蛋白酶体抑制剂MG-132诱导L1210细胞凋亡及其机制研究

为了观察蛋白酶体抑制剂MG-132对淋巴细胞白血病细胞株L1210的致凋亡作用,探讨MG-132的致凋亡机制,分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG-132处理L1210细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,应用Annexin-Ⅴ和PI双染色细胞流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定细胞中caspase3的活性,采用Western-blot法检测细胞NF-κB P65核蛋白的表达。结果表明:在相同的作用时间下,随着MG-132浓度的增高(0、2.5、5、10、20μmol/L),细胞增殖抑制率、凋亡率、caspase3活性逐渐升高;Western-blot法检测显示,细胞NF-κB P65核蛋白表达水平降低。结论:蛋白酶体抑制剂能够诱导L1210细胞凋亡,其机制可能是通过下调NF-κB的表达,进一步活化caspase3的活性而诱导凋亡。     

三氧化二砷对SPCAⅠ/人肺腺癌细胞株抗增殖及诱导凋亡作用的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对SPCAⅠ/人肺腺癌细胞株的抗增殖效应及诱导细胞凋亡的作用。方法将SPCAⅠ/人肺腺癌细胞株培养传代,分别加入不同浓度的三氧化二砷,作用24小时后,分别以酶标仪检测细胞抑制率、FACSAr-ia流式细胞仪检测细胞凋亡率、倒置显微镜观察凋亡细胞形态。结果不同浓度的三氧化二砷体外对人肺腺癌细胞株SPCA/Ⅰ均有直接的抑制作用,其抑制率与所用药物浓度呈正相关;三氧化二砷体外对人肺腺癌细胞株SPCAⅠ/有诱导凋亡的作用,细胞凋亡率明显增加。倒置显微镜见细胞由原来贴壁生长而逐渐脱落、外形变圆、体积缩小、折光性增强,核染色质凝集,细胞裂解。结论三氧化二砷能通过诱导细胞凋亡,直接抑制人肺腺癌细胞株SPCAⅠ/增殖。     

华蟾素对Jurkat细胞株的体外作用和动物实验研究

目的:通过体外实验和动物实验,探索华蟾素对白血病细胞株的作用。方法:通过四氮唑蓝(MTT)比色法、Hoechst荧光染色法、原位末端标记(TUNEL)法、DNA凝胶电泳及流式细胞术(FCM)观察华蟾素对人白血病细胞株Jurkat的增殖、细胞凋亡、bcl-2表达的影响;在DBA/2小鼠的腹腔中注射L1210细胞,比较治疗组和对照组小鼠的生存期,评价药物疗效。结果:与对照组相比,1∶100～1∶25浓度的华蟾素能明显抑制Jurkat细胞生长,Hoechst荧光染色可见典型的凋亡形态学改变,TUNEL可见深棕色凋亡细胞,DNA电泳出现凋亡特有的“梯子”式条带,AnnexinV/PI双染色的FCM也证实凋亡的存在。在经1∶100、1∶50、1∶25浓度的华蟾素处理2d后,细胞凋亡率分别为18.78%、24.40%和40.29%。凋亡细胞的bcl-2表达由44.07%下调至16.30%。动物实验中,L1210白血病腹水瘤小鼠经华蟾素治疗后,生存期延长35.90%。结论:华蟾素能抑制Jurkat细胞生长并诱导凋亡,可能是通过下调bcl-2的表达来实现。动物实验证实,华蟾素能延长L1210白血病腹水瘤小鼠的生存期。     

拓扑替康对人子宫内膜癌细胞株AN3CN抑制作用的研究

目的观察拓扑替康(TPT)对人子宫内膜癌细胞株AN3CN生长的抑制作用及TPT对诱导肿瘤细胞调亡的作用。方法共分为5组,对照组不加TPT,治疗组根据所加TPT浓度的不同分为20μgL组、40μgL组、80μgL组及160μgL组。MTT法检测各组在不同时间经TPT处理后的肿瘤细胞抑制率,流式细胞术检测各组细胞经TPT处理24小时后的细胞周期变化,电子显微镜观察各组肿瘤细胞形态学改变。结果治疗组不同浓度的TPT对AN3CN细胞的生长均有抑制作用,其中40μgL组和80μgL组随药物作用的延长,肿瘤抑制率也显著增大,各治疗组G0G1期的细胞比例数增加,S期和G2M期细胞减少,其中40μgL组、80μgL组和160μgL组与对照组差异显著(P<005),各治疗组的细胞在形态学上呈细胞调亡的表现。结论TPT对子宫内膜癌细胞株AN3CN的生长具有抑制作用,并且诱导肿瘤细胞调亡是TPT抗肿瘤作用的机理之一。     

