基于GSK-3β/Fyn/Nrf2信号通路探讨槲皮素对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响及内在机制

目的：探究槲皮素在自发性高血压大鼠（SHR）心肌纤维化中的作用机制。方法：50只SHR随机分为SHR组、卡托普利组、槲皮素低、中、高剂量组,每组10只;10只Wky大鼠为Wky组。卡托普利组灌胃给予卡托普利30 mg/kg,槲皮素低、中、高剂量组分别灌胃给予槲皮素20、50、100 mg/kg,Wky组、SHR组给予等量0.9%氯化钠溶液,每天1次,连续12周。尾袖法每2周测定大鼠尾动脉收缩压（SBP）;给药结束,称定心脏质量,大鼠处死,称定其左心室质量（LVM）,计算左心室肥厚指数（LVMI）;比色法测血清超氧化物歧化酶（SOD）、总抗氧化能力（T-AOC）活性、丙二醛（MDA）含量;实时荧光定量-聚合酶链式反应法和Western blot法检测左心室组织中糖原合成酶激酶-3β (GSK-3β)、非受体酪氨酸激酶Fyn、核因子相关因子2 (Nrf2)的mRNA、蛋白表达,以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原（Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ）蛋白表达。结果：与Wky组比较,SHR组大鼠SBP、心脏质量、LVMI显著升高（P<0.01）;血清SOD、T-AOC活性显著降低,MDA含量显著...     

薯蓣皂苷通过GSK3β/Nrf2/HO-1 通路改善尿酸诱导的HK-2 细胞氧化应激损伤的作用及机制研究

目的 探讨薯蓣皂苷（dioscin）对尿酸（uric acid,UA）诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）氧化应激损伤的影响及分子机制。方法 将HK-2细胞分为正常组、模型组（尿酸刺激造模）、条件对照组（尿酸+DMSO）和薯蓣皂苷组（尿酸+薯蓣皂苷）。通过尿酸诱导HK-2细胞氧化应激损伤模型;采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞技术检测细胞活性氧（ROS）水平,Real-time PCR法检测糖原合成激酶3(GSK3β)、核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)在mRNA水平的表达,Western Blot法检测GSK3β、磷酸化糖原合成激酶3(p-GSK3β)、Nrf2及HO-1在蛋白水平的表达。结果 经尿酸刺激后,HK-2细胞的活力明显下降,ROS水平明显升高（均P<0.001）。经薯蓣皂苷治疗后,HK-2细胞的活力增加,ROS水平明显降低（均P<0.001）。在蛋白及mRNA水平上,尿酸刺激后Nrf2和HO-1的表达均下降,薯蓣皂苷干预后Nrf2和HO-1表达均明显增加（均P<0.001）。在蛋白水平上,模型组细胞p-GSK3β/GSK...     

虎杖苷通过调控Nrf2/HO⁃1信号通路减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的探究虎杖苷对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(HIR)的保护作用及其与核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO?1)信号通路的作用关系。方法采用随机数字法将40只SD大鼠分为5组(每组8只),即假手术组、模型组、低剂量虎杖苷组、高剂量虎杖苷组、高剂量虎杖苷联合Nrf2抑制剂组。建立大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,并于造模前连续3 d给予不同剂量虎杖苷或联合Nrf2抑制剂ML385预处理。再灌注6 h后,检测各组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、白细胞介素1β(IL?1β)、白细胞介素6(IL?6)和肿瘤坏死因子α(TNF?α)表达水平以及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;HE染色观察大鼠肝组织病理特征并进行病理评分;TUNEL法检测大鼠肝组织细胞凋亡情况;Western blot检测肝组织核蛋白Nrf2、全蛋白HO?1、Bax、Bcl?2及cleaved caspase?3等表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠肝组织病理评分、血清ALT与AST活性及IL?1β、IL?6和TNF?α水平升高,肝组织细胞凋亡率、MDA水平以及Nrf2、HO?1、Bax、cleaved caspase?3蛋白表达增加,而SOD活性和Bcl?2表达水平降低,组间差异显著。高剂量虎杖苷能显著缓解模型大鼠肝组织损伤,降低炎症水平、氧化应激以及细胞凋亡,并且促进Nrf2及HO?1的蛋白表达,组间差异显著。ML385处理可抑制高剂量虎杖苷的干预效果。结论虎杖苷可能通过激活Nrf2/HO?1信号通路,抑制HIR诱导的炎症、氧化应激以及肝细胞凋亡,改善大鼠肝脏缺血再灌注损伤。     

