烟草黑胫病拮抗放线菌的分离与筛选

从堆沤过圈肥的土壤中采集样品,用平板法对所采样品进行菌株分离、纯化培养,共获得原始放线菌101株,再通过室内拮抗试验,从随机28株试验菌株中初步获得16株具有一定拮抗作用的菌株。对拮抗效果较好的6株菌株以及抑菌圈较小、但其菌落较大的A15菌株进一步做盆栽防治试验。结果表明,A6的防治效果最好,达到55.26%,其它菌株效果一般。     

烟草内生细菌118菌株对烟草黑胫病的诱导抗性研究

从烟草根部分离到的内生细菌118菌株,对8-10叶期烟苗进行诱导,6 d后挑战接种,防效达41.79%;对4-6叶期烟苗施菌后,抗性相关酶POD、PPO、PAL活性明显上升.第13d时,分别比对照上升29.65、197.01和21.05个酶活性单位.     

烟草内生细菌对烟草病害的拮抗和防治作用

利用烟草内生细菌进行了防治烟草黑胫病的试验,获得了对烟草黑胫病有较好防效的内生细菌菌株118、57、93等,其防效分别达69.23%、61.53%和65.38%。其中118菌株具有较广的抗菌谱,对几种主要的烟草病害的病原菌均有拮抗作用,对烟草疫霉菌有明显的拮抗作用,而且对烟草有促生效果,鲜重增产率为13.10%。     

防治烟草黑胫病的根际细菌分离与筛选

从云南昆明、玉溪、曲靖、楚雄、大理等地13份烟田根际土样中,经分离纯化得到753株根际细菌.通过对黑胫病病原(Phytophthora parasitica.var.nicotiana)的平板拮抗筛选,共得到有抑制病原菌生长的根际细菌97株,用细菌悬液浸泡烟草种子,通过测定烟草种子发芽率和对烟草苗期的促生作用,选出有较好促生作用的细菌19株,再进行温室盆栽测定,选出对烟草黑胫病有防病促生作用的根际细菌6株,分别编号为RB-1、R4、RB-42、RB-59、RB-78、RB-89.在研究过程中发现,从明胶、几丁质培养基和从根表上分离到的细菌,其防病促生作用的机率较高.在防治苗期黑胫病的温室试验中,RB-42和RB-89菌株的相对防治效果分别达到42.22%和37.78%.通过形态学与生理生化初步的鉴定,RB-42、RB-78、RB-89鉴定为假单胞杆菌(Pseudomonas spp.),R4鉴定为芽孢杆菌(Bacillus sp.).     

烤烟品种K326内生细菌分离、抗黑胫病菌株筛选及种群组成分析

从烤烟品种K326的不同生长时期分离内生细菌1000株,以烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)为靶标,共筛选出168株拮抗菌,这些内生细菌对黑胫病菌的抑菌率在12.54％～50.14％之间.苗期和团棵期的内生菌含量较高,但在开花和成熟期时降低了一个数量级,而拮抗菌数量呈上升趋势.对168株拮抗菌的16SrRNA基因序列进行RFLP分析,共产生10种带型.根据RFLP带型选取39株进行16S rRNA基因序列测定和系统发育分析.结果表明,这168株生防内生细菌归于2大类群:Firmicutes和Actinobacteria.Firmicutes类群中的芽孢杆菌属(Bacillus)是优势属,共6种RFLP带型,150个菌株,包括Bacillus amyloliquefaciens subsp,plantarum,Bacillus tequilensis,Bacillus methylotrophicus,Bacillus cereus,Bacillus thuringiensis和Bacillus aryabhattai. Bacillus amyloliquefaciens subsp,plantarum和Bacillus methylotrophicus的出现频率最高,共126株,占该属总菌株数的78.75％.其余18个菌株分属于4个种:即Brevibacillus formosus,Brevibacillus parabrevis,Pseudomonas umsongensis和Pseudomonas aeruginosa.     

