115例急性髓细胞白血病多参数流式细胞术免疫表型分析

免疫表型检测已成为白血病诊断和分类的重要手段。为了解急性髓细胞白血病(AML)免疫表型特征，利用三色流式细胞术CIM5／SSC参数散点图设门方法，对115例AML患者幼稚细胞表面及胞浆内分化抗原进行分析：结合FAB分类，比较AML不同亚型中抗原表达的差异，并对其诊断价值加以探讨。结果显示：在AML患者中，CD33、CD38和CDl3的表达最常见，分别达94．8％、91．3％、89．6％。在淋系抗原中，CD7的表达最为常见(20．2％)，其次是CD19(16．5％)和CD2(15％)，某些免疫表型特征与FAB分类具有相关性，包括M3中缺乏表达HLA—DR、CD34和CD56，但CD2的表达增加；M2中CD19，M5中CD14和CD56的表达增加，而M0中未见MPO的表达，结论：多参数流式细胞术是诊断AML的一项可靠技术，AML某些免疫表型特征与FAB分类具有明显相关性．     

成人急性白血病的免疫表型分析

目的 探讨成人急性白血病的免疫表型特征与诊断价值。方法 采用流式细胞仪对59例成人急性白血病进行免疫表型分析。结果 急性淋巴细胞白血病除均表达淋系抗原外，有15．0％伴有髓系抗原（CD13、CD33、CD11b)的表达；急性髓细胞白血病均表达髓系抗原，同时有13．9％伴有淋系抗原（CD7）的表达。2例细胞形态学不能确定的白血病结合免疫表型分别确诊为M7和HAL；1例形态学诊断为慢粒急淋变的病例，经免疫表型检测后诊断为HAL。结论 免疫表型分析能确诊一些特殊类型的白血病，在急性白血病的诊断分型及治疗预后中具有重要价值。     

232例急性白血病流式细胞术免疫表型分析

目的探讨急性白血病(AL)免疫表型的特点和临床意义。方法使用四色流式细胞仪,按照白血病分型四色方案添加抗体,对232例急性白血病患者进行的免疫分型检测,并分析抗原表达情况。结果其中T-ALL 9例,占3.9%,各类抗原的表达率依次为c CD3(100.0%)、CD7(100.0%)、CD2(88.9%)、CD5(88.9%)、CD34(66.7%)、CD1a(55.6%);B-ALL 51例,占22.0%,各类抗原的表达率依次为cCD22(100.0%)、CD19(100.0%)、HLA-DR(100.0%)、CD10(90.2%)、CD34(89.2%)、CD20(19.6%),其中7例患者伴有CD13、CD33等髓系抗原的表达。AML 172例,占74.1%,各类抗原的表达率依次为cMPO(87.8%)、CD13 (93.6%)、CD33 (97.7%)、CD117 (81.4%)、HLA-DR (62.2%)、CD34 (64.0%)、CD15 (26.2%)、CD11b (12.8%)、CD14(9.9%)、CD64(26.2%)。结论流式细胞术免疫分型能快速、多参数、客观地测定细胞膜和胞浆中多种抗原的表达,准确地判断白血病细胞的类别和所处的分化阶段,结果重复性好,从而能够更加精确的诊断出各类白血病所属的亚型,为白血病的预后判断和化疗方案的选择提供了科学的依据。     

流式细胞术对1例白血病病例的免疫表型分析

目的 探讨白血病免疫分型在临床诊断、治疗中的作用。方法 采用免疫荧光标记的方法，用流式细胞仪分析患者血细胞表面各种抗原标记物的表达情况。结果 形态学最初诊断为再生障碍性贫血（AA）的这例病例，经流式细胞术检测出有异常幼稚细胞群体的存在，两次的免疫表型分析显示异常细胞群体由最初的两群细胞克隆演变为一个克隆群体，并带有B细胞系列的抗原标记，临床最终诊断为急性淋巴细胞白血病。目前采用针对B系的化疗方案，疗效较显著。结论 流式细胞术的免疫表型分析对临床的诊断、治疗方案具有重要的参考价值。     

