直肠癌Ku80蛋白的表达及其放射敏感性的临床研究

目的：探讨直肠癌中Ku80蛋白的表达及其放射敏感性的关系。材料与方法：选取手术切除60例直肠癌标本为研究对象，应用免疫组化方法检测各研究对象放疗前后肿瘤组织的Ku80蛋白表达。结果：根据Ku80蛋白表达在各病例中所占百分比平均数的分布情况，以中位数为界分为高、低表达两类。各病理反应与Ku80表达差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：Ku80蛋白表达可能成为预测直肠癌术前放射治疗效果的指标。     

Ku70蛋白在前列腺癌中表达的临床研究

目的探讨Ku70蛋白表达与前列腺癌Gleason评分及前列腺特异抗原（prostate specific antigen,PSA）的关系。方法采用HE染色观察组织学形态,免疫组化SP法检测前列腺癌组织中Ku70蛋白表达,按前列腺癌Gleason评分和血清PSA值分组,比较各组间Ku70蛋白表达水平。结果 58例前列腺癌标本中Ku70蛋白均呈阳性表达,其表达强度与前列腺癌Gleason评分和血清PSA呈明显负相关。结论 Ku70蛋白表达水平能帮助判断前列腺癌预后及评价治疗效果,可用于临床指导个体化治疗。     

RNA干扰Ku70基因对宫颈癌Hela细胞放射敏感性影响的实验研究

目的观察ku70基因短干扰RNA(siRNA)对宫颈癌Hela细胞放射敏感性的影响。方法采用集落形成技术测定不同剂量射线照射对Hela细胞存活率的影响,观察Hela细胞对射线照射的敏感性。采用时定量PCR技术(quantitiv real time PCR,QRT-PCR)检测Ku70 mRNA水平表达。采用Western Blot免疫印记技术检测Ku70蛋白表达。采用RNA干扰(RNAi)技术抑制Hela细胞中Ku70蛋白的表达,观察Ku70蛋白表达下调对Hela细胞放射敏感性的影响。采用集落形成技术测定4.0 Gy射线照射对Hela细胞存活率的影响。进而分析Hela细胞对射线的放射敏感性。结果宫颈癌Hela细胞对1.0-4.0 Gy射线照射不够敏感,有相当高的辐射抗性。量效实验证实,1.0-6.0 Gy射线照射后,HeLa细胞中Ku70 mRNA及Ku70蛋白表达均明显增高。时效实验证实,4.0 Gy射线照射后8 h-72 h,HeLa细胞中Ku70 mRNA及Ku70蛋白表达均明显增高。本实验成功的构建了Ku70基因RNA干扰载体pSilencer-4.1-Ku70,稳定转染HeLa细胞后,有效抑制Ku70蛋白的表达。稳定转染pSilencer-4.1-Ku70干扰质粒并抑制Ku70蛋白表达后,HeLa细胞对射线照射的放射敏感性显著增高(P0.001)。结论 Ku70 siRNA有效下调Ku70 mRNA水平,抑制Ku70蛋白的表达,可明显提高Hela细胞对辐射的敏感程度。本研究结果还提示,Ku70基因可作为衡量宫颈腺癌辐射敏感性指标,为临床合理筛选患者进行放疗、预测放疗疗效提供一条适用途径。     

局部微波热疗对热休克蛋白表达的影响

目的探讨骨肉瘤术中热疗对热休克蛋白表达的影响。方法对61例骨肉瘤组织进行免疫组化染色,观察热休克蛋白HSP-60、HSP-70及GP-94的表达。结果骨肉瘤组织中GP-94表达最高,阳性率为100%,其次为HSP-60,阳性率为94.5%,HSP-70弱表达,阳性率41.8%。热疗后HSP均不同程度增多,以HSP-70较明显,阳性率上升到72%。体外骨肉瘤细胞株加热后热休克蛋白也明显增多。结论局部微波热疗后,3种热休克蛋白在骨肉瘤组织均有表达。     

局部微波热疗对热休克蛋白表达的影响

目的：探讨骨肉瘤术中热疗对热休克蛋白表达的影响。方法：对61例骨肉瘤组织进行免疫组化染色，观察热休克蛋白HSP－60、HSP－70及GP－94的表达。结果：骨肉瘤组织中GP－94表达最高，阳怀率为100％，其 次为HSP－60，阳性率为94．5％，HSP－70弱表达，阳性率41．8％。热疗后HSP均不同程序增多，以HSP－70较明显，阳性率上升到72％。体外骨肉瘤细胞株加热后热休克蛋白也明显增多。结论：局部微波热疗后，3种热休克蛋白在骨肉瘤组织均有表达。     

