ATRA联合Genistein对A549人肺腺癌细胞株MUC1表达及转移潜能的影响

目的 MUC1是一种跨膜粘蛋白,在肿瘤进展过程中起重要作用,MUC1可作为多种肿瘤预后判断的有用标记,本实验探讨了全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)联合三羟异黄酮(Genistein)对肺腺癌细胞MUC1蛋白、mRNA的表达及转移潜能的影响.方法 ATRA、Genistein及两者联合处理人肺腺癌细胞株A549,免疫组化法检测MUC1蛋白的表达情况,荧光定量PCR法检测MUC1 mRNA的表达,根据细胞穿过铺有Matrigel胶多孔膜的数量检测细胞侵袭力.结果 ATRA和Genistein联合处理A549肺癌细胞后,具有协同下调细胞MUC1蛋白、mRNA的表达,抑制A549细胞体外侵袭能力的作用.结论 ATRA联合Genistein可能通过协同下调MUC1蛋白及mRNA的表达,从而抑制肺癌A549细胞的转移潜能.     

LPS的直接诱导对肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及对PMN黏附作用影响的研究

目的探讨内素毒(Endotoxin LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)ICAM-1表达的影响及诱导发生的PMVEC对多形核中性粒细胞(PMN)黏附作用的影响。方法100ng/m l LPS刺激PMVEC 0、2、4、6、8 h或10、50、100 ng/m l LPS刺激6 h,同时检测PMVEC ICAM-1的表达(免疫细胞化学法)、PMVEC-PMN黏附率及抗ICAM-1抗体对黏附作用的影响,并进行PMVEC与PMN黏附作用的扫描电镜观察。结果LPS的直接刺激可诱导PMVEC ICAM-1的表达增加,且表现为随LPS刺激的时间、剂量增加而增加;同时LPS直接刺激也促进了PMVEC对PMN的黏附率增加,其变化在时间与方式上几乎与ICAM-1的表达增加同步。Anti-ICAM-1抗体可以显著地抑制LPS诱导的PMVEC-PMN黏附(P<0.01)。扫描电镜可以直观地显示PMVEC-PMN黏附的超微结构表现,并且首次通过这种方式观察到了“间接系链”现象的存在。结论表明细菌致病因子LPS的直接诱导可以促进PMVEC表达ICAM-1,从而为PMVEC-PMN的黏附提供物质基础,而“间接系链”的发生更扩大和巩固了黏附效果。     

异黄酮Genistein对T细胞体外活化CD69表达的影响

目的 :研究异黄酮Genistein对T淋巴细胞活化的影响 ,探讨将其发展为免疫干预药物的可能性。方法 :应用荧光标记的单克隆抗体和流式细胞技术 ,在全血培养体系中于 2h和 6h时间点检测分别经 10 ,5 0或 10 0 μmol L浓度Genistein预培养的 ,PHA或PDB诱导活化的T细胞的CD6 9表达百分率。结果 :培养 2h后 ,Genistein对PHA活化组的抑制作用要强于PDB活化组 ,P <0 0 5 ;培养 6h后 ,Genistein对PHA活化组的抑制作用同样强于PDB活化组 ,P <0 0 5 ,但较之 2h时间点均有所降低 ;无论PHA活化组或PDB活化组 ,Genistein对T细胞CD6 9表达率的抑制效应均随作用浓度的升高而增强。结论 :Genistein对PHA和PDB诱导活化的T细胞的CD6 9表达率均有明显的抑制作用 ,这种抑制作用存在浓度依赖关系。Genistein有潜力发展成一种免疫干预药物。     

曲古柳菌素A对肺癌A549细胞凋亡的影响

目的:检测不同浓度的组蛋白去乙酰化酶抑制剂古曲柳菌素A(TSA)对A549细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨TSA抑制A549肺癌细胞的分子机制.方法:以流式细胞术分析,Annexin V/PI 法,免疫印迹研究 TSA 对A549 细胞的细胞周期、凋亡及Bax蛋白水平变化的影响.结果:TSA处理后,100nmol/L和400nmol/L引起细胞G0/G1及G2/M期阻滞.Annexin V/PI法显示TSA可诱导细胞凋亡.Bax蛋白的表达随着TSA浓度的增高而增强.结论:不同浓度的TSA对A549细胞周期阻滞影响不同,低浓度可诱导细胞凋亡.     

