蜗轴切除术后囊泡膜谷氨酸转运体阳性终末在豚鼠耳蜗核内的变化

目的研究豚鼠行单侧蜗轴切除术后双侧蜗神经核复合体内囊泡膜谷氨酸转运体（vesicular glutamate transporter．VGluTs）表达的变化情况,以明确VGluTs阳性终末在第一级听觉中枢中的分布情况及功能。方法将正常成年豚鼠行单侧内耳蜗轴切除术,手术前、后行听觉脑干诱发电位（ABR）检测,术后1周应用免疫组织化学染色ABC法观察双侧脑干蜗神经核内VGluTs阳性终末的分布及变化情况。结果正常豚鼠蜗神经前腹侧核、后腹侧核、背侧核内均可见丰富的VGluTl阳性终末分布,腹侧核内可见阳性终末环绕神经元胞体形成密切接触。VGluT2阳性终末主要分布于蜗神经背侧核中间层及腹侧核边缘小细胞壳区。豚鼠单侧蜗轴切除术后一周．手术同侧蜗神经腹侧核内VGluT1阳性终末几乎全部消失。与对侧及对照组蜗神经腹侧核对比鲜明。蜗神经核内VGluT2阳性终末在蜗轴切除术后一周未发现明显变化。结论蜗神经腹侧核内大量的Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体（VGluT1）阳性终末起源于同侧耳蜗螺旋神经节：VGluT1是研究初级听觉传人通路中谷氨酸能神经元终末的良好标志;VGluT1和VGluT2在听觉传导系统及听觉中枢中的分布有差异,提示了功能上的不同。     

椎基底动脉供血障碍时耳蜗血流的变化及其调节

为了研究椎基底动脉供血障碍时耳蜗血流的变化及其调节作用，用激光多普勒血流计观察了３１只豚鼠椎基底动脉部分阻断时耳蜗血流及血压变化。其中５只豚鼠观察了罂粟碱及颈上神经节切除对内耳缺血的影响，发现惟基底动脉部分阻断时耳蜗血流明显减少（Ｐ＜０．００１），血压升高（Ｐ＜０．０５）。颈上神经节切除５分钟，耳蜗血流及血压无明显变化文Ｐ＞０．０５）。罂粟碱应用后２０分钟，耳蜗血流明显改善（Ｐ＜０．０００１）。颈上神经节切除后再次给予罂粟碱，耳蜗血流亦有增加，但较单纯应用罂粟碱时低。耳蜗血流与血压两者间无相关性。提示椎基底动脉供血障碍时耳蜗血流减少比较持续而稳定，罂粟碱明显改善豚鼠耳蜗血流说明肌源性调节的作用，而交感神经对内耳血流调节作用微弱。     

碱性成纤维细胞生长因子脑脊液途径用药对听觉系统保护作用的实验研究

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）脑脊液途径用药对硫酸丁胺卡那霉素诱导的豚鼠听觉损害的防治作用,为临床有效防治感音神经性聋提供理论依据。方法应用硫酸丁胺卡那霉素肌肉注射诱导豚鼠听觉损害,将bFGF采用脑脊液途径注入豚鼠体内。用药结束后测试听性脑干反应（auditory brainstem response,ABR）阈值,行耳蜗灌注琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase,SDH）组化染色,耳蜗铺片,观察染色强度及内、外毛细胞损伤程度,取脑干和双侧耳蜗行甲苯胺蓝染色,耳蜗螺旋神经节细胞计数,并测量相应的积分光密度（integral optical density,IOD）。结果用药后各组动物ABR阈值测试有显著性差异;耳蜗SDH染色和铺片内、外毛细胞损伤程度不同;耳蜗切片螺旋神经节细胞计数及IOD测定、耳蜗核切片IOD测试各组间比较有显著性差异。结论bFGF脑脊液途径用药对硫酸丁胺卡那霉素诱导的豚鼠听觉系统损害有防治作用。     

