实时荧光PCR技术在手足口病病毒核酸检测中的应用

目的探讨实时荧光RT-PCR和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测手足口病病毒核酸的应用价值。方法采集2009年5-8月奉贤区幼儿疑似肠道病毒感染者粪便和咽拭子标本,分别用实时荧光RT-PCR和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对肠道病毒EV71、Coxsackie A16(CoXA16)病毒进行检测。结果在对38例疑似病例的粪便和咽拭子标本进行检测时,用实时荧光RT-PCR方法检测到EV71、CoXA16阳性标本为63份,阳性率为82.89%;而用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测到52份阳性标本,阳性率为68.42%。结论实时荧光RT-PCR技术具有特异性强、灵敏度高的特点,且能在采样后数小时内检测到病毒的RNA,从而达到快速诊断的目的。因此,该方法对肠道病毒的流行病学调查及控制起重要作用。     

实时荧光PCR检测EV71病毒核酸的临床应用价值

目的:讨论实时荧光PCR技术检测EV71病毒核酸的临床价值。方法:对128例临床诊断为手足口病患者采用实时荧光RT-PCR技术检测患者粪便中EV71病毒核酸,分析结果与临床诊断相符性。结果:128例临床诊断为手足口病的患儿经实时荧光RT-PCR检测EV71病毒核酸阳性者65例(50.78%)。结论:实时荧光RT-PCR技术是诊断手足口病的主要实验方法,但该方法存在一定的漏检,临床诊断手足口病时应密切结合临床以防漏诊。     

实时荧光PCR技术在手足口病病毒核酸检测中的应用

目的通过对2010年4～8月北京市怀柔区手足口病病原学监测数据的分析,了解北京市怀柔区手足口病流行趋势,为该地区手足口病防治提供科学依据,同时探讨实时荧光RT-PCR在检测手足口病毒核酸中的应用价值。方法采集2010年4～8月怀柔区疑似肠道病毒感染者咽拭子和疱疹液标本,用实时荧光RT-PCR方法对人肠道病毒(包括EV71、CoXA16)进行核酸检测。结果 2010年4～8月共采集121例标本,检出肠道病毒EV71型87例,CoXA16型19例,肠道病毒通用型6例,阴性9例。结论 2010年4～8月怀柔区手足口病毒以肠道病毒EV71型为主。实时荧光RT-PCR技术具有特异性强、灵敏度高的特点,且能在采样后数小时内检测到病毒的RNA,从而达到快速诊断的目的,该方法对手足口病的治疗及疫情的有效控制提供有力的病原学支持。     

实时荧光定量PCR检测EV71肠道病毒在不同类型样本中检测率的分析

目的 探讨肠道病毒71型(EV 71)检测方法和样本收集对检测结果的影响.方法 采集疑拟患者鼻咽拭子和大便样本,应用实时荧光定量PCR方法检测.结果 结果EV71型肠道病毒大便检出率为46.2％,鼻咽拭子为5.61％,大便的检出率明显高于鼻咽拭子；差异有统计学意义(x2=61.51＞x20.01.1,P＜0.01).结论 对HFMD的诊断建议首选采集粪便标本,应用实时荧光定量PCR方法进行检测,可减少漏诊率,提高灵敏度.     

实时荧光定量PCR检测手足口病肠道病毒71型与柯萨奇病毒16型临床分析

目的 探讨肠道病毒71型(EV71)与柯萨奇病毒A 16型(Cox A16)实时荧光定量PCR检测在早期诊断手足口病(HFMD)中的意义,为临床治疗提供参考依据。方法 对2012年3月-2013年6月157例疑似HFMD患儿的粪便、疱疹液、鼻咽拭子样本进行EV71、Cox A16、肠道病毒(EV)的实时荧光定量PCR检测,根据试剂说明书的标准判定;采用SPSS16.0进行数据分析。结果 粪便中EV、EV71、Cox A16的检出率分别为94.09%、42.04%、38.85%,高于鼻咽拭子样本,差异有统计学意义(P<0.05);而粪便与疱疹液中EV、EV71、Cox A16的阳性率相比,差异无统计学意义。结论 对HFMD患儿早期诊断、早期治疗,应该首选粪便标本采用实时荧光定量PCR法检测EV、EV71、Cox A16。     

肠道病毒EV71荧光定量RT-PCR法快速检测

手足口病 (HFMD)是由多种人肠道病毒感染引起,其中以EV71及Cox A16型最为常见 (1-3).由于肠道病毒传统的检测方法是病毒分离中和法定型,繁琐费时,不适合早期诊断.逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)方法敏感、特异、快速,但由于PCR扩增产物需要凝胶电泳检测,易造成实验室交叉污染.本研究建立的肠道病毒EV71TaqMan荧光定量RT-PCR方法,具有敏感、特异、快速和实时在线检测等特点,较RT-PCR法具有更多的优点,适合于突发疫情的实验室早期诊断,该方法的建立为手足口病感染实验室检测提供了有效的分子生物学检测手段.现报告如下.     

