芪参益气滴丸对糖尿病大鼠视网膜谷氨酸转运体及谷氨酰胺合成酶表达的影响

目的:探讨芪参益气滴丸对糖尿病大鼠视网膜谷氨酰胺合成酶及谷氨酸转运体的表达水平的影响。方法:选择维通利华实验动物研究所提供的六周龄SPF级SD大鼠80只,体重180~220 g,雄性,根据随机数字表法分为实验组(例数=70)、正常组(例数=10),进行链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ),一次性注射腹腔对胰岛β细胞进行选择性破坏,诱发实验性糖尿病;应用时由PH 4.4、0.1 mmol/L无菌的柠檬酸钠缓冲液配制为1%STZ溶液,根据大鼠体重予以65 mg/kg左下腹腔一次性注射1%STZ,正常组注射相同体积的生理盐水,72 h后应用快速血糖仪检测血糖水平;血糖水平超过16.7mmol/L者则为糖尿病大鼠模型;随机分为对照组(多贝斯对照组)(20只)、治疗组(芪参益气滴丸组)(30只)、糖尿病模型组(模型组)(20只)、正常组(例数=10),应用RT-PCR法检测4组大鼠视网膜GFAP mRNA表达水平;应用免疫组织化学染色法(Labelled Streptavidin Biotin Method,LSAB法)检测4组视网膜的谷氨酸转运体(Glutamate/aspartate Transporter,GLAST)表达水平;应用免疫组织化学染色法(LSAB法)检测视网膜上谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase,GS)的表达水平情况。结果:对照组、模型组、治疗组的大鼠视网膜GFAP阳性表达IOD值显著低于正常组,差异有统计学意义(P0.05);治疗组、对照组的大鼠视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白(Glialfibrillaryacidprotein,GFAP)阳性表达IOD值显著高于模型组,差异有统计学意义(P0.05);治疗组的大鼠视网膜GFAP阳性表达IOD值显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);对照组、模型组、治疗组的大鼠视网膜GS阳性表达IOD值显著低于正常组,差异有统计学意义(P0.05);治疗组、对照组的大鼠视网膜GS阳性表达IOD值显著高于模型组,差异有统计学意义(P0.05);治疗组的大鼠视网膜谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase,GS)阳性表达IOD值显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:芪参益气滴丸可促进视网膜GS和GLAST的表达,降低谷氨酸的高浓度兴奋性毒性功能,保护视网膜神经细胞。     

灵芝多糖对2型糖尿病大鼠心肌AGEs及其受体表达的影响

目的:观察灵芝多糖(GLPs)对2型糖尿病大鼠心肌组织中晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)及其受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)表达的影响,探讨其防治糖尿病大鼠心肌病变的作用机制。方法:采用高能量饮食加小剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立2型糖尿病大鼠模型(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM),成模后将大鼠随机分成6组:正常对照组、模型对照组、灵芝多糖低、中、高剂量治疗组、小檗碱对照组。灌胃治疗12周后测定各组大鼠空腹血糖、血浆胰岛素,免疫组化和蛋白印迹法检测心肌组织中AGEs、RAGE含量的表达。结果:与DM组比较,灵芝多糖组、小檗碱组能有效降低血糖、升高血浆胰岛素水平,降低心肌组织中AGEs、RAGE的表达,其中灵芝多糖高剂量组效果优于小檗碱组。结论:灵芝多糖可显著改善糖尿病大鼠血糖、空腹血浆胰岛素水平,并可能通过抑制心肌组织中AGEs、RAGE的表达实现其保护糖尿病大鼠心肌的作用。     

芪参益气滴丸对糖尿病大鼠微循环障碍的影响

目的探讨参芪益气滴丸改善糖尿病大鼠微循环障碍的作用机制。方法 STZ腹腔注射建立1型糖尿病大鼠模型,随机分为模型组、治疗组、阳性对照组,并设正常组。治疗组灌服芪参益气药液,对照组灌服羟苯磺酸钙溶液1 g/(kg·d),实验周期10个月。利用激光多普勒血流灌注成像仪观察糖尿病大鼠耳廓、四肢及虹膜微循环状态。结果模型组耳廓、四肢皮肤及虹膜血管单位面积血流量较正常组和治疗组均明显减低,差异均有统计学意义(P0.01,P0.05),但与阳性对照组差异无统计学意义(P0.05)。结论芪参益气滴丸可以增加糖尿病大鼠耳廓、四肢及虹膜单位面积血流量,改善末梢循环缺血状态。     

