人脐带间充质干细胞对肝癌细胞增殖性及凋亡的影响

目的 探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchyma cell, MSC)对肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)癌细胞增殖和凋亡的影响,为HCC的治疗提供新的思路。 方法 取50%覆盖率的MSC培养皿,换上新鲜的DMEM/F-12培养基,待其培养至100%的覆盖率后收集培养基备用,即为MSC条件培养基。用新鲜DMEM/F-12培养基加上等量的MSC条件培养基的混合培养基培养HepG₂人类肝癌细胞株24、48和72h,使用MTT法测定HepG₂细胞的增殖活性、通过Hoechest33342和PI双染色后在荧光倒置显微镜下观察计数以测定HepG₂细胞的凋亡、用Transwell侵袭实验和黏附实验测定HepG₂细胞侵袭能力以及通过Western blot法检测凋亡相关信号通路蛋白的表达。 结果 混合培养基培养HepG₂细胞24h后,对其生长和凋亡及侵袭黏附能力没有显著影响(P>0.05)。但是培养延长到48h和72h后,HepG₂细胞的活性、增殖能力、侵袭能力和黏附能力都受到显著的抑制,这些变化伴随着细胞分裂相关因子Ki-67、PCNA和组蛋白H3磷酸化水平下调,以及细胞凋亡执行者caspase-3的激活和抗凋亡蛋白Bcl-2的抑制。 结论 体外间接共培养实验表明,人脐带间充质干细胞具有抑制肝脏肿瘤细胞增殖及促进其凋亡的作用。     

circ0090521对肝癌细胞增殖及凋亡的影响机制研究

目的 本研究旨在探讨circ0090521的异常表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 以人正常肝细胞HL-7702和人肝癌细胞HepG2为细胞模型,应用siRNA对HepG2中的circ0090521进行基因敲减,然后将实验分为四组：对照组、肝癌组、si-NC组、si-circ0090521组。CCK-8法对细胞增殖速率进行检测;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;qRT-PCR法检测circ0090521的表达情况;qRT-PCR、Western Blot法和ELISA法分别检测STAT3、Bcl-2、Bax、caspase-3的mRNA相对表达量和蛋白表达及活力情况。结果与对照组比较,肝癌组的circ0090521水平明显升高（P<0.05）。与肝癌组比较,si-NC组中circ0090521表达水平无明显变化,而si-circ0090521组circ0090521水平明显降低（P <0.05）。与肝癌组比较,sicirc0090521组细胞增殖速率显著降低（P<0.05）,而si-NC组无明显变化。与肝癌组比较,si-circ0090521组B...     

肝癌干细胞中差异表达miRNAs对肝癌干细胞增殖和转移的影响

目的:探讨肝癌干细胞较卵园细胞中高表达的miRNAs(hsa-miR-199a-3p,hsa-miR-122)对肝癌干细胞增殖和转移的影响。方法:分离培养肝癌干细胞,构建并转染肝癌干细胞中差异表达的miRNAs寡核苷酸,通过MTT实验、裸鼠成瘤实验、裸鼠脾脏转移实验观察干扰hsa-miR-199a-3p,hsa-miR-122的表达后肝癌干细胞增殖和转移能力。结果:采用寡核苷酸干扰hsa-miR-199a-3p,hsa-miR-122的表达后,肝癌干细胞增殖能力较对照组显著减弱,裸鼠成瘤实验中形成的肿瘤显著小于对照组,脾脏肿块及肝转移肿瘤显著小于对照组。结论:hsa-miR-199a-3p,hsa-miR-122能够增强肝癌干细胞增殖,促进其成瘤及转移。     

薏苡仁提取物对人肝癌细胞增殖、凋亡及p53表达的影响

目的：探讨薏苡仁提取物（康莱特注射液,KLT）抗肝癌的作用机制。方法：利用MTT法、免疫组化法及电镜观察34例肝癌患者的癌细胞在体外培养和经KLT处理后的变化,并与对照组比较,结果：（1）KLT对肝癌细胞增殖有抑制作用,可达30％以上。（2）经KTL处理后的肝癌细胞有明显的凋亡现象和p53增高,与对照组比较有显著性差异（P＜0．05）。（3）电镜下观察,肝癌细胞形态改变,出现细胞膜小泡和凋亡小体形成等调亡细胞的特征性变化。结果：KLT抗肝癌的作用是通过诱发细胞凋亡或上调p53基因表达,引起细胞坏死而达到治疗目的的。     

