应用结核病DNA疫苗治疗小鼠耐多药结核病的研究

目的 研究结核分枝杆菌Ag85A质粒DNA疫苗单独或联合药物治疗小鼠耐多药结核病的效果,为建立耐多药结核病的免疫治疗新策略和新方案奠定基础.方法 用结核分枝杆菌高耐利福平、低耐异烟肼临床分离株HB361尾静脉注射17～19 g的6～8周龄雌性BALB/C小鼠后,将小鼠随机分为6组,每组10只.感染后第2天开始,分别用pVAX1载体(A组)、利福平(B组)、吡嗪酰胺(C组)、Ag85A质粒DNA疫苗(D组)、Ag85A质粒DNA疫苗联合利福平(E组)、Ag85A质粒DNA疫苗联合吡嗪酰胺(F组)治疗60 d.治疗结束后4周,分别取肺、肝和脾观察病理改变,称取重量,做菌落计数.结果 小鼠感染4周后,肺内菌量达到1.5×107 CFU,脾内菌量达到1.1×106 CFU.A、B组小鼠死亡率均为10%,其余各组小鼠均存活.治疗结束后4周,肺组织病理显示,各治疗组肺组织病变均有不同程度减轻,病变局限,可见正常的肺泡结构,肺泡轮廓相对清晰.与A组比较,C、D、E、F组肺组织菌落数分别减少了1.18、1.35、1.38、1.08 logs,脾脏菌落数分别减少了0.91、1.00、1.26、1.03 logs(P＜0.01).结论 结核分枝杆菌Ag85A质粒DNA疫苗单独或联合药物治疗小鼠耐多药结核病均有显著疗效.Ag85A质粒DNA疫苗与抗结核药物联合治疗是治疗耐多药结核病的最有前途的免疫策略.     

结核病DNA疫苗及其作用机制研究进展

为实现到2050年在全球范围内根除结核病(Tuberculosis,TB)这一宏伟目标,迫切需要开发新的TB疫苗和疫苗接种策略.虽然卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)在保护儿童免受粟粒性结核和结核性脑膜炎等方面获得了成功,但其对成人肺结核(Pulmonary tuberculosis,PT...     

应用结核病DNA疫苗治疗小鼠耐多药结核病的研究

Objective To establish foundation for new strategy and program on immune therapy of multi-drug resistant tuberculosis (MDR-TB) by studying the therapeutic effects of Mycobacterium tuberculosis Ag85A plasmid DNA vaccine alone or combined with drugs on MDR-TB mice. Methods Sixty 6-8 weeks old female BALB/C mice were injected via tail vein with clinical isolate Mycobacterium tuberculosis HB361 which was highly resistant to rifampin (RFP) and lowly resistant to isoniazid. The mice were randomly divided into six groups, ten mice in each group. From the second day after infection,the mice respectively received pVAX1 vector (group A), RFP (group B), pyrazinamide (PZA) (group C),Ag85A plasmid DNA vaccine (group D), Ag85A plasmid DNA vaccine combined with RFP (group E),Ag85A plasmid DNA vaccine combined with PZA (group F) for sixty days. Four weeks after the end of treatment,the lung, liver and spleen of the mice were taken and their pathological changes, weight and colony count were examined. Results Four weeks after infection, the numbers of bacteria in lung and spleen of the mice reached up to 1.5×107 CFU and 1.1 × 106 CFU,respectively. The death rates of mice in group A and group B were both 10% ,and the mice in other groups were alive. Four weeks after the end of treatment,lung pathology in the treated groups showed that the lung lesions were slight and limited,normal alveolar structure were seen, and the profile of the alveoli was relatively clear. Compared with group A, group C, D, E, F reduced by 1.18,1.35,1.38,1.08 logs on the colony count of lung, and reduced by 0.91,1.00,1.26 and 1.03 logs on the colony count of spleen (P＜0.01), respectively. Conclusions Mycobacterium tuberculosis Ag85A plasmid DNA vaccine alone or combined with drugs has significant therapeutic effects on MDR-TB mice. Ag85A plasmid DNA vaccine combined with anti-tuberculosis drugs is the most promising immunization strategy for treatment of MDR-TB.     

