FTY720对耐顺铂非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:检测芬戈莫德（fingolimod,FTY720)对耐顺铂非小细胞肺癌细胞株A549增殖及凋亡的影响。方法:应用CCK-8检测耐顺铂A549细胞株在FTY720不同浓度（5 μmol/L、10 μmol/L、15 μmol/L和20 μmol/L）作用不同时间（24 h和48 h）后的增殖活性。流式细胞仪检测不同浓度（5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L）作用不同时间（24 h和48 h）后耐顺铂A549细胞凋亡情况,Western blot 法检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:耐顺铂A549细胞的增殖抑制程度和促进凋亡的程度均与FTY720呈时间依赖及剂量依赖性。结论:FTY720以时间依赖及剂量依赖模式对耐顺铂A549细胞呈现出抑增殖及促凋亡作用。     

miRNA-139-5p通过靶向调控CXCR4/CXCL12信号通路逆转非小细胞肺癌A549细胞顺铂耐药

目的:探讨miRNA-139-5p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂（cisplatin,DDP）耐药的影响,及其可能的分子机制。方法:采用DDP浓度递增法诱导A549细胞建立DDP耐药细胞株A549/DDP,将miR-139-5p mimics、无义序列（mimics-NC）、CXCR4过表达质粒（pcDNA3.1-CXCR4）、pcDNA3.1空载质粒（Vector）转染至A549/DDP细胞中,将细胞分为mimics-NC组（转染无义序列）、mimics组（转染miR-139-5p mimics）、mimics+Vector组（共转染miR-139-5p mimics和空载质粒）和mimics+CXCR4组（共转染miR-139-5p mimics和CXCR4过表达质粒）,另设置空白对照组（blank）。不同浓度DDP处理,MTT法检测细胞增殖活性,并计算IC50值和耐药指数（resistance index,RI）;qRT-PCR法检测细胞中miR-139-5p和CXCR4 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）及CXCR4/CXCL12信号通路相关蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与CXCR4的靶向关系。结果:不同浓度DDP处理24 h后,耐药株A549/DDP及其亲本A549细胞IC50值分别为（208.87±27.89）μmol/L和（31.66±6.30）μmol/L,RI=6.59。与亲本A549细胞比较,耐药株A549/DDP中miR-139-5p的表达水平明显降低（P＜0.05）,而CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。与mimics-NC组比较,mimics组A549/DDP细胞增殖活性明显降低（P＜0.05）,细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）,细胞中CXCR4 mRNA和蛋白以及P-gp、MRP1、PI3K（p110α）和p-AKT/AKT等蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与mimics+Vector组比较,mimics+CXCR4组A549/DDP细胞增殖活性显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,而细胞中CXCR4、P-gp、MRP1、PI3K（p110α）和p-AKT等蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-139-5p靶向负调控CXCR4表达。结论:miRNA-139-5p通过靶向下调CXCR4表达,提高非小细胞肺癌DDP耐药细胞株A549/DDP对DDP的药物敏感性。     

非小细胞肺癌顺铂耐药相关基因生物信息学研究

目的：通过分析非小细胞肺癌顺铂敏感株及耐药株的基因芯片表达数据,筛选差异基因及关键通路,构建蛋白相互作用网络,探讨关键集群功能。方法:从GEO数据库获得基因芯片表达数据,利用GEO2R工具筛选差异基因,通过STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白相互作用网络,经DAVID富集得到相关特征基因与信号通路信息。结果：通过芯片分析共获得481个差异表达基因,相比于敏感细胞株,顺铂获得性耐药细胞株中有418个上调基因和63个下调基因。差异基因功能主要富集在piRNA代谢、DNA甲基化修饰、细胞有丝分裂及细胞周期进程等信号通路。蛋白复合物预测得到主要功能集群6个,分别与细胞趋化性、细胞角化性、piRNA代谢过程、细胞因子受体相互作用、细胞因子分泌调节及染色质沉默相关生物进程相关。结论:本研究利用生物信息学方法,发现顺铂耐药细胞株特征基因及信号通路,其中SAA1、KRT5、TDRD9、BCL2A1、CSF1R和HIST1H1A等显著上调基因及其功能集团可能是非小细胞肺癌顺铂耐药的潜在分子机制,为临床精准治疗提供新的理论依据。     

