4株蚊媒病毒多重RT-PCR快速检测方法的建立

目的建立登革1、2型病毒、黄热病毒及流行性乙型脑炎病毒的多重RT-PCR快速检测方法。方法参照病毒核酸序列设计多重RT-PCR引物,并检索GenBank国际基因序列数据库初步验证其特异性,随后对Mg2+、dNTP及引物浓度,RT-PCR反应条件进行优化,建立稳定、特异的多重RT-PCR快速检测4株病毒方法 ,并以同属于黄病毒科的登革3型病毒、登革4型病毒及甲病毒属基孔肯亚病毒、辛德毕斯病毒为对照,验证其特异性。结果应用多重RT-PCR反应体系,对引物的相关性实验结果表明引物之间不会因相互干扰而出现假阳性结果 ;采用多重RT-PCR引物对登革1、2型病毒、黄热病毒及流行性乙型脑炎病毒进行扩增,分别获得574、251、879、422 bp片段,与设计相符,而对照病毒组均无非特异性扩增条带。结论实验证明,所建立的多重RT-PCR方法能够快速地检测登革1、2型病毒、黄热病毒及流行性乙型脑炎病毒,为其检测提供了一种方便易行的方法 。     

基孔肯雅病毒定量反转录聚合酶链式反应绝对定量检测方法的建立

目的 建立检测基孔肯雅病毒实时荧光定量RT-PCR快检方法,为其实验室诊断与定量分析提供技术方法。方法 基于基孔肯雅及其相近虫媒病毒基因组序列的系统比对分析,筛选、鉴定基孔肯雅病毒特异性核酸序列,并以人GAPDH基因为内参照,设计引物、探针,采用L₉(3⁴)正交实验确定最佳反应条件,建立基于TaqMan探针法的基孔肯雅病毒qRT-PCR快检方法,并详细分析所建立方法的灵敏度、特异度、重复性及覆盖面。以克隆的检测靶标核酸片段为阳性品,制作标准曲线,建立绝对定量方法。结果 经系统优化,建立了基孔肯雅病毒实时荧光定量RT-PCR定性、定量检测方法,反应体系包括：基孔肯雅病毒、GAPDH内参照检测引物探针,RT/Taq酶混合液,反应缓冲液及阴阳性参考品。所建立方法与ECSA亚型ROSS株、IOL分支LR2006株,亚洲型181/25株以及2010东莞流行株均可获得阳性结果,而与所试其他18种黄病毒、甲病毒、布尼安属相近虫媒病毒无交叉反应,检测下限为580拷贝/mL。定量分析表明,在5.80×10²～5.80×10^10<...     

肺炎病毒抗原快速检测方法的关键

介绍肺炎病毒抗原快速检测中的关键步骤、合适对象、晴好天气，合格涂片。     

RT-PCR法快速鉴定几种甲病毒感染

目的 简单、快速地鉴定几种临床症状相似的甲病毒及黄病毒感染,并将它们加以简单的区分。方法 从病毒培养细胞上清提取病毒总RNA,并用甲病毒特异性引物进行RT．PCR扩增,把扩增产物进行凝胶电泳。结果 通过凝胶电泳,观察到甲病毒科的辛德毕斯病毒扩增片段大小为1420bp,孔肯雅病毒为I630bp,罗斯河病毒病为1650bp,而属于黄病毒的西尼罗病毒和登革病毒无条带出现。结论 RT-PCR法可简单、快速地初步鉴定及区分这几株临床症状相似的病毒感染。     

柯萨奇病毒B5巢式RT-PCR检测方法的建立

目的:建立一种快速、灵敏、特异的柯萨奇病毒B5(CVB5)检测方法。方法:根据GenBank发表的CVB5河南分离株全基因组序列,在其VP1区设计并合成巢式RT-PCR引物,优化PCR反应条件,建立检测CVB5的巢式RT-PCR方法。将已测得TCID50的病毒标准株进行10倍梯度稀释后用上述方法检测,以评价该方法的灵敏性;将5株不同的CVB5毒株和EV71等4株其他肠道病毒毒株及阴性对照用该方法进行扩增,以检测其特异性。用建立的巢式RT-PCR方法对52份病毒性脑炎病例样本进行检测。结果:该方法对CVB5的两轮PCR扩增敏感性分别为10TCID50和10-4TCID50;所有CVB5毒株用该方法扩增结果均为阳性,所选其他肠道病毒扩增结果均为阴性。52份临床病例样本中检出10份CVB5阳性,阳性率为19.23%。结论:所建立的CVB5巢式RT-PCR检测方法具有良好的灵敏度和特异度。     

阿尼昂尼昂病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

目的 建立阿尼昂尼昂病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法.方法 针对阿尼昂尼昂病毒nsP1基因设计特异性引物和探针,以珠海国际旅行卫生保健中心之前构建的MS2病毒样颗粒为标准品,采用一步法建立实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的检测下限、特异性、精密度、抗干扰能力、符合率进行评价.结果 建立的阿尼昂尼昂病毒实...     