应用结核病DNA疫苗治疗小鼠耐多药结核病的研究

Objective To establish foundation for new strategy and program on immune therapy of multi-drug resistant tuberculosis (MDR-TB) by studying the therapeutic effects of Mycobacterium tuberculosis Ag85A plasmid DNA vaccine alone or combined with drugs on MDR-TB mice. Methods Sixty 6-8 weeks old female BALB/C mice were injected via tail vein with clinical isolate Mycobacterium tuberculosis HB361 which was highly resistant to rifampin (RFP) and lowly resistant to isoniazid. The mice were randomly divided into six groups, ten mice in each group. From the second day after infection,the mice respectively received pVAX1 vector (group A), RFP (group B), pyrazinamide (PZA) (group C),Ag85A plasmid DNA vaccine (group D), Ag85A plasmid DNA vaccine combined with RFP (group E),Ag85A plasmid DNA vaccine combined with PZA (group F) for sixty days. Four weeks after the end of treatment,the lung, liver and spleen of the mice were taken and their pathological changes, weight and colony count were examined. Results Four weeks after infection, the numbers of bacteria in lung and spleen of the mice reached up to 1.5×107 CFU and 1.1 × 106 CFU,respectively. The death rates of mice in group A and group B were both 10% ,and the mice in other groups were alive. Four weeks after the end of treatment,lung pathology in the treated groups showed that the lung lesions were slight and limited,normal alveolar structure were seen, and the profile of the alveoli was relatively clear. Compared with group A, group C, D, E, F reduced by 1.18,1.35,1.38,1.08 logs on the colony count of lung, and reduced by 0.91,1.00,1.26 and 1.03 logs on the colony count of spleen (P＜0.01), respectively. Conclusions Mycobacterium tuberculosis Ag85A plasmid DNA vaccine alone or combined with drugs has significant therapeutic effects on MDR-TB mice. Ag85A plasmid DNA vaccine combined with anti-tuberculosis drugs is the most promising immunization strategy for treatment of MDR-TB.     

结核分枝杆菌Ag85A／ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果研究

目的研究结核分枝杆菌Ag85A／ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果。方法用结核分枝杆菌高耐利福平低耐异烟肼临床分离株HB240尾静脉注射BALB／c小鼠1个月后，将小鼠随机分成2组，第1组用利福平（RFP）、异烟肼（INH）治疗12周，第2组用RFP、INH和结核分枝杆菌Ag85A／ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗（免疫5次）联合治疗12周；治疗结束后4和8周，分别取肺、肝和脾观察病理改变、称取质量、作菌落计数。结果治疗结束后4和8周，第2组小鼠体质量均超过第1组，但无显著性差异（P〉0．05）。治疗结束后4周，第2组肺、脾脏指数（0．017，0．011）均略低于第1组（0，020，0，012）（P〉0．05）；治疗结束后8周，第2组肺、肝脏指数（O．021，0．047）均略低于第1组（0．022，0．048）（P〉0．05）；而第2组脾脏指数（0．008）显著低于第1组（0．012）（P〈0．05）。治疗结束后4周，第2组有4例脾脏未见明显病变，第1组仅1例脾脏未见明显病变；治疗结束后8周，第2组有1例肺门淋巴结肿大，而第1组有3例；第2组有5例脾脏未见明显病变，第1组仅2例脾脏未见明显病变。治疗结束后4周，第2组肺菌落计数和脾菌落计数比第1组显著减少，分别减少70％和80％。结论DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病疗效高于单纯化疗。     

DNA疫苗治疗小鼠耐多药结核病的研究

目的研究结核分枝杆菌DNA 疫苗治疗小鼠耐多药结核病的效果。方法用结核分枝杆菌耐利福平和异烟肼临床分离株HB361尾静脉注射60只雌性BALB/c小鼠后,将小鼠随机均匀地分为6组,感染后第3d开始,分别用生理盐水（A组）、pVAX1载体（B组）、利福平（C组）、HSP65 DNA疫苗（D组）、Ag85A DNA 疫苗（E组）、Ag85A/ESAT6嵌合DNA疫苗（F组）治疗60d,DNA疫苗每隔15d肌肉注射1次,共5次。治疗结束后3周,分别取肺和脾观察病理改变、称取重量、做菌落计数。结果治疗结束后3周,与对照组比较,D组、E组和F组肺脏病变有不同程度减轻,病变局限,2/3区域可见正常的肺泡结构,肺泡轮廓相对清晰,细胞分布均匀。与A组相比,D组、E组和F组肺脏菌落数分别减少了0.34、0.50 和0.26 logs;脾脏菌落数依次减少了0.37、0.46 和0.28 logs（P<0.05,P<0.01）。结论Ag85A DNA 疫苗治疗小鼠耐多药结核病效果优于HSP65 DNA和Ag85A/ESAT6嵌合DNA疫苗。     