人肺癌细胞株抗脱落凋亡特性的分析

目的：研究肺癌细胞A549、Spc-A1、PLA801及Calu-3抗脱落凋亡的特性，为研究肺癌细胞抗脱落凋亡的机制提供理论依据。方法：应用形态学观察，流式细胞术结合PI及AnnexinV—FITC双标记染色法及Western blot法观察4株肺癌细胞脱落凋亡的特性。结果：脱落培养12h后，4株肺癌细胞有不同形态学变化；流式细胞仪检测发现Calu-3悬浮培养24h后，凋亡率与贴壁培养24h的凋亡率有明显差别；而A549等3种肺癌细胞系与贴壁培养的对照组相比较，其凋亡率无显著性差异，Western blot结果也验证了上述结果。结论：肺癌细胞Calu-3属于脱落凋亡细胞，而A549、Spc-A1、PLA801属于抗脱落凋亡细胞。     

β-榄香烯通过抑制HIF-1α表达促进人肺癌细胞凋亡

目的探讨β-榄香烯是否通过抑制肺癌细胞中HIF-1α的高表达促进肺癌细胞的凋亡及相关机制。方法常规培养人肺癌A549细胞,实验分为对照组、乏氧组、β-榄香烯组、不同浓度β-榄香烯/乏氧处理组;通过转染含有HIF-1α基因的质粒过表达HIF-1α基因。应用Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪、TUNEL检测细胞凋亡。并采用免疫荧光检测HIF-1α蛋白的活化、Westen blot方法检测Bax、caspase-3及Bclx L蛋白表达及转染效率。结果β-榄香烯能够抑制肺癌A549细胞的增殖力,呈时间和浓度依赖性,能够诱导乏氧状态下的肺癌A549细胞凋亡。β-榄香烯可通过上调A549细胞的Bax、caspase-3蛋白表达,降低Bcl-xL表达来诱导乏氧状态下肺癌A549的凋亡。此外,β-榄香烯可有效降低乏氧状态下HIF-1α蛋白的高表达。通过转染过表达HIF-1α基因,大大降低了β-榄香烯的诱导凋亡作用。结论β-榄香烯可以上调乏氧状态下A549细胞凋亡,可能与抑制HIF-1α的高表达相关。     

肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）诱导肺癌细胞凋亡的研究

目的　研究肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）对肺癌细胞株（A549）的致凋亡作用及其作用机理,为临床应用TIL治疗肺癌提供依据.方法　从肺癌病人胸水中用淋巴细胞分离液分离提取出TIL细胞,在含1000U/mlIL-2的完全培养基中培养20天后,将TIL细胞与靶细胞（肺癌细胞株）共同培养24小时,将培养细胞制成细胞涂片,经福尔马林固定,用原位末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的脱氧三磷酸嘧啶（duTP）末端标记法（TUNEL）原位的方法进行肺癌凋亡细胞的标记.结果　肺癌肿瘤细胞凋亡指数（%）经TIL作用组的凋亡指数为8.56±0.84,对照组凋亡指数为2.10±0.86,两组之间差别有非常显著性（p<0.01）.结论　TIL细胞诱导肺癌细胞的凋亡可能是TIL细胞对肺癌细胞杀伤作用的机理之一.     

丹参醇提取物对内皮细胞VCAM-1、ICAM-1表达的影响

众所周知,粘附分子在内皮细胞受损过程中起了重要作用,中药丹参对血栓性疾病有治疗和预防作用,对内皮细胞有保护作用,但保护机制的研究尚不充分,如对内皮细胞粘附分子的表达是否有影响,还未见文献报道。本文用丹参醇提取物作用内皮细胞后,检测血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的变化,以进一步阐明丹参对内皮细胞保护作用的机制,为临床上用丹参防治心血管疾病补充理论依据。     

