内皮素1对人肾小球基质金属蛋白酶3及其组织抑制剂1表达的影响

内皮素1(ET-1)是一种强烈的缩血管活性肽，能够促进肾小球系膜细胞增殖及多种细胞外基质(ECM)组分的合成，但ET-1对ECM降解代谢的影响还不甚清楚。基质金属蛋白酶3(MMP-3)是一种基质溶解酶，能够降解多种ECM组分，活性受其组织抑制物1(TIMP-1)所抑制。本实验通过研究ET-1与MMP-3／TIMP-1的关系探讨ET-1对肾小球ECM降解代谢的影响。     

IgA肾病患者血清基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶抑制物-1的表达及意义

IgA肾病（IgA nephropathy,IgAN）是我国最常见的原发性肾小球疾病,发病率409／6～47．29／6[1,2]。本病以肾小球系膜IgA沉积为主要特征,以细胞外基质（extracellular matrixc,ECM）大量积聚为主要病理改变,ECM积聚导致系膜基质扩张、滤过面积减少,最终发展为肾小球硬化和肾间质纤维化,引起肾衰竭。     

肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制物—1,—2及凝？…

目的探讨人肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP-1、-2)的表达及凝血酶对它们的调节作用,进一步阐明凝血酶促进肾小球损伤及硬化过程中的分子生物学机制.方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Northern杂交和Western印迹等分子生物学方法,观察了凝血酶对体外培养的人肾小球系膜细胞表达TIMP-1、-2的诱导作用.结果在无血清RPMI1640培养12h后,RT-PCR、Northem和Western分析显示,系膜细胞可表达基础水平的TIMP-1、-2mRNA及其蛋白质;凝血酶(0.5、1.5、4.5HIU/ml)可浓度依赖性地上调系膜细胞TIMP-1、-2mRNA的表达水平,Western印迹分析证明凝血酶还可以上调系膜细胞表达TIMP-1、-2蛋白水平;凝血酶的上述作用可被其特异性抑制物一水蛭素部分性阻断.结论正常人肾小球系膜细胞在基础状态下可以表达TIMP-1、-2,我们首次证实凝血酶在基因转录和蛋白质翻译水平促进系膜细胞表达TIMP-2,从而参与病理状态下肾小球内细胞外基质的异常代谢过程.     

肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制物-1、-2及凝血酶调控的研究

目的探讨人肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP-1、-2)的表达及凝血酶对它们的调节作用,进一步阐明凝血酶促进肾小球损伤及硬化过程中的分子生物学机制.方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Northern杂交和Western印迹等分子生物学方法,观察了凝血酶对体外培养的人肾小球系膜细胞表达TIMP-1、-2的诱导作用.结果在无血清RPMI 1640培养12 h后,RT-PCR、Northem和Western分析显示,系膜细胞可表达基础水平的TIMP-1、-2 mRNA及其蛋白质;凝血酶(0.5、1.5、4.5 HIU/ml)可浓度依赖性地上调系膜细胞TIMP-1、-2 mRNA的表达水平,Western印迹分析证明凝血酶还可以上调系膜细胞表达TIMP-1、-2蛋白水平;凝血酶的上述作用可被其特异性抑制物一水蛭素部分性阻断.结论正常人肾小球系膜细胞在基础状态下可以表达TIMP-1、-2,我们首次证实凝血酶在基因转录和蛋白质翻译水平促进系膜细胞表达TIMP-2,从而参与病理状态下肾小球内细胞外基质的异常代谢过程.     