RNA干扰DNA修复蛋白Ku80对乳腺癌基因HER2表达的影响

目的 构建特异性沉默Ku80基因的真核表达栽体,检测其对乳腺癌基因HER2表达的影响.方法 设计2条表达短发夹RNA的互补DNA序列,分别克隆至真核表达载体pGCsi-U6/Neo/DsRed构建shRNA-Ku80,转化大肠埃希菌DH5α菌株扩增后,提取质粒测序分析,以相同的方法构建并鉴定Ku80基因的真核表达载体pEGFP-N1-Ku80;将2种shRNA-Ku80分别与pEGFP-N1-Ku80共转染HEK293细胞株,通过流式细胞仪检测荧光强度筛选高效敲减靶点,并在基因和蛋白水平观察抑制Ku80对乳腺癌基因HER2表达的影响.结果 成功构建Ku80特异性shRNA表达载体,shR-NA-Ku80对靶点Ku80敲减效率达到59.50％,抑制Ku80表达使乳腺癌基因HER2在基因和蛋白水平明显降低.结论 成功构建shRNA-Ku80载体,在体外可有效抑制Ku80的表达,使癌基因HER2的表达明显下调,提示Ku80有望成为乳腺癌治疗的基因靶点.     

ATM基因经RNAi表达沉默后对肝癌细胞放射敏感性的影响

目的:探讨ATM基因经RNAi表达沉默后对肝癌细胞放射敏感性的影响.方法:将含有ATM干扰片段的慢病毒转染至原发性肝癌细胞株HepG2细胞制成单细胞悬液,经不同剂量照射后培养细胞,观察干扰前后HepG2细胞照射细胞集落形成率,利用Graphpad prism 5.0软件拟合线性二次曲线模型和单击多靶模型,计算出放射生物学参数.结果:HepG2细胞干扰前后D0值分别为:3.087 0±0.033 7、3.237 3±0.036 7,Dq值分别1.749 0±0.060 9、1.507 6±0.022 0,α/β值分别0.753 0±0.120 9、3.451 0±0.034 0,干扰前后D0、Dq、α/β值差异均有显著性.放射增敏比SER=1.309 9.结论:ATM基因的表达水平可影响肝癌细胞的放射敏感性,ATM基因沉默表达后改变了肝癌细胞的放射生物学参数,起到放射增敏作用.ATM基因可能在原发性肝癌放射敏感性中起重要作用.     

GR、Hsp90表达与前列腺癌生物学行为的关系

【目的】探讨糖皮质激素受体 (GR)和热休克蛋白 90 (Hsp90 )与前列腺癌雄激素非依赖发生的关系。【方法】根据临床雄激素阻断治疗效果将前列腺癌 (PC)患者分为雄激素依赖 (ADPC)组和雄激素非依赖(AIPC)组 ,根据手术及病理进行临床分期、病理分级 ,应用免疫组化对手术标本进行GR、Hsp90检测 ,并分析其与临床生物学行为的关系。【结果】AIPC组织中GR、Hsp90表达明显升高 ( P <0 .0 1) ,GR表达与前列腺癌的分化程度密切相关 ,Hsp90表达与病理分级有密切关系。在AIPC组织中GR和Hsp90的表达之间存在明显的正相关 (r =0 .6 6 4 ,P <0 .0 5 )。【结论】GR抑制了前列腺癌细胞的分化 ,Hsp90的高表达促进了前列腺癌的进展 ,两者的表达及活性增高促进了前列腺癌的雄激素非依赖进展     

热疗联合化疗对Raji细胞的体外抑制及Bcl-2表达的作用

目的：观察热疗联合阿霉素对人B细胞淋巴瘤细胞系Raji的体外增殖的抑制作用、凋亡及Bcl-2表达的影响。方法：MTT法确定阿霉素的工作浓度，以该浓度进行化疗或与热疗的联合，选择温度40℃、41℃及42℃，体外作用于Raji细胞。作用前及48h采用台盼蓝拒染法检测肿瘤细胞的存活率；MTr法检测肿瘤细胞增殖的抑制作用；流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡及Bcl-2表达。观察热疗联合阿霉素的抗肿瘤效果。结果：作用48h IC50的药物浓度作为实验的工作浓度。单纯40℃、41℃及42℃热疗60min对Raji细胞系有抑制作用（P〈0．01），热化疗组对Raji细胞有明显的抑制作用（P〈0．01），均随着温度的增高而增强。流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2的表达，热疗组、化疗组及热化疗组的细胞凋亡率均较对照组显著升高，各组之间差异均有非常显著性意义（P〈0．01）；Bcl-2蛋白的表达则下降，各组之间差异也有非常显著性意义（P〈0．01）。结论：热疗联合阿霉素能增强对Raji细胞的体外抑制作用：提高肿瘤细胞的凋亡率，下调Bcl-2蛋白的表达。     

