离体心脏耗氧量的测定方法

离体心脏耗氧量的测定方法陈维宁，张义军，张薇（药理学教研室２６１０４２）离体心脏耗氧量的检测方法，至今尚未见报道。为此我们以Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ离体心脏灌流实验法对β受体激动剂异丙基肾上腺素和β受体阻滞剂普萘洛尔进行实验，对离体心脏耗氧量的测定方法...     

大鼠langendroff离体心脏局部缺血再灌注模型建立及功能评价

目的建立大鼠Langendorff离体心脏局部缺血再灌注模型的方法并进行功能评价。方法将26只Wistar大鼠随机分成2组,对照组（control,n=12）和模型组（model,n=14）。两组均建立标准的Langendorff离体心脏灌注模型：K-H液持续灌注（95%O2＋5%CO2过饱和,左心室插入球囊压力管）,K-H液持续灌注平衡20min后对照组K-H液持续灌注105 min;模型组同对照组平衡20 min后穿线结扎冠状动脉左前降支第一对角支下缘部位,造成局部停灌（缺血）30 min,而后剪断结扎线复灌（再灌注）75 min。伊文思蓝、TTC染色观察心肌梗死、缺血面积;记录左心室压力及心率变化过程,比较各组平衡20 min、局部缺血30 min、再灌15 min、再灌30 min、再灌75 min的血流动力学指标及灌流液中肌酸激酶（creatine kinase,CK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）漏出量。结果对照组血供正常,模型组局部缺血、梗死明显;对照组、模型组平衡末心肌酶学及血流动力学各参数无明显差异（P〉0.05）,模型组局部缺血、再灌注各个观测时刻心肌酶学及血流动力学参数均与对照组有显著差异（P〈0.05）,说明模型组经历局部缺血、再灌注损伤,心肌酶漏出明显升高,心脏收缩功能、舒张功能受损,心肌耗氧量升高。结论大鼠Langendorff离体心脏局部缺血灌注模型稳定可靠,掌握制作要点及注意事项后,可顺利快速地成功制备,为心肌局部缺血再灌注损伤的研究提供更接近临床疾病状态的实验途径。     

不同糖浓度K-H液对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响

目的:观察不同糖浓度的Krebs-Henseleit (K-H)液对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响.方法:采用Langendorff大鼠离体心脏灌流技术制备心脏缺血/再灌注损伤模型,用不同糖浓度的K-H液灌流心脏,灌流结束后测定心肌组织中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)的活性以及一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)的含量.结果:1.5倍糖浓度组(3g·L-1)能显著提高大鼠心肌组织中LDH、CK、GSH-PX的活性(P＜0.05),提高NO(P<0.05)、降低MDA(P<0.05)的含量.结论:1.5倍糖浓度组(3g·L-1) 对大鼠缺血/再灌注心肌有保护作用,可能是通过增加心肌细胞膜稳定性、增强大鼠抗氧化酶系统功能、松弛血管平滑肌增加血供、抑制心肌缺血/再灌注损伤时的脂质过氧化损伤来实现的.     

丹参素对大鼠离体心脏缺血再灌注心肌能量代谢的影响

SD大鼠随机分为正常灌流组和缺血再灌注组,对大鼠离体心脏进行Langendorff灌流。采用高效液相色谱法测定大鼠心肌组织中辅酶A、乙酰辅酶A及高能磷酸化合物含量,心肌组织中乳酸含量和灌流液中脂肪酸的含量采用试剂盒测定,观察给予丹参素和阳性药雷诺嗪后上述各指标的变化情况。结果表明,雷诺嗪能够增加心肌ATP储备,升高腺苷酸能荷值,降低心肌组织乳酸含量及含脂肪酸组乙酰CoA/CoA比值,抑制脂肪酸的氧化从而优化心肌能量代谢。丹参素可以使大鼠离体心脏ATP含量及腺苷酸能荷值升高,乳酸含量降低,对正常灌流组心肌组织乙酰CoA/CoA比值无明显影响,但可以降低添加脂肪酸的缺血再灌注组心肌组织乙酰CoA/CoA比值,提示丹参素对病理状态下心肌脂肪酸的氧化有一定的抑制作用,从而优化病理状态下的心肌能量代谢,发挥对缺血再灌注心肌的保护作用。     