CA6阳性与EV71、CA16阳性手足口病患儿临床特征分析

目的 分析柯萨奇病毒A6型(CA6)阳性与肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16型(CA16)阳性手足口病患儿的临床特征.方法 选取商洛市中心医院2014年1月至2016年12月收治的1528例手足口病患儿,通过实时荧光定量聚合酶链反应法检测患儿肠道病毒核酸,以分析CA6、EV71、CA16三种病毒引起的手足口病患儿的临床特征.结果 在1528例手足口病患儿中,经病原学确诊出374例CA6阳性患儿、673例CA16阳性患儿、481例EV71阳性患儿.CA6阳性患儿发病平均年龄(t值分别为6.34、5.85)、齿龈部疱疹分布(χ2值分别为5.65、5.23)均低于CA16、EV71阳性患儿(均P<0.05),且发热分布均高于CA16、EV71阳性患儿(χ2值分别为8.56、8.23,均P<0.05).CA6阳性患儿C反应蛋白和WBC升高分布均高于CA16、EV71阳性患儿(χ2值分别为5.34、5.89;6.34、6.83,均P<0.05).结论 CA6已发展成一种手足口病患儿新型的流行病原,且其临床特征与因EV71及CA16引起的手足口病有所不同,可作为临床诊断的依据.     

一步法三重荧光PCR检测手足口病病毒方法的建立及其运用

目的 建立一种三重荧光PCR检测手足口相关病毒的方法,并对收集的样本进行检测.方法 分别用普通PCR和单荧光PCR进行引物探针的测试,然后将确定的引物和探针混合进行三重荧光PCR测试和标本的检测.结果 建立了一种三重荧光PCR方法,利用该方法对94份标本进行检测,其中肠道病毒71型(EV71) 37.23％,科萨奇病毒A16(COX A16) 35.11％,其他肠道病毒4.26％.结论 本研究建立的三重荧光PCR可以特异地检测出引起手足口病的EV71和COX A16以及其他肠道病毒.     

TaqMan荧光定量RT—PCR法快速检测肠道病毒EV71

手足口病（Hand foot mouth disease，HFMD）是婴幼儿常见的传染病，由人肠道病毒属的柯萨奇病毒（Coxsaekie vials）A组16、4、5、7、9、10型，B组2、5型；埃可病毒（ECHOviruses）和肠道病毒71型（EV71）感染引起，其中以EV71及CoxA16型最为常见。EV71感染儿童引起的手足口病大部分病例病情较轻，可治愈，但少数患者可出现心肌炎、无菌性脑膜炎和肺水肿等并发症，     

实时荧光定量PCR在手足口病原体检测中的应用探讨

目的：：对手足口病患儿施行病原体检测时运用荧光定量PCR实时测定法（FQ-PCR法）的效果及有关情况探析。方法：以2016年5月-7月因疑似感染手足口病进入本院施行病原体测定的患儿127例为评估对象,依据年龄段情况将其划分成A组（年龄不超3岁者）77例、B组（年龄间于3-6岁间者）50例,运用FQ-PCR法对疑似患儿的疱疹液、咽拭子实施相应指标值的测定;并以ELISA法对患儿血清展开检测,经比对两法的检出率数据情况,系统评估FQ-PCR医疗检测效果。结果：127例患儿咽拭子样本、疱疹液样本在FQ-PCR法测定下,EV检测有101例显阳性,占79.53%;当中A组有67例,占87.01%,B组有34例,占68.00%。A组患儿阳性检出率超出B组,差异明显（P＜0.05）。咽拭子样本检出阳性率是69.60%,疱疹液样本检出阳性率是81.97%。FQ-PCR法检出EV71阳性病例超出ELISA法,差异显著（P＜0.05）,检出COXA16阳性病例和ELISA法较接近,没有较大差异（P＞0.05）。结论：FQ-PCR 法践行于HFMD病原体测定及评估中,能强化病原学指标监控力度,以辅助当地HFMD疫情预测、防范工作的有效进行。     