PI3K/Akt通路在芍药苷抗Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的:研究PI3K/Akt通路在芍药苷对PC12细胞神经保护中的作用。方法:芍药苷组(5,10,20μmol·L-1)预处理30 min,然后加入Aβ25-35(20μmol·L-1)共同作用24 h;抑制剂LY294002(10μmol·L-1)于芍药苷(10μmol·L-1)作用前预处理30 min。用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染检测细胞凋亡率,以及Western blot法检测p-Akt,Bax,Bcl-2,cleaved caspase-3蛋白表达。结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,其保护作用可能是通过上调Akt磷酸化水平,增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制caspase-3等的激活而实现的;抑制剂LY294002可减弱上述芍药苷的保护作用。结论:芍药苷可通过激活PI3K/Akt信号通路对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用。     

基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨高良姜总黄酮对铅诱导HK-2细胞损伤的保护作用

目的 探讨高良姜总黄酮对铅(Pb)诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞损伤的保护作用。方法 体外培养HK-2细胞,MTT法检测不同质量浓度高良姜总黄酮和Pb对HK-2细胞活力的影响。设置对照组、高良姜总黄酮对照组、模型组和高良姜总黄酮组,除对照组和高良姜总黄酮对照组外各组均给予200μmol/L Pb诱导细胞损伤,同时高良姜总黄酮对照组和高良姜总黄酮组给予100μg/mL高良姜总黄酮干预24 h。通过Hoechst 33258荧光染色法联合annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜法观察Pb诱导及高良姜总黄酮干预对细胞内ROS水平的影响,试剂盒法检测细胞内氧化应激指标ROS、MDA、GSH水平和GSH-Px、CAT、SOD活性,ELISA法检测细胞培养上清液IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western bolt法检测细胞Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白及caspase-3蛋白表达。结果 与对照组比较,高良姜总黄酮(12.5～200μg/mL)对HK-2细胞活力没有显著影响。与模型组比较,高良姜总黄酮可减少Pb诱导HK-2...     

芍药苷对H2O2诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用

目的 研究芍药苷对过氧化氢（H₂O₂）诱导人神经瘤母细胞（SH-SY5Y）凋亡的保护作用及其机制。方法 制备H₂O₂诱导的氧化应激损伤模型。相差显微镜观察SH-SY5Y细胞形态的变化;CCK-8法测定细胞存活率;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡;碘化丙啶染色、流式细胞仪检测细胞周期;2′, 7′-二氯荧光素二乙酸盐（DCFH-DA）法检测细胞内活性氧（ROS）;INT显色反应法测定乳酸脱氢酶（LDH）的量;ELISA法检测8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的量;caspase-3催化特异性底物反应检测caspase-3活性。结果 与对照组相比,200 μmol/L H₂O₂作用SH-SY5Y细胞24 h,使细胞存活力显著下降（P＜0.01）,细胞凋亡率上升（P＜0.01）,增殖指数（PI）降低（P＜0.05）,8-OHdG的量上升（P＜0.01）,LDH释放量和细胞内ROS量增加（P＜0.01）,caspase-3活性增强（P＜0.01）。与H₂O₂损伤组相比,芍药苷终浓度为20～40 μmol/L,可浓度相关地减轻H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞上述指标的变化（P＜0.05）;芍药苷10 μmol/L组细胞PI、LDH和8-OHdG量未有明显改观,但能显著减轻H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞毒性、ROS和caspase-3活性（P＜0.05）。结论 芍药苷对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞损伤具有显著保护作用,该作用可能与其清除ROS、减轻DNA氧化损伤、抑制细胞凋亡的caspase通路激活和调节细胞周期有关。     