67例儿童急性白血病流式细胞术免疫分型的研究

目的探讨儿童急性白血病流式细胞术（flow cytometry）免疫分型的特点。方法选择67例儿童急性白血病，采用CD45／SSC双参数散点图设门法流式细胞术进行急性白血病免疫表型检测，分析儿童急性白血病细胞的抗原表达规律。结果①FAB分型与免疫分型相符率为92．5％（62／67）。②B细胞系列急性淋巴细胞白血病（B-ALL）中CDl9敏感性最高，HLA-DR、cCD79a特异性强。T细胞系列急性淋巴细胞白血病（T-ALL）中cCD3、CD7敏感性最高，cCD3特异性强。③急性髓细胞自血病（AML）中CD117、CDl3、CD33敏感性高，CDll7、cMPO的髓系特异性强。④急性淋巴细胞白血病（ALL）中伴髓系抗原表达（My^＋-ALL）占50．0％，主要表达的髓系抗原为CD33、CDl3。AML中伴淋系抗原表达（Ly^＋-AML）占35．0％，主要表达的淋系抗原为CD7。结论①免疫学分型弥补了FAB分型的不足，更能反映白血病细胞的异质性，提高了诊断的准确性。②儿童降ALL最具有诊断价值的抗原是CDl9、HLA-DR、cCD79a，T-ALL最具有诊断价值的抗原是cCD3、CD7。My^＋-ALL主要表达的髓系抗原为CD33、CDl3。③儿童AML最具有诊断价值的抗原为CDll7、CDl3、CD33，而CDll7的髓系特异性优于CDl3、CD33，是鉴别ALL、AML的重要标志，Ly^＋-AML主要表达的淋系抗原为CD7。     

50例成人急性淋巴细胞白血病免疫表型分析

目的研究成人急性淋巴细胞白血病(ALL)的免疫表型特征,并分析免疫表型与细胞形态学及细胞遗传学的关系。方法应用一组系列相关单克隆抗体和CD45／SSC设门的三色流式细胞术对50例初治成人ALL进行免疫表型研究。结果 50 例ALL中42例B系来源,5例T系ALL,3例T／B混合型ALL。27例伴有髓系抗原表达(54％),髓系抗原主要表达CD13、CD33。大部分病例(90％)幼稚细胞均出现CD45的缺失及弱表达。细胞学形态学分析发现所分析病例中FAB-L1占多数(67％)、L2 27 ％。2例L3其免疫表型为B-祖细胞及成熟B细胞表型。20例存在染色体异常,其中6例染色体数目异常,涉及的异常为 8、-X、-7、-11、-4、、6和、13。染色体结构异常最多见为t(9;22),且均伴有髓系抗原的表达。结论 ALL免疫表型不是单独的诊断标准,其与细胞形态学及遗传学密切相关。     

多参数流式细胞术对急性髓系白血病微小残留病变与疾病复发的监测

本研究探讨微小残留病变（MRD）检测对急性髓系白血病（AML）治疗后疾病复发的预测作用。采用多参数流式细胞术（multiparameter flow cytometry,MPFC）分析AML治疗前白血病相关免疫表型（1eukemiaassociatedimmunphenotypes,LAIP）,检测诱导和巩固治疗后MRD（Post—IndMRD,Post—ConsMRD）的水平。结果表明：122例初发AML患者中（AML—M3除外）,有115例（94．3％）存在明确的LAIP,其中存在单一LAIP类型的患者15例（13．0％）,存在2个或2个以上LAIP类型的患者100例（87．0％）。抗原跨系列表达者占40．9％,抗原跨阶段表达者、抗原过度表达者和抗原表达减弱或缺失者分别占20．9％、27．0％和34．8％。对41例诱导化疗后达完全缓解并进行2个疗程以上巩固治疗的AML患者MRD监测显示,Post—IndMRD＋的24例中,巩固治疗后18例复发;Post—IndMRD-者17例中,巩固治疗后5例复发;Post—IndMRD-患者和Post—IndMRD＋患者的平均无病生存时间（RFS）分别为43．05±6．25个月和12．48±1．69月（P〈0．0001）。Post—ConsMRD＋者18例均复发;Post—ConsMRD一者23例中仅5例复发。Post—ConsMRD-患者和Post—ConsMRD＋患者的平均RFS分别为39．32±5．44月,9．72±1．51个月（P〈0．0001）。结论：Post—IndMRD水平和Post—ConsMRD水平均与AML患者的RFS密切相关,可作为AML治疗依赖的预后因素。     

