磺胺二甲基嘧啶残留检测ELISA方法的研究

本实验对磺胺二甲嘧啶残留检测ELISA反应的各种条件进行了筛选优化,建立了直接竞争ELISA检测方法,该法最小检出量为1.97ng/mL,检测范围5ng/mL～200ng/mL,样品添加回收率为73.20%～91.16%,批内变异系数<5.5%,批间变异系数<9%。与美国进口Max Signal试剂盒相比较,灵敏度为100%,特异性为96.0%,两者的符合率为98.3%。     

磺胺二甲基嘧啶残留快速检测阻断ELISA试剂盒的研制及其性能测定

应用磺胺二甲基嘧啶(SM2)单克隆抗体(mAb)成功研制出SM2残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SM2-Kit).研究结果表明,SM2-Kit的标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.9911,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.625μg/L～80μg/L,灵敏度为0.9 μg/L,半数抑制浓度(IC50)为5.82μg/L,检测限为1μg/L;饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为83.4%、89.5%,平均批内和批间变异系数均低于15%;SM2-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率(CR%)为2.08%,与其它磺胺类药几乎没有反应性;基质对SM2-Kit的检测结果影响不大;试剂盒在4℃可保存6个月.     

饲料中磺胺二甲基嘧啶及磺胺间甲氧嘧啶的测定--高效液相色谱测定法

磺胺类药物作为饲料药物添加剂广泛应用于防治畜禽的球虫病、血冠病、霍乱及伤寒等病症。同时,因其是国家允许使用的一类广谱抗菌药物而被各饲料生产厂家采用。研究其检测方法具有现实意义。磺胺二甲基嘧啶及磺胺间甲氧嘧啶的检测方法文献报道的有GC-MS方法及AOAC发布的紫外分光光度法,本实验室在查新的基础上建立了用高效液相色谱法测定饲料中两种磺胺药     

猪肉中磺胺类药物残留检测操作要点

目前我国磺胺类药物残留检测对象主要是猪肉,使用的检测方法是(以下简称方法).该检测方法用于测定动物可食性组织中磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)、磺胺甲恶唑(SMZ)、磺胺二甲氧嘧啶(SDM)、磺胺喹恶啉(SQ)单个或混合物的残留量.     

磺胺对甲氧嘧啶在肉鸡组织中的残留研究

将艾维茵肉鸡100羽随机分成4组,在基础日粮中分别添加不同水平的磺胺对甲氧嘧啶(从第Ⅰ到第Ⅳ组分别添加0、500、1000、2000mg/kg),连喂3d后停药,并于停药后第1、2、3、5、10d时每组各捕杀鸡10只,迅速取出肝脏、肾脏、肌肉组织,用高效液相色谱法测定这些组织中磺胺对甲氧嘧啶的残留。结果表明,停药后10d内,肌肉、肝脏和肾脏中均有浓度不一的残留,其检测限达0.005mg/kg,回收率在87%以上。     

磺胺甲噁唑残留快速检测胶体金试纸条的研制

磺胺类药物（sulfonamides，SAs）其抗菌谱广，能抑制大多数革兰氏阳性菌和阴性菌，但其半衰期较长，通过任何途径摄入均会在人体中蓄积，对人体造成潜在危害。我国、美国以及欧盟等规定动物性食品中总磺胺以及单种磺胺药的MRL为0．1mg／kg。     

ELISA检测鸡肉中磺胺喹恶啉的残留

本研究采用间接竞争ELISA方法，对吉林某肉鸡鸡场的23个样品进行了磺胺喹恶啉（SQX）的残留检测。检测结果表明该场23个样品的磺胺喹恶啉（SQX）残留量在国家许可的范围内，未超标。     

直接竞争ELISA法快速检测动物源性食品中磺胺嘧啶残留

采用重氮化-偶联法将磺胺嘧啶（SD）与人血清白蛋白（HSA）相连制备了免疫抗原SD—HSA,与卵清白蛋白（OVA）相连制备了包被抗原SD—OVA,用过碘酸钠法将SD—OVA与辣根过氧化物酶（HRP）连接制备了酶标抗原（SD—OVA—HRP）。用SD—HSA免疫BALB／c小鼠,经融合、筛选和克隆化制备了单克隆抗体,利用单抗建立了直接竞争ELISA方法。该方法具有好的特异性,在1—729ng／mL浓度范围标准曲线方程Y=12．05x＋2．2538,R^2=0．995,IC50为41．7ng／mL,在猪肉、鸡肉、鸡肝、鸡蛋、牛奶中的检测限分别为20、20、20、5、5μg/kg。在20μg／kg和100μg／kg水平猪肉、鸡肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋样品中添加,回收率为82．78％-104．6％。与高效液相色谱方法比较,二者的阳性符合率为81．3％,阴性符合率为83．3％,总符合率为88．9％;与同类英国RANDOX试剂盒比较,二者符合率为100％。     

检测猪肉中磺胺喹噁啉的快速检测试纸条的研制

磺胺类药物(Sas)是一类应用广泛的抗菌药物,对畜禽疾病控制和治疗起到重要作用.其在人体巾长期存在会导致许多细菌产生耐药性,且有潜在的致癌性,我国规定其残留限量为100 μg／kg[1].``     

弓形虫抗体免疫胶体金快速检测试纸条的研制

将样品垫（加样区）、包被了弓形虫排泄分泌抗原和胶体金结合物的结合垫、包被了弓形虫排泄分泌抗原和抗弓形虫抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫依次首尾互相衔接粘贴在白色塑料板上，组装成检测弓形虫抗体的免疫胶体金快速试纸条。然后用其进行动物弓形虫病血清抗体检测，并用弓形虫IHA诊断试剂进行对照试验。经对已知弓形虫阴、阳性血清检测，与弓形虫IHA检测结果的符合率为82．5％，金标试纸条较弓形虫IHA诊断试剂能提前2d检测到抗体。结果表明，检测弓形虫抗体免疫胶体金试剂（金标试纸条）的敏感度高于IHA。     