基质金属蛋白酶和组织金属蛋白酶抑制剂在大肠癌中的表达

目的　研究基质金属蛋白酶 (MMPs)及组织金属蛋白酶抑制剂 (TIMPs)在大肠癌中的表达特点 ,与肿瘤发生发展的关系 ,以及在肿瘤治疗中的应用前景。　方法　采用RT PCR方法测定 2 8例大肠癌患者肿瘤组织和周围正常粘膜的基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )、膜型 1 基质金属蛋白酶 (MT1 MMP)、基质溶素 (MMP 7)、组织金属蛋白酶抑制剂 2 (TIMP 2 )、组织金属蛋白酶抑制剂 3(TIMP 3)的mRNA表达状况 ,并将其结果与临床及病理学资料进行统计学分析。　结果　 (1) 2 7例患者肿瘤组织中MMP 7mRNA表达阳性 ,MMP 2、MT1 MMP、TIMP 2和TIMP 3在肿瘤组织和正常粘膜中均有高表达 ;(2 )肿瘤组织中MMP 7mRNA的表达水平与大肠癌患者的Dukes′分期相关 (P <0 0 1) ;(3)淋巴结阳性患者的肿瘤组织TIMP 2表达水平为 (1 2 5± 0 46 )明显高于淋巴结阴性患者的 (0 75± 0 41) ,差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;(4)大肠癌患者癌周正常粘膜TIMP 3mRNA表达随患者Duke′s分期的进展和肿瘤浸润深度的增加而降低 (P <0 0 1) ;(5 )TIMPs与MMPs之间无明显相关关系 (P >0 1)。　结论　MMP 7可望成为诊断大肠癌的敏感指标 ;人工诱导TIMP 2、TIMP 3或阻断MMP 7、MMP 2、MT1 MMP的表达可能抑制肿瘤的浸润和转移 ,成为肿瘤治疗的新途径。     

基质金属蛋白酶1组织抑制剂短发夹式RNA对肾小球系膜细胞凋亡及细胞外基质的影响

目的 构建靶向基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)的短发夹RNA(shRNA)表达载体，并观察其对大鼠肾小球系膜细胞的凋亡和细胞外基质分泌的影响。方法 构建携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的RNA干扰真核表达载体pEGFP-1/TIMP-1 shRNA， 利用该载体介导两个TIMP-1 shRNA，分别为TIMP-1 shRNA1和TIMP-1 shRNA2。用荧光显微镜观察EGFP的表达。采用 RT-PCR和Western 印迹测定宿主细胞TIMP-1在基因和蛋白水平的沉默效果。用 ELISA检测细胞外基质成份的表达。以流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。 结果 (1)测序证实成功构建了针对TIMP-1的shRNA表达载体pEGFP-1/TIMP-1 shRNA；(2)荧光显微镜下，转染组细胞内均见绿色荧光；未转染组未见绿色荧光；(3)基因和蛋白水平的检测显示，与阴性对照组相比，TIMP-1 shRNA1组的TIMP-1明显受抑制(P < 0.05)，TIMP-1 shRNA2组抑制效果不明显；(4)ELISA结果显示， 正常对照组FN、Ⅳ型胶原蛋白和 LN的表达不随时间的延长而变化；未转染组和阴性对照组在高糖诱导下， FN、Ⅳ型胶原蛋白和 LN的表达随时间的延长而增加；48、72 h的shRNA1组、抗体组和反义组对 FN、Ⅳ型胶原蛋白、LN表达明显低于阴性对照组，以shRNA1组最明显；(5)流式细胞仪结果显示，高糖诱导的各组细胞凋亡率随时间的延长而升高。在同一时间点shRNA1组细胞的凋亡率最高，反义组细胞的凋亡率次之，48 h和72 h的shRNA1组细胞的凋亡率与其他各组比较， 差异有统计学意义(P < 0.05)。 结论 pEGFP-1介导的TIMP-1 shRNA1能更加有效的抑制大鼠肾小球系膜细胞中TIMP-1的表达，促进肾小球系膜细胞的凋亡并使细胞外基质的成份表达下降。     

基质金属蛋白酶9及组织型基质金属蛋白酶抑制因子1在大鼠外伤性脑水肿中的表达及意义

目的 探讨大鼠脑损伤中基质金属蛋白酶9(MMP9)及组织型基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)的表达变化规律及意义.方法 采用Feeney自由落体法制作大鼠轻度脑损伤模型,采用干湿重法测定脑组织含水量;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对大鼠脑损伤模型中MMP9及TIMP1 mRNA进行检测并分析两者比值.结果 实验组脑组织含水量(BWC),MMP9mRNA及TIMP1 mRNA表达量及两者比值均明显高于对照组,P值分别为0.013、0.000、0.000及0.011,差异有统计学意义(P<0.05),MMP9 mRNA与TIMP1mRNA表达量及两者比值与BWC均呈正相关,r值分别为0.654、0.355(P<0.05).结论 MMP9/TIMP1的比例失衡可能在外伤性脑水肿的发生发展过程中起重要作用.     