多参数流式细胞术观察CD36在白血病细胞上的表达及其意义

本研究旨在探讨CD36在白血病细胞的表达及其在白血病诊断和鉴别诊断中的意义。采用CD45／SSC参数设门多色流式细胞术分析133例白血病细胞CD36及其它白血病相关抗原的表达情况。结果表明：133例白血病中有29例患者（21．8％）的白血病细胞表达CD36，62例急性髓系白血病（AML）中26例患者（41．9％）白血病细胞表达CD36，54例淋系白血病未见CD36阳性的病例。M4、M5和M6中CD36的阳性率（8／10、12／12、3／3）明显高于M1（0／9）、M2（3／12）、M3（0／16），具有统计学差异（P值均〈0．001）；CD36在M5b组的阳性细胞百分数（中位数89．6％）明显高于M5。组（中位数32．7％）（P=0．001）。在急性髓系白血病中，CD36的表达与CD117呈负相关（r=-0．751，P=0．005），与HLA．DR、CD34不相关；在M4和M5b组中CD36与CD14的表达呈正相关（r=0．870，P=0．011）；在单核细胞相关性白血病（MLIL）中CD36阳性率为92．6％（25／27），CD14的阳性率为48．1％（13／27），前者明显高于后者（P=0．001），在M5。中CD14未表达，在M5b中CD14表达为100％（5／5）；CD117在M5a的阳性率明显高于M5b（P=0．010）；CD34在M5的阳性率较低（33．3％，4／12）。结论：结合CD36与其它淋系及髓系抗原有助于淋巴系白血病、髓系白血病及其单核细胞相关性白血病的诊断与鉴别，其在单核细胞相关性白血病阳性率为92．6％（25／27），高于CD14（41．8％，13／27）。     

流式细胞术用于急性白血病免疫分型现状

流式细胞术针对细胞内外的特异性抗原,对急性白血病细胞的来源和分化阶段进行精细检测和分型.并利用急性白血病细胞免疫表型标志对其进行分型,提高了急性白血病诊断准确性,弥补了传统形态学分型的不足,有利于患者的进行个体化治疗及预后的判断.     

儿童与成人急性淋巴细胞白血病免疫表型的比较

目的了解儿童及成人急性淋巴细胞白血病(ALL)免疫表型的异同.方法应用流式细胞仪直接免疫荧光法检测297例初治ALL,其中儿童109例,成人188例.结果在成人T系ALL中,男性多于女性,在成人B-ALL中,女性多于男性,在成人伴髓系抗原表达ALL(My ALL)及CD34 ALL中均为女性多于男性,而在儿童中均未见显著差异.无论是成人还是儿童,CD34 在B系ALL中的表达均高于T系ALL;CD34 ALL伴髓系抗原(CD13或CD33)在成人中的表达明显高于儿童,两者有显著差异;在成人ALL中伴My 明显高于儿童,两者有显著差异;在成人及儿童My ALL中CD34的表达显著高于My-者,且有显著差异;CD2 B系ALL均高表达CD34,且儿童比成人多见.结论 B-ALL在儿童及成人中的比率均高于T-ALL;在成人及儿童ALL中,CD34表达与B系ALL及CD2 B系ALL相关;在成人My ALL明显高于儿童;在成人My ALL及CD34 ALL中,以女性多见.     