适用于Langendorff离体心脏灌流大鼠心肌梗死动物模型的建立

目的建立适用于Lansendorff离体心脏灌流大鼠心肌梗死的动物模型，为评价干细胞移植对急性心肌梗死后的心功能变化提供基础。方法选用Sprague-Dawley（SD）大鼠16只，结扎其左冠状动脉前降支中远1/3处，在结扎前后通过MPA多导生理记录仪连续描记心电图；4周后再次开胸进行Langendorff离体心脏灌流测定左室心功能和心肌组织病理学检查；另选仅开关胸后存活的10只SD大鼠作为对照组。结果造模成功率为62．50％（10／16）；心电图动态监测在冠脉结扎后出现ST-T抬高的融合波，30min后可见病理性Q波；4周后Langendorff离体心脏灌流装置系统检测显示左室收缩压峰值（LVSP）、左室内压等容相最大上升及下降速率（＋dp／dtmax，-dp/dtmax）等指标较对照组降低，左室舒张末压峰值（LVEDP）则反之；病理组织切片可见结扎区域心肌纤维排列紊乱、坏死心肌被纤维组织取代。结论通过结扎左冠脉前降支的方法，4周后能够形成稳定的适用于Langendorff离体心脏灌流的心肌梗死动物模型，该模型能应用于干细胞移植对心脏功能影响的研究。     

Langendorff离体心脏灌注模型的制备及应用

离体心脏灌注模型通过主动脉逆行插管灌注灌流液,经冠状动脉血管营养心肌,维持离体心脏持续搏动,可用于器官水平心脏功能研究;或灌注含胶原酶的溶液分离单个心肌细胞用于心肌细胞或分子功能研究。根据研究目标条件选用适宜动物,成功制备离体心脏Langendorff灌注模型,需要选用合宜的灌注液、控制灌注压力流量及温度,娴熟的麻醉取心、主动脉插管及灌注操作,保证离体心脏良好灌注,才能制得功能良好的离体搏动心脏或心肌细胞,用于心脏生理、药理、临床应用基础研究。其与在体心脏相比有一定局限性,但该模型制备简便经济,重复性好,适用于心脏功能学研究。     

微型计算机在离体心脏灌流教学实验中的应用

应用1台微型计算机(IBM-/PC/XT)与2台二道生理记录仪相连,进行离体豚鼠心脏灌流实验。从换能器输出的信号同时输入生理记录仪与计算机,这样,计算机可采集与储存换能器输出的电信号,最终打印出8个实验组的给药前和给药后的心肌收缩力(伏特)与心率(次/分),并标出最低值、最高值和平均值,以及给药前、后心肌收缩力图形,本实验为计算机应用于教学迈出了可喜的一步。随着国家经济发展,微型计算机正在步入实验室。但是,就目前的国力而言,配备的数量还比较少;因此,在这种情况下,如何更好地发挥计算机的作用,在医学教育中,如何把计算机应用于教学实验,把以往的定性实验量化,是计算机应用与开发的一个新课题,对开拓学生思维具有深远的意义。我们在这一方面进行了初步尝试,把一台微型计算机应用于采集与整理八台实验数据并打印,现将有关情况报道如下。     

缺血预处理对离体大鼠心脏缺血再灌注的保护作用

应用Langendorff灌流模型,研究离体大鼠心肌缺血预处理(IPC)对心脏缺血再灌注时心功能指标及乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)含量的影响。结果显示：IPC可使缺血再灌期心肌收缩和舒张性能显著改善,心肌细胞受损明显减轻,心肌MDA含量也明显降低。提示IPC对心肌缺血再灌注损伤有良好的保护作用,而减轻氧自由基对细胞的损伤作用可能是其保护机制之一。     