结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果研究

目的研究结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果。方法用结核分枝杆菌高耐利福平低耐异烟肼临床分离株HB240尾静脉注射BALB/c小鼠1个月后,将小鼠随机分成2组,第1组用利福平(RFP)、异烟肼(INH)治疗12周,第2组用RFP、INH和结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗(免疫5次)联合治疗12周;治疗结束后4和8周,分别取肺、肝和脾观察病理改变、称取质量、作菌落计数。结果治疗结束后4和8周,第2组小鼠体质量均超过第1组,但无显著性差异(P>0.05)。治疗结束后4周,第2组肺、脾脏指数(0.017,0.011)均略低于第1组(0.020,0.012)(P>0.05);治疗结束后8周,第2组肺、肝脏指数(0.021,0.047)均略低于第1组(0.022,0.048)(P>0.05);而第2组脾脏指数(0.008)显著低于第1组(0.012)(P<0.05)。治疗结束后4周,第2组有4例脾脏未见明显病变,第1组仅1例脾脏未见明显病变;治疗结束后8周,第2组有1例肺门淋巴结肿大,而第1组有3例;第2组有5例脾脏未见明显病变,第1组仅2例脾脏未见明显病变。治疗结束后4周,第2组肺菌落计数和脾菌落计数比第1组显著减少,分别减少70%和80%。结论DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病疗效高于单纯化疗。     

Ag85A/B嵌合DNA疫苗治疗小鼠敏感结核病疗效的实验研究

目的研究结核分枝杆菌Ag85A/B嵌合DNA疫苗治疗小鼠敏感结核病的效果。方法用结核分枝杆菌标准株H37Rv尾静脉注射50只雌性BALB/c小鼠后,将小鼠随机均匀地分为5组,感染后第3 d开始,分别用生理盐水(A组)、pVAX1载体(B组)、利福平(C组)、草分枝杆菌F.U.36注射液(D组)、Ag85A/B嵌合DNA疫苗(E组)治疗,每2周肌肉注射1次DNA疫苗,共3次。在治疗结束后2周,杀鼠,取小鼠肺和脾观察病理改变、称取重量、做菌落计数。结果与A组比较,D组、E组肺脏病变有不同程度减轻,病变局限,3/5区域肺泡结构完整,清晰,细胞分布均匀。与A组相比,C、D、E组肺脏菌落数依次减少2.11 log、0.76 log、0.81 log;肝脏菌落数依次减少2.11 log、0.74 log、1.11 logs(P0.01)。结论 Ag85A/B嵌合DNA对小鼠敏感结核病具有较好的治疗效果。     

结核分枝杆菌ESAT6、CFP10基因DNA疫苗对小鼠免疫原性的初步研究

目的 研究ESAT6、CFP10基因DNA疫苗分别与卡介苗联合免疫小鼠,以诱导免疫效果.方法 以构建的真核表达载体pEGFP-N1ESAT6、pEGFP-N1-CFP10与卡介苗共同免疫随机分成8组的80只小鼠,分别标记为：生理盐水组（SLYS）、卡介苗组（KJM）、pEGFP N1组（P-N1）、pEGFP-N1 ESAT6组（P-N1-E）、pEGFP N1-CFP10组（P-N1-C）、卡介苗加pEGFP-N1组（K＋P-N1）、卡介苗加pEGFP-N1-ESAT6组（K＋P-N1-E）和卡介苗加pEGFP-N1 CFP10组（K＋P-N1-C）.每只小鼠皮内注射100μL卡介苗,每只小鼠肌肉注射50μg质粒,每组共注射3次.以纯化的ESAT6、CFP10蛋白作为抗原,用DOT ELISA方法检测小鼠血清中的抗体;用ELISA方法检测小鼠血清中IFN-γ的变化.结果 免疫3次后的小鼠血清中检测到针对CFP10蛋白的抗体,未检测到针对ESAT6蛋白的抗体.但二者血清中IFNγ水平都有显著上升,K＋P N1-C和K＋P-N1-E免疫3次后,测得的IFN-γ平均含量为（107.591±7.3281）pg/mL和（95.7503±9.0184） pg/mL,显著高于免前、一免、二免（P＜0.01）.结论 结核分枝杆菌ESAT6,CFP10基因DNA疫苗和卡介苗联合应用后可诱导小鼠产生有效的细胞免疫应答,为DNA疫苗的研究奠定一定的基础.     