噪声对耳蜗边缘细胞及螺旋神经节细胞乙酰化组蛋白H2B的影响

目的　观察噪声性聋豚鼠耳蜗侧壁血管纹边缘细胞及蜗轴螺旋神经节细胞乙酰化组蛋白H2B表达水平的变化。方法　成年雄性白色红目豚鼠50只随机分为噪声组和对照组,通过听性脑干反应检测两组豚鼠噪声前听力,噪声组给予高强度窄带噪声（122 dB SPL,3 h）暴露,于暴露后1 h行ABR检测噪声后听力,并通过免疫荧 光染色和Western blot方法检测暴露后2 h两组豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞及蜗轴螺旋神经节细胞中乙酰化组蛋白H2B的表达水平。结果　两组豚鼠噪声暴露前听力在4、8、16与32 kHz频率的反应阈比较,差异无统计学意义。噪声组在噪声刺激1 h后ABR阈值在4、8、16与32 kHz频率的最大输出90 dB无反应。免疫荧光染色显示在噪声刺激2 h后血管纹边缘细胞中乙酰化组蛋白H2B荧光强度明显下降,Western blot显示噪声组豚鼠侧壁中乙酰化组蛋白H2B表达（H2B-AcK5/β-actin的比值为0.3471±0.0843）较对照组（0.6114±0.0207）明显下调,两组比较差异有统计学意义（t =5.268,P＜0.01）。耳蜗蜗轴组织中乙酰化组蛋白H2B表达在噪声组和对照组中分别为（0.4993±0.0994）和（0.5139±0.0132）,两组比较差异无统计学意义（P ＞0.05）。结论　噪声可导致豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞组蛋白乙酰化水平显著下降,螺旋神经节细胞中组蛋白乙酰化水平无明显改变,血管纹边缘细胞组蛋白乙酰化失衡有可能参与噪声性聋的发生发展。     

自身免疫性听神经病动物模型的建立及听性脑干反应和畸变产物耳声发射的变化

目的建立自身免疫性听神经病动物模型，探讨其听性脑干反应（auditory brainstem response ABR）和畸变产物耳声发射（distortion product otoacoustic emission DPOAE）的变化特征。方法选取耳廓反射正常的白色豚鼠250只，分离、电泳与纯化豚鼠螺旋神经节及蜗轴内的耳蜗神经纤维抗原，然后与等量完全弗氏佐剂免疫同种豚鼠，其中正常组10只，对照组10只，试验组50只。观察ABR、DPOAE、血清IgG水平、螺旋神经节和耳蜗核团形态学的改变、听神经抗原蛋白在螺旋神经节和耳蜗神经的表达、听神经纤维超微结构的变化。结果免疫后16只动物（32／100耳）出现听性脑干反应阈提高10～25dB，Ⅰ、Ⅲ波潜伏期延长，到免疫后第3周最为明显，随后有逐渐恢复的趋势，其中Ⅲ波潜伏期到第6周恢复正常；该组豚鼠DPOAE没有变化，动物血清IgG显著性升高，与对照组相比差异有统计学意义（F=10．03，P〈0．05）；均有不同程度的螺旋神经节细胞变性、数目减少，螺旋神经节和小血管周围有淋巴细胞浸润；听神经纤维出现脱髓鞘、髓鞘断裂等现象。豚鼠耳蜗核各亚核团平均细胞密度和细胞平均面积各组差异比较没有统计学意义；听神经蛋白完全分布于耳蜗螺旋神经节和听神经纤维组织。免疫后34只动物（68／100耳）没有出现ABR反应阈升高，血清IgG没有升高，与对照组相比差异没有统计学意义，螺旋神经节、耳蜗核团、听神经纤维超微结构没有变化。结论建立了豚鼠自身免疫性听神经病动物模型，该动物模型的ABR反应阈轻中度提高，Ⅰ、Ⅲ波有自然恢复的趋势。DPOAE没有变化。     