Smac类似物LCL161对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨Smac类似物LCL161对肝癌HepG2,SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法：MTT法检测LCL161对肝癌细胞增殖的影响,克隆形成实验观察低浓度LCL161对肝癌细胞增殖的影响,PI染色流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色检测线粒体膜电位的变化,Western印迹检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP],磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)、细胞凋亡抑制蛋白1(cellular inhibitor of apoptosis protein 1,cIAP1)、X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)的蛋白表达。结果：LCL161在1~16 μmol/L浓度范围内对肝癌HepG2,SMMC7721细胞具有显著的增殖抑制作用(P<0.01),48 h的IC50值分别为4.3,4.9 μmol/L。低浓度的LCL161能明显抑制肝癌细胞克隆的形成。LCL161可诱导肝癌细胞发生明显的细胞凋亡(P<0.01),2,4,8 μmol/L 的LCL161作用于HepG2细胞48 h的凋亡率分别为(15.2±2.8)%,(28.7±3.0)%,(34.6±2.3)%,对照组的细胞凋亡率为(1.5±0.8)%;作用于SMMC7721细胞的凋亡率分别为(12.2±2.4)%,(22.4±2.7)%,(30.2±2.4)%,对照组的细胞凋亡率为(1.8±0.6)%。JC-1染色结果表明,LCL161作用后HepG2和SMMC7721细胞的线粒体膜电位降低。LCL161处理肝癌细胞后促进PARP的剪切,下调p-Akt的蛋白表达以及降解cIAP1。结论：LCL161对肝癌细胞HepG2,SMMC7721具有显著的增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与降低线粒体膜电位、下调p-Akt的蛋白表达以及降解cIAP1相关。     

片仔癀对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响

目的 观察片仔癀对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移的影响,并探讨其作用机制.方法 用MTT法检潮片仔癀对HUVEC增殖的影响,用划痕损伤实验观察片仔癀对HUVEC的迁移的影响.结果 片仔癀干预6、12、24、48 h后,与空白对照组比较,各剂量组抑制HUVEC的增殖能力(P＜0.01),且有剂量和时间依赖;片仔...     

c-src基因敲减对大鼠精原干细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究c-Src蛋白对大鼠精原干细胞的增殖和凋亡的影响。方法：在转染c-Src RNA干涉质粒后,用western blot检测细胞内c-Src蛋白的表达;用MTT比色法观察c-Src敲减后细胞的活性;同时分别用流式细胞仪和Hoechest33342染料检测细胞的细胞周期和凋亡情况。结果：与转染对照质粒相比,c-Src敲减后能显著降低大鼠精原干细胞内c-Src蛋白的表达,细胞活性下降了29.60%（P＜0.05）,S期细胞显著减少（P＜0.05）,细胞凋亡显著增加（P＜0.05）。结论：c-Src基因敲减后可抑制大鼠精原干细胞增殖和促进细胞凋亡。     

硝苯地平对肝癌细胞增殖的影响

目的　观察钙通道阻断剂硝苯地平 (Nifedipine)对人肝癌细胞 (HHCC)增殖的影响。方法　将不同浓度的Nifedipine作用于HHCC ,应用MTT比色分析法观察其细胞增殖情况。结果　Nifedipine使HHCC吸光度 (OD)显著降低 ,去除后OD值逐渐恢复。结论　Nifedipine具有可逆的抑制HHCC增殖功能。     