结核病黏膜疫苗的研究进展北大核心CSCD

呼吸道黏膜免疫是机体抵御结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染的第一道防线,是重要的抗MTB感染的保护性免疫,如何通过黏膜免疫,诱导黏膜免疫系统产生抗MTB感染的特异性免疫,是目前结核病疫苗研究的新方向。本文基于近年来结核病黏膜疫苗的研究,总结了不同类型疫苗的特点、黏膜免疫后的免疫学特性和免疫保护效果,展望了未来结核病黏膜疫苗的研究方向,希望能够对研发更加高效的结核病黏膜疫苗有所启示。     

结核分枝杆菌休眠相关抗原Rvl733cDNA疫苗的构建及免疫学特性研究

目的 构建结核分枝杆菌（Mtb）休眠相关抗原Rv1733c的真核表达载体,并评价其作为DNA疫苗的免疫学特性。 方法 利用限制性酶切的方法从本室前期保存的pMD-18T-Rv1733c质粒中构建Rv1733c的真核表达载体pcDNA-Rv1733c。将pcDNA-Rv1733c重组质粒稳定转染P815细胞,并用间接免疫荧光法检测Rv1733c的表达。采用数字表法随机将BALB/c小鼠分为3组,每组10只,即pcDNA-Rv1733c质粒DNA组、生理盐水组和BCG组。pcDNA-Rv1733c质粒DNA组和生理盐水组采用肌内注射方式免疫,间隔2周免疫1次,共免疫3次。BCG组采用皮下免疫一次。各组小鼠每2周采血,ELISA检测血清中特异性抗体水平和IgG2a/IgG1抗体亚类比率与比值。初次免疫8周后,MTS［3-(4,5-diethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-etrazolium,inner salt］（四氮唑蓝盐化合物）法检测小鼠脾淋巴细胞特异性增殖、ELISPOT检测脾淋巴细胞分泌IFN-γ的水平。流式细胞法检测脾淋巴细胞中CD4⁺和CD8⁺ T细胞所占比率;LDH法检测CTL（cytotoxic T lymphocytes;细胞毒性T淋巴细胞）活性。 结果 成功构建Rv1733c的真核表达载体pcDNA-Rv1733c。间接免疫荧光实验表明pcDNA-Rv1733c质粒稳定转染的P815细胞中能够稳定表达Rv1733c蛋白。pcDNA-Rv1733c质粒DNA免疫小鼠后能诱导小鼠产生特异性抗体,抗体亚类以IgG2a为主,随着免疫时间的延长,IgG2a/IgG1的比值趋于平衡;脾淋巴细胞增殖指数（2.00±0.36）高于BCG组（1.1±0.06）（t=3.096,P<0.05）;特异性分泌IFN-γ的脾淋巴细胞频数(41.48±5.30) SFC/10⁶高于生理盐水组（2.75±1.37）SFC/10⁶（t=4.752,P<0.05）;然而脾淋巴细胞中CD4⁺、CD8⁺ T细胞所占比率［分别为(18.15±2.30)%、(7.68±1.34)%］、CTL杀伤活性［(29.52±1.96)%］都与生理盐水组相当［(16.43±2.02)% (t=0.571,P>0.05)、(7.32±0.42)% (t=0.234,P>0.05)、（25.28±2.51）%（t=0.726,P>0.05）］。 结论 成功构建Rv1733c真核表达载体pcDNA-Rv1733c;并能够诱导小鼠机体产生特异性的体液和细胞免疫应答,提示用于结核病新型疫苗的研究具有一定的意义。     