EB病毒IgA／VCA抗体的快速检测

作者改良免疫酶法检测EB病毒IgA/VCA抗体的孵育条件，认为43℃－46℃10分钟条件下孵育，效果与37℃30分钟一致，因此半小时即可完成EB病毒IgA/VCA抗体的检测，缩短一个半小时。     

呼吸道病毒单克隆抗体快速检测的应用

对310例成人和114例小儿呼吸道感染患者的鼻咽分泌物,应用系列单克隆抗体联接碱性磷酸酶抗碱性磷酸醇桥联技术(APAAP),检测呼吸道病毒抗原和血清病毒抗体的结果表明,成人呼吸道感染患者中33.2％属病毒感染;小儿肺炎和支气管炎患者54.3％是由病毒引起的。本法对临床病毒感染的诊治具有重要意义。     

双重实时荧光PCR快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的建立

目的:建立一种能快速检测金黄色葡萄球菌,同时能快速鉴别是否具有耐甲氧西林基因的双重实时荧光PCR方法.方法:以金黄色葡萄球菌特异NUC基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,同时针对耐甲氧西林特异MecA基因设计另一对引物和探针;2条探针的5′端标记不同荧光报告基团(FAM和HEX),3′端标记荧光淬灭...     

H7N9禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价

目的应用Taq Man探针实时荧光RT-PCR技术,建立一种快速检测H7N9禽流感病毒的方法。方法针对H7N9禽流感病毒的HA和NA基因分别设计特异性引物和Taq Man-LNA探针,建立H7N9禽流感病毒特异性实时荧光RT-PCR快速检测方法。结果本研究建立的方法对检测H7N9禽流感病毒株的灵敏度达到10 PFU/ml。该方法特异性强,与其他亚型流感病毒株及呼吸道病原体无交叉反应。与对照方法相比,本研究方法的检测阳性符合率为99.07%,阴性符合率为100%,Kappa值为0.993。结论建立的检测试剂盒具有快速灵敏、结果准确可靠等优点,适用于H7N9禽流感病毒的分子生物学检测和监测。     

登革热病毒RNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

目的 建立TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法,测定登革热病毒(DV)及DV病毒的RNA拷贝数.方法 利用TaqMan探针,建立实时荧光定量RT-PCR方法,通过对登革热病毒RNA定量外标准品的定量分析,优化反应体系.检测TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法的灵敏度、特异性和重复性.结果 该方法检测灵敏度可达1×103 copies/mL,特异性及重复性良好,对同一样品进行5次重复检测,其循环阈值的平均标准偏差为O.792.结论 TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定登革热病毒及DV RNA载量.     

基于近红外免疫层析技术食源性诺如病毒快速检测方法研究

目的建立一种快速、灵敏检测食源性GⅡ型诺如病毒的近红外免疫层析法。方法采用低噪声激发式荧光染料标记鼠抗诺如病毒单克隆抗体,将诺如病毒多克隆抗体和羊抗鸡Ig Y多克隆抗体喷涂于硝酸纤维膜上分别作为检测线和质控线,制备靶向于诺如病毒衣壳蛋白的免疫层析试纸条,研制检测诺如病毒的近红外免疫层析试纸条。结果采用便携式低噪声激发式荧光扫描仪分别扫描质控线和检测线,以检测线荧光强度检测值实现样本的定性检测,在45 min内即可完成检测。该试纸条与肠道病毒EV71、腺病毒、轮状病毒、甲肝病毒均无交叉反应。结论 GⅡ型诺如病毒的近红外免疫层析法具有良好的特异性和较高的灵敏度。通过效果评价试验发现,与荧光RT-PCR、胶体金法相比较,所建立的近红外荧光法检测时间最短,检测限低于胶体金法。因此,近红外免疫层析法可用于食品中GⅡ型诺如病毒的高效检测,为食品安全监管提供可靠的技术支持。     

直接免疫荧光法用于多种呼吸道病毒抗原的快速检测分析

目的研究分析直接免疫荧光法用于多种呼吸道病毒抗原的快速检测。方法该院接诊呼吸道感染患者230例,将其分为成人组（105例）和儿童组（125例）,均通过直接免疫荧光法对7种病毒抗原进行检测,其中包括流感病毒A、流感病毒B、副流感病毒1、副流感病毒2、副流感病毒3、呼吸道合胞病毒、腺病毒。结果 230例呼吸道感染的病毒检出呈阳性85例,检出率为37.0%,其中最高为呼吸道合胞病毒50例（21.7%）,其次为流感病毒A（16例,6.9%）、流感病毒B（14例、6.0%）。呼吸道病毒的阳性检出率随着年龄增长而下降,其中儿童组检出阳性55例,阳性率为44.0%,明显高于成人组（30例,28.6%）,差异有统计学意义（P〈0.05）,且两者的最高检出率均为呼吸道合胞病毒,分别为27.2%和15.2%。结论呼吸道感染与流感病毒A、流感病毒B、副流感病毒1、副流感病毒2、副流感病毒3、合胞病毒、腺病毒等7种病毒密切相关,直接免疫荧光法可对其进行快速检测,并且灵敏度及特异性均较高,易于标准化,能满足实验室对病毒检测要求,应在临床中推广应用。     