抑制Hsp90对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的原发性肝癌恶性程度高，病情发展迅速，难以治愈，因此，寻找新的治疗手段十分必要。而分子伴侣Hsp90是维持一系列恶性肿瘤中起重要作用的蛋白质，特别是其在信号转导系统中所起的作用。如本实验通过特异性抑制剂格尔德霉素(Geldanamycin，GA)抑制Hsp90功能的方法研究Hsp90在肝癌细胞中的作用。方法培养人肝癌细胞株HepG2，采用Western印迹杂交法检测GA作用后HepG2细胞内蛋白激酶B／Akt磷酸化状态的变化、MTT法检测细胞和活力，并应用流式细胞术分析细胞周期与凋亡；MTT法检测单独应用丝裂霉素(mitomycin，MMC)或者将其与GA联合应用时对HepG2细胞的抑制情况、计算两药相互作用指数，同时采用流式细胞术分析这两种情况下细胞凋亡率的变化。结果400．mol／L的GA处理细胞后，HepG2细胞内磷酸化AKT的水平明显下降(24h为对照组的66．03％，48h为对照组的34．02％)；经过GA的作用，细胞呈现G2／M期阻滞，48h可见到凋亡率显著增加；同时MTT法显示GA对HepG2细胞有生长抑制作用，用药时间越长抑制率越高，24h和48h的抑制率分别为4．09％和21．74％。400．mol／L GA可以增强MMC对HepG2细胞的抑制作用，两药相互作用指数小于1。单独应用15．mol／L MMC细胞的凋亡率为7．65％，将400．mol／L GA与15．mol／L MMC联合使用，凋亡率上升到21．34％。结论在肝癌细胞中Hsp90可以通过增强信号转导系统中蛋白激酶的稳定性而维持癌细胞的生长优势，抑制Hsp90功能能够明显抑制肝癌细胞的生长并促进其凋亡，同时增强常用化疗药物对肝癌细胞杀伤效应，Hsp90可以成为肝癌治疗中的一个新靶点。     

渗透浓度对肝癌细胞增殖的影响

目的 :观察渗透浓度对人肝细胞肝癌 (HHCC)细胞系增殖的影响 ,为容积调控氯离子通道参与细胞增殖提供进一步证据。　方法 :改变培养液的渗透浓度 ,应用噻唑蓝比色分析法及细胞计数法观察细胞增殖情况 ;流式细胞仪检测细胞周期时相。　结果 :细胞在低渗培养液中增殖旺盛 ,在高渗培养液中增殖减慢 (P <0 .0 1 )。经高渗处理 4 8h的HHCC细胞G1 期细胞比例比对照组明显增高 ,S期及G2 期细胞比例明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,而经低渗处理 4 8h的细胞 ,G1 期细胞比例明显降低 ,S期及G2 期细胞比例明显高于对照组 ,并且低渗对细胞周期的影响可被氯离子通道阻断剂尼氟灭酸 (NFA)减弱 (P <0 .0 5 )。　结论 :渗透浓度可以通过影响细胞增殖周期而影响细胞增殖。     

NPPB 对肝癌细胞增殖的影响

目的观察氯通道阻断剂 5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)对人肝癌 HHCC 细胞增殖的影响.方法将 NPPB 作用于 HHCC 细胞,应用细胞计数法及 MTT 比色分析法观察细胞增殖情况;同时应用流式细胞仪检测其细胞周期时相的变化.结果 NPPB 使 HHCC 细胞数及 MTT 光吸收值(OD)较对照组均显著降低,去除 NPPB 后,OD 值便可逐渐恢复;经 100 μmol/L 的 NPPB 处理 48 h 时,HHCC 细胞 G1 期细胞比例比对照组明显增高,S 期及 G2 期细胞比例则明显低于对照组.结论 NPPB 能可逆抑制肝癌细胞增殖,并具有浓度依赖性;NPPB 使细胞增殖停滞在 G1 期.     

miR-302a对叶酸缺乏小鼠胚胎干细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨miR‐302a对叶酸缺乏小鼠胚胎干细胞（mESC）增殖和凋亡的影响。方法mESC分为完全培养基组（对照组）,无叶酸培养基组（无叶酸组）,无叶酸培养基＋miR‐302amimic组（miR‐302a组）,通过RT‐PCR进行检测miR‐302a在完全培养基及无叶酸培养基中的表达。构建miR‐302amimic,后转染到无叶酸培养基mESC中,采用MTT法检测miR‐302amimic对mESC活力的影响,AnnexinV‐FITC／PI流式细胞术检测miR‐302amimic对mESC细胞凋亡的影响;流式细胞术检测miR‐302amimic对mESC细胞周期的影响;Westernblot检测及磷脂酰肌醇3羟激酶（PI3K）／蛋白激酶B（Akt）／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路激活情况,以及下游分子细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、p27表达的影响。结果RT‐PCR证实无叶酸组中miR‐302a表达量下降（P＜0．01）。与完全培养基比较,无叶酸培养基中,mESC细胞活力下降,细胞凋亡增加,细胞周期阻滞在G1期,Akt及mTOR磷酸化水平下降,CyclinD1表达下调,p21及p27表达上调,差异均具有统计学意义（P＜0．01）。与无叶酸组比较,miR‐302a组中,mESC细胞活力上升,凋亡下降,G1期缩短,AKT及mTOR磷酸化水平提高,CyclinD1表达上调,p21及p27表达下调,差异均具有统计学意义（P＜0．01）。结论miR‐302a类似物能显著抑制缺乏叶酸mESC凋亡,能促进其增值,与PI3K／AKT／mTOR信号通路有关。     