结核分支杆菌Ag85B DNA疫苗的构建及其免疫作用的研究

目的 研究pcDNA3-Ag85B质粒DNA疫苗的免疫原性及其诱生细胞免疫应答的作用。方法 将结核分支杆菌Ag85B基因插入载体pcDNA3中,制备pcDNA3-Ag85B DNA疫苗。分别以生理盐水、pcDNA3及pcDNA3-Ag85B免疫BALB／c小鼠,检测小鼠抗Ag85B抗体水平（ELISA）和体外循异抗原刺激诱导的免疫小鼠脾细胞IL－2、IL－4、IL－10、IFN－γ表达水平。结果 pcDNA3-Ag85B诱生的抗Ag85B效介明显高于生理盐水组和pcDNA3组;pcDNA3-Ag85B免疫小鼠脾细胞在Ag85B抗原刺激下,IL－2和IFN－γ mRNA转录水平明显高于对照组,而IL－4和IL－10 mRNA转录水平在3组中无明显变化。结论 pcDNA3-Ag85B质粒DNA疫苗不仅能增强体液免疫,亦可诱导Th1型细胞免疫。     

结核分枝杆菌Rpf-DNA疫苗对Mtb感染小鼠免疫保护作用的研究

目的 评价Mtb复苏因子DNA疫苗（resuscitation-promoting factor DNA,Rpf-DNA）对Mtb感染宿主的免疫保护作用。 方法 构建复苏因子D(Rpf D-DNA)和复苏因子E(Rpf E-DNA)质粒疫苗,180只BALB/c小鼠（4周龄）分为6组,每组30只,分别用空质粒、Rpf D-DNA质粒、Rpf E-DNA质粒、BCG、生理盐水免疫,H37Rv标准株气溶胶感染。检测血清复苏因子（Rpf）抗体、IFN-γ;RpfD、E刺激淋巴细胞后进行淋巴细胞增殖、细胞杀伤实验;检测细胞上清IFN-γ、IL-12、IL-2;对肺组织进行病理学检测和细菌负荷（CFU）计数。 结果 （1）疫苗免疫组血清Rpf D、Rpf E抗体水平：Rpf D组0.32±0.1,Rpf E组0.39±0.1,BCG组0.02±0.01,空质粒组0.01±0.0,生理盐水组0.09±0.04,空白对照组0.03±0.01,RpfD组与RpfE组抗体水平与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D：45.6,43.2,45.1,45.7;Rpf E：51.6,53.6,51.0,52.2;P值均<0.01。血清IFN-γ：Rpf D组（43.9±24.8）pg/ml,Rpf E组（45.9±21.0）pg/ml,BCG组（21.0±11.0）pg/ml,空质粒组（7.9±4.9）pg/ml,生理盐水组（4.7±2.1）pg/ml,空白对照组（5.8±4.7）pg/ml,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组比较差异有统计学意义（F值分别为Rpf D：10.2;Rpf E：12.4;P值均<0.05）, 与空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D：15.6,17.8,17.3;Rpf E：17.5,21.1,20.7;P值均<0.01。（2）淋巴细胞增殖实验CCK-8：Rpf D组176.0±4.2,Rpf E组183.0±4.3,BCG组101.0±1.1,空质粒组100.0±6.8,生理盐水组104.0±8.4,空白对照组116.0±2.2,RpfD、RpfE质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D：9.5,10.1,10.0,9.0;Rpf E：11.2,12.9,11.7,10.3;P值均<0.05。细胞杀伤实验：Rpf D组32.0±3.2,Rpf E组30.0±4.2,BCG组16.0±5.9,空质粒组3.3±1.5,生理盐水组6.7±0.5,空白对照组7.3±3.5,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D：8.8,14.5,13.7,11.9;Rpf E：8.1,12.5,11.6,11.1;P值均<0.05。（3）Rpf D、Rpf E蛋白各自刺激淋巴细胞后上清细胞因子检测：IL-2：Rpf D组9.5±2.4,Rpf E组9.2±1.2,BCG组2.4±2.1,空质粒组1.2±0.3,生理盐水组1.8±1.0,空白对照组1.5±0.7,Rpf D、Rpf E质粒组与其他各组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D：12.5,14.6,13.5,13.9;Rpf E：12.0,13.6,13.1,13.2;P值均<0.05。IFN-γ：Rpf D组22.2±5.7,Rpf E组28.7±14.4,BCG组16.1±10.1,空质粒组9.8±1.6,生理盐水组13.2±2.1,空白对照组15.7±2.9,RpfD、RpfE质粒组与其他各组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D：7.8,12.6,8.7,8.3;Rpf E：11.3,16.4,14.7,14.2;P值均<0.05。 结论 实验表明复苏因子疫苗能诱导Mtb感染小鼠产生体液免疫和细胞免疫,有希望成为结核病候选疫苗之一。     