适行放射治疗前列腺癌剂量学疗效比较及对生活质量的影响

目的：应用三维适形放射治疗计划系统评价前列腺癌不同的照射方法，以明确前列腺癌三维适形放射治疗(3D．sCRT)改善生活质量的优势。方法：选用2000-09／2004—09复旦大学附属中山医院45例T1，T2，T3前列腺癌病例，随机分3组，每组15例，分别用常规四野、四野适形、六野适形3个不同放射治疗技术，适行放疗采用CMS公司FOCUS2．6．1三维适形放射治疗计划系统设计治疗计划，计划的总剂量均为70Gy。用剂量体积直方图(DVH)比较靶区剂量和正常组织的受照射剂量差异。结果：3种治疗计划均能满足靶区剂量要求，但六野适形放射治疗计划靶区剂量明显优于常规放射治疗(P&;lt;0．05)，而六野适形放射治疗计划与四野适形放射治疗之间差异无显著性意义(P&;gt;0．05)：常规四野、四野适形、六野适形放射治疗计划适形指数分别为0．33，0．55，0．56；50％直肠的受照射剂量为47．48，39．15，38．45Gy，50％膀胱受照射剂量为49．32，9．42，3．1lGy，股骨头最大剂量为49．84，34．00，26．24Gy。常规放射治疗组患者生活质量评分为(15．2&;#177;2．90)分，而四野适形、六野适形组为(18．30&;#177;3．90)，(19．10&;#177;4．30)分，明显优于常规放射(P&;lt;0．05)。结论：前列腺癌的常规设野方法基本能满足靶区剂量学要求，然而正常组织的受照射剂量明显高于其他两种计划。3D—CRT的主要优势在于减少正常组织的受照射剂量，使靶区剂量分布更合理，并明显改善患者的生活质量。     

JKTBP在前列腺癌细胞系和组织中的表达差异及其意义

目的研究在雄激素依赖性及雄激素非依赖性前列腺癌细胞系、组织和前列腺增生（BPH）组织中JKTBP的表达差异。方法应用RT-PCR和Westernblot比较雄激素依赖性前列腺癌（AD-PCa）细胞系LNCaP及雄激素非依赖性前列腺癌（AI-PCa）细胞系DU145JKTBPmR—NA和蛋白的表达差异;应用免疫组化方法比较BPH、AD-PCa和AI-PCa组织中JKTBP的表达差异。结果在LNCaP细胞系中JKTBPmRNA和蛋白的表达水平均较低,相反,在DU145细胞系中两者均呈高表达,两细胞系间mRNA和蛋白的表达差异具有统计学意义（P〈0．05）。JKTBP在20例BPH组织中均表达阴性;在20例AD-PCa组织中有4例弱阳性,2例阳性,14例阴性;而在6例AI-PCa组织中5例呈强阳性表达,1例弱阳性;三组之间表达差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论JKTBP在AD／AI-PCa细胞系、组织和BPH组织中的表达存在差异,其可能参与了前列腺癌的进展过程,是前列腺癌进展的一个指标。     

TRPM8对前列腺癌细胞PC-3细胞增殖和迁移影响的研究

目的探讨TRPM8对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞增殖和迁移能力的影响。方法PC-3细胞分别转染空载体pcDNA3和目的基因TRPM8,筛选稳定表达细胞株;分别通过免疫荧光和钙成像检测TRPM8蛋白表达、分布以及功能;通过流式细胞术和划痕实验检测TRPM8对PC-3细胞周期和细胞迁移率的影响。结果免疫细胞化学和钙成像提示PC-3-TRPM8细胞表达有功能的TRPM8通道;TRPM8能诱导细胞周期阻滞于G0／G1期,与PC3和PC-3-vector细胞相比,处于G0／G1期的PC-3-TRPM8细胞显著增加（71．89％±3．43％vs54．67％±4．59％、51．48％±3．54％,P〈0．05）,易化饥饿诱导的细胞凋亡（12．56％±1．78％vs4．67％±1．49％、5．28±1．35％,P〈0．05）,并抑制细胞迁移（P〈0．01）。结论TRPM8并不为PC-3细胞存活所必需,相反,高表达的TRPM8能抑制PC-3细胞的增殖和迁移,可能为前列腺癌治疗的一个新靶点。     