人参皂苷通过Nrf2/ARE信号通路发挥抗氧化应激作用的研究进展

人参皂苷作为一种从人参属药材中提炼的物质,被视为是人参中的活性成分,因而成为热门的研究目标。而Nrf2/ARE信号通路是迄今为止发现的最为重要的内源性抗氧化应激通路,其调控的下游抗氧化基因在抗氧化应激中发挥了重要的作用。就人参皂苷通过调控Nrf2/ARE信号通路下游多种保护性基因的表达发挥其抗氧化应激的作用进行综述,为今后人参皂苷用于氧化应激的治疗提供科学依据。     

基于ROS/GSK-3β信号通路研究淫羊藿次苷Ⅱ对过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨淫羊藿次苷Ⅱ对过氧化氢诱导的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用。方法:以过氧化氢损伤SH-SY5Y细胞建立氧化损伤模型,以不同浓度淫羊藿次苷Ⅱ(12.5、25和50μmol/L)进行干预。采用MTT法检测细胞活力,采用DCFH-DA检测ROS的水平,TUNEL法和PI染色检测细胞凋亡,免疫印迹实验检测细胞中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)蛋白表达。结果:不同浓度淫羊藿次苷Ⅱ(12.5、25和50μmol/L)能够抑制过氧化氢诱导的细胞死亡并呈浓度依赖性。模型组细胞氧化应激作用和凋亡率较对照组明显增强,给予淫羊藿次苷Ⅱ作用24 h后,能够显著降低活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量,升高超氧化物歧化酶(SOD)活力,抑制过氧化氢诱导的细胞凋亡并上调p-ser9-GSK-3β的蛋白表达,下调p-tyr216-GSK-3β蛋白表达。结论:淫羊藿次苷Ⅱ能够抑制过氧化氢对SH-SY5Y细胞的氧化损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激引起的细胞凋亡并调控ROS/GSK-3β信号通路有关。     

人参皂苷Rg1通过激活Nrf2/HO-1信号通路抑制H2O2-N2a细胞氧化应激损伤的研究

目的 探究人参皂苷Rg1对H2O2诱导的N2a细胞的保护作用及机制.方法 实验分为对照组、模型组、给药组,通过500μmol/LH2O2孵育5h构建体外细胞损伤模型,给药组给予50 μmol/L Rg1.采用CCK-8法检测细胞存活率,运用Hoechst 33258染色法及免疫荧光化学法检测细胞凋亡率,选用试剂盒检测各...     

基于PI3K/Akt/Nrf2信号通路探讨小蓟饮子治疗小鼠放射性膀胱炎作用机制

目的 基于PI3K/Akt/Nrf2信号通路探讨小蓟饮子治疗小鼠放射性膀胱炎（RC）的作用机制。方法 将30只健康雌性SPF级ICR小鼠采用随机数字表法分为11只空白组和19只造模组。空白组不予造模,造模组腹腔麻醉后暴露膀胱部位于X射线辐照仪下以6-MV X射线、2 Gy/min照射10 min建立RC小鼠模型,空白组和造模组各随机取3只处死后,在光镜下观察膀胱组织形态学改变以确定造模成功。造模成功后将造模组按随机数字表法分为模型组和中药组各8只,中药组按10 mL/（kg·d）灌胃1.68 g/mL小蓟饮子浓缩液,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水,连续灌胃7 d。灌胃结束后使用酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定小鼠眼球血氧化应激指标[超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总抗氧化能力（T-AOC）;实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测膀胱组织中磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA相对表达水平。结果 与空白组比较,模型组小鼠眼球血中SOD、T-AOC...     

基于PI3 K/AKT/GSK-3β信号通路探讨益骨汤对去势大鼠骨质疏松的作用

目的:探讨益骨汤通过PI3K/AKT/GSK-3β信号通路治疗去势大鼠骨质疏松的作用机制.方法:选取60只12周龄清洁级Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组、益骨汤组及雌二醇组,每组15只,模型组、益骨汤组及雌二醇素组摘除两侧卵巢制备模型,检测各组大鼠脊柱BMD(骨密度),心脏采血检测BALP(骨碱性磷酸酶)、OC...     