手足口病患儿EV71的检测及分离鉴定

目的了解手足口病患儿感染EV71的情况,为科学防治疾病提供依据。方法采集手足口病患儿的咽拭子标本,接种于RD细胞,出现致细胞病变效应(CPE),运用RT-PCR方法,EV71引物检测样本和细胞培养物上清。结果标本直接用RT-PCR扩增,阳性率为30%(6/20),细胞培养后出现CPE的阳性率为45%(9/20),培养后经RT-PCR扩增阳性率为70%(14/20)。结论病毒分离和RT-PCR方法联合应用可以提高肠道病毒EV71的检出率,RT-PCR方法可以满足病毒流行期间同时处理大量样本的需要。     

手足口病EV71和CoxA16检出率的影响因素分析

目的了解厦门市手足口病病原检出率的影响因素。方法 2009年至2010年,收集哨点医院病例的咽拭子和血清标本1 502人份,用荧光定量RT-PCR法进行核酸检测,分析EV71和CoxA16检出率的影响因素。结果 EV71和CoxA16总检出率为63.5%（954/1 502）。咽拭子检出率高于血清;发病3 d内的标本检出率较高,时间间隔越久检出率越低;专科医院检出率高于综合医院;年龄别检出率呈抛物线形。结论标本类型、采集时间、医院类型、患者年龄与EV71和CoxA16检出率相关。     

重症EV71手足口病2例报告

手足口病是由肠道病毒引起的传染病,多发生于5岁以下的婴幼儿,可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹、溃疡,在个别患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜炎等并发症[1].本科2008年与2009年收治2例重症EV71手足口病患儿,经积极抢救后痊愈出院,现报告如下.     

肠道病毒71型手足口病病毒3种检测技术比较研究

目的探讨不同方法在肠道病毒71型（EV71）检测中的效果对比分析,方便对EV71做出及时而有效的诊断,为该病快速鉴别诊断奠定基础。方法采用ELISA、荧光定量RT—PCR、RT—PCR3种方法对EV71病毒特异性和灵敏度进行综合分析。结果通过对比分析,ELISA方法检出阳性18份,阳性率为11．32％;实时荧光定量PCR方法检出阳性53份,阳性率为33．33％;RT—PCR方法检出阳性51份,阳性率为32．08％。结论3种方法中实时荧光定量PCR方法具有较高的灵敏度及特异性,更具优势,更能满足临床需要。     

乙型肝炎病毒核酸实时荧光PCR超敏检测方法的建立与评价

目的应用Taq-man实时荧光PCR技术,建立一种超敏检测乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)载量的方法(以下简称超敏试剂),并对其临床应用进行评价。方法对比GeneBank中HBV DNA基因组序列,使用Primer 5.0软件在其S区和C区分别设计一对特异性的引物和探针,应用Taq-man探针技术,优化反应体系和反应条件。并收集195例临床样本与某国产试剂进行平行检测,采用相关性分析和Bland-Altman等方法对检测结果进行分析。结果建立的HBV DNA超敏检测方法灵敏度达10 IU/mL,线性范围20～1×10~9IU/mL,准确性为100%,覆盖型别为A、B、C、D、E、F、H,批内和批间变异系数在5%以内。195例临床样本检测结果显示,与某国产试剂相比,超敏试剂的阳性符合率为99.45%,阴性符合率为91.67%,总符合率为98.97%(Kappa值为0.911 2,P<0.05)。超敏试剂与某国产试剂具有很强的相关性(r=0.979 1,P<0.000 1)。结论本研究成功建立了一种HBV DNA实时荧光PCR检测方法,具有很高的临床应用价值。     

应用荧光定量PCR技术检测肠道病毒71型

[目的]探讨实时荧光RT-PCR和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肠道病毒EV71病毒核酸的应用。[方法]采集2008年5月深圳市龙岗区幼儿疑似肠道病毒感染者粪便和疱疹液标本,分别用实时荧光RT-PCR方法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对肠道病毒EV71病毒进行检测。[结果]在对16例已收集到的患者的粪便、疱疹液标本进行检测时,用实时荧光RT-PCR方法检测到8份阳性样本,阳性率为50.O%(8/16),而用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测到5份阳性样本,阳性率为31.3%(5/16)。[结论]实时荧光RT-PCR技术具有特异性强,灵敏度高的特点,且能在采样后数小时内检测到病毒的RNA,从而达到快速诊断的目的,因此该方法对肠道病毒的流行病学调查及治疗起重要作用。     

