞的增殖;在体外黄芪有明显抗CMV作用,能促进CMV感染的定向干细胞增殖。     

脐血造血干细胞分离方法的实验研究

目的 优化脐血造血干细胞/祖细胞的分离方法.方法 脐血按体积比1:5与含有树脂海绵筛(筛孔直径约12μm)的6%羟乙基淀粉混合,静置60min,提取界面有核细胞.倒置显微镜下计数有核细胞数,集落培养记数CFU-GM数,流式细胞仪检测CD34 细胞数,并与按照标准的羟乙基淀粉沉淀法和淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离的脐血相对照.结果 采用本实验方法分离脐血获得的有核细胞数、CFU-GM数和CD34 细胞数分别为(96.82±25.78)×105/ml,(66.70 ±12.47)×105,(1.33±0.57)×105/ml,明显高于由羟乙基淀粉沉淀法(70.72±20.93)×105/ml,(28.79±10.25)×105,(1.01±0.36)×105/ml和淋巴细胞分离液密度梯度离心法(25.33±7.27)X 105/ml,(20.13±7.55)×105,(0.34±0.01)×105/m1分离的脐血(P＜0.05).结论 本实验方法可由脐血中分离出大量的造血干/祖细胞,是一种分离脐血造血干/祖细胞的理想方法.     

CD133对CD133^+/Sox2^+脑肿瘤干细胞增殖、侵袭及药物敏感性的影响

目的分析靶向下调CD133表达对CD133^+/Sox2^+脑肿瘤干细胞增殖、侵袭及药物敏感性的影响。方法用肿瘤微球法从脑胶质瘤细胞系U251中筛选出CD133和Sox2均为阳性的脑肿瘤干细胞,后设计并合成针对CD133的特异性shRNA片段,构建GV115-shCD133RNA重组质粒,将其转染CD133^+/Sox2^+U251细胞,设为实验组(GV115-shCD133RNA-CD133^+/Sox2^+U251细胞),并设立空白组(CD133^+/Sox2^+U251细胞)和对照组(GV115-shRNA-CD133^+/Sox2^+U251细胞)。用Celigo细胞计数实验和Transwell实验分别检测细胞增殖能力和侵袭能力。向3组细胞分别加入8个不同浓度的顺铂和替莫唑胺(200%,150%,100%,75%,50%,25%,12.5%和5%),其中100%顺铂和和替莫唑胺的质量浓度分别为4和18μg·mL^-1),用Celigo细胞计数实验检测细胞增殖能力的变化,以评估其对药物敏感性的影响。结果实验组、对照组和空白组的CD133 mRNA分别为0.24±0.01,1.00±0.03和1.08±0.04,侵袭细胞个数分别为(18.93±0.64),(66.82±2.89)和(69.43±3.22)个,实验组的上述指标与空白组和对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。从第1～5天,实验组的细胞增殖能力均明显低于对照组和空白组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。实验组、对照组和空白组的顺铂半抑制浓度(IC₅₀)分别为(1.06±0.11),(4.03±0.21)和(3.94±0.25)μg·mL^-1,替莫唑胺IC₅₀分别为(4.23±0.38),(18.06±2.13)和(17.48±2.05)μg·mL^-1,实验组对顺铂和替莫唑胺的药物敏感性与对照组和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论靶向下调CD133表达能有效抑制脑胶质瘤干细胞的增殖及侵袭能力,提高其对化疗药物的敏感性。     

非肽类生长抑素类似物研究进展

天然的生长抑素（Somatostatin,SST）是一种小的调节肽,作为生长激素释放抑制因子于1973年从羊的下丘脑腺体分离出来,广泛分布于人体各个系统,包括下丘脑一垂体、内分泌、胃肠道消化、脉管、免疫、中枢和外周神经、造血系统等。天然SST分布广泛、作用多样,但半衰期短（小于3min）,故人们对其肽骨架进行了各种结构修饰,