三氧化二砷对SPCA/I人肺腺癌细胞株抗增殖及诱导凋亡作用的研究

目的 探讨三氧化二砷( As2 O3)对SPCA/I人肺腺癌细胞株的抗增殖效应及诱导细胞凋亡的作用.方法 将SPCA/I人肺腺癌细胞株培养传代,分别加入不同浓度的三氧化二砷,作用24小时后,分别以酶标仪检测细胞抑制率、FACSAria流式细胞仪检测细胞凋亡率、倒置显微镜观察凋亡细胞形态.结果 不同浓度的三氧化二砷体外对人肺腺癌细胞株SPCA/I均有直接的抑制作用,其抑制率与所用药物浓度呈正相关;二氧化二砷体外对人肺腺癌细胞株SPCA/I有诱导凋亡的作用,细胞凋亡率明显增加.倒置显微镜见细胞由原来贴壁生长而逐渐脱落.外形变圆、体积缩小、折光性增强,核染色质凝集,细胞裂解.结论 三氧化二砷能通过诱导细胞凋亡,直接抑制人肺腺癌细胞株SPCA/I增殖.     

塞来昔布对U266细胞株增殖和凋亡的研究

目的观察环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对骨髓瘤细胞株U266细胞的增殖抑制和凋亡诱导的影响,并通过比较单用塞来昔布和加用Caspase-3阻断剂Ac-DEVD-FMK后的U266细胞株的凋亡率以及Caspase-3的表达,探讨其诱导U266细胞株凋亡的分子机制。方法骨髓瘤细胞株U266细胞经不同浓度的塞来昔布处理后,应用CCK-8体外药物筛选法测定受试样品塞来昔布对人骨髓瘤细胞U266体外增殖有无抑制作用及作用强弱;Annexin V-FITC染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法测定不同实验组样品中Caspase-3总量的表达。结果塞来昔布浓度>40μmol/L能抑制人骨髓瘤细胞U266体外增值,并呈浓度依赖性,IC50=66.83μmol/L。塞来昔布在40～120μmol/L浓度范围内能诱导人骨髓瘤细胞U266细胞凋亡,呈浓度依赖性。用Ac-DEVD-FMK阻断Caspase-3活性,塞来昔布诱导的U266细胞凋亡明显受抑。结论塞来昔布可诱导骨髓瘤细胞株U266细胞株凋亡,其机制涉及Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路。     

紫杉醇对SHI-1细胞株增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的观察紫杉醇体外抑制人白血病细胞SHI-1细胞的增殖活性及诱导细胞分化和凋亡的作用,并探讨其凋亡机制。方法以不同质量浓度（5、0．5、0．05、0．005mg／L）的紫杉醇与SHI-1细胞在体外共同培养,分别作用0、12、24、36、48h,通过细胞计数、台盼蓝染色、细胞形态学、DNA含量测定、AnnexinV／PI、细胞线粒体跨膜电位（△φm）等分析细胞的凋亡。结果紫杉醇能促进SHI-1细胞的凋亡;0．05mg,／L紫杉醇处理对SHI-1细胞株增殖抑制及诱导凋亡作用最为显著。结论紫杉醇能抑制SHI-1细胞增殖活性,诱导细胞分化,促进细胞凋亡,使SHI-1细胞停留在G2／M期。     

超声对鼻咽癌拓扑替康化疗的增效作用研究

目的以人鼻咽癌低分化细胞株(CNE-2)为对象,观察超声对拓扑替康(TPT)化疗作用的影响。方法以CNE-2为靶细胞,计算TPT的半数抑制浓度(IC50);试验分为空白对照组,高频超声治疗组(3 MHz),低频超声治疗组(1 MHz),TPT组,低频超声(1 MHz)+TPT组和高频超声(3 MHz)+TPT组;记录在不同频率的超声作用下,TPT对CNE-2的生长抑制率,并在电镜下观察细胞和亚细胞结构变化。结果 TPT对鼻咽癌细胞株的IC50为0.396μg/ml;超声联合TPT组对CNE-2的生长抑制率强于单纯TPT组(P<0.01),并且1 MHz作用优于3 MHz;透射电镜结果显示:超声联合化疗对CNE-2重要细胞器的损害程度最严重,早期出现坏死或凋亡的细胞较多。结论超声对TPT有增效作用,并且这种作用有频率依赖性,1 MHz作用优于3 MHz。     