肺癌细胞bcl-2的表达与凋亡的关系

目的:为研究bcl-2的表达与肺癌细胞凋亡发生的关系.方法:采用免疫组化及末端转移酶介导的切口末端标记法(TUNEL).分别对73例肺癌组织进行bcl-2免疫组化染色和细胞凋亡的检测.并对bcl-2表达强度和细胞凋亡指数(Al)进行相关分析,结果:(1)bcl-2在肺癌组织中总的阳性率为27,4%,其中小细胞癌的阳性率为54%;鳞癌阳性率23%;腺癌阳性率18.7%(2)肺癌细胞AI为0到17.6%,其中有13例AI<1%,29例AI在1%到5%之间,31例AI>5%.(3)bcl-2表达的强应与肺癌细胞凋亡指数呈显著负相关.r=0.6216,P<0.01.结论:肺癌组织中bcl-2的过表达可能与抑制细胞凋亡有关.     

Elf-1在非小细胞肺癌中的表达与肿瘤细胞凋亡及患者预后的关系

目的探讨转录因子Elf-1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达与凋亡抑制蛋白(inhibitorof apoptosis protein,IAP)家族中最强的凋亡抑制因子survivin关系。方法采用免疫组化PV-9000法检测60例NSCLC组织芯片及9例正常肺组织中Elf-1的表达水平;脱氧核苷酸移换酶(terminal deoxynucleotidy transferase,TdT)介导的dUTP切口末端标记方法(TUNEL)检测癌细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果在正常肺组织中有1例Elf-1弱阳性,余为阴性,在NSCLC组织中的阳性率为70.0%,其表达水平与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移、临床分期和术后生存期有关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明其过表达与患者的生存率有关,阳性患者的生存率明显低于阴性患者(P<0.01)。Spearman相关分析显示,Elf-1在NSCLC组织中的表达与AI呈负相关(r=-0.708,P<0.01)。结论 Elf-1在NSCLC组织中的过表达影响着肿瘤细胞的凋亡,与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移和预后有关,检测其表达水平可作为判定NSCLC恶性生物学行为的参考指标。     

ICAM-1 supports adhesion of human small-cell lung carcinoma to endothelial cells

Adhesion of tumor cells to endothelium via cell-adhesion molecules constitutes a crucial step in metastasis, which is largely responsible for the poor prognosis of small-cell lung carcinoma (SCLC). Patients with SCLC were reported to have elevated levels of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1). The present study therefore focusses on endothelial ICAM-1 in tumor-cell adhesion. We found that the adherence of SCLC cells (cell lines H24, H69, H82) to cultured vascular endothelium in stasis and flow depends on the expression of ICAM-1. After blocking endothelial ICAM-1 with monoclonal antibodies, adhesion was significantly reduced. These results pinpoint ICAM-1 for the first time as a molecule crucially involved in SCLC cell-endothelial adhesion.     

电磁脉冲诱导肺癌细胞株A549凋亡的研究

目的　研究电磁脉冲 (EMP)对肺癌细胞A5 4 9凋亡的影响。方法　以场强为 6× 10 4V/m的EMP辐照 5次 /2min ,然后采用细胞计数、MTT、流式细胞术及免疫组化染色的图像分析 ,观察EMP对肺癌细胞A5 4 9的损伤作用 ,所有数据经SPSS8 0软件进行分析。结果　EMP可明显抑制肺癌细胞A5 4 9的增殖与活力。流式细胞术证明 ,A5 4 9细胞发生明显的凋亡。免疫组化的图像分析表明 ,伴有不同程度的Bcl 2蛋白表达的下调及P5 3蛋白表达的上调。结论　EMP可诱导肺癌细胞A5 4 9的凋亡。Bcl 2及P5 3蛋白参与了A5 4 9细胞的凋亡过程     