开心散对Aβ1-42诱导Alzheimer病大鼠模型Keap-1/Nrf2/MnSOD信号通路的作用

目的:基于Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap-1)/核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/锰超氧化物歧化酶(Mn SOD)信号通路探讨开心散改善阿尔茨海默病(AD)模型大鼠认知障碍的可能机制。方法:通过侧脑室注射β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42,5μL)建立AD模型。造模后将大鼠随机分为模型组,多奈哌齐组和开心散低、中、高剂量组,并另设正常组。多奈哌齐组给予多奈哌齐片(1.8 g·kg^-1·d^-1),开心散低、中、高剂量组给予开心散制成的药液(10,20,40 g·kg^-1·d^-1),正常组和模型组给予等体积的纯水。采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆力。采用比色法检测血清中髓过氧化酶(MPO),诱导型一氧化氮合酶(i NOS),超氧化物歧化酶(SOD)的表达水平。采用尼氏染色观察海马CA3区病理形态。采用免疫组化(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测海马中Keap-1,Nrf2,Mn SOD的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间显著增加(P<0.01),穿越平台次数和目标象限时间显著降低(P<0.01);与模型组比较,多奈哌齐组和开心散低、中、高组大鼠平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间明显减少(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数和目标象限时间明显增加(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠血清中MPO,i NOS表达水平显著升高(P<0.01),而SOD表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较,多奈哌齐组和开心散低、中、高组大鼠血清中MPO,i NOS表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),而SOD表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。正常组大鼠海马CA3区神经元排列整齐,未有尼氏体固缩。模型组大鼠海马CA3区神经元排列欠整齐,有明显的神经元丢失和尼氏体固缩。多奈哌齐组和开心散低、中、高组大鼠海马CA3区神经元排列较整齐,神经元数量增多,尼氏体固缩减少。与正常组比较,模型组大鼠海马中Keap-1的积分吸光度IA和蛋白水平降低(P<0.01),而Nrf2,Mn SOD的IA和蛋白水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,多奈哌齐组和开心散低、中、高组大鼠海马中Keap-1和Mn SOD的IA和蛋白水平明显升高(P<0.05,P<0.01),而Nrf2的IA和蛋白水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:开心散可通过调节Keap-1/Nrf2/Mn SOD信号通路缓解AD模型大鼠的认知障碍。     

苓桂术甘汤含药血清通过PI3K/Akt信号通路保护H2O2诱导的H9c2细胞损伤

目的 研究苓桂术甘汤含药血清对H₂O₂诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路的关系。方法 采用血清药理学方法,制备空白血清及苓桂术甘汤含药血清。体外培养H9c2细胞,分为空白组、H₂O₂组、20%空白血清组、20%苓桂术甘汤含药血清组,给予相应药物处理12 h,再加入100 μmol·L^-1 H₂O₂继续培养6 h后进行检测。采用细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测20%苓桂术甘汤含药血清对H₂O₂诱导的H9c2细胞增殖活性的影响,荧光探针法检测线粒体活性氧（ROS）水平,比色法检测氧化应激标志物丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt mRNA水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。加入PI3K抑制剂LY294002后对线粒体ROS、LDH、GSH-Px水平,PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达及细胞凋亡率进行检测。结果 与空白组比较,H₂O₂诱导后细胞活力显著降低（P<0.01）,线粒体ROS、MDA及LDH水平显著增加（P<0.01）,CAT、GSH-Px水平则显著下降（P<0.01）,PI3K、Akt蛋白的磷酸化及mRNA水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。与H₂O₂组比较,苓桂术甘汤含药血清能够提高H9c2细胞活力,显著降低线粒体ROS、MDA及LDH水平（P<0.01）,并显著提高CAT、GSH-Px水平（P<0.01）,促进PI3K、Akt的磷酸化及mRNA的表达（P<0.05,P<0.01）,显著减少细胞凋亡率（P<0.01）。苓桂术甘汤含药血清与抑制剂LY294002联用后,逆转了苓桂术甘汤含药血清对H9c2细胞的上述作用（P<0.05,P<0.01）。结论 苓桂术甘汤含药血清保护H₂O₂诱导的H9c2细胞损伤可能与调控PI3K/Akt信号通路减轻氧化应激及细胞凋亡有关。     