烟草黑胫病不同植物源生防菌的筛选及防效测定

植物内生菌是生防菌剂的宝贵资源,在作物病害生物防治中具有重要作用。本文采用稀释平板法从8种不同植物茎组织中分离内生菌,采用二次平板对峙法筛选拮抗菌,通过形态观察、生理生化反应及16S rDNA分析鉴定菌种,利用盆栽和田间试验检验其生防防效,并测定其促生作用。结果表明:分离出内生菌共89株,其中烟草疫霉菌拮抗效果较好的菌株6株,分别为J11、J21（构树）,T3、T23（马铃薯）,G3（枸杞）和KY（烟草）。KY被鉴定为亚麻假单胞菌（Pseudomonas lini）,J11、G3和T3为蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）,T23为短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）,J21为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。KY、T23及J11的相对防效较好,盆栽相对防效分别为75.41%、63.93%、70.49%,大田相对防效分别为63.62%、51.11%、52.67%,且对烟株的株高、茎围均有促生作用。      

烟草黑胫病拮抗真菌的筛选及活性评价

为获得更多防治烟草黑胫病的拮抗真菌,从烟草黑胫病发病烟株根际土壤分离20株真菌,通过平板对峙法筛选,发现菌株ZP2-1、ZP2-3、ZP2-4、GZ3、GZ7对烟草黑胫病菌具有较好的抑制效果。形态学和分子生物学分析表明,ZP2-1为里氏木霉（Trichoderma reesei）、ZP2-3为拟康宁木霉（Trichoderma koningiopsis）、ZP2-4为黑曲霉（Aspergillus niger）、GZ3为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）、GZ7为红棕肉座菌（Hypocre rufa）。ZP2-4具有较强分泌纤维素酶和蛋白酶的能力且固体发酵产孢能力显著（p<0.01）高于其余4株菌。ZP2-1、GZ3、ZP2-4固态发酵产物纤维素酶活性相当且显著（p<0.01）高于ZP2-3和GZ7。田间试验结果显示,ZP2-1、GZ3、ZP2-4对烟草黑胫病田间防治效果分别为59.50%、61.82%、85.00%。     

防治烟草黑胫病的药效试验

测定了"百抗"、"东旺黑达"、活性菌肥、"金雷多米尔"、"安克"、"宝大森"、58%"甲霜灵锰锌"、72%"甲霜灵锰锌"等药剂对烟草黑胫病的防治效果。结果表明,"东旺黑达"、"宝大森"、"58%甲霜灵锰锌"、"活性菌肥"、72%"甲霜灵锰锌"、"安克"对烟草黑胫病的防效均较好。其中,"东旺黑达"的防效最好,在病害盛发期的相对防效达到67.48%,生物农药"百抗"和"活性菌肥"防效也分别达到62.71%和65.11%。     

Biolog GEN Ⅲ微孔板在烟草青枯病、黑胫病生防细菌鉴定中的应用

采用Biolog全自动微生物鉴定系统的Biolog GEN III微孔板对24株烟草青枯、黑胫病未知生防细菌进行了鉴定。结果表明,鉴定准确率为100%,其中解淀粉芽孢杆菌12株(Bacillus amyloliquefaciens)、饲料类芽孢杆菌3株(Paenibacillus pabuli)、枯草芽孢杆菌2株(Bacillus subtilis)、萎缩芽孢杆菌2株(Bacillus atrophaeus)、地衣芽孢杆菌2株(Bacillus licheniformis)、短小芽孢杆菌1株(Bacillus pumilus)、亨氏普罗威登斯菌1株(Providencia heimbachae)。     

烟草病原真菌拮抗性内生细菌的筛选

为利用有益微生物防治烟草某些病害,从7个烤烟品种(云烟85、红大、K326、K346、RG11、G28和NC89)不同生育期的根、茎、叶中分离获得内生细菌1729株,并通过平板对峙培养法筛选出对烟草灰霉病菌、黑胫病菌、赤星病菌和炭疽病菌有较好拮抗活性的菌株61、38、52和55株。结果显示,在各个品种、各个时期及根、茎、叶中均有不同数量拮抗这4种病原菌菌株存在。     

拟氨基多糖抑菌剂K1、K2对烟草黑胫病原菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)的抑制效果研究

采用生长速率法测定了拟氨基多糖类抑菌剂K1、K2对烟草黑胫病原菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)的抑菌效果。结果表明:K1、K2对烟草黑胫病原菌均有显著的抑制作用,且抑制效果随K1、K2浓度的增大而增强;20 mL/L的K1、K2对烟草黑胫病原菌的抑制率分别为50.58%、84.68%,EC50分别为26.15、4.87 mL/L。     

烟草黑胫病菌研究进展(一)