肾上腺素预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注的保护作用

目的　研究肾上腺素预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用 ,并探索其与剂量的关系。方法　大鼠随机分为 3组 ,每组 8只。A组 :即对照组 ,予静脉输注生理盐水 1ml/kg ,持续 3min ;B组 :静脉输注较低剂量肾上腺素 2 μg/kg ,持续 3min ;C组 :静脉输注较高剂量肾上腺素 2 0 μg/kg ,持续 3min。大鼠心脏稳定后 ,结扎冠状动脉左前降支 ,在Langendorff灌流模型下缺血 40min、再灌注 90min。 结果　B组缺血后心脏功能恢复良好 ,左心室压差为 ( 82 .96± 5 .60 )mmHg ,左室舒张末压为 ( 4.95± 0 .96)mmHg ,A组心脏功能恢复较差 ,左心室压差为 ( 70 .16± 5 .0 7)mmHg ,左室舒张末压为 ( 6.60± 1.0 4)mmHg ,B组较A组明显增高 (P <0 .0 5 ) ;B组灌注流出液中肌酸激酶值较低 ,B组梗死面积为 ( 2 8.70± 3 .41) % ,较A组的 ( 3 7.90± 6.2 9) %明显下降 (P <0 .0 5 )。结论　低剂量肾上腺素预处理在心肌缺血再灌注损伤中具有心肌保护作用     

缺血后处理对急性心肌梗死介入治疗患者的心脏保护作用

目的探讨缺血后处理(I-postC)对接受急诊介入治疗的急性心肌梗死(AMI)患者的心脏保护作用。方法检索1998年1月至2011年5月各中文医学数据库中关于AMI患者接受急诊介入治疗过程中应用I-postC的文献。进行文献筛选和质量评价后,利用RevMan4.2软件进行Meta分析。结果共纳入文献7篇,总病例数为519例,其中I-postC组234例,对照组285例。与对照组比较,I-postC能明显降低AMI患者的肌酸激酶(CK)酶峰(WMD:-356.72IU/L,95%CI:-541.33～-199.11IU/L,P<0.000 01)、肌酸激酶MB型同工酶(CK-MB)酶峰(WMD:-39.45IU/L,95%CI:-54.53～-24.37IU/L,P<0.000 01)以及再灌注心律失常的发生(OR:0.41,95%CI:0.25～0.66,P=0.000 3),并改善AMI患者左心室射血分数(LVEF)(WMD:0.03,95%CI:0.02～0.03,P<0.000 01)。结论 I-postC对缺血心脏有明显的保护作用,具有较大的临床应用价值。     

心脏缺血预处理与后处理的临床应用

心脏缺血预处理与后处理可减少心肌缺血再灌注损伤。心脏缺血预处理可提高心肌缺血耐受能力、减少心肌梗死面积、保护内皮细胞功能、降低术后室性心律失常发生率、减少术后正性肌力药物的使用和重症监护室驻留时间,心脏缺血后处理可减少心肌细胞凋亡并促进左心室收缩功能恢复。文章对心脏缺血预处理与后处理的临床作用、主要机制和影响因素进行综述。     

远隔缺血后适应对急性心肌梗死再灌注治疗患者血小板功能的影响

目的 探讨远隔缺血后适应(RIPostC)对急性心肌梗死再灌注治疗患者血小板功能的影响.方法 入组2015年6月至2016年7月该院71名急性心肌梗死患者,均接受再灌注治疗.患者分为两组:处理组,接受RIPostC;对照组,接受假RI-PostC.在经皮冠状动脉介入术(PCI)之前、RIPostC后即刻、PCI术后24 h、PCI后48 h采集患者的静脉血样,用流式细胞仪检测血小板活化指标CD62P和PAC-1,和血小板凋亡指标线粒体跨膜电位(ΔΨm).结果 处理组PCI术后24 h血小板表面CD62P的表达明显低于对照组(P<0.05),而在其他时间点两组差异无统计学意义(P>0.05);两组血小板PAC-1表达在各个时间点差异无统计学意义(P>0.05);两组患者血小板 ΔΨm在各时间点差异也无统计学意义(P>0.05).结论 RIPostC能一定程度降低急性心肌梗死患者血小板的活化,不引起血小板早期凋亡.     