肠道病毒EV71和Cox A16型所致手足口病临床特点比较

目的了解肠道病毒EV71和Cox A16所致手足口病临床特点,为早期临床诊断提供依据,以减少重症病例的发生。方法从常州市2014-2015年0~14岁儿童手足口病实验室确诊病例的临床资料中。收集135例EV71和225例Cox A16病例进行比较。结果两组病例年龄构成,发热、出疹、呼吸急促、精神差、呕吐、肢体震颤、脑膜刺激征等症状和重症率差异均有统计学意义(P值均0.05)。将有意义的9项指标进行多因素logistic回归分析,发现发热、呕吐和脑膜刺激征对临床鉴别有意义。结论手足口病重症病例以EV71病毒感染为多见,出现持续高热数天不退、频繁呕吐应考虑该病毒感染的可能性。     

EV71与Cox A16病原体RT-PCR检测在预防手足口病传播中的意义

目的探讨EV71和Cox A16病毒的RT-PCR检测在早期诊断与预防手足口病传播中的应用价值。方法选择2013年11月至2014年10月间疑似手足口病患儿120例纳入疑似组,同期排除手足口病诊断患儿100例纳入对照组,均行粪便RTPCR检测,比较两组EV、EV71、Cox A16的检出率。结果疑似组的EV、EV71、Cox A16和EV71联合Cox A16检出率分别为100.0%、37.5%、31.7%和11.7%,均显著高于对照组的15.0%、0.0%、0.0%和0.0%,两组间差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 EV71和Cox A16的RT-PCR检测对于早期评价手足口病发病作用明显,有利于早期发现和隔离患儿,预防疫情传播扩散。     

Real-Time RT-PCR检测手足口病肠道病毒方法的建立及应用

目的建立手足口病肠道病毒的Real-Time RT-PCR法,为手足口病病毒快速、准确检测提供一种新方法。方法采用卫生部《手足口病预防控制指南》(2009年版,以下简称《指南》)推荐的RT-PCR法对湖南省株洲市2009年3-8月间发生的82例临床诊断手足口病患儿的82份标本进行人肠道病毒、柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型特异性核酸的检测,同时采用实时荧光定量RT-PCR(Real-Time Quantitative RT-PCR,简称Real-TimeRT-PCR)进行复检,比较二者的实验结果 ,分析Real-TimeRT-PCR的准确度和灵敏度。结果 Real-TimeRT-PCR检测82份标本肠道病毒、柯萨奇病毒A16型、肠道病毒71型,与RT-PCR比较,二者差异有统计学意义(λ=4.09,P0.05),Real-TimeRT-PCR法检出率明显高于RT-PCR法。结论本研究建立了一种灵敏、特异、简单易行的Real-TimeRT-PCR检测手足口病肠道病毒的方法 ,为手足口病病毒的快速诊断提供了新的方法 。     

手足口病患儿EV71的检测与其临床分析

目的了解仙居县2008年6月-2009年6月儿童手足口病病例不同标本中肠道病毒EV71和CoxA16的感染情况,为手足口病的治疗和预防控制提供依据。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光RT-PCR方法,对145例疑似手足口病的咽拭子、疱疹液及脑脊液标本进行手足口致病病毒进行检测,全部取咽拭子145份,49份同时取疱疹液,47份同时取脑脊液,进行EV、EV7I和CoxA16的检测,最后对重症病例的病毒核酸测序,并进行基因分型。结果 145份疑似样品中,39份为肠道通用病毒阳性,其中21份样品EV71阳性,6份样品CoxA16阳性;咽拭子、疱疹液、脑脊液的检出率分别为28.6%、28.6%、12.8%;3例重症病例均只检出肠道病毒EV71,阳性率为100.0%。结论采用咽拭子及其疱疹液标本检出率比较,差异无统计学意义,且阳性检出率高于脑脊液标本,仙居县肠道病毒夏季高发,感染以EV71和CoxA16为主,手足口病重症感染病毒为EV71的C4亚型。