系统综述了烟草黑胫病菌的发现与命名、分类、生物学特征、分布与为害、致病机理、生理特性及寄主范围等方面的最新研究进展。     

抑制烟草黑胫病的混合菌株优化

通过正交试验筛选混合菌株有效抑制烟草黑胫病病原菌（Phytophthora parasitica）菌丝的生长,其中1107、1205、1601、5801和7403五株芽孢杆菌（Bacillus）在室内NYBD培养基上培养,参照5因素3水平正交试验设计进行混菌比例优化。结果表明,1107菌株在生物量和抑菌活性方面都表现出了显著性。5株芽孢杆菌（1×108 CFU/mL）的最优组合为芽孢菌株1107、7403、1601、5801的添加量均为1.2 mL,芽孢菌株1205添加量为0.6 mL。在此优化条件下,生物量（OD600 nm值）为3.18±0.02,抑菌圈直径为（24.22±0.68） mm,分别比单独培养的菌株或其他混合菌株都显著提高。     

烟草黑胫病菌研究进展(Ⅲ)

综述了烟草黑胫病菌抗甲霜灵菌株群体动态及抗性水平 ,抗药性产生的原因 ,抗甲霜灵菌株的生物学性状遗传与变异 ,甲霜灵对烟草黑胫病菌的毒性作用方式 ,烟草黑胫病菌对甲霜灵抗性的遗传稳定性 ,对甲霜灵的抗药性治理策略和核酸分子杂交技术、PCR、RAPD、RFLP、ELISA技术在烟草黑胫病菌研究中的应用以及烟草黑胫病菌毒性遗传等方面的最新研究进展。     

烟草疫霉生防细菌的筛选及鉴定

为获得防治烟草黑胫病的生防菌株,通过对峙平板法,从烟田土壤中分离出1株对烟草疫霉具有很好抑菌作用的细菌B40-3.培养3 d后,该菌株对烟草疫霉抑菌带宽度为0.9 cm,抑菌圈半径为2.3 cm,并对其余12种植物病原真菌有很好抑制作用.该菌株在LB液体培养基中,37 ℃,210 rpm条件下培养40 h,OD值达到最大值.依传统生理生化反应鉴定,B40-3属于枯草芽孢杆菌.     

土壤中烟草疫霉的分离与量化测定

从温室盆栽接种试验土和烟田土中分别取样，在室温下晾干，研碎并通过１ｍｍ直径的网筛，用选择性培养基土壤稀释平板法和叶片诱饵法分离烟草疫霉菌株；用土壤稀释平板法测定了云南主要烟区土样的烟草疫霉密度。结果看出，连作烟田的病菌密度高于轮作田，低凹烟田高于山地烟田。叶片诱饵法试验表明，以烟茎切片的诱集效果最好，其次是烟叶和马铃薯叶，番茄叶和辣椒叶的诱发效果相似，花生叶诱集不到烟草疫霉。     

烟草黑胫病菌研究进展(Ⅱ)

综述了烟草黑胫病菌致病性与生理分化的发现、机制、类型、主要途径、鉴定方法(生理生化法和寄主法)以及交配型的类型和在无性繁殖条件下发生变异的因素等方面的主要研究进展,并对烟草黑胫病菌致病性与生理分化、接种方法进行了比较分析和讨论。     

烟草疫霉拮抗菌筛选、鉴定及发酵条件研究

从毕节8个县市种植烟草的田地采集土壤样品122份,筛选出5 株对烟草疫霉有较强拮抗作用的菌株。其中一菌株抑菌活性最强且拮抗效果稳定,综合形态学、生理生化及分子生物学实验可以将其鉴定为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus ）,记为1205。该菌株现已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO.M2012382。经过对1205菌株的液体摇瓶发酵条件研究,结果表明,1205菌株摇瓶振荡的最适培养条件：培养基为NYBD,接种量为1%,初始pH值为6.0,培养温度为28℃,装液量为20mL/100mL,摇床转速为160r/min,培养时间为28h。     

湖北省烟草黑胫病菌生理小种研究初报

在湖北省襄樊、恩施等主要烟区采集烟草黑胫病病株样本111个,分离纯化出30个烟草黑胫病菌株。采用游动孢子悬浮液注射接种鉴别寄主和TTZ(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)颜色反应两种方法鉴定其生理小种类型。结果表明,供试的30个菌株在TTZ培养基中的反应皆为红色,有24个菌株在鉴别寄主反应中对L8和NC1071有较强致病力,而对N.nesophila无致病力,应为1号生理小种,占供试菌系的80%,为湖北省优势生理小种;其他6个菌株中有4个菌株对NC1071有较强致病力,但对L8致病力较弱,有1个菌株对L8和NC1071致病力较弱;1个菌株对NC1071致病力较弱,但对L8有较强致病力;6个菌株对N.nesophila无致病力,是否为2号生理小种还是其他致病型,尚待进一步研究确定。