芪参益气滴丸对糖尿病大鼠视网膜谷氨酸转运体及谷氨酰胺合成酶表达的影响

目的探讨芪参益气滴丸对糖尿病大鼠视网膜谷氨酸转运体（glutamate-aspartatetransporters,GLAST）、谷氨酰胺合成酶（glutaminesynthetase,GS）表达的影响,及其对视网膜神经细胞保护作用的机制。方法链脲佐菌素诱导实验性糖尿病大鼠模型。治疗组每日予芪参益气滴丸灌胃给药1次。LSAB法检测GLAST、GS在视网膜的表达,ImagePlusPro6.0图象分析系统计算阳性表达的IOD值。结果与正常组相比,模型组视网膜GLAST（5.491±0.121）、GS（3.142±0.063）的表达明显降低（P〈0.05）;与模型组相比,治疗组GLAST（6.820±0.404）、GS（6.532±0.073）的表达增强（P〈0.05）。结论芪参益气滴丸能够促进视网膜GLAST及GS的表达,减轻高浓度谷氨酸的兴奋性毒性作用,对视网膜神经细胞起保护作用。     

芪参益气滴丸抗大鼠肝纤维化的实验研究

目的研究芪参益气滴丸抗肝纤维化的作用机制。方法60只大鼠随机分为正常组、模型组、干预组、对照组及芪参益气滴丸组（简称治疗组）。采用二甲基亚硝胺腹腔内注射建立肝纤维化大鼠模型。按6期分类法评价各组肝纤维化程度。应用RT—PCR检测各组肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原和1型组织性基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1）mRNA水平;应用免疫组织化学技术检测各组动物肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原和TIMP-1的表达。结果干预组与治疗组大鼠肝纤维化程度、肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原和TIMP—1mRNA水平及肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原和TIMP-1的阳性表达均分别较模型组与对照组显著减轻与下降。结论芪参益气滴丸能明显减轻肝组织病理改变和肝纤维化程度,抑制Ⅰ、Ⅲ胶原和TIMP-1的表达是其抗肝纤维化的部分机制。     

筋脉通对实验性糖尿病大鼠坐骨神经AGEs及其受体表达的影响

目的:观察中药复方筋脉通对实验性糖尿病大鼠坐骨神经晚期糖基化终产物AGEs及其受体RAGE表达的影响。方法:采用链脲佐菌素造模后,将大鼠随机分为模型对照组、筋脉通小剂量、中剂量和大剂量组,并设立正常对照组。成模后即开始灌胃给药,筋脉通小、中、大剂量组分别按成人剂量的5、10、20倍给药。模型组和正常组予灌服蒸馏水。检测各组治疗前及治疗后4、8、12、16周的体质量和血糖变化,并测定大鼠机械痛阈,采用免疫组化法测定坐骨神经AGEs及其受体的表达。结果:治疗后正常组大鼠的体质量、血糖与其余各组比较有明显的差异(P<0.01);而模型组及各用药组之间均无明显的差异。机械痛阈结果显示,与正常组比较模型组及各治疗组的机械痛阈值显著降低(P<0.01)。正常组大鼠坐骨神经中AGEs及RAGE表达呈弱阳性,模型组坐骨神经AGEs及RAGE的阳性表达比正常组明显增强,筋脉通各治疗组介于两者之间。IOD值测定显示,与正常组比较,模型组的AGEs及RAGE的IOD值显著升高(P<0.01),各治疗组均较正常组升高,较模型组降低,其中筋脉通中剂量组治疗组明显降低,有显著性差异(P<0.01)。结论:筋脉通能够减少糖尿病大鼠周围神经中AGEs的生成,并下调其受体的异常表达。     