基质金属蛋白酶-9及其抑制物-1在青年特发性气胸肺组织中的表达及意义

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及其抑制物-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1)在青年特发性气胸肺组织中的表达及临床意义.方法 随机选取我科2009年1月至2010年5月治疗的30例青年特发性气胸患者肺大疱组织标本作为实验组,同期获取10例青年正常肺组织标本(因肺裂伤行局部楔形切除肺组织)作为对照组,采用EVG染色法和免疫组织化学SABC法分别观察肺弹力、胶原纤维结构变化及MMP-9与TIMP-1在两组肺组织中的表达状况.结果 实验组中肺弹力、胶原纤维密度稀疏,正常结构伴有明显断裂、萎缩,局部肺泡壁中有纤维缺失;对照组肺组织纤维结构基本完整.MMP-9在实验组肺组织中阳性表达率为76.7%(23/30),在对照组中阳性表达率为30%(3/10);TIMP-1在实验组中阳性表达率为66.7%(20/30),在对照组中阳性表达率为10%(1/10)(P＜0.05).与对照组相比MMP-9 及TIMP-1在实验组中表达明显增多、增强,以TIMP-1表达升高更为显著,且存在MMP-9/TIMP-1表达比例失衡.结论 MMP-9、TIMP-1在局部肺组织中的表达增多、增强及其比值的失衡与肺大疱的形成以及青年特发性气胸的发生、发展有着密切的关系.     

膜型1基质金属蛋白酶在胃癌组织中的表达及意义

已有研究表明 ,膜型 1基质金属蛋白酶 (ｍｅｍｂｒａｎｅ ｔｙｐｅ 1ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ,ＭＴ1 ＭＭＰ)在多种肿瘤组织中表达 ,且与它们的侵袭和转移相关[1] 。我们采用免疫组织化学方法检测胃癌组织中ＭＴ1 ＭＭＰ的表达 ,探讨其表达特点、组织定位及临床意义。资料与方法1.一般资料 :收集我院 1998年 1月至 1999年 10月胃癌标本 4 7例 ,男女比例为 1∶4 9,年龄 2 9～ 86岁 ,平均 5 7 6岁 ,肿瘤大小以其直径的中位数 5 5ｃｍ为界 ,每例均做常规病理检查。2 .免疫组织化学检测 :按美国Ｚｙｍｅｄ公司试剂盒Ｓ…     

增生性瘢痕中基质金属蛋白酶及其抑制因子基因的表达

目的 了解基质金属蛋白酶2(MMP-2,又称明胶酶A)、MMP-9(又称明胶酶B)及其金属蛋白酶1组织抑制因子(TIMP-1)在增生性瘢痕不同形成时期的基因表达.方法 提取16例人体不同时期增生性瘢痕样本和8例正常皮肤样本总RNA,分离mRNA,用反转录-聚合酶链反应法检测MMP-2、MMP-9和TIMP-1基因在不同样本中的表达.结果 在正常皮肤中MMP-2、MMP-9和TIMP-1基因转录产物的灰度比值分别为(3.8±0.7)%、(5.8±4.4)%、(30.3±3.0)%,在增殖期瘢痕中分别为(13.5±4.5)%、(18.4±4.7)%、(37.7±4.3)%,明显高于正常皮肤(P＜0.05).成熟期瘢痕MMP-2和MMP-9基因表达量已恢复至正常水平,但TIMP-1基因较正常皮肤仍持续高表达(P＜0.05).结论 MMP-2、MMP-9和TIMP-1基因表达增强可能是增生性瘢痕形成的机制之一,MMP-2和MMP-9基因表达降低可能与增生性瘢痕达到相对稳定的成熟状态有关.     

慢性肾衰竭患者血清MMP-9和TIMP-1表达及意义

目的检测慢性肾衰竭（CRF）患者血清基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达状况,拟在探讨其与肾脏纤维化的关系。方法采用ELISA法测定60例CRF患者（氮质血症期15例,肾衰竭期24例,尿毒症终末期21例）和20例正常对照组血清MMP-9、TIMP-1水平,同时收集患者临床资料,分析血清MMP-9、TIMP-1水平和MMP-9／TIMP-1比值与肾功能损害等临床指标之间的相关性。结果CRF患者各期血清MMP-9、TIMP-1水平明显升高,MMP-9／TIMP-1比值显著降低,随着肾小球滤过率（GFR）下降,MMP-9、TIMP-1呈降低趋势,而MMP-9／TIMP-1比值却逐渐上升。血清TIMP-1水平和MMP-9／TIMP-1比值与血肌酐、GFR及血红蛋白呈高度相关性。结论血清MMP-9、TIMP-1参与了CRF的进展,血清TIMP-1水平或MMP-9／TIMP-1比值能较好地反映肾脏纤维化的程度。     