三色流式细胞术分析急性淋巴细胞白血病免疫分型

本研究探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）各亚型免疫分型的特点及其临床意义。利用CD45／SSC双参数散点图设门方法,对40例ALL进行三色流式细胞术免疫表型分析。结果显示：采用CD45／SSC双参数散点图设门法能清楚地区分骨髓或外周血中的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、有核红细胞和原始细胞群。40例ALL中B—ALL26例,T-ALL11例,HAL3例。26例B—ALL中CD19全部（100％）阳性表达,而11例T-ALL中CD7表达的阳性率最高（100％）。伴髓系抗原表达的ALL（My＋ALL）比较常见,本实验中共有12例,约达到30．0％,经常累及B淋巴系统（占My＋ALL的75．0％）;在髓系抗原中以CD13表达阳性率最高;有3例患者为急性杂合性白血病（HAL）,发病率为7．5％,且全部为髓系、B系共同表达,其中有2例患者CD34阳性表达,占66．67％。结论：在流式细胞仪上采用CD45／SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术分析,能排除正常细胞的干扰,使免疫分型的结果更为准确、可靠。     

多参数流式细胞术分析505例急性淋巴细胞白血病跨系列表达方式

跨系列抗原表达是白血病免疫表型的一个重要特征。对于急性淋巴细胞白血病（ALL）的跨系表达方式,目前国内尚缺乏大样本多参数的研究报道。本研究利用三色流式细胞术探讨505例ALL（431例B—ALL,74例T—ALL）患者23种系相关抗原的跨系表达方式。结果显示：全部ALL病例中,髓系抗原的表达率为56．4％,其中以CD13（32．7％）的表达最常见,其次为CD33（29．5％）、CD15（19．2％）和CD11b（7．7％）。CD13／CD33在CD34^＋病例中的表达高于CD34^＋病例。在B—ALL中,T系抗原CD4、CD5、CD7和CD2的表达率依次为6．3％、2．8％、1．9％和1．4％,并且CD7^＋、CD2^＋和CD4^＋病例通常共表达CDl3和（或）CD33。在T—ALL,B系抗原cCD79a、CD19和CD22的表达率分别为8．1％、6．8％、和2．8％,而全部CD19和CD22表达者均伴CD13／CD33表达。结论：ALL的跨系袁达多存在未成熟的阶段,以跨髓系抗原的表达最常见（B^＋M^＋,T^＋M^＋）,偶有B系、T系和髓系抗原的共表达（B^＋T^＋M^＋）,仅有B系和T系跨系表达的极少（B^＋T^＋M^-）。     

四色流式细胞术分析B细胞型急性淋巴细胞白血病免疫表型

为了研究国人B细胞型急性淋巴细胞白血病(B-ALL)免疫表型特点，使用了四色流式细胞术CD45／SSC 设门分析181例B-ALL的免疫表型。研究结果发现，所有检测病例CDl9阳性率100％，HLA-DR阳性率98．9％，CD38，CD10和CD34阳性率分别为88．5％，76．8％和76．8％，CD117与T系抗原CD2和CD7在B-ALL中很少表达。儿童组(≤14岁)CD10比例较高，青少年(15-18岁)和成人组(≥19岁)髓系相关抗原CD13和(或)CD33表达较高。各年龄组CD10 ／CD34 型比例最高，随年龄增长CD10 /CD34 型比例升高。CD10-CD34 型伴殖系抗原表达率明显高于其它亚型。与CD45 病例相比，CD45-或CD45 /-病例常伴有较高的CD10表达。43例标本RT-PCR检测bcr／abl结果显示：bcr／abl 组和bcr／abl-组伴殖系抗原表达率无显性差弄，m-bcr／abl 主要见于CD10／CD34 型。结论：典型的B-ALL细胞表达CD19和HLA-DR，不表达CD117。不同发育阶段CD34，CD10和CD45表达不一。青少年组免疫表型与成人组相似。CD45 多见于CD10-B-ALL。儿童组殖系抗原表达率较低。m-bcr／abl 多见于CD10／C1)34 型B-ALL。     