对灰鼠延迟性神经元死亡模型中螺旋神经节细胞缺损的评估

目的探索观察耳蜗螺旋神经节细胞的简便定量研究方法 ,并在灰鼠延迟性螺旋神经节细胞死亡动物模型中验证本方法的实用性和可靠性。方法 15只成年灰鼠平均分为3组,第1组用于正常对照;第2组一次性同时肌肉注射庆大霉素（125mg/kg）和静脉注射利尿酸钠（40mg/kg）,并在用药后2个月处死;第3组接受与第2组同样的药物注射,但在用药后4个月处死。耳蜗样品被常规应用环氧树脂包埋并制作成耳蜗中轴半薄切片,计数耳蜗各回蜗轴螺旋管腔切片截面内的螺旋神经节数量并进行统计分析。结果灰鼠耳蜗底回起始端的蜗轴螺旋管腔比耳蜗底回中部和耳蜗中回大,因此耳蜗底回起始端蜗轴螺旋管内的螺旋神经节细胞数量多于耳蜗底回中部和耳蜗中回。耳蜗毛细胞被彻底破坏后2个月,与正常灰鼠耳蜗各回蜗轴螺旋管腔切片截面内的螺旋神经节细胞数量相比,耳蜗底回蜗轴螺旋管切片截面内的螺旋神经节细胞减少数量比耳蜗中回严重,提示延迟性螺旋神经节细胞死亡可能遵循着从耳蜗底回向顶回扩展的规律。耳蜗毛细胞被彻底破坏后4个月,全耳蜗蜗轴螺旋管内的螺旋神经节细胞基本上丧失殆尽。结论计数耳蜗中轴切片各回蜗轴螺旋管腔切片截面内的螺旋神经节细胞数量是一种简便可靠的定量分析方法 。     

实验性微栓塞缺血豚鼠耳蜗cNOS的表达变化

目的 探究一氧化氮（nitricoxide，NO）在一过性微栓塞耳蜗缺血性损伤中的作用。方法 20只豚鼠随机分为实验组和对照组各10只，实验组动物通过磁微粒栓塞造成实验性耳蜗缺血模型；以扫描电镜观察缺血耳蜗听纤毛变化；以免疫组织化学方法观察原生型一氧化氮合酶（constitutive nitric oxide synthase，cNOS）在两组耳蜗的表达变化。结果 实验性耳蜗缺血造成内外毛细胞听纤毛散在的粘结、倒伏或缺失，内毛细胞听纤毛病变明显；内皮型一氧化氮合酶（endothelial NOS，eNOS）表达分布于蜗轴及内侧螺旋板内神经纤维、螺旋神经节、内侧螺旋缘、Corti器细胞及血管纹／螺旋韧带区；神经型一氧化氮合酶（neuron NOS，nNOS）主要分布于蜗轴及内侧螺旋板内神经纤维、螺旋神经节细胞，在Corti器细胞、血管纹细胞及内侧螺旋缘上皮细胞有较弱的表达；实验性缺血组豚鼠耳蜗与正常对照组耳蜗原生型一氧化氮合酶的表达无差异。结论 微栓塞耳蜗缺血引起散在听毛细胞损伤；两种原生型NOS在耳蜗固有表达，分布有交叉，功能存在相互代偿，但未发现因微栓塞缺血而引起变化。     

听力学

930486谷氨酸免疫反应在豚鼠低位听觉传人径路上的分布/乔莉…尹中华耳鼻咽喉科杂志一2992,27(增刊)一30~31 采用免疫细胞化学ABC法显示豚鼠Corti器、螺旋神经节及耳蜗核谷氨酸免疫反应(Gl-utamate immunoreaetivity,Glu一IR)。结果发现,正常豚鼠耳蜗各回均可见Glu一IR阳性产物,呈蓝黑色,主要分布在内毛细胞底部,阳性的神经纤维数量较多,粗细不一,膨体不明显,纤维与内毛细胞关系密切。蜗轴四回螺旋神经节(SG)内,均可见Glu一IR阳性的细胞,呈圆形及椭圆形,有大、小两种,并可见由胞体发出的突起。豚鼠耳蜗腹侧核及背侧核均可见Glu一IR…     