结核分枝杆菌ESAT-6抗原真核表达质粒的构建及其免疫原性

目的构建结核分枝杆菌抗原ESAT-6的真核表达质粒,并研究其免疫原性.方法采用聚合酶链反应（PCR）方法自结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增esat-6基因片段,定向亚克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-esat-6重组质粒;利用脂质体介导的转染技术,将其导入Vero E6细胞,RT-PCR法检测mRNA表达情况,Western-blot法鉴定表达产物;重组质粒经基因枪免疫小鼠后,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清抗ESAT-6特异性抗体以及小鼠脾淋巴细胞培养上清液干扰素-γ（IFN-γ）含量.结果成功构建了真核表达重组质粒pVAC-esat-6,并可在VeroE6细胞中表达;重组质粒免疫小鼠3次后,抗体滴度达到了1：1600,重组质粒组（pVAC-esat-6组）小鼠脾淋巴细胞培养上清液IFN-γ水平明显高于对照组（pVAC组）（P＜0.01）.结论成功构建结核分枝杆菌抗原ESAT-6的真核表达质粒pVAC-esat-6,免疫小鼠后诱导产生了特异的体液免疫应答和细胞免疫应答.     

Ag85B与MPT64 DNA疫苗联合免疫对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用

目的　研究Ag85B与MPT6 4DNA疫苗联合免疫对鼠结核分枝杆菌感染的免疫保护效果。方法　C5 7BL/ 6小鼠 5 4只 ,采用随机数字表法随机分为 6组 ,分别用磷酸盐缓冲液 (PBS)、pcDNA3 1( )、卡介苗 (BCG)、pcDNA/Ag85B、pcDNA/MPT6 4、pcDNA/Ag85B pcDNA/MPT6 4经肌肉注射法免疫小鼠 ,0、3、6周各 1次 ,即PBS组、pcDNA3 1组、BCG组、pcDNA/Ag85B组、pcDNA/MPT6 4组及pcDNA/Ag85B pcDNA/MPT6 4组。BCG组只在 0周予皮内注射卡介苗 1次。末次免疫后第 5周用 1×10 6CFU的H3 7Rv经尾静脉实施攻击 ,攻击后 6周处死部分小鼠 ,用酶联免疫吸附测定 (ELISA)法检测血清总IgG、纯化蛋白衍生物 (PPD)特异性脾淋巴细胞干扰素γ(IFN γ)和白细胞介素 4 (IL 4 )分泌水平 ,四甲基偶氮唑盐 (MTT)法测定特异性脾淋巴细胞增殖 ;作脾、肺组织荷菌量和病理学检查 ,并观察小鼠存活时间。结果　PBS组肺和脾器官荷菌量分别为lg-1(7 85 4± 0 0 0 3)CFU/g和lg-1(7 190±0 0 16 )CFU/g、pcDNA3.1组分别为lg-1(7 70 0± 0 0 16 )CFU/g和lg-1(7 0 72± 0 0 6 8)CFU/g、BCG组分别为lg-1(6 4 4 9± 0 0 0 2 )CFU/g和lg-1(5 4 36± 0 0 4 2 )CFU/g、pcDNA/Ag85B组分别为lg-1(7 370± 0 0 0 2 )CFU/g和lg-1(6 4 2 96± 0 0 0 9)C     