木脂素-1通过抑制DNA拓扑异构酶I诱导胃癌细胞凋亡的机制研究

目的 探究牛蒡子衍生物木脂素-1(Mzs-1)体外抗肿瘤活性,初步分析其诱导胃癌细胞凋亡相关机制,为临床提供参考依据.方法 采用CCK-8法测定Mzs-1对人胃癌细胞株SGC-7901增殖抑制情况,计算其半数抑制浓度(IC50),并观察Mzs-1对SGC-7901细胞凋亡及细胞周期的影响,分析Mzs-1对DNA拓扑异构...     

芦荟大黄素对人肺癌A549细胞的体外抑制作用研究

目的:探讨芦荟大黄素(AE)对人肺癌A549细胞的体外抑制作用及其可能的作用机制。方法:MTT法检测AE对A549细胞的生长抑制作用,流式细胞仪分析A549细胞周期分布和免疫组化法检测A549细胞中caspase-3和caspase-8表达的变化。结果:AE对人肺癌A549细胞的生长抑制率随浓度和作用时间的增加而呈明显上升趋势,表现出一定的浓度-时间-效应依赖关系。随着AE浓度的增加,A549细胞的G0/G1期比率逐渐上升,而G2/M期比率逐渐下降;同时A549细胞中caspase-3和caspase-8表达均上调。结论:AE能通过诱导人肺癌A549细胞周期阻滞于G2/M期来抑制癌细胞的生长增殖。其机制可能与caspase-3和caspase-8表达上调有关。     

纳洛酮抗颅脑损伤后细胞凋亡及信号传递机制的实验研究

目的 观察纳洛酮对严重颅脑损伤后神经细胞凋亡的影响，探讨Caspase -3介导的信号传递机制。方法 选用健康普通家兔随机分成正常组、对照组和纳洛酮组，分别予非致伤、致伤、致伤后纳洛酮腹腔注射处理，应用免疫组织化学方法检测各组家兔致伤部位和对侧非致伤部位脑组织中凋亡及Caspase -3蛋白表达阳性的神经细胞数量。结果 在致伤部位或对侧非致伤部位，正常组、纳洛酮组及对照组脑组织中调亡的及Caspase -3蛋白表达阳性的神经细胞所占比例的差异有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01），数值大小为：正常组〈纳洛酮组〈对照组。结论 纳洛酮可抑制严重颅脑损伤后神经细胞凋亡，Caspase -3介导的信号传导机制可能参与纳洛酮抗严重颅脑损伤后神经细胞凋亡的过程。     

Mechanism of synergistic cell killing when methotrexate precedes cytosine arabinoside: study of L1210 and human leukemic cells.

Synergistic killing of L1210 cells occurs when methotrexate (MTX) is administered just before 1-beta-D-arabinofuranosylcytosine (Ara-C). This pehnomenon is dependent upon both the dose and time of exposure to MTX. Such increased killing of cells can be explained by the enhanced intracellular accumulation of Ara-C in cells exposed to MTX. This enhancement of Ara-C entry into cells was only observed when the dose of MTX was high enough (1, 10, and 100 muM) to result in free intracellular nondihydrofolate reductase-bound MTX. At the highest doses of MTX (10 and 100 muM) Ara-C triphosphate was increased eightfold and deoxycytidine triphosphate was decreased by 50%. Therefore, the maximum synergistic cell kill when MTX precedes Ara-C may be the consequence of greater inhibition of DNA polymerase by th;e increased Ara-C triphosphate in the presence of the decreasing natural substrate of this enzyme, deoxycytidine triphosphate. Enhanced Ara-C accumulation after administration of MTX was also observed in human acute myelogenous leukemia cells.     