纯化内耳P0蛋白诱发实验性自身免疫性内耳病动物模型

目的：用从内耳组织中纯化的P0蛋白免疫豚鼠,建立P0蛋白诱发的自身免疫性内耳病动物模型,研究其在自身免疫性内耳病中的作用。方法：采用制备性SDS-PAGE从内耳组织中分离、纯化P0蛋白。以纯化的豚鼠内耳P0蛋白作为抗原免疫豚鼠,观察其听性脑干反应阈,血清中抗体水平和内耳形态学的改变,并用免疫组织化学法确定P0蛋白在耳蜗的分布情况。结果：SDS-PAGE结果显示纯化的蛋白质只在分子量为30 000的位置上出现单一的蛋白染色带,Western blot结果示该蛋白即为P0蛋白。免疫后有22%豚鼠的听性脑干反应阈升高,对照组动物无变化。实验组血清IgG显著升高（F=6.48,P〈0.01）,反应阈提高豚鼠的螺旋神经节细胞均有不同程度的数目减少,蜗轴小血管周围有炎性细胞浸润。P0蛋白在耳蜗仅分布于螺旋神经节、蜗轴神经纤维的髓鞘上。结论：用制备性SDS-PAGE能够成功地从内耳纯化P0蛋白,用于自身免疫性内耳病的研究。P0蛋白在部分豚鼠能够诱发自身免疫性内耳病,可能是自身免疫性内耳病的自身抗原之一。     

胱硫醚-γ-裂解酶基因在大鼠耳蜗螺旋蜗轴动脉中的表达

突发性聋、噪声性聋以及老年性聋等都与耳蜗缺血有关。小脑前下动脉分出的螺旋蜗轴动脉是耳蜗供血的终末动脉，耳蜗的供血缺少侧支循环，当受到各种病理因素影响时，易发生微循环障碍而出现缺血性损伤。因此，研究耳蜗微循环调控特别是其自身调节能力是寻求解决缺血性耳蜗损伤的关键。     

谷氨酸对豚鼠畸变产物耳声发射和听性脑干反应的影响

目的 研究外源性谷氨酸对畸变产物耳声发射(distortion product otoacoustlcemission，DPOAE)、听性脑干反应(auditory brainstem response，ABR)及耳蜗形态学的影响。方法应用豚鼠全耳蜗灌流技术，耳蜗灌流10mmol/L谷氨酸2h，分别记录灌流前、后DPOAE和ABR；耳蜗微音电位(cochlear microphonics，CM)和听神经复合动作电位(compound action potential，CAP)；应用透射电镜进行耳蜗形态学观察。结果灌流人工外淋巴液前、后CM及CAP无改变；灌流10mmol／L谷氨酸后DPOAE无改变，ABR潜伏期延长；同样灌流10mmol／L谷氨酸后CM幅度虽有下降、但是其非线性特点无改变；CAP阈值平均升高了35dB；灌流谷氨酸后内毛细胞及其下方神经纤维出现空泡。结论谷氨酸作为耳蜗主要的兴奋性传入神经递质，过度释放可以产生兴奋性毒性，损伤耳蜗内毛细胞及传入神经。同时本实验为建立听神经病的动物模型提供了一个参考方法。     

effects of glutamate on distortion-product otoacoustic emissions and auditory brainstem responses in guinea pigs