多参数流式细胞术动态监测儿童B系急性淋巴细胞白血病微量残留病的临床意义

摘要本研究旨在探讨儿童B系急性淋巴细胞白血病（B-ALL）化疗过程中监测不同时间点微量残留病（MRD）水平的临床意义。回顾性分析我院2008年8月至2011年9月以流式细胞术监测3个时间点（即诱导化疗第15天、第33天和治疗第12周）的206例B-ALL患儿骨髓的MRD。结果表明：①206例B-ALL患儿中196例诱导化疗后迭完全缓解（CR）（CR率95．1％）,其1年与3年无事件生存（EFS）率分别为（92．7±1．8）％和（78．7±3．7）％,其中标危、中危、高危组的3年EFS率分别为（85．6±4．9）％、（82．1±5．8）％和（58．1±9．2）％,3组比较有明显统计学差异（P〈0．001）;②各时间点上MRD分析显示：MRD水平越高,患儿的3年EFS率越低,其中第15天MRD≥10^-2组、第33天和第12周MRD≥10^-3组的患儿预后明显不佳;多因素分析显示,第12周MRD≥10^-3为独立的不良预后因素;第12周MRD〈10^-3的3年EFS率为（86．3±4．1）％,MRD≥10^-3的3年EFS率为（55．8±9．1）％,差异有统计学意义（P〈0．05）;③在化疗第33天MRD阴性（MRD〈10^-4）的98例患儿中有8例复发（复发率为8．2％）,在这98例惠儿中有39例在第12周时转为阳性（MRD≥10^-4）,其中5例复发;在第12周时MRD仍为阴性的59例中有3例复发;在第33天MRD阳性的108例患儿中有19例复发（复发率为17．6％）,复发率在MRD阳性和阴性两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：B-ALL患儿治疗过程中以流式细胞术动态监测MRD可有效地评估治疗反应、判断预后、预测复发及指导化疗方案的调整,其中第15天、第33天及第12周的MRD分别以10^-2、10^-3、10^-3为区分危险度最佳界值,第12周MRD≥10^-3为独立的不良预后因素。     

Flow Cytometry Immunophenotyping Evaluation in Acute Lymphoblastic Leukemia: Correlation to Factors Affecting Clinic Outcome

The authors conducted a flow cytometry immunophenotyping study in patients with acute lymphoblastic leukemia (ALL) from Natal, Rio Grande do Norte, Brazil. The patients (n = 126) were newly diagnosed using a panel of monoclonal antibodies: CD1a, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD10, CD13, CD33, CD14, CD19, CD22, CD79a, CD117, CD34, anti‐IgM, anti‐TdT, anti‐HLA‐Dr, and anti‐human kappa and lambda light chains. Additional data, such as patients' age and gender, clinical and laboratory findings such as presence of tumor masses, lymphadenopathy, hepatomegaly, splenomegaly, leukemic infiltration in the central nervous system (CNS) were also investigated. Results showed that 56.7% of the cases were B‐lineage ALL and 55% were T‐cell ALL. Also, we found that males were more affected by the disease, regardless of immunological classification. The correlation between age and immunological subtypes showed that the B‐lineage ALL occurred more frequently in patients aged under 15while the T‐cell ALL subtype was more frequent in adults. Immunophenotypic profiles and morphological subtypes showed a direct correlation between L3 subtype and B‐lineage ALL, while L1 and L2 subtypes correlated more often with B‐cell lineage and T‐cell ALL, respectively. Correlation analysis between immunophenotypic and clinical profiles showed that T‐cell ALL was more associated with a higher incidence of lymphadenopathy, hepatomegaly, splenomegaly and CNS leukemic infiltration, also showing a greater blast cell count in peripheral blood than the other subgroups. The presented data suggest that immunophenotyping is an important method in the diagnosis, monitoring and prognostic assessment in determining the pathological mechanisms of evolution of ALL.     