红景天苷通过Nrf2-HO-1保护Aβ25-35诱导的原代皮层神经元损伤

目的探讨红景天苷对Aβ25-35诱导的皮层神经元损伤的保护作用。方法:随机将培养成熟的原代皮层神经分为5组:正常对照组、模型组、红景天苷5μmol·L^-1组、红景天苷10μmol·L^-1组、激动剂组。后3组分别使用5μmol·L^-1红景天苷、10μmol·L^-1红景天苷、10μmol·L^-1TBHQ培养24 h,余组正常换液。然后除正常对照组,将余组更换为终浓度为20μmol·L^-1Aβ25-35并维持各药物组终浓度的培养液,24 h后使用CCK8试剂盒测细胞活性、LDH试剂盒测细胞LDH释放量、免疫组化和Western Blot测Nrf2、HO-1、Caspase-3、Bax、Bcl-2等蛋白的表达水平。结果红景天苷5μmol·L^-1组、红景天苷10μmol·L^-1组、TBHQ组都能够提高Aβ25-35损伤后细胞的活性、减少LDH的释放改善细胞损伤,红景天苷10μmol·L^-1组、TBHQ组都能够增加Nrf2、HO-1的表达水平,下调Caspase-3蛋白表达水平、上调Bcl-2/Bax的蛋白表达水平。锌原卟啉ZnPP可逆转红景天苷及TBHQ对Aβ25-35诱导的皮层神经元的保护作用。结论红景天苷对Aβ25-35诱导的皮层神经元细胞的保护作用,可能主要通过改善凋亡相关蛋白、上调Nrf2/HO-1信号通路表达实现。     

芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞氧化损伤的影响

目的:研究芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法:Aβ25-35造成PC12细胞损伤,检测细胞的存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率以及细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的变化.采用流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位的变化.Western blot法检测细胞内HO-1,Cyt C和cleaved Caspase-3蛋白的表达水平.结果:芍药苷组(5,10,20 μmol·L-1)能不同程度地对抗Aβ25-35对PC12细胞的损伤,增加细胞存活率,减少LDH漏出率和MDA含量,增加抗氧化酶SOD,GSH-Px和HO-1的活性,减少细胞内ROS形成,提高线粒体膜电位,减少Cyt C释放和cleaved Caspase-3蛋白的表达.结论:芍药苷对Aβ25-35致PC12细胞损伤具有一定的抑制作用,其作用机制可能与抑制Aβ25-35诱导的氧化应激以及减轻线粒体损伤有关.     

黄芩汤通过Nrf2信号通路对Caco-2细胞抗氧化应激作用的机制

目的：以Caco-2细胞为载体,结合基因干扰(RNAi)技术,通过体外实验进一步验证黄芩汤基于核因子E2相关因子2(Nrf2)通路发挥的抗氧化应激作用。方法：将处于对数生长期的Caco-2细胞,经siRNA转染,构建siRNA Caco-2细胞;将正常Caco-2细胞和siRNA Caco-2细胞与不同浓度的黄芩汤共同孵育后,提取RNA和蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、接头蛋白Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)及Nrf2 mRNA和蛋白的表达;同时,采用比色法和探针法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的表达水平。结果：与空白组比较,仅有黄芩汤400 mg·L^-1组与萝卜硫素(SFN)组可降低正常Caco-2细胞内ROS、MDA含量(P<0.01);而黄芩汤各剂量组与SFN组细胞内SOD与GSH-Px...     

虎杖苷通过PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导人宫颈癌细胞凋亡的初步研究

通过观察虎杖苷对宫颈癌HeLa细胞体外生长的抑制作用,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。不同浓度的虎杖苷(50,100,150μmol·L~(-1))处理HeLa细胞后,采用MTT法检测虎杖苷对HeLa细胞增殖的抑制作用,AO/EB染色法荧光显微镜观察HeLa细胞凋亡的形态学变化;Annexin/PI双标记法检测HeLa细胞凋亡率;流式细胞仪分析HeLa细胞周期分布;RTPCR和Western blot法检测HeLa细胞中PI3K,AKT,mTOR,P70S6K的mRNA和蛋白表达。结果显示,虎杖苷显著抑制HeLa细胞增殖,且具有一定剂量依赖性;虎杖苷能够引起HeLa细胞发生S期阻滞,促进细胞凋亡,显著下调HeLa细胞中PI3K,AKT,mTOR,P70S6K的mRNA和蛋白表达。表明虎杖苷具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路及其下游基因蛋白表达有关。     