Objective To investigate changes in evoked potentials and structure of the guinea pig cochleae during whole cochlear perfusion with glutamate. Methods CM, CAP, DPOAE, and ABR were recorded as indicators of cochlear functions during whole cochlear perfusion. The morphology of the cochlea was studied via transmission electron microscopy. Results There were no significant changes in DPOAE amplitude before and after glutamate perfusion. CM I/O function remained nonlinear during perfusion. ABR latencies were delayed following glutamate perfusion. The average CAP threshold was elevated 35 dB SPL following glutamate perfusion.. The OHCs appeared normal, but the IHCs and afferent dendrites showed cytoplasmic blebs after glutamate perfusion. Conclusions While being a primary amino acid neurotransmitter at the synapses between hair cells and spiral ganglion neurons, excessive glutamate is neurotoxic and can destroy IHCs and spiral ganglion neurons. The technique used in this study can also be used to build an animal model of auditory neuropathy.     

Type II cochlear ganglion cells in the chinchilla

In order to ascertain whether Type II cochlear ganglion cells project to the brain, we have studied the retrograde transport of horseradish peroxidase (HRP) from the cochlear nucleus to the spiral ganglion of the chinchilla. In this animal there exist two types of ganglion neurons, which closely correspond to those previously described in guinea pigs, cats and rats. As in the guinea pig, the majority population (Type I) consists of relatively large, myelinated neurons. The minority population (Type II, 10% of the total population) consists of small, mostly unmyelinated cells, with filamentous cytoplasm and finely grained nuclear chromatin. Type II neurons tend to be clustered toward the peripheral side of Rosenthal's canal, often in close proximity to the intraganglionic spiral bundle. By 24 h after injections of HRP into the cochlear nucleus, incubation of the cochlear ganglion in diaminobenzidine/H2O2 reveals abundant HRP label in both Type I and Type II neurons. Type II neurons, however, tend to be labelled less intensely than Type I neurons. Control experiments, consisting of spillage of HRP solution over the cochlear nucleus, were carried out to determine how much HRP might be picked up by neurons after HRP diffusion. Comparison of cochleae from injected animals and from the control animals suggests that most of the label that was found in ganglion neurons after cochlear nucleus injections represents axonally transported HRP. We conclude, at least tentatively, that Type II neurons project to the brain. The fact that less label is found in Type II neurons that in Type I neurons suggests that the former have thinner axons and/or finer terminals in the cochlear nucleus.     

噪声对豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶阳性神经元及其基因表达的影响

为探讨豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）神经元在白噪声损伤过程中可能的作用，采用硫辛酰胺脱氢酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）组织化学方法及半定量多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术，研究白噪声暴露后豚鼠耳蜗核ＮＯＳ神经元及ＮＯＳｍＲＮＡ含量的变化以及与听阈的关系。结果表明，噪声暴露后耳蜗核ＮＯＳ阳性神经元的数量及染色强度明显增加，２周达高峰，３～４周持续高表达，５周有所恢复，但仍高于正常水平。耳蜗核ＮＯＳｍＲＮＡ含量的变化规律与形态学观察结果一致，２周组ＮＯＳｍＲＮＡ含量最高，是正常的５．０２倍。噪声暴露后ＡＢＲ阈移与耳蜗核ＮＯＳｍＲＮＡ含量呈正相关（ｒ＝０．９６５５，Ｐ＜０．０１）。提示耳蜗核ＮＯＳ阳性神经元可能参与了耳蜗神经损伤修复的调节，ＮＯＳ基因的高表达是噪声性聋发病机制中不可忽视的重要因素之一。     