缺血后适应对急性心肌梗死患者心脏的保护作用

目的 探讨缺血后适应对心脏产生保护作用及与氧自由基和炎症反应的关系.方法 选取我院急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）患者42例,随机分为对照组（A组,n=22例）和缺血后适应组（B组,n=20例）.记录两组患者临床基本特征、冠脉病变情况以及支架置入情况;PCI术前、术后2h、1、2、3d抽取动脉血2 mL送我院检验科生化室检测血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平;术前及术后2h抽取动脉血2 mL离心、保存于-80℃冰箱,待标本收集完后采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）法检测血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及C反应蛋白（CRP）的水平.结果 两组患者临床基本特征、冠脉病变情况及支架置入情况比较无差异.B组术后2h血清MDA下降较A组明显（P＜0.05）,而B组血清SOD升高较A组明显（P＜0.001）,Pearson相关分析发现B组SOD和MDA的变化呈负相关（r=-0.438,P=0.04）,而A组呈正相关（r =0.301,P =0.05）;B组术后2h血清CRP值升高幅度明显低于A组（P＜0.05）,Pearson相关分析发现B组术后血清CRP伴随血清CK-MB下降幅度较A组明显（r=0.187,P＜0.01）.结论 缺血后适应通过降低STEMI患者直接PCI时氧自由基产生以及抑制炎症反应,对心脏发挥保护作用.     

Calcineurin is involved in cardioprotection induced by ischemic postconditioning through attenuating endoplasmic reticulum stress

Background  Ischemic postconditioning (I-postC) is a newly discovered and more amenable cardioprotective strategy capable of protecting the myocardium from ischemia/reperfusion (I/R) injury. Endoplasmic reticulum (ER) is a principal site for secretary protein synthesis and calcium storage. Myocardial I/R causes ER stress and emerging studies suggest that the cardioprotection has been linked to the modulation of ER stress. The aim of the present study was to determine whether cardioprotection of I-postC involves reduction in ER stress through calcineurin pathway.

Methods  In the in vivo model of rat myocardial I/R, myocardial infarct size was measured by triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining and apoptosis was detected using terminal eoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick-end labeling (TUNEL) assay. Expression of calreticulin, C/EBP homologous protein (CHOP), caspase-12, and activation of caspase-12 in myocardium were detected by Western blotting. The activity and expression of calcineurin in myocardium were also detected.

Results  I-postC protected the I/R heart against apoptosis, myocardial infarction, and leakage of lactate dehydrogenase (LDH) and creatine kinase-MB (CK-MB). I-postC suppressed I/R-induced ER stress, as shown by a decrease in the expression of calreticulin and CHOP, and caspase-12 activation. I-postC downregulated calcineurin activation in myocardium subjected to I/R.

Conclusion  I-postC protects myocardium from I/R injury by suppressing ER stress and calcineurin pathways are not associated with the I-postC-induced suppression of ER stress-related apoptosis.

     

缺血后处理对缺血再灌注大鼠心肌梗死和心肌细胞凋亡的作用

目的观察在体情况下缺血后处理(IPC)对兔心肌梗死范围及缺血心肌细胞凋亡的影响,并与缺血预处理(IP)心脏保护作用比较. 方法采用兔心肌缺血/再灌注模型,在缺血后、再灌注前多次短暂再灌/停灌处理. 以Even's blue-TTC法检测心肌梗死范围,TUNEL方法检测缺血心肌细胞凋亡. 结果与对照组相比,缺血后处理明显减小心肌梗死范围(12.5±5.4% vs对照组26.7±6.7%, P<0.01),缺血区心肌凋亡指数明显下降(14.6±7.4 vs对照组30.4±12.3, P<0.05). 结论对于已缺血心肌,再灌前予多次短暂复灌、停灌处理具有与IP类似缩小心梗范围作用,IPC对缺血心肌的保护效应可能与其抑制缺血心肌细胞凋亡有关.     

缺血后处理对减小猪急性心肌梗死面积的作用

目的探讨缺血后处理限制猪心肌梗死范围的作用。方法滇南小耳猪10只,随机分为2个组。实验组(n=5):在X线的监控下,经右股动脉置入冠状动脉球囊导管至左前降支,球囊扩张阻断血流60min,予8次球囊放气30s、充气30s短暂缺血再灌注即缺血后处理;对照组(n=5):不行缺血后处理,直接撤除球囊。测定缺血前、再灌注2h及24h心肌酶学指标。再灌注72h采用2,3,5氯化三苯基氯四氮唑(TTC)染色确定心肌梗死面积。结果再灌注后2h,两组的磷酸肌酸激酶(CK)及乳酸脱氢酶(LDH)较缺血前明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);再灌注后24h,实验组的CK、LDH较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。病理学检查显示缺血后处理组梗死面积明显小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺血后处理有缩小猪急性心肌梗死面积的保护作用。