Celebrex对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的抑制作用

目的探讨选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂Celehrex对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞株的抑制作用及机制。方法体外培养人雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3,应用MTT法、RT-PCR和ELISA法检测Celebrex对PC3细胞生长的作用及对COX-2mRNA、前列腺素E2（PGE2）和IL-6表达的影响。结果Celebrex在一定时间和剂量范围内可明显抑制PC3细胞的生长,Celebrex无论在时间-效应或剂量-效应关系上均不影响PC3细胞COX-2mRNA的表达,但能明显减少PGE2和IL-6的表达。结论炎症因子的分泌增多可能是雄激素非依赖性前列腺癌细胞生长的动力,Celebrex对COX-2mRNA的表达无明显影响,主要是通过抑制COX-2及其下游炎症因子PGE2和IL-6等的表达而对雄激素非依赖性前列腺癌发挥抑制效应。     

磁共振波谱成像在前列腺癌诊断和放疗中的研究进展

磁共振波谱成像（magnetic resonance spectroscopy,MRS）是一种能够无创地检测活体组织某些代谢物质的成分和含量变化,反映分子水平的病理生理过程的榆查方法。本文就MRS在前列腺癌诊断利放疗中的应用,以及前列腺MRS技术的最新研究进展予以综述。     

激素非依赖性前列腺癌T淋巴细胞亚群及NK细胞水平分析

目的观察激素非依赖性前列腺癌患者的细胞免疫水平。方法激素非依赖性前列腺癌患者36例,以处于激素依赖期前列腺癌患者39例为对照组,分别抽取静脉血,按程序处理后采用流式细胞术检测患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞水平。结果与对照组比较,激素非依赖性前列腺癌患者CD3＋T、CD4＋T及CD8＋T水平均明显下降（P〈0.05）,CD（16＋56）＋N水平亦下降明显（P〈0.05）,而CD4＋/CD8＋T比值上升,但差异无统计学意义;多脏器转移患者CD3＋T、CD4＋T、CD8＋T及CD（16＋56）＋N水平下降更明显,与其他组分别比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论激素非依赖性前列腺癌患者T淋巴细胞亚群水平及NK细胞活性明显下降,监测激素非依赖性前列腺癌患者的细胞免疫水平有助于判断患者病情变化和指导治疗。     

调强适形放射治疗前列腺癌

目的初步探讨调强适形放射治疗前列腺癌的临床应用价值。方法自2001年2月采用NOMOS公司调强放疗设备(孔雀系统)对10例前列腺癌实施调强放疗。5例先行全盆腔常规外照射,调强放疗剂量2.0～3.5Gy/次,每周3～5次,总剂量24.5～45.5Gy;外照射+调强放疗总量54.5～70Gy。5例全程调强放疗,剂量2.0～3.0Gy/次,每周5次,总剂量64～78Gy。结果除1例放疗前血清前列腺特异性抗原正常外,放疗后所有患者血清前列腺特异性抗原均下降。放疗后1月复查肿瘤明显缩小6例,稍微缩小或无变化4例。未发生近期严重的膀胱、直肠副反应。结论调强适形放射治疗可提高前列腺癌放疗剂量,减少膀胱、直肠副反应,是一种安全、有效的治疗手段。     

薄荷醇抑制前列腺癌DU145细胞的增殖和迁移

目的探讨薄荷醇对雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞增殖和迁移能力的影响。方法通过RT-PCR、免疫组织化学和Western blot方法检测TRPM8和TRPA1的表达;MTT和划痕试验检测薄荷醇对DU145细胞的增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测TRPM8对DU145细胞周期和凋亡的影响。结果 RT-PCR、免疫组织化学和Western blot提示TRPM8在DU145细胞中高表达而TRPA1在DU145细胞中不表达;薄荷醇能诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,与未经薄荷醇处理的细胞相比,经100μmol/L薄荷醇处理的细胞培养24、48和72h后,G0/G1期细胞显著增加（49.12%±1.92%vs61.71%±2.70%、77.65%±1.63%、71.81%±2.46%,P〈0.05,P〈0.01）,进而抑制细胞增殖（P〈0.05）,并抑制细胞迁移（P〈0.05）,流式细胞术检测显示薄荷醇并不引起细胞凋亡。结论 TRPM8可能成为前列腺癌治疗的一个新靶点,对于高表达TRPM8的雄激素非依赖性前列腺癌针对TRPM8通道的药物治疗可能比TRPM8基因治疗更为实用,因此,薄荷醇作为一个潜在的抗肿瘤药物也拥有很大的发展前景。