噪声对豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶阳性神经元及其基因表达的…

NADPH-diaphorase (NADPH-d) histochemistry method and semiquantitative polymerase chain reaction (PCR) technology were adopted to study nitric oxide synthase (NOS) neurons and to investigate the content change of NOS mRNA and the relationship between it and auditory threshold and to explore the possible role of NOS neurons in cochlear nuclei of guinea pigs after exposed to white noise. The results showed that the quantity and staining intensity of positive NOS neurons in cochlear nuclei increased obviously after exposed to noise. It reached the peak 2 week later and remained 5 week than normal. The regulation of NOS mRNA was consistent with that of morphological observation. NOS mRNA content in 2 w group was the highest and was 4.02 times higher than normal. After exposed to noise, ABR threshold shift was in positive correlation with NOS mRNA content in cochlear nuclei (r = 0.9655, P < 0.01). It is suggested that positive NOS neurons in cochlear nuclei might be involved in controlling injury and repair of cochlear nerves. The high expression of NOS gene might be an important factor in pathogenic mechanism of noise deafness.     

白噪声对豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶活性的影响

采用硫辛酰胺脱氢酶组织化学方法及图象分析技术，研究白噪声暴露后豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶（ＮＯＳ）神经元及ＮＯＳ活性的变化与听阈的关系，探讨豚鼠耳蜗核ＮＯＳ神经元在白噪声损伤过程中可能的作用。结果表明，白噪声暴露后耳蜗核ＮＯＳ阳性神经元的数量及染色强度明显增加，２周达到高峰，３￣４周持续高表达，至５周有所恢复，仍高于正常水平。白噪声暴露后７ｄ以内，耳蜗核ＮＯＳ活性与ＡＢＲ阈值有分离现象，７ｄ后，ＮＯＳ     

睫状神经营养因子防治强脉冲噪声对豚鼠内耳损伤的实验研究

目的探索应用睫状神经营养因子（ｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ＣＮＴＦ）防治强脉冲噪声对豚鼠内耳损伤的可能性,为强脉冲噪声致聋的防治提供新的方法。方法制作强脉冲噪声致聋豚鼠模型３６只,１８只应用ＣＮＴＦ肌内注射３周,１８只等量的生理盐水作对照,正常对照豚鼠１８只,进行耳蜗铺片计算机图像分析毛细胞计数,螺旋神经节细胞计数、耳蜗乙酰胆碱酯酶染色铺片观察和ＡＢＲ反应阈测定。结果正常对照组、噪声暴露后２１ｄ的生理盐水对照组和ＣＮＴＦ组耳蜗毛细胞平均总数（ｘ±ｓ,下同）分别为９０９４±１０３．６、７３５１±１９６．５、８５２２±２０３．１;而螺旋神经节细胞计数在耳蜗中轴切片第二回下段３组间差异有显著性,分别为５１±４．７２、２７±６．９４、３７±１０．４。乙酰胆碱酯酶染色铺片结果示ＣＮＴＦ组较生理盐水对照组耳蜗乙酰胆碱酯酶活性损失轻、范围小。结论ＣＮＴＦ在一定程度上能防止受损的螺旋神经节细胞及外毛细胞发生变性坏死,并可能促进其损伤的修复。     

The protective effects of ciliary neurotrophic factor on inner ear damage induced by intensive impulse noise]

OBJECTIVE: To evaluate the feasibility of using ciliary neurotrophic factor(CNTF) to treat intensive impulse noise-induced inner ear damage. METHODS: The guinea pigs were given either CNTF (CNTF group) or 0.9% sodium chloride (NS group) for 3 weeks after impulse noise exposure. The animals receiving neither medicine nor noise served as a control group. ABR threshold shifts, the cochlear AchE staining as well as the hair cell and spiral ganglion cell counting were carried out in three groups of animals. RESULTS: The numbers of damaged hair cells and spiral ganglion cells in the CNTF group was less than that in the NS group. AchE activity alteration was also less severe in the CNTF group. Similar to the morphological results, changes in the auditory function, represented by the ABR threshold shifts, was less in the CNTF group. CONCLUSION: CNTF can protect cochlear hair cells and spiral ganglion cells against intensive impulse noise exposure by decreasing degeneration and necrosis of the hair cells in some extent and expedite hearing recovery.