用流式细胞术结合单克隆抗体CD71,Ki-67和PCNA研究儿童急性淋巴细胞白血病的细胞增殖(英文)

为研究儿童急性淋巴细胞白血病的细胞增殖动力学,我们用流式细胞术结合单克隆抗体CD71,Ki-67和增殖性细胞核抗原(PCNA)检测了21例初诊急性淋巴细胞白血病(ALL)儿童骨髓细胞的增殖性抗原表达情况。结果表明:白血病细胞的CD71标记指数(LI)与正常细胞相比无显著差异,且个体间异质性较大;白血病细胞的Ki-67和PCNA的LI明显高于正常细胞,每例标本的PCNA LI均高于Ki-67LI,两者间有明显相关关系。本实验结果提示白血病细胞的增殖活力明显高于正常细胞,单克隆抗体Ki-67和PCNA是检测白血病细胞增殖活力的有效生物学指标,且PCNA的敏感性高于Ki-67。     

急性白血病流式细胞术免疫分型中系相关抗体的敏感性和特异性分析

为了评估急性白血病流式细胞术免疫分型中系相关抗体的敏感性和特异性，参考St Jude研究医院的急性白血病免疫分型方案对184例急性白血病患者进行流式细胞术免疫分型。结果表明：AML系相关抗体CD13和CD33的敏感性较高(95.5％和91．2％)，特异性不足(72．5％和62．2％)；MPO敏感性低(69．1％)，特异性高(100％)；CD117敏感性、特异性都高(88．2％和100％)。CD14、CD15敏感性低(18．4％和27．2％)，CD14对单核细胞特异性高。B细胞系ALL系相关抗体CD19具有高敏感性(100％)，而特异性(83．4％)差；CD79a、CD22(CyCD22)敏感性(96．4％和100％)和特异性(100％和100％)都高；CD10和CD20的敏感性(53．6％和70．4％)、特异性(82．5％和87．5％)均低。T—ALL系列相关抗体CD3(CyCD3)高特异性(97．5％)，而敏感性(80．0％)欠佳；CD7敏感性高(100％)，特异性低(77．9％)；CD5、CD2、CD1a敏感性、特异性均不理想。结论：184例急性白血病系相关抗体的敏感性和特异性分析与St Jude免疫分型方案基本一致，只是在确定AML时CD117似乎优于MPO；确定B细胞系ALL时CD22和CD79a具有相似的敏感性和特异性，所以可以任选一个。     

成人与儿童急性淋巴细胞白血病细胞遗传学大样本对比分析

本研究对566例成人急性淋巴细胞白血病（aALL）和586例儿童急性淋巴细胞白血病（cALL）的细胞遗传学进行对比分析。对所有患者均进行了细胞遗传学分析,部分患者进行了FISH检测。结果表明：aALL与cALL的染色体异常存在明显的差异。aALL中异常核型占62．0％,染色体异常较多见的为t（9;22）（q34;q11）、亚二倍体、超二倍体（47—50）、abn（6q）、abn（9p）、-7等,预后不良的占多数。cALL中异常核型占39．2％,染色体异常较多见的为高超二倍体、亚二倍体、TEL／AML1（＋）、＋8、超二倍体（47—50）、＋21等,预后良好的占多数。其中异常核型、总亚二倍体、总超二倍体（47—50）、t（9;22）（q34;q11）、-7、abn（7q）、abn（14q32）、＋Ph在aALL中的发生率明显高于eALL;cAu．正常核型（N）、高超二倍体、＋8、＋21＊2、TEL／AML1（＋）的发生率明显高于aALL。Ph（＋）在aALL中的检出率为20．5％,伴有附加异常的占63．8％。Ph（＋）aALL附加异常中＋Ph、-7、i（9q＋）、9p-、＋8、＋21、＋x、6q-、abn（14q32）、＋14出现的比例较高。Ph（＋）在cALL中的检出率为4．4％,明显低于aALL（P：0．000）,伴有附加异常的占42．3％,附加异常中abn（9p）、abn（7p）、-7、17p-、＋21出现的比例较高。结论：本组病例染色体数目异常及结构异常几乎涉及到每一条染色体,复杂核型多见。aALL与cALL的染色体异常存在明显的差异。