MMP-9和TIMP-1在膀胱癌中的表达及临床意义

目的：研究基质金属蛋白酶9（MMP-9）和组织型金属基质蛋白酶抑制因子1（TIMP-1）在膀胱移行细胞癌中的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系。方法：采用免疫组织化学SP法检测56例膀胱移行细胞癌标本中MMP-9和TIMP-1的表达,并与肿瘤的临床及病理参数相比较。结果：在56例膀胱移行细胞癌中,MMP-9和TIMP-1的表达率分别为6．1．29％和57．14％,MMP-9表达率随肿瘤的临床分期、病理分级的升高而增加,TIMP—1表达率也呈上升趋势,两者间的表达仔在轻度正相关。结论：MMP-9和TIMP—1的相互作用对于膀胱移行细胞癌的浸润转移发挥了重要作用,MMP-9可能成为早期无创诊断膀胱肿瘤的生物学指标。     

轻度慢性乙型肝炎患者肝组织中MMP-2和TIMP-2的表达及其意义

目的 探讨轻度慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织中的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)的表达及临床意义.方法 选取2006年12月至2011年12月温州医学院附属第二医院感染内科收治入院的慢性HBV感染者68例为研究对象,将其分为轻度慢性乙型肝炎(CHB)组(35例)和慢性HBV携带组(33例).采集患者血清,行HBV血清学标志物、HBVDNA、肝纤维化血清学指标检测及肝穿刺活检,光镜下观察肝组织.采用免疫组织化学染色法检测MMP-2和TIMP-2的表达,并进行阳性表达评分及肝组织纤维化分级.用SPSS 17.0软件进行统计学分析.结果 轻度CHB组和慢性HBV携带者组血清肝纤维化指标透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型胶原(PC Ⅲ)和Ⅳ型胶原(CⅣ)的差异无统计学意义(t=1.35,1.65,1.88和1.89,P＞0.05).轻度CHB组肝组织中MMP-2和TIMP-2评分分别为(4.42±1 37)和(3.89±1.12)分,慢性HBV携带组分别为(3.61 ±1.23)和(3.31±1.07)分,差异有统计学意义(t=2.56和2.18,P＜0.05).CHB组的MMP-2/TIMP-2比值为1.15±0.17,而慢性HBV携带组为1.08-±0.11,两组比较差异有统计学意义(t=2.04,P＜0.05).MMP-2和TIMP-2评分与纤维化分级的相关系数分别为0.372(P =0.002)和0.439(P =0.000).结论 轻度CHB患者的肝组织中MMP-2和TIMP-2表达增加,且与纤维化分级具有相关性,可用于评估患者肝纤维化的程度.     

Clinical significance of phospholipase A2 receptor 1 in patients with idiopathic membranous nephropathy

Objective To explore the role of phospholipase A2 receptor 1 (PLA2R1) in the diagnosis, differential diagnosis and evaluation of idiopathic membranous nephropathy (IMN) in adult patients. Methods A total of 242 renal disease patients diagnosed by renal biopsy from March 2015 to January 2016 were enrolled, consisting of 90 IMN, 20 secondary membranous nephropathy (SMN), 82 IgA nephropathy (IgAN), 30 minimal changed disease (MCD), 16 focal segmental glomerulosclerosis (FSGS) and 4 membranoproliferative glomerulonephritis (MPGN). Their clinical data including age, sex, serum creatinine (Scr), serum albumin and 24 h urinary protein were collected. Serum PLA2R1 was measured by enzyme linked immunosorbent assay. PLA2R and IgG subclasses in glomeruli were detected by indirect immunofluorescence assay. The positive rate of serum PLA2R1 among those groups and its correlation with clinical-pathological parameters were analyzed. Results Compared with IMN patients, SMN, MCD and FSGS patients were younger (all P＜0.01); IgAN patients were younger and had higher serum albumin and lower 24 h proteinuria (all P＜0.001); MPGN patients had higher Scr (all P＜0.01). The positive rate of serum PLA2R1 was 75.6% in IMN patients, while it was 0.0% in non-IMN patients. The distribution between serum PLA2R1 and pathological diagnosis had difference (P＜0.001), their positive coincidence rate was 100%, negative coincidence rate was 87.4%, total coincidence rate was 90.9% and their consistency was well (Kappa=0.795, P＜0.001). Among IgG subtype comparisons between IMN patients and SMN patients in the glomeruli, only moderate or more positive IgG4 had statistical differences (82.2% vs 5.0%, P＜0.001); the positive rate of glomerular PLA2R1 was 41.1% in IMN patients, higher than 10.0% in SMN patients (P=0.009); positive PLA2R1 with moderate or more positive IgG4 in glomeruli in IMN patients was more than that in SMN patients (40.0% vs 0.0%, P＜0.001), which could improve the diagnostic specificity of IMN. In IMN patients serum PLA2R1 and glomerular PLA2R1 had statistical differences (P＜0.001). Spearman rank correlation analysis showed that serum PLA2R1 of IMN patients positively correlated with 24 h proteinuria (r=0.315, P=0.002), negatively correlated with serum albumin (r=-0.228, P=0.030) and didn't correlate with Scr (r=0.199, P=0.059). Conclusions Serum PLA2R can be used as the specific indicator for diagnosis, differential diagnosis of IMN and to reflect the severity of IMN in patients.     