反义Bmi-1 RNA转染对人肺癌细胞株A549体外增殖的影响

目的 研究转染反义Bmi-1 RNA对人肺腺癌细胞A549的体外增殖及细胞周期和凋亡的影响.方法 将表达反义Bmi-1 RNA的真核表达载体稳定转染A549细胞株,GA18筛选挑取阳性克隆.应用即时荧光定量RT-PCR及Western blot检测转染后Bmi-1基因在mRNA水平及蛋白水平的表达;应用MTT比色法及平板克隆形成实验检测A549细胞体外生长能力;用PI单染及Annexin-V-PI双染技术在流式细胞仪上检测细胞周期及凋亡情况.结果 Western blot结果显示转染反义Bmi-1RNA使A549细胞中Bmi-1蛋白表达量减少了95%;MTT检测细胞生长曲线表明反义Bmi-1 RNA使A549细胞生长速度明显减慢;平板克隆形成实验结果显示转染反义Bmi-1 RNA的A549细胞在平板中形成集落的数目(0.67±0.50)明显低于未转染组(73.0±4.1)及转染空质粒组(67.0±4.0,P<0.01);流式细胞仪结果显示反义Bmi-1使A549细胞阻滞在G_0/G_1期,但对细胞凋亡没有影响.结论 反义Bmi-1 RNA在体外对A549细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制作用是通过使A549细胞阻滞在G0/G1期实现的.     

Cytokine regulation of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) expression on human glioblastoma cells

Intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) has recently been identified as one of the ligands for lymphocyte function-associated antigen-1 (LFA-1). Immunohistochemical staining of frozen tissue sections using the ICAM-1 antibody RR1/1 demonstrated significant levels of ICAM-1 expression on human glioblastoma cells and on intratumoural vascular endothelial cells. ICAM-1 was weakly expressed or absent from low grade gliomas and absent from normal and fetal brain. ICAM-1 expression was similar to that of MHC class II. HLA-DR antigens. Glioblastoma cell lines constitutively expressed ICAM-1 to a minimal or moderate extent. Surface antigen expression of ICAM-1 and ICAM-1-specific mRNA could be significantly increased by incubating glioblastoma cells with interleukin-1 beta (IL-1 beta), tumour necrosis factor-alpha (TNF-alpha), and interferon-gamma (IFN-gamma). IL-2, IL-4, IL-6 and transforming growth factor beta 2 (TGF-beta 2) had no significant effect on surface antigen expression. Significant enhancement of ICAM-1 expression was obtained using TNF-alpha and IL-1 beta at 1-10 U/ml and at 500 U/ml of IFN-gamma. Induction of ICAM-1 specific mRNA was observed 4 h after cytokine treatment and decreased by 24 h. Surface antigen expression of ICAM-1 increased for up to 48 h after treatment.     

一氧化氮供体对缺血再灌注肾脏ICAM-1表达的影响

目的 观察缺血再灌注后加用NO供体对肾脏ICAM-1表达及白细胞浸润的影响。方法 分别采用ICAM-1和整合素β2多克隆抗体，免疫组化方法观察加有NO供体后大鼠肾脏缺血再灌注24hICAM-1表达的变化及肾功能改变。结果 缺血再灌注24h大鼠肾脏ICAM-1及β2阳性细胞表达显著增强，以外髓直小血管，皮质肾小管外毛细血管较为明显，再灌注同时灌注NO供体SIN-1可显著抑制缺血再灌注后ICAM-1的表达增强，减少局部炎细胞浸润，改善肾功能，结论 NO供体可减少肾组织ICAM-1的表达及炎细胞浸润，发挥对急性缺血性肾衰的治疗作用。     

Inhibition of adhesion molecules by budesonide on a human epithelial cell line (lung carcinoma)

Inhaled corticosteroids in the treatment of asthma have been shown to produce marked reductions in the number of inflammatory cells (mainly mast cells and eosinophils) and their products at bronchial level (such as cytokines). Recently, it has been demonstrated that epithelial cells express ICAM-1/CD54 in allergic patients both during natural allergen exposure and after allergen challenge. We have previously demonstrated that deflazacort (a systemic steroid) reduces the expression of ICAM-1 on conjunctival epithelial cells. The present study aimed to evaluate the effects exerted by budesonide on adhesion molecule expression by a human epithelial cell line (lung carcinoma: DM) and on soluble ICAM-1. Budesonide was added at concentrations corresponding to 10⁻⁸, 10⁻⁷, and 10⁻⁶ mol/1 in cultured epithelial cells, either in the absence of any stimulus or in the presence of interferon-gamma (IFN-y) at 500 U/ml. After 24 h of incubation, cytofluorometric analysis was performed for ICAM-1 and CD29/VLAP1. The 24–h supernatants of the same cultures were collected and then evaluated for soluble ICAM-1 (sICAM-1). The results showed that budesonide inhibits ICAM-1 and CD29 basal expression on the cells studied (P<0.05): budesonide was effective in a dose-dependent manner. In addition, budesonide reduced surface ICAM-1 upregulation induced by IFN-γ at 500 U/ml (p<0.05). Finally, cell cultures with budesonide showed decreased levels of soluble ICAM-1 in basal condition, but not after IFN-γ stimulation.     