益气化瘀方促进糖尿病难愈创面血管新生的AGEs/RAGE/NF-κB信号通路研究

目的:从AGEs/RAGE/NF-κB信号通路探讨益气化瘀方促进糖尿病难愈创面血管新生的作用机制。方法:32只雄性SD大鼠除正常对照组外,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,随机分为模型组、益气化瘀方组、氨基胍组,灌胃8周后在大鼠背部制造全层皮肤缺损开放性创面,于创面造模后第7天取各组大鼠背部创面肉芽组织标本,通过免疫组化及图像分析法检测创面肉芽组织中AGEs、VEGF、CD34含量,用Western blot法检测创面肉芽组织中RAGE、e NOS蛋白水平和NF-κB活性。结果:模型组与正常对照组比较,创面肉芽组织AGEs含量、RAGE蛋白水平、NF-κB活性均明显上升(P0.01),e NOS蛋白水平、VEGF及CD34含量均明显下降(P0.01);益气化瘀方组、氨基胍组与模型组比较,创面肉芽组织AGEs含量、RAGE蛋白水平、NF-κB活性均明显下降(P0.01,P0.05),e NOS蛋白水平、VEGF及CD34含量均明显上升(P0.01,P0.05);益气化瘀方组创面肉芽组织AGEs含量的下降较氨基胍组更为明显(P0.05)。结论:益气化瘀方可以减少糖尿病大鼠创面肉芽组织AGEs的蓄积及组织细胞表面RAGE的表达,阻断两者结合所导致的组织细胞内NF-κB被激活,细胞受损和功能紊乱,使组织细胞合成和分泌VEGF、NO增加。益气化瘀方可以通过调节AGEs/RAGE/NF-κB信号通路从而促进糖尿病性难愈创面血管新生,加速创面修复愈合。     

艾炷灸命门穴对衰老模型大鼠脑组织中AGEs、RAGE表达影响

目的:观察艾炷灸命门穴对D-半乳糖致衰老大鼠脑组织中AGEs及其受体RAGE表达的影响,探讨艾炷灸命门穴延缓衰老的作用机制。方法:雄性SD大鼠40只,随机分为空白组10只、模型制备组30只,空白组腹腔注射生理盐水,模型制备组进行腹腔注射D-半乳糖500 mg/kg,每日1次,连续60天,模型制备成功后随机选取20只分为模型对照组、命门穴治疗组,艾炷灸治疗4周。酶联免疫吸附测定法(Elisa)观察各组大鼠脑组织匀浆中AGES、RAGE表达水平,RT-PCR观察RAGE mRNA的表达水平。结果:模型对照组大鼠脑组织中AGES、RAGE及RAGE mRNA表达水平比空白组明显增加(P<0.01);命门穴治疗组脑组织中AGES、RAGE及RAGE mRNA表达水平明显低于模型对照组(P<0.01)。结论:艾炷灸命门穴可以延缓衰老,其机制可能是AGEs的水平下调减少了对蛋白的直接修饰及抑制AGEs与特异性配体RAGE结合而引发一系列的生物学效应而达到延缓衰老的目的。     

芪参益气滴丸抑制大鼠心肌梗死后心肌纤维化及对TGF-β1/Smads通路表达的影响

目的观察芪参益气滴丸对大鼠心肌梗死（简称心梗）后心肌纤维化（myocardial fibrosis,MF）的影响,并基于TGF-β1/Smads通路表达探讨其作用机制。方法结扎雄性Wistar大鼠左冠状动脉前降支制作心梗模型,模型成功后随机分为模型组,芪参益气滴丸常规剂量组（QSYQ-N）,芪参益气滴丸高剂量组（QSYQ-H）,卡托普利组,另设假手术组,每组10只。干预4周后对大鼠心脏行HE和Masson染色,并计算心肌胶原容积分数 （collagen volume fraction,CVF）。采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测心脏组织中转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、Smad2、Smad7 mRNA和蛋白表达情况。结果HE染色显示模型组室壁可见大面积结缔组织形成,室壁明显变薄,心肌细胞明显水肿及大量炎细胞浸润。各治疗组可见室壁结缔组织面积减少,细胞水肿及炎细胞减轻。Masson染色显示造模后各组大鼠出现心肌纤维化。与模型组比较,各治疗组CVF均明显降低（P<0.01）。与假手术组比较,模型组TGF-β1、Smad2 mRNA及蛋白表达均明显增加,Smad7明显下降（P<0.05, P<0.01）;与模型组比较,QSYQ-H、卡托普利组TGF-β1、Smad2 mRNA及蛋白表达下调,Smad7表达上调（P<0.05, P<0.01）。结论芪参益气滴丸可以抑制大鼠心梗后心肌纤维化,其作用机制可能与调控TGF-β1/Smads通路相关因子的基因与蛋白表达有关。     