血清抗核抗体阳性的不典型膜性肾病与狼疮膜性肾病及特发性膜性肾病的临床病理比较

目的 探讨血清抗核抗体（ANA）阳性的不典型膜性肾病（AMN）与狼疮膜性肾病（LMN）、特发性膜性肾病（IMN）的关系，寻找对诊断LMN具有较高预测价值的临床和病理学指标。 方法 2003年1月至2006年12月期间在北京协和医院住院并行肾活检，临床、病理资料保存完整的患者为对象。分组：AMN组（n = 28）：血清ANA滴度≥1∶80，少于4条美国风湿病学会（ARA）修订的系统性红斑狼疮分类标准，病理呈肾小球基底膜病变伴系膜增生和（或）免疫荧光C1q阳性；IMN组（n = 100）；LMN组（n = 45）。回顾性分析各组病例的临床表现、病理学特点。应用免疫组化法，对各组部分病例肾活检组织行IgG亚型染色，半定量分析染色强度。对各组部分病例肾活检组织行免疫荧光双染色（IgG-TRITC，C3-FITC），用激光扫描共聚焦显微镜观察肾小球沉积的IgG和C3的空间分布。 结果 (1)AMN组起病年龄（38±17）岁，女∶男比为2.5∶1，介于LMN和IMN之间。3组起病年龄差异有统计学意义（P < 0.01），AMN组女∶男比高于IMN组（P = 0.017）。AMN组血液系统异常、血抗SSA抗体阳性百分比较高（21.4%、40.7%）。(2)AMN组系膜增生、系膜区及内皮下电子致密物出现的百分比高于IMN组（P < 0.01）。(3)AMN和LMN组肾小球IgG3沉积占优势的百分比分别为78.9%、73.9%；IMN组IgG4沉积占优势的百分比为61.1%，差异均有统计学意义（IMN组与AMN、LMN组比较, P < 0.01）。(4)IMN组常出现IgG和C3在上皮下的共沉积现象，而在AMN和LMN组中少见。(5)在鉴别LMN和IMN的指标中，敏感性较高的有肾小球IgG4不占优势（91.3%）；特异性较高的有内皮下电子致密物（100.0%）、血抗SSA抗体（95.5%）、肾小球IgG3占优势（94.4%）。 结论 AMN的临床表现与IMN类似，而各项病理学特点，尤其是肾小球IgG亚型沉积特点与LMN更为接近。它有可能是狼疮肾炎中较为隐匿的一个亚型。     

MMP-3和TIMP-3在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的 研究基质金属蛋白酶3(MMP-3)及其抑制物组织基质金属蛋白酶抑制剂3(TIMP-3)在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义.方法 通过免疫组化Elivision法检测48例膀胱移行细胞癌组织及20例正常膀胱组织中的MMP-3和TIMP-3的表达.结果 MMP-3和TIMP-3在正常膀胱组织中不表达,随着肿瘤分级和分期的增高,MMP-3表达增高,但差异无统计学意义(P＞0.05).TIMP-3表达降低,但在肿瘤分级中差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MMP-3的高表达,TIMP-3的低表达与膀胱移行细胞癌的恶性程度有关,在膀胱移行细胞癌的发生发展中起重要作用,可作为临床判断膀胱移行细胞癌的恶性程度及预后的重要参考指标.     