MicroRNA-18a对非小细胞肺癌细胞A549/DDP顺铂耐药性的调控研究

目的：探讨microRNA-18a（miR-18a）对顺铂（DDP）耐药非小细胞肺癌（NSCLC）A549/DDP细胞耐药性的影响及其作用机制。方法将A549/DDP细胞随机分为3组,分别为空白对照组（正常培养的A549/DDP细胞）、阴性对照组（在正常培养的A549/DDP细胞中转染无关序列）和miR-18a转染组（在正常培养的A549/DDP细胞中转染miR-18a）。每组重复5次,待转染进行24、48、72、96 h后检测转染效果。实时荧光定量PCR检测A549/DDP细胞中miR-18a的表达水平;流式细胞术检测转染后的细胞周期情况;MTT法测定转染miR-18a对A549/DDP细胞的增殖抑制;Western Blot检测转染后A549/DDP细胞的共济失调-毛细血管扩张症突变基因蛋白（ATM）及磷酸化ATM的表达。结果 miR-18a转染组、阴性对照组、空白对照组的miR-18a相对表达量分别为（101.1±2.50）、（1.18±0.21）、（1.00±0.02）,差异有统计学意义（P﹤0.05）;miR-18a转染组DDP的半数抑制浓度（IC50）值为（17±0.51）μmol/L,低于阴性对照组和空白对照组;与阴性对照组和空白对照组相比,miR-18a转染组A549/DDP的S期和G2/M期细胞比例、ATM及磷酸化ATM蛋白水平均降低,差异均有统计学意义（P﹤0.05）。结论 miR-18a的表达水平可以调控A549/DDP细胞对DDP的耐药性,可能与ATM及磷酸化ATM的表达有关。     

miRNA-192对非小细胞肺癌A549／DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的 探讨抑制microRNA-192（miR-192）在非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂（DDP）耐药性方面的影响及可能机制。方法 通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测人肺腺癌耐DDP细胞株A549／DDP及其亲本细胞株A549细胞中miR-192的表达水平,A549／DDP细胞转染miR-192抑制剂（inhibitor）和miR-阴性对照（NC）48h后采用qRT-PCR检测转染效率,分别采用MTT法、克隆形成实验及流式细胞术检测转染48h后A549／DDP细胞对DDP的药物敏感性、细胞增殖能力及细胞凋亡变化,Western blotting检测转染48h后细胞中Bax和Bcl-2的表达变化。结果 miR-192在A549／DDP细胞中的表达水平高于A549细胞（P＜0.05）;转染miR-192 inhibitor 48h后的A549／DDP细胞miR-192水平低于转染miR-NC者（P＜0.05）;转染miR-192 inhibitor后,A549／DDP细胞的增殖能力减弱、凋亡细胞增多、DDP对其半数抑制浓度降低、Bax蛋白水平升高和Bcl-2蛋白水平下降,与转染miR-NC者比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 抑制miR-192能够降低A549／DDP细胞对DDP的耐药性,其作用机制可能是通过增加细胞凋亡以及下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白表达来实现的。     

顺铂加卡铂治疗中晚期非小细胞肺癌的临床观察

全组共90例经病理学证实为中晚期的非小细胞肺癌。将病例随机分为三组,每组30例。均采用EP方案,第一组为足叶乙甙加顺铂,卡铂交替应用;第二组为足叶乙甙加顺铂;第三组为足叶乙甙加卡铂。90例均可评价疗效,第一组1例获完全缓解,13例获部分缓解,有效率达46.7％。第二组有效率为40％,第三组有效率为36.7％,第二、三组均无完全缓解病例。经统计学处理,三组疗效无显著差异。第一组胃肠道反应明显低于第二组,而骨髓抑制明显低于第三组,具有统计学意义。因此,第一组副作用比第二、三组低。     

顺铂为主联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌疗效分析

采用以顺铂为主的联合化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌３６例。ＣＡＰ方案治疗２１例，无１例达完全缓解，７例达部份缓解，有效率为３３．３％；ＥＰ方案治疗１５例，１例达完全缓解，５例达部分缓解，有效率为４０％。３６例患者总有效率为３６．１％。化疗中出现的毒副反应主要是Ⅰ－Ⅱ级的骨髓抑制和消化道反应，未出现明显的肝肾功能损害，使用ＣＡＰ方案治疗时出现１例ＥＣＧ异常。     

盖诺加顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的 观察国产去甲长春花碱（盖诺）加顺铂治疗非小细胞肺癌的临床治疗效果。方法 共有48例晚期非小细胞肺癌接受治疗，盖诺25mg/m^2，静滴，第1，8天；顺铂30mg/m^2，静滴1－3天；21天为一周期，2－3周期为一疗程。结果 全组CR5例，PR21例，SD17例，有效率54．2％，其中鳞癌为57．1％，腺癌为50．0％。主要毒性反应为血液学和消化道毒性。结论 国产盖诺加顺铂治疗NSCLC具有较好的临床治疗效果，与进口产品相似。     