周络通胶囊对糖尿病周围神经病变小鼠坐骨神经糖基化终末产物及受体的影响

目的:观察周络通胶囊对糖尿病周围神经病变(DPN)小鼠的作用及对晚期糖基化终末产物(AGEs)及其受体的影响。方法:40只KK/Upj-Ay小鼠随机分为模型组、周络通胶囊高、中、低剂量组(6.85,3.43,1.71 g生药.kg-1),另设10只C57BL/6小鼠对照组。灌胃给药12周,观察一般情况,测定空腹血糖(FBG)及糖化血红蛋白(HbA1c);测定运动神经传导速度(MNCV);光镜及电镜观察坐骨神经形态学变化;荧光分光光度法测定坐骨神经中AGEs含量;荧光定量PCR和Western blot法测定坐骨神经AGEs受体(RAGE)表达。结果:周络通胶囊能不同程度改善模型小鼠症状,高剂量组能降低FBG和HbA1c(P<0.05,P<0.01);3组均能提高MNCV(P<0.05,P<0.01);减轻坐骨神经病理损伤;降低AGEs含量及RAGE mRNA和蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:周络通胶囊对DPN有明显的改善作用,其机制可能与降低周围神经AGEs形成、抑制RAGE表达有关。     

阿魏酸钠对糖尿病大鼠肾脏糖基化终产物受体mRNA表达的影响

 目的探讨阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠肾脏皮质糖基化终产物受体(receptor for advanced glcation end products,RAGE)mRNA表达的影响。方法 对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的DM大鼠灌胃给予SF110 mg·kg^-1·d^-1),治疗8周,测定各组大鼠肾重／体重、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、24h尿蛋白定量,并用RT-PCR方法检测肾脏皮质RAGE mRNA的表达,观察肾脏病理改变。结果 DM组大鼠肾重／体重,BUN,Scr,24h尿蛋白定量,肾皮质RAGE mRNA的表达显著高于正常对照组;SF组肾重／体重,BUN,24 h尿蛋白定量,肾皮质RAGE mRNA的表达显著低于DM组;DM组大鼠肾脏病理显著异常,SF可显著减轻其病理学改变。结论SF可通过抑制肾脏RAGE mRNA的表达,减轻糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)-RAGE之间的相互作用对DM大鼠肾脏产生保护作用。     

酸味中药复方对2型糖尿病大鼠主动脉AGEs含量及受体基因表达的影响

目的 观察酸味中药复方对2型糖尿病(T2DM)大鼠主动脉晚期糖基化终产物(AGEs)含量及受体(RAGE)基因表达的影响,探讨其防治糖尿病大血管病变的机制。     

灵芝多糖对2型糖尿病大鼠胸主动脉AGEs 及其受体的影响

目的:研究灵芝多糖对2型糖尿病大鼠胸主动脉糖基化终末产物及其受体的影响,探讨灵芝多糖对糖尿病大鼠主动脉的保护机制.方法:SD大鼠经4周高脂饮食后腹腔注射链脲佐菌素(STL)30mg·㎏-1建立2型糖尿病(T2DM)模型.大鼠随机分为对照组、模型组、小檗碱阳性对照组、灵芝多糖低、中、高剂量组(200,400,800mg·㎏-1).给药治疗12周后,测定大鼠空腹血糖、血清中糖基化终末产物(AGES)含量,免疫组化法和蛋白印迹法测定胸主动脉AGES,RAGE蛋白的表达情况.结果:灵芝多糖高、中剂量组与模型组大鼠相比,血糖和血清AGES明显降低(P＜0.01).各治疗组胸主动脉AGE.和RAGE的表达量较模型组都有所下调,其中灵芝多糖高剂量组表达明显下调(P＜0.01).结论:灵芝多糖对T2DM大鼠血糖的降低和主动脉保护作用明显,其机制可能是下调AGES及RAGE的表达从而对糖尿病大鼠主动脉起到保护作用.     