基质金属蛋白酶－9、细胞金属蛋白酶抑制因子－1在胃癌中的表达

目的：探讨基质金属蛋白酶－9（MMP－9）,组织金属蛋白酶抑制因子－1（TIMP－1）在胃癌中表达的意义。方法：采用免疫组化S－P法对47例胃癌组织进行MMP－9及TIMP－1的检测。结果：MMP－9,TIMP－1主要表达于癌周基质细胞,癌细胞少量表达,MMP－9,TIMP－1表达与胃癌患淋巴结转移（P＜0．01）,浆膜浸润相关（P＜0．01）;TIMP－1的表达与胃癌TNM分期相关（P＜0．05）,而MMP－9的表达与胃癌TNM分期无相关性（P＞0．05）。结论：MMP－9及TIMP－1可作为判断胃癌恶性行为的重要生物学标记物。     

Expression and significance of M-type phospholipase A2 receptor and thrombospondin type-1 domain-containing 7A in adult idiopathic membranous nephropathy

Objective To detect the M-type phospholipase A2 receptor (PLA2R), and thrombospondin type-1 domain-containing 7A (THSD7A) expression in renal tissue and the levels of their antibodies in adult idiopathic membranous nephropathy (IMN). Also to determine the value of the two markers in the diagnosis of IMN. Methods One hundred and sixteen patients with biopsy-proven MN at the Second Hospital of Hebei Medical University from December 2014 to August 2015 were enrolled, including 86 patients with IMN, 10 patients with HBV-MN and 10 patients with stage V lupus nephritis (LN-V). Twenty patients with minimal change disease (MCD) were regarded as control group. We conducted immunohistochemical analysis of the presence of THSD7A and PLA2R the Paraffin section and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) detecting serum PLA2R-AB and THSD7A-AB concentration to investigate whether there was a correlation between them and clinical indicators. Results Compared with the SMN and MCD groups, the positive rates of PLA2R and PLA2R-AB were significantly higher in IMN groups. Expression PLA2R was detected in 88.4%, 47.4%, 10% and 0% and PLA2R-AB in 82.6%, 15%, 10%, 0%, respectively, of the patients with IMN, HBV-MN, LN-V and MCD. Expression THSD7A was detected in 2.3% of the patients with IMN while not detected in SMN and MCD. THSD7A-AB antibody was negative in all patients. Compared with serum PLA2R-Ab negative individuals, patients with serum PLA2R-Ab positive had lower serum albumin (P＜0.001), higher urine protein excretion (P=0.01). The sensitivity of PLA2R-AB, PLA2R,THSD7A and PLA2R+THSD7A in the diagnosis of IMN were 82.6%, 88.4%, 2.3%, 88.6%, and the specificity was 92%, 66.7%, 100%, 66.7%, respectively. Conclusions PLA2R in renal tissue and serum PLA2R-AB are specific markers for the diagnosis of IMN, which are closely related with the severity of IMN. Expression of THSD7A is only positive in some of IMN patients with negative PLA2R, which can be used as a supplementary examination of IMN patients with negative PLA2R.     