猪伪狂犬病gB抗体快速检测试纸条的研制和评价

为了建立一种猪伪狂犬病gB抗体检测试纸,为养猪业基层工作人员提供一种快速简便的狂犬病免疫抗体评价方法。胶体金标记gB蛋白作为探针,SPA和猪抗伪狂犬病病毒多抗IgG分别作为检测线和质控线,建立了猪伪狂犬病gB抗体检测试纸。猪伪狂犬病质控血清和疫苗免疫猪血清用来评价其特异性,敏感性以及与IDEXX PRV gB ELISA试剂盒的符合率试验。试验结果显示,该试纸条具有较高的特异性和敏感性,与IDEXX PRV gB ELISA试剂盒的符合率为91.04%;该免疫层析试纸条具有快速(5min)、特异、敏感等优点,不需要专门的仪器设备和专业技术人员,适合于田间推广应用。     

氯霉素残留检测阻断ELISA试剂盒的研制及性能测定

在建立氯霉素单克隆抗体（CAP mAb）杂交瘤细胞株和阻断ELISA方法的基础上．研制出CAP残留快速检测试剂盒（CAP-kit），并对其性能进行了测定。结果表明，CAP-kit的标准曲线呈典型的S型，符合4参数logit曲线拟合，相关系数R^2=0．9953，检测范围为1．0μg/L～128．0μg/L，灵敏度为0．85μg／L，半数抑制浓度（IC50）为7．54μg/L，检测限为1．0μg/L；牛奶样、猪肉样的平均添加回收率为88．3％、82．5％，平均批内和批间变异系数均〈15％；CAP-kit与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应（CR％）为150％，与其它酰胺醇类和抗菌素药物无交叉反应；试剂盒在4℃可保存6个月。     

甲硝唑胶体金试纸条的研制

为方便药物残留的现场快速检测,利用胶体金免疫层析技术研制出了一种快速检测蜂蜜样本中甲硝唑残留的试纸条。将人工抗原与二抗包被到硝酸纤维素膜上依次作为检测线和控制线,样本中的甲硝唑与检测线上的人工抗原竞争性结合胶体金结合垫上的抗体-胶体金结合物,根据检测线和控制线的显色情况判断样本的阴阳性。实验结果显示：试纸条上人工抗原MNZ-BSA的包被量为0.5mg/mL,二抗羊抗鼠IgG的包被量为0.54 mg/mL;试纸条对于甲硝唑的检出限为1μg/kg,与4种硝基咪唑类药物有交叉反应,但甲硝唑的检出限最低;样本中添加溶液A处理并用乙酸乙酯作为提取剂,单个样本检测时间为20min。适用于甲硝唑残留的大规模现场快速检测。     

牛副结核胶体金免疫层析试纸条的研制

将提纯的牛副结核分支杆菌重组蛋白MAP0862-2154c作为硝酸纤维素膜检测线的包被抗原,兔抗羊IgG作为硝酸纤维素膜质控线的包被抗体,金标羊抗牛IgG点喷到玻璃纤维素膜上,制成用于检测牛副结核抗体胶体金免疫层析试纸条。用牛的副结核标准阳性血清与检测试纸条反应,在检测线处出现红色反应带,而滴加阴性血清的试纸条检测线处未出现反应条带,上述2种血清在质控线处均出现红色反应条带;试纸条可检出牛副结核抗体的最低抗原包被浓度为400μg/mL;试纸条不与牛结核病、牛布鲁氏菌病的阳性血清发生反应;试纸条37℃保存9d后的检验结果与4℃保存的检验结果相同。所制备的试纸条具有灵敏、特异的优点,稳定性良好;10min左右即出结果,操作简便,可用于临床诊断。     

牛病毒性腹泻病毒抗体胶体金检测试纸条的制备

采用sf9昆虫细胞-杆状病毒系统重组表达牛病毒性腹泻病毒P80蛋白抗原,经纯化鉴定后将P80蛋白用胶体金标记作为示踪抗原,未标记的P80抗原作为捕获抗原,并以羊抗牛IgG抗体作为质控抗体,建立了牛病毒性腹泻病毒抗体快速诊断试纸条。试验结果表明,该试纸条检测灵敏度高,特异性良好,与牛口蹄疫病毒、牛传染性鼻气管炎病毒无交叉反应。使用建立的胶体金试纸条和IDEXX牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒同时检测80头份牛血清,阳性结果符合率为86.7%,阴性结果符合率为100%,总符合率为95%。该试纸条可用于临床牛病毒性腹泻病毒抗体的诊断和检测。     

牛传染性鼻气管炎病毒抗体胶体金检测试纸条的制备

采用SF 9昆虫细胞-杆状病毒系统重组表达牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白抗原,经纯化鉴定后将gD蛋白用胶体金标记作为示踪抗原,未标记的gD抗原作为捕获抗原,并以羊抗牛IgG抗体作为质控抗体,建立了牛传染性鼻气管炎病毒双抗原夹心法胶体金检测试纸条。试验结果表明,该试纸条检测灵敏度高,特异性良好,与牛口蹄疫病毒、牛病毒性腹泻病毒等阳性血清无交叉反应。使用建立的胶体金试纸条和IDEXX牛传染性鼻气管炎病毒抗体ELISA检测试剂盒同时检测112份牛血清,阳性符合率为93.5%,阴性符合率为96.0%,总符合率为94.6%。说明该试纸条可以应用于临床牛传染性鼻气管炎病毒抗体的诊断和检测。