结核分枝杆菌DNA疫苗对小鼠结核病免疫治疗作用的实验研究

目的探讨结核分枝杆菌DNA疫苗pcD85B、pcDMPT64以及小鼠白细胞介素12(IL-12)真核表达质粒psIL12对结核分枝杆菌感染的疗效与机制。方法将结核分枝杆菌H37Rv感染的C57BL/J6小鼠100只随机分成生理盐水对照组、pcDNA3.1对照组,psIL12治疗组,pcD85B、pcDMPT64、pcD85B+pcDMPT64、pcD85B+psIL12DNA疫苗治疗组。感染4周后分别给予生理盐水、空质粒、psIL-12及DNA疫苗,第1次治疗后2个月处死小鼠,检测器官荷菌量、脾淋巴细胞特异性γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平,并于第1次治疗后2个月、5个月观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果pcD85B治疗组肺组织荷菌量(lg-1CFU/g)为6.99±0.40,比生理盐水对照组(8.15±0.37)、pCDNA3.1对照组(8.19±0.29)显著降低(P<0.01);脾组织荷菌量(lg-1CFU/g,x±s)为5.17±0.33,比生理盐水对照组(5.76±0.16)及空质粒对照组(5.88±0.21)显著降低(P<0.05)。psIL12治疗组的肺(7.41±0.50)、脾(5.31±0.21)荷菌量比对照组显著降低(P<0.05);pcD85B+psIL12治疗组肺、脾荷菌量与pcD85B组比较差别无统计学意义。pcD85B组脾淋巴细胞IFN-γ、TNFα水平比对照组显著升高(P<0.05),各组间IL4水平差异无统计学意义。生理盐水对照组、pCDNA3.1对照组肺组织     

Toll样受体与结核病的免疫反应

结核分枝杆菌是结核病的致病菌.目前机制尚未完全明确.Toll样受体(Toll-like recepTIR)能够感知结核杆菌感染,同时对先天免疫和获得性免疫都具有调控作用.与抗结核有关的主要是TLR2、TIR9和TLR4.但是,结核杆菌也能够利用TLR逃避免疫监视,促进慢性感染.对TIR的研究有助于阐明结核分枝杆菌诱导先天免疫反应机制,并为治疗方法提供新的思路.     

微卡菌苗预防糖尿病患者并发肺结核的临床观察

目的探讨母牛分支杆菌菌苗（微卡）对糖尿病患者预防并发肺结核的临床疗效及安全性。方法随机配对分组法将80例糖尿病患者分入微卡治疗组（M组，40例）和对照组（C组，40例）。两组常规使用降糖药及饮食控制血糖。M组加用微卡治疗3个月，C组不用微卡。结果M组未见微卡对血糖控制等产生不良影响，细胞免疫功能显著改善，治疗后M组T细胞亚群各项指标与C组比较：CD3、CD4显著升高（P〈0．001），CD8显著下降（P〈0．05）；PPD皮试阳转率M组较C组显著提高（P〈0．05）；近2年观察M组无1例发生肺结核，C组有4例发生。结论微卡临床使用安全，有显著改善糖尿病患者的细胞免疫功能对并发肺结核有较好的预防作用。     

结核分枝杆菌DNA三价苗的细胞与体液应答研究

本文构建了含分枝杆菌抗原Ag85B(30kDa) ,MPT - 83(2 6kDa)和ESAT - 6 (6kDa)分泌蛋白的真核表达载体pJW 4 30 3,酶切鉴定和序列分析 ,确定含有正确的读码框。重组表达质粒导入COS7细胞内并瞬时表达 ,证明上述三种重组质粒能在COS7细胞中表达出特异蛋白。三种重组表达质粒同时肌注免疫小鼠 ,首免 ,二免和三免小鼠后 2 1dAg85B抗体平均滴度分别为 1∶32 0 0 ,1∶5 12 0 0和 1∶10 2 4 0 0 ,MPT - 83抗体平均滴度二次免疫和三次免疫后 2 1d测得为 1∶2 5和 1∶5 0 ,三次免疫后均未检测到ESAT - 6特异性抗体。在三免后 2 1dAg85B和MPT - 83的特异性细胞因子γ -干扰素的浓度分别 2 75 pg/ml±16 5 ,2 2 0 pg/ml± 19 8;而ESAT - 6的γ -干扰素浓度为 2 2 0 pg/ml± 9 9。本研究表明 ,多价核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞免疫应答和体液免疫应答 ,可能有利于增强疫苗对抗结核病的抗性。