神经调节素对缺血再灌注损伤大鼠脊髓MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的:观察神经调节素-1β(neuregulin-1β,NRG-1β)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后脊髓组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响,并初步探讨其作用与机制。方法:48只SD大鼠随机分为对照组(n=16)、缺血再灌注组(模型组,n=16)、NRG-1β治疗组(n=16),对照组仅分离暴露腹主动脉,其余两组采用腹主动脉阻断法制备动物模型。治疗组在打开动脉夹后立即经尾静脉注射NRG-1β(10μg/kg),缺血再灌注模型组在打开动脉夹后立即经尾静脉注射等量的0.1mol/L的PBS缓冲液。于取材前3min根据改良Tarlov评分标准进行神经功能评分。分别于术后3h、6h、12h、24h取材(每个时间点4只),HE染色观察脊髓病理变化,免疫组化和Real-time PCR分别检测MMP-9、TIMP-1蛋白和m RNA水平的表达。结果:模型组在术后各时间点的Tarlov评分较对照组显著下降(P0.05),治疗组在术后6h、12h、24h的Tarlov评分较模型组显著增高(P0.05)。HE染色显示模型组和治疗组均存在脊髓组织损伤,但治疗组较模型组减轻。免疫组化结果显示,对照组未见MMP-9、TIMP-1阳性表达细胞;模型组MMP-9免疫阳性细胞数(个/高倍视野)在术后3h、6h、12h、24h分别为9.00±1.63、23.80±1.71、28.30±1.50、34.80±2.63,治疗组分别为8.50±0.58、17.80±0.96、20.80±3.50、30.00±2.16,其中6h、12h、24h治疗组与模型组相比阳性细胞数明显减少(P0.05)。模型组TIMP-1免疫阳性细胞数(个/高倍视野)在术后3h、6h、12h、24h分别为11.80±0.96、12.30±1.50、7.80±0.96、7.80±1.50,治疗组分别为12.30±0.96、13.80±0.96、10.50±1.73、10.30±0.96,其中12h、24h治疗组与模型组相比阳性细胞数明显增多(P0.05)。对照组MMP-9在术后3h、6h、12h、24h的m RNA表达量分别为4.93±0.21、4.95±0.24、4.96±0.25、4.98±0.23,模型组分别为5.38±0.25、6.53±0.31、6.87±0.29、7.53±0.33,治疗组分别为5.35±0.26、5.56±0.22、5.74±0.27、5.90±0.31,其中6h、12h、24h模型组与对照组比较MMP-9的m RNA表达量明显增加(P0.05),6h、12h、24h治疗组MMP-9的m RNA表达量较模型组明显减少(P0.05)。对照组TIMP-1在术后3h、6h、12h、24h的m RNA表达量分别为4.74±0.23、4.76±0.21、4.73±0.25、4.76±0.24,模型组分别为4.53±0.32、4.62±0.21、3.83±0.20、3.65±0.32,治疗组分别为4.55±0.26、4.65±0.27、4.28±0.22、4.25±0.24,其中12h、24h模型组与对照组比较TIMP-1的m RNA表达量明显减少(P0.05),12h、24h治疗组TIMP-1的m RNA表达量较模型组明显增加(P0.05)。结论 :神经调节素可在大鼠脊髓缺血再灌注损伤过程中发挥神经保护作用,该作用的实现可能与MMP-9的表达下调和TIMP-1的表达上调有关。     

Changes of autophagosomes of podocytes in idiopathic membranous nephropathy and its clinical significance

Objective To observe the quantity change of autophagosomes in podocytes and expressions of autophagy-related gene Beclin-1 and microtubule-associated protein 1 light chain 3 (LC3) in different pathological stages of idiopathic membranous nephropathy (IMN), and to explore how autophagy is related to podocyte injury, the occurrence of proteinuria and the disease progression in IMN. Methods Clinical data of 26 patients who were diagnosed as IMN (14 IMN stage 1 and 12 IMN stage 2) admitted to Zhejiang Provincial people's Hospital from January 2013 to December 2014 were retrospectively analyzed. Normal renal tissue from 15 cases of kidney neoplasms with nephrectomy was collected as control. The changes of kidney tissue pathology were detected after PAS and PASM staining by light microscope. The autophagosomes of podocyte were detected by transmission electron microscopy. Expressions of Beclin-1 and LC3 protein were detected by immunohistochemistry. Expressions of LC3 and synaptopodin were detected by immunofluorescence. The correlation of autophagosomes and clinical pathologic factors in IMN patiens was analyzed. Results There were fewer autophagosomes of podocytes and lower expression of Beclin-1 and LC3 protein in IMN group than those in control group (P=0.034, P=0.011, P=0.013, respectively). Moreover, these effects were more obvious with the development of IMN. Compared with those in control group, autophagosomes, Beclin-1 and LC3 protien were reduced in IMN stage 2 group (P=0.009, P=0.030, P=0.015); the number of autophagosomes and the expressions of LC3 and Beclin-1 were decreased in IMN stage 1 group as well, however statistically insignificant (P=0.352, P=0.087, P=0.128); Comparisons between IMN stage 2 patients and IMN stage 1 patients shown significant difference in the number of autophagosomes (P=0.030), but no significant difference in expressions of Beclin-1 and LC3 (P=0.355, P=0.181). Autophagosomes number was not correlated with serum creatinine, serum urea nitrogen, 24-hour urinary protein and eGFR (all P＞0.05). The expressions of synaptopodin and LC3 protein were lower in IMN group than those in control group. Conclusion Autophagy may contribute to podocyte injury and the production of protein urine in IMN, and may be closely related to the progression of disease.