前列腺素E1预先给药对出血性休克复苏后大鼠肾组织Caspase-3表达的影响

目的 探讨PGE1预先给药对急性出血性休克复苏后大鼠肾组织活化Caspase-3以及TNF-α mRNA,iNOS mRNA表达的影响.方法 32只雄性SD健康大鼠随机分成4组(n=8),A:正常对照组,不进行任何处理;B:手术对照组,0.5 mL生理盐水尾静脉注射,1 h后切开左侧腹股沟皮肤暴露股动静脉;C:出血性休克复苏组,大鼠硫喷妥纳麻醉后,经股静脉穿刺置管放血,平均动脉血压降至25～35 mmHg,维持1 h,自体温血复苏30 min,维持平均动脉血压80～100 mmHg,制作失血性休克复苏模型;D:出血性休克复苏+lipo-PGEl预先给药组,lipo-PGEl按10 μg/kg溶于0.5 mL生理盐水尾静脉汴射,1 h后制作出血性休克复苏模型.各组分别于复苏后6 h时间点用Northern blotting法检测肾组织TNF-α mRNA和iNOS mRNA的表达;免疫组化检测肾脏组织活化Caspase-3的表达.数据采用单因数方差分析(SNK-q检验),以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 出血性休克复苏模型组肾组织出现Caspase-3阳性表达细胞;TNF-α mRNA和iNOS mRNA的表达也明显高于正常对照组[(0.651±0.028)vs.(0.030±0.003),(0.524±0.022)vs.(0.026±0.003),P<0.05]和手术对照组[(0.651±0.028)vs.(0.029±0.002),(0.524±0.022)vs.(0.025±0.003),P<0.05];预先给药组肾组织Caspase-3阳性细胞数量显著减少;TNF-αmRNA和iNOS mRNA的表达明显低于模型组[(0.250±0.019)vs.(0.651±0.028),(0.203±0.020)vs.(0.524±0.022),P<0.05],正常对照组和手术对照组间肾组织Caspase-3的表达以及TNF-α mRNA和iNOS mRNA的表达尢显著差异[(0.029±0.002)vs.(0.030±0.003),(0.029±0.002)vs.(0.030±0.003),P>0.05].结论 lipo-PGEl预先给药可以下调出血性休克复苏后大鼠肾组织Caspase-3的表达水平,其机制可能与在基因转录水平抑制TNF-α和I-NOS的表达有关.     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰神经干细胞移植短暂性脑缺血再灌注损伤大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达

背景:以往对脑缺血再灌注后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific protease 3,Caspase-3)的表达均缺乏长时间的动态观察.目的:探讨胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞移植对暂时性脑缺血大鼠脑组织Caspase-3表达的影响.设计:随机对照动物实验.材料:清洁级成年SD大鼠60只,随机分为4组:正常对照组5只、缺血再灌注组5只、单纯细胞移植组25只、基因修饰细胞移植组25只.另取清洁级新生SD大鼠数只,用于分离培养神经干细胞.方法:除正常对照组外,其余3组大鼠按改良性线栓法制备暂时性脑缺血模型.再灌注3 d,单纯细胞移植组从右侧侧脑室每只注入20 μL神经干细胞悬液,含(4.0-5.0)×10~5个神经干细胞;基因修饰细胞移植组每只注入等量胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞悬液;缺血再灌注组每只注入20μL生理盐水.正常对照组、缺血再灌注组在缺血再灌注1周麻醉处死动物,单纯细胞移植组、基因修饰细胞移植组分别在缺血再灌注1,2,3,5,7周麻醉处死动物,5只/时间点.主要观察指标:采用免疫组织化学SP法观察Caspase-3在海马和额顶皮质表达及分布特点.结果:免疫组织化学染色显示,Caspase-3免疫阳性产物位于细胞核、细胞质和部分突起.在海马:单纯细胞移植组、基因修饰细胞移植组Caspase-3阳性细胞数均随再灌注时间的延长而逐渐减少;除缺血再灌注第1周外,其余各时间点基因修饰细胞移植组Caspase-3阳性细胞数均明显少于单纯细胞移植组(P<0.05).在额顶皮质:单纯细胞移植组、基因修饰细胞移植组Caspase-3阳性细胞数亦均随再灌注时间的延长而逐渐减少;除缺血再灌注第1,2周外,其余各时间点基因修饰细胞移植组Caspase-3阳性细胞数均明显少于单纯细胞移植组(P<0.05).结论:胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞移植通过降低Caspase-3的表达,减少神经元凋亡,从而抑制缺血性脑损伤的进行性恶化,其移植效果优于单纯神经干细胞移植.     

Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的：观察Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响。方法：将36只SD大鼠以改良Allen法制作大鼠急性脊髓损伤（SCI）模型（脊髓中度损伤），分为对照组（单纯损伤A组18只，按时间段又分为A1，A2，A3），治疗组（应用Z-DEVD-FMK治疗B组18只，按时间段又分为B1，B2，B3）。损伤后6h，3d，8d对脊髓损伤区进行组织学HE染色，细胞凋亡TUNEL标记，Fas凋亡因子检测，免疫组化检测Caspase-3的表达变化，同时采用BBB评分方法和斜板试验观察神经功能恢复情况。结果：对照组和治疗组均见TUNEL阳性的凋亡细胞和Caspase-3表达。Z-DEVD-FMK治疗组神经细胞的凋亡数减少，Caspase-3表达降低，神经功能增强，两组相比差异有显著性（P〈0．05）。结论：Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK能减少继发性脊髓损伤细胞凋亡和促进神经功能的恢复。     

高压氧对大鼠创伤性脑损伤神经元凋亡及其凋亡相关因子的影响

目的:探讨高压氧对创伤性颅脑损伤后神经细胞凋亡及凋亡相关因子Caspase-3和Bcl-2表达的影响。方法:成年健康雄性Wistar大鼠66只,随机分为高压氧治疗组(HBOT)、损伤对照组和假手术组,应用自由落体法建立中度颅脑损伤的大鼠模型,采用原位末端标记法(TUNEL)染色检测脑挫伤灶旁周围半影区的细胞凋亡情况,用免疫组化法检测Caspase-3和Bcl-2蛋白的表达。结果:HBOT组与损伤对照组相比,凋亡细胞数和Caspase-3阳性表达均有不同水平降低,Bcl-2表达升高,差异有显著性(P<0.01)。假手术组各指标均为阴性。结论:HBO对创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的发生有抑制作用,其抑制神经细胞凋亡的机制可能与HBOT对促凋亡蛋白Caspase-3的抑制和抗凋亡蛋白Bcl-2的促进作用有关。     

三氧化二砷对K562/ADM耐药细胞凋亡抑制的逆转作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导白血病K562/ADM耐药细胞凋亡的分子机制。方法:采用MTT比色法检测K562/ADM耐药细胞增殖活性,细胞形态学和annexinV /PI双染色检测细胞凋亡,RT-PCR检测mdr1、bcl-2和caspase-3基因mRNA的表达水平,流式细胞法(FCM)测定P-糖蛋白(P -glycoprotein,P-gp)和bcl-2蛋白表达及caspase-3活性。结果:As2O3显著抑制K562/ADM耐药细胞的增殖;经 As2O3处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变,annexinV /PI双染显示凋亡细胞明显增加;mdr1mRNA表达和P-gp合成明显降低,凋亡抑制基因bcl-2mRNA及其蛋白bcl-2表达下调, caspase-3mRNA表达和caspase-3活性显著增强。结论:As2O3诱导K562/ADM耐药细胞凋亡,其主要机制可能为As2O3抑制 mdr1和bcl-2基因表达,逆转耐药白血病细胞因bcl-2和P-gp高表达所介导的凋亡抑制。     

新辅助化疗中凋亡效应因子caspase-7、caspase-3及凋亡抑制因子survivin关系初探

目的探讨凋亡效应因子caspase-7、caspase-3及凋亡抑制因子survivin之同的相互关系。方法免疫组织化学法检测17例乳腺癌新辅助化疗标本中caspase-7、caspase-3、sunrivin的表达，统计分析采用Fisher确切概率法、Spearman检验。结果化疗前后三者阳性率比较，仅caspase-7差异有统计学意义（P=0．038）；caspase-3、survivin差异无统计学意义（均P〉0．05）。化疗前三者表达强度未见相关性（均P〉0．05）。化疗后表达强度caspase-3与caspase-7、survivin相关，P值分别为0．009、0．000；suvivin与caspasc-7无相关性。化疗前后三者表达强度变化比较，仅caspase-7与caspase-3相关（P=0．035）；余未见相关性。结论caspase-7、caspsse-3表达相关，但caspase-7可能不依赖caspase-3而表达，survivin与caspase-7、caspase-3之间无相关性，也不能抑制后两者的表达，三者关系尚需进一步研究。     

Effect of shock waves on suspended and immobilized L1210 cells

L1210 mouse leukemia cells have been exposed to different doses of shock waves generated by underwater spark discharge at 18 kV in an experimental lithotripter (XL1, Dornier). Histological and flow cytometric investigations revealed severe damage and a LD50 of about 420 shock waves when the cells were treated as suspensions. Cells immobilized in gelatine, however, were unaffected, indicating that secondary effects are responsible for the cellular damage. Possible mechanisms such as cavitation, jets, and shear forces are discussed.