基于PI3K/AKT/Gsk3β/p53信号通路探究解毒益智方对Aβ25-35诱导PC12细胞神经毒性保护作用机制

目的 基于PI3K/AKT/Gsk3β/p53信号通路探究解毒益智方对β淀粉样蛋白25-35片段（Aβ25-35）诱导肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞神经毒性保护作用机制。方法 Aβ25-35诱导PC12细胞损伤作为阿尔茨海默病（AD）细胞模型,以解毒益智方含药血清作为治疗药物。实验分为空白组、模型组、解毒益智方（低剂量组、中剂量组及高剂量组）。用噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率及毒性;蛋白免疫印记法（Western Blot,WB）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)蛋白及p53蛋白的表达。结果40μmol/L Aβ25-35为阿尔茨海默病最佳诱导浓度;10%解毒益智方大鼠含药血清为最佳干预浓度;与空白组相比,模型组PC12细胞存活率下降,细胞密度较小,无明显触角,形态类似圆形,且PI3K、p-Akt蛋白表达下调及GSK3β、p53蛋白表达上调（P <0.05）;与模型组相比,解毒益智方低、中、高剂量组细胞存活率增多,细胞悬浮死亡现象好转,以高剂量组效果显著;解毒益智方各剂量组PI3K、p-Akt蛋白表达上调及GSK3β、...     

淫羊藿苷激活Nrf2/HO-1信号通路减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤研究

目的探究淫羊藿苷对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤的保护作用及其分子机制。方法将SPF级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为青年对照组(2月龄)、衰老模型组(16月龄)和淫羊藿苷低、高剂量组(2、6 mg/kg,16月龄),每组8只,给予普通或含药饲料饲养4个月,禁食12 h后处死大鼠。HE染色法观察睾丸组织形态变化;黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法检测睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)水平;免疫荧光法检测睾丸组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)及DNA损伤相关蛋白γ-H2AX的表达和定位;Western blotting法检测睾丸组织中Nrf2及其下游相关蛋白血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、γ-H2AX和DNA损伤修复相关蛋白p-p53和p21表达水平。结果HE染色结果表明,淫羊藿苷能明显改善自然衰老大鼠睾丸组织形态学变化,显著提高衰老大鼠睾丸组织SOD活力,降低MDA水平;免疫荧光结果显示,淫羊藿苷能明显上调衰老大鼠睾丸组织中各级生精细胞内Nrf2蛋白表达水平,明显下调初级精母细胞和精原细胞中γ-H2AX蛋白表达水平;Western blotting结果显示,淫羊藿苷能显著上调衰老大鼠睾丸组织中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平,下调γ-H2AX、p-p53和p21蛋白表达水平。结论淫羊藿苷可减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤,其机制与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

萝卜硫素通过Nrf2/ARE通路对人结肠上皮细胞氧化应激损伤的调控作用

目的:探讨萝卜硫素对H_2O_2诱导的氧化应激损伤人结肠上皮细胞的保护作用。方法:体外原代培养人结肠上皮细胞,并将细胞分为空白对照组、H_2O_2诱导组、H_2O_2+低剂量萝卜硫素组、H_2O_2+中剂量萝卜硫素组及H_2O_2+高剂量萝卜硫素组,用H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,CCK8法检测萝卜硫素对细胞存活率的影响,同时检测细胞匀浆中的氧化应激产物,免疫印迹法检测核转录因子(Nrf2)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)、醌氧化还原酶1(NQO1)及血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达水平。结果:H_2O_2能诱导人结肠上皮细胞氧化应激损伤;与H_2O_2诱导组相比,不同剂量萝卜硫素可增加细胞存活率、降低氧化应激产物丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的释放并增强超氧化物歧化酶(SOD)酶活性,差异均有统计学意义(P0.05);萝卜硫素可增强Nrf2转位,诱导GCLC、NQO1及HO-1蛋白的表达,与H_2O_2诱导组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:萝卜硫素可降低人结肠上皮细胞的氧化应激损伤,其作用机制可能与活化Nrf2/ARE信号通路有关。