RT-PCR结合GeneScan检测SARS病毒的高灵敏度技术的建立及应用

目的建立高度敏感的检测SARS病毒(SARS—CoV)RNA的技术，提高SARS病毒检出率。方法用RT—PCR技术扩增SARS—CoV 138bp片段并荧光标记后，用ABI-310毛细管电泳仪和GeneScan软件对扩增产物进行分析，并以峰高的方式给出产物的相对产量，参考空白对照和阴性对照的峰高定出本批实验检测基线。高于基线为SARS病毒阳性。结果检测了来自20例SARS患的67份标本，与常规的琼脂糖凝胶电泳法的结果(23／67)相比，GeneScan法(38／67)检测SARS—CoV的灵敏度提高22．4％。全部20例患的1-5种标本中都有1种、2种甚至3种、4种检出为阳性。病程1-22天的患均能检出阳性。结论ABI-310仪检测SARS—CoV的灵敏度较高，有助于早期诊断。     

常见腹泻病毒的多重荧光RT-PCR检测方法的建立及临床应用

目的：建立能同时检测病毒性腹泻病人粪便中星状病毒(Astrovirus)、A族轮状病毒(Group A Rotavirus)、肠道腺病毒(Enteric Adenovirus)、诺如病毒 GI/GII(Norovirus GI/GII)的多重荧光RT-PCR方法。方法：根据各病毒基因组保守性序列设计引物和探针,建立多重荧光RT-PCR检测方法。对建立的多重荧光RT-PCR方法进行特异性、敏感性、灵敏性实验,并使用该法对256份病毒性腹泻粪便标本进行检测,同时使用基因测序进行验证。结果：成功建立常见腹泻病毒的多重荧光RT-PCR检测方法,对星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、诺如病毒以外的病原体不发生扩增反应。该法检测星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、诺如病毒的灵敏度可达500copies/ml。256份标本中：星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、诺如病毒阳性率分别为3.13%( 8/256),42.97%(110/256),9.38%( 24/256),10.16%(26/256),与基因测序方法检测结果符合率达到100%。结论：该多重荧光RT-PCR检测方法具有快速、灵敏、特异的的优点,可用于临床病原诊断。     

霍乱弧菌LAMP快速检测方法的建立及应用

目的 建立环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测霍乱弧菌.方法 针对霍乱弧菌外膜蛋白的ompW基因设计特异引物,优化反应条件,建立霍乱弧菌的LAMP检测方法.通过对47株细菌及模拟污染现场,检测该方法的灵敏度、特异度和实用性.结果 活菌计数方法表明建立的LAMP方法检测霍乱弧菌的灵敏度为1.6×10~2 cfu/ml.在人工污染霍乱弧菌的粪便及海水标本中检测的敏感度为1.6×10~3 cfu/ml,在牛奶标本中敏感度为1.6×10~4 cfu/ml.检测21株霍乱弧菌均为阳性,26株非霍乱菌则全部阴性,特异度为100%.结论 建立的LAMP方法检测霍乱弧菌灵敏度、特异度高,可用于霍乱现场监测和流行病学调查.

Abstract：

Objective To establish a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method for rapid diagnosis of Vibrio cholerae. Method Based on the ompW nucleic sequence of Vibrio cholerae, a pair of primers was designed for LAMP. The reaction conditions were optimized, and the specificity, sensitivity, and practicability of LAMP were tested using 47 baterial strains and simulated contaminated sites. Results The results of viable bacterium count showed that LAMP was capable of detecting Vibrio cholerae at a level as low as 1.6×10~2 cfu/ml. The minimal detectable concentration was 1.6×10~3 cfu/ml for simulated contaminated samples such as feces and seawater, and 1.6×10~4 cfu/ml for contaminated milk. All the 21 strains of Vibrio cholerae yielded positive results in LAMP, and the 26 strains of other bacteria all showed negative results, with a detection specificity of 100%. Conclusion The established LAMP method has high specificity and sensitivity for detecting Vibrio cholerae and is applicable in field monitoring and epidemiological study of Vibrio cholerae.     

两则非常适用于社区医疗的快速检测方法

煤气的主要成分为CO(一氧化碳)，CO经呼吸道进入体内，可迅速与血液中的血红蛋白结合生成碳氧血红蛋白：Hb与CO的亲合力比与O的亲合力大240倍，故少量CO即可与O竞争，充分生成HbCO而使血液携氧能力减低，而HbCO的解离速度比HbO慢3600倍，生成后可在血中停留较长时间，并能阻碍HbO释氧，故可进一步加重机