Thy-1表达水平对肺腺癌细胞A549迁移性及部分相关基因表达的影响

目的 验证Thy-1(CD90)基因与肺癌细胞迁移潜能的关系,并探讨其作用机制. 方法 利用真核表达载体pcDNA3.0构建包含Thy-1基因全长序列的重组表达质粒载体,转染A549细胞,G418筛选获得稳定克隆,采用RT-PCR及免疫荧光技术检测重组质粒转染后细胞内Thy-1 mRNA及蛋白表达水平的改变;通过体外Transwell迁移实验研究外源性Thy-1对A549细胞迁移能力的影响. 结果 构建了pcDNA3.0-Thy-1真核细胞表达载体;成功建立了稳定表达外源性人Thy-1蛋白的肺癌A549细胞株.Trenswell实验提示,表达外源性Thy-1蛋白的A549细胞较对照组细胞体外迁移能力下降(P<0.0001);基因芯片结果提示,Thy-1基因在肺癌细胞中表达后,影响了25个细胞迁移相关基因的表达,在检测基因表达差异时,RT-PCR与基因芯片能够得到基本一致的结果. 结论 Thy-1基因的过表达能降低肺癌细胞系A549细胞的迁移能力,并改变A549细胞多个细胞迁移相关基因的表达,提示Thy-1在肺癌组织的表达状态可能影响肺癌的转移性.     

HIV-1 Nef通过Erk/Mapk途径调节内皮细胞黏附分子ICAM-1的表达

目的:研究HIV-1Nef基因对内皮细胞ECV304细胞ICAM-1表达的影响及其信号途径。方法:选用Nef基因稳定表达细胞株ECV304-Nef和对照细胞株ECV304pcDNA3.1(+),应用Westernblot分析ECV304-Nef细胞ERK的磷酸化水平,利用ERK磷酸化抑制剂通过Westernblot、流式细胞术分析ECV304-Nef细胞ICAM-1的表达水平与信号分子ERK磷酸化的相关性。结果:Westernblot显示ECV304-Nef细胞ICAM-1和p-ERK蛋白的表达水平均高于对照组;流式细胞术检测结果表明ECV304-Nef细胞和对照组ICAM-1阳性细胞百分率分别为(35.3±2.2)%和(12.5±0.8)%(P0.01)。加入p-ERK抑制剂PD98059后,ECV304-Nef细胞p-ERK水平被显著抑制,ICAM-1降至对照组水平,ECV304-Nef细胞和对照组细胞ICAM-1阳性细胞百分率分别为(11.4±1.1)%和(10.4±1.5)%(P0.05)。结论:HIV-1Nef基因上调血管内皮细胞细胞黏附分子ICAM-1的表达与ERK信号分子磷酸化有关,为HIV-1感染的致病机制及临床治疗提供实验基础。     

MCP—1对培养的人肾小球内皮细胞表达ICAM—1的影响

目的研究单核细胞趋化蛋白 - 1(MCP- 1)对培养的人肾小球内皮细胞 (HU GEC)表达细胞间粘附分子 - 1(ICAM- 1)的影响。方法采用细胞 EL ISA法。结果 1培养的 HU GEC表面有少量 ICAM- 1表达 ,在 10 ng/ m L MCP- 1刺激后 ICAM- 1表达量增多 (P<0 .0 5 ) ,6 h即有 ICAM- 1表达增强 ,12 h达高峰 ,不同浓度的 MCP- 1(10、2 0、40 ng/ m L)刺激HU GEC18h后 ,ICAM- 1表达与对照组比较差异显著 (P<0 .0 1) ;2加入抗 MCP- 1抗体后 ,ICAM- 1表达量下降 ,与对照组比较无差异 (P>0 .0 5 )。结论 MCP- 1可刺激 HU GEC表达 ICAM- 1增加。