肝癌干细胞源性外泌体对肝癌细胞增殖耐药性的影响

目的 观察肝癌干细胞外泌体对肝癌细胞增殖和耐药性的影响.方法 流荧光细胞技术筛选人肝癌细胞株MHCC97干细胞,超速离心提取干细胞外泌体.MTT和软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖情况;MTT法检测细胞对化疗药物的敏感程度,实时荧光定量RT-PCR和Western Blot检测细胞增殖和耐药相关基因和蛋白表达水平.结果 实验肝癌细胞各时间点OD值要明显高于对照组和普通组(P<0.05).实验组肝癌细胞对5-氟尿嘧啶和阿霉素的半数抑制浓度明显高于对照组和普通组(P<0.05).RT-PCR和Western blot结果显示:实验组肝癌干细胞外泌体中survivin、c-myc、ras、ABCG2、MDR-1、MRP-1基因mRNA和蛋白的表达均较对照组的普通肝癌细胞明显增强,而P53和PTEN的表达则较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 肝癌干细胞外泌体能促进肝癌细胞的增殖,诱导肝癌细胞对化疗药物的耐药,其机制可能通过调控细胞增殖和耐药相关基因蛋白表达来实现.     

无花果浆液对肝癌细胞增殖抑制作用研究

目的探讨无花果浆液（Fig fruit latex,FFL）对肝癌细胞SMMC7721及正常肝细胞L-02增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法采用MTT法、克隆形成试验、Brdu掺入试验,Hoechst33342染色、流式细胞术检测FFL作用后,SMMC7721、L-02细胞增殖、凋亡和细胞周期分布的变化,并通过RT-PCR观察其诱导凋亡的机制。结果用FFL处理后,肝癌细胞增殖活性降低（P〈0.05）,克隆形成下降（P〈0.05）,Brdu标记指数降低（P〈0.05）,Hoechst33342染色凋亡细胞增多（P〈0.05）;细胞周期分布改变,凋亡指数升高（P〈0.01）,G0/G1期细胞数增加（P〈0.01）,S期细胞数减少（P〈0.01）,在一定剂量内对正常细胞无明显影响。RT-PCR检测ADPRTL基因表达增强。结论与正常肝细胞比较,FFL通过上调ADPRTL基因诱导肝癌凋亡,促进肝癌细胞周期阻滞,抑制肝癌细胞DNA合成等作用,抑制肝癌细胞增殖。     

片仔癀对人骨肉瘤MG63细胞相关凋亡蛋白表达的影响

目的观察不同浓度片仔癀对人骨肉瘤MG63细胞相关凋亡蛋白表达的影响。方法不同浓度片仔癀溶液干预人骨肉瘤MG63细胞24h后,采用Westernblot法检测各组骨肉瘤MG63细胞凋亡标志蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax的表达。结果片仔癀通过内源性的线粒体途径,促进人骨肉瘤MG63细胞Caspase-3、Caspase-9的激活,诱导骨肉瘤细胞的凋亡,同时可以调节Bcl-2、Bax的表达,有剂量依赖性。结论片仔癀促进骨肉瘤MG63细胞凋亡可能通过调节相关凋亡蛋白表达而实现。     

RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰技术对人肝癌HepG2细胞mTOR的表达及细胞增殖与凋亡的影响.方法:体外合成mTOR siRNA,并转染HepG2细胞,同时设无义对照组(转染无义siRNA)、空白对照组(转染空脂质体)及正常对照组(不转染).采用western blot法检测各组HepG2细胞的mTOR蛋白表达;应用MTT法检测...     