绞股蓝皂苷对晚期糖基化终末产物诱导人肾小球系膜细胞晚期糖基化终末产物受体表达及氧化应激水平的影响

目的观察绞股蓝皂苷(GP)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导下人肾小球系膜细胞(HMCs)中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)表达及氧化应激水平的影响。方法用含13%FBS的DMEM低糖培养液体外培养HMCs细胞,将细胞分为6组:对照组(DMEM培养液),AGEs组(200 mg/L),GP低、中、高剂量(25、75、150 mg/L)组和阳性对照组(氨基胍0.1 mmol/L)。培养72 h后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中RAGE m RNA的表达水平,Western blotting法检测RAGE蛋白表达水平。应用试剂盒检测各组细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及细胞内微量还原型谷胱甘肽(GSH)活性。结果 AGEs显著促进HMCs中RAGE m RNA及蛋白表达(P0.01),增强细胞氧化应激水平。GP能有效抑制RAGE m RNA及蛋白表达,增加上清液中SOD和细胞内GSH水平,降低细胞上清液中MDA水平,且呈浓度依赖效应,与AGEs组比较差异显著(P0.01)。结论 GP下调AGEs刺激后HMCs细胞RAGE的异常高表达,同时改善细胞内氧化应激水平,其可能的机制是GP阻断了RAGE介导的AGEs-RAGE-氧化应激信号通路,表现为细胞上清液中MDA水平降低和SOD水平增加及细胞内GSH水平增加。     

莫诺苷对晚期糖基化终末产物加重链脲佐菌素诱导糖尿病肾病保护作用及其机制

目的探讨山茱萸Cornus officinalis中效应成分莫诺苷对晚期糖基化终末产物(AGEs)加重链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病(DN)小鼠的保护机制。方法将STZ诱导成功的DN小鼠饲喂高AGEs饲料,并分别ig给予氨基胍(0.1 g/kg)、二甲双胍(0.2 g/kg)、卡托普利(0.02 g/kg)、莫诺苷低剂量(0.02 g/kg)和莫诺苷高剂量(0.10 g/kg)12周。检测空腹血糖、胰岛素、血清肌酐和尿素氮、血清和肾脏AGEs、24 h尿蛋白等指标,RT-PCR法检测肾组织中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)m RNA表达,Westorn blotting法检测肾组织中RAGE蛋白表达,观察各组小鼠胰腺和肾脏的病理改变。结果莫诺苷可显著降低DN小鼠血糖,改善"三多一少"症状,增加胰岛素分泌,降低24 h尿蛋白、血清尿素氮和肌酐、血清和肾脏AGEs水平,缓解胰腺及肾脏病变,下调肾皮质RAGE m RNA和蛋白的表达。结论莫诺苷具有保护DN小鼠的作用,且高剂量作用较优,其相关机制可能与降低血清、肾脏AGEs水平,下调肾皮质RAGE m RNA和蛋白的表达有关。     

糖尿病大鼠心肌糖基化终产物受体mRNA表达及仙贞片对其影响的实验研究

目的：观察仙贞片对糖尿病大鼠心肌内皮细胞蛋白非酶糖基化终产物受体mRNA（RAGE-mRNA)高表达的影响。方法：采用链脲佐菌素左下腹腔内单次注射造成糖尿病大鼠模型。随机分模型组，仙贞片组及氨基胍组各10只，另设正常对照组10只，应用原位杂交的方法检测RAGE-mRNA表达。结果：模型组大鼠心肌内皮细胞RAGE-mRNA表达灰度值明显增高，出现过度表达，仙贞片治疗后心肌内皮细胞RAGE-mRNA表达灰度值降低。与氨基胍组相近似（P>0.05)。与模型组比较差异显著（P<0.05)。显示仙贞片与氨基胍一样，可显著下调RAGE-mRNA的过度表达，对糖尿病大鼠心肌RAGE-mRNA高表达有明显调节作用。结论：仙贞片对高血糖造成的心肌损害具有保护作用。