脐带间充质干细胞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)抑制人卵巢癌SKOV3细胞增 殖及促进其凋亡的作用。方法：采用Transwell共培养观察UC-MSCs向卵巢癌细胞靶向归巢的作用;MTT 实验检测UCMSCs 条件培养基抑制SKOV3细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染法检测其凋亡率;实时PCR检测与SKOV3细胞增殖 和凋亡相关基因Ki-67,Bax,Bcl-2的表达。结果：UC-MSCs体外向SKOV3细胞靶向归巢。MTT 结果显示UC-MSCs条件 培养基明显抑制SKOV3细胞的增殖(P<0.01)。Annexin V-FITC/PI双染法提示75%条件培养基组的凋亡率明显高于对照 组(P<0.05)。实时PCR发现增殖相关基因Ki-67的表达明显下降(P<0.01),凋亡相关基因Bcl-2的表达明显降低(P<0.01), Bax的表达明显增加(P<0.01)。结论：UC-MSCs体外能向卵巢癌细胞靶向归巢,通过调节增殖相关基因Ki-67的表达, 抑制SKOV3细胞增殖;通过调节凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,促进SKOV3细胞凋亡。     

不同临床有效浓度异丙酚对新生大鼠海马区来源神经干细胞增殖分化和凋亡的影响

目的:探讨不同临床有效浓度异丙酚对新生大鼠海马区来源神经干细胞增殖分化及凋亡的影响。方法:采用已建立的新生SD大鼠海马区来源神经干细胞单细胞克隆系细胞株,将其均匀地接种到24或48孔培养板中(含血清培养基培养孔用于分化和凋亡检测,无血清培养基培养孔用于增殖周期和凋亡检测)。将细胞随机分为五组(每组5个培养孔):⑴低异丙酚浓度组(P1组):终浓度2.5μg/mL;⑵中异丙酚浓度组(P2组):终浓度5.0μg/mL;⑶高异丙酚浓度组(P3组):终浓度10.0μg/mL;⑷C组:正常(control)对照组;⑸L组:脂肪乳(introlipid)对照组。培养8 h后,5-溴脱氧尿(Brdu)检测细胞增殖周期,培养48 h后,流式细胞仪检测各组神经干细胞增殖分化过程中的增殖和凋亡情况;72 h免疫荧光技术检测神经元特异性微管蛋白抗体(β-tubulin)和星形胶质细胞特异性胶质酸性蛋白(GFAP),观察神经干细胞分化的各类神经细胞形态学变化、分化比率及分化细胞的凋亡情况。结果:与C组比较,L组细胞增殖周期和分化比率无明显差异(P>0.05),分化细胞无明显凋亡且细胞形态正常;P2和P3组细胞增殖周期显著抑制,增殖和分化过程中凋亡比率明显升高(其中P2组P<0.05;P3组P<0.01),分化细胞的突触或轴突发育差且发生大量凋亡,未凋亡的星形胶质细胞增生肥大;P1组神经元分化比率高(P<0.05)。结论:中高浓度异丙酚均明显抑制新生大鼠海马区来源神经干细胞的增殖和分化,并诱发神经细胞的大量凋亡,影响到分化细胞的神经突起分支、树突棘的生长发育;低浓度异丙酚能诱导神经干细胞向神经元细胞分化。     

神经生长因子对神经干细胞增殖的影响

目的:观察不同剂量神经生长因子(NGF)对体外培养的神经干细胞(NSCs)增殖的影响.方法:取人胚胎组织脑室区/脑室下区(VZ/SVZ)组织分离神经干细胞,培养于DMEM/F12 B27细胞基础培养液中,加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为阳性对照组;实验组培养液中分别加入NGF至终浓度的50μg/L、20μg/L、10μg/L、5μg/L、2μg/L;培养液无添加成分作为阴性对照组.用MTT比色分析法测定细胞增殖能力,倒置显微镜下观察细胞增殖情况.结果:3 d MTT比色显示,50μg/L NGF组细胞增殖较其他各组低(P＜0.05);培养10 d时细胞活力测定表明各组细胞均有一定程度的增殖,10μg/L NGF组与阳性对照组比较差异无统计学意义,与阴性对照组比较差异有统计学意义.结论:在一定浓度范围内NGF能明显促进神经干细胞的增殖.     

SIRT6基因沉默对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨SIRT6基因沉默对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建肝癌细胞系,转染SIRT6,检测SIRT6 mRNA及蛋白质的表达水平;将表达shSIRT6的慢病毒感染Huh-7细胞,培养后检测SIRT6 mRNA、蛋白质表达水平及凋亡情况.结果 成功构建了沉默SIRT6基因的Huh-7稳定细胞系,在Huh-7细胞中,mRNA表达的抑制率达81.25%,其SIRT6蛋白质水平亦受到抑制;Huh-7细胞的凋亡比例为(16.52±2.08)%.结论 SIRT6基因沉默可诱导人肝癌细胞凋亡,进而抑制其增殖.