国产紫杉醇联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的：观察国产紫杉醇(商品名为特素)联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的近期疗效及其毒副作用。方法：特素135mg／m^2加入5％葡萄糖注射液500mL，静脉滴注，第1天，DDP20mg／m^2，静脉滴注，第1天～第5天。以上方案每28d为1周期，至少完成2周期。结臬：CR1例，PR18例，SD17例，PD6例。总有效率45．2％，主要毒副作用为恶心呕吐、血白细胞减少、脱发、轻度血小板及血红蛋白减少、轻度外周神经感觉异常、肝肾功能轻度损害。结论：国产紫杉醇联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌疗效较好，毒副作用可耐受，值得临床推广应用。     

健择联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察

目的:评价健择(GEM)联合顺铂(DDP)治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效和毒副反应。方法:收集NSCLC患者38例给予GP方案化疗,GEM1000mg/m2iv d1,8;DDP80mg/m2iv d1,28天为一周期,应用2周期后评价疗效。结果:全组有效率46.9%,无CR病例,鳞癌和腺癌有效率分别为44.0%和46.1%,初治、复治有效率分别为46.9%、33.3%,Ⅲ、Ⅳ期有效率为47.6%、41.2%。毒副反应主要为白细胞下降68.4%,其次为消化道症状为42.1%。结论:GP方案治疗NSCLC疗效较好,毒副反应轻。     

MicroRNA-145增强非小细胞肺癌细胞对吉非替尼敏感性及其机制探讨

目的:探讨微小RNA-145（microRNA-145,miR-145）对非小细胞肺癌细胞系吉非替尼耐药的作用及其可能的潜在机制。方法:实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法检测正常细胞及非小细胞肺癌细胞中miR-145的表达差异;不同时间5 μmol/L吉非替尼干预肺癌细胞SPC-A-1和A549后,Q-PCR检测miR-145表达变化;miR-145 mimics和miR-145 inhibitors分别转染SPC-A-1和A549肺癌细胞后,CCK8检测细胞活力变化;双荧光素酶报告系统检测miR-145与ADAM19的靶向结合;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞,Western blot检测ADAM19蛋白表达;Western blot检测5 μmol/L吉非替尼干预后,SPC-A-1和A549肺癌细胞中ADAM19蛋白的表达;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞,再用5 μmol/L吉非替尼干预,Western blot检测ADAM19蛋白的表达;采用siRNA抑制ADAM19表达,再用5 μmol/L吉非替尼干预,CCK8检测细胞活力;采用BALB/C雌性裸鼠皮下接种肿瘤细胞的方法,观察上述效应。结果:Q-PCR结果显示,与正常肺上皮细胞系BEAS-2B相比较,肺癌细胞SPC-A-1和A549中miR-145表达明显降低;5 μmol/L吉非替尼干预SPC-A-1和A549细胞后,miR-145表达显著上调;转染miR-145 mimics后,CCK8结果显示两种细胞细胞活力下降;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-145靶向结合ADAM19基因的3'-UTR区;Western blot结果显示,5 μmol/L吉非替尼诱导SPC-A-1和 A549细胞后,两种细胞中ADAM19蛋白表达均降低;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549细胞,之后给予5 μmol/L吉非替尼治疗,ADAM19蛋白表达下调;siRNA抑制SPC-A-1和A549细胞中ADAM19表达,再给予5 μmol/L吉非替尼治疗,CCK8结果显示,两种细胞的细胞活力显著降低;过表达BALB/C雌性裸鼠的miR-145后,显著抑制皮下肿瘤生长,并且增强吉非替尼的抗肿瘤效果。结论:miR-145显著增强肺癌细胞SPC-A-1和A549对吉非替尼的敏感性,其机制可能是通过靶向结合AMDM19基因的3'-UTR区域,从而抑制其表达。miR-145有可能成为治疗非小细胞肺癌吉非替尼耐药的有效靶点。     

吉非替尼联合培美曲塞和顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的安全性和有效性

目的:比较单用培美曲塞/顺铂化疗或吉非替尼联合培美曲塞/顺铂化疗治疗晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）的临床疗效及安全性,为临床应用提供参考。方法:选择标准一线化疗后复发的晚期NSCLC患者112例,其中联合治疗组52例接受培美曲塞/顺铂及吉非替尼治疗,化疗组60例仅采用培美曲塞和顺铂化疗,评价两组患者的临床疗效及不良反应。结果:联合组客观有效率（objective response rate,ORR）为36.5%,高于化疗组的18.3%（P=0.030）;两组疾病控制率（disease control rate,DCR）分别为71.2%和55.0%（P=0.035）;两组患者的中位无进展生存期（progression free survival,PFS）分别为8.7个月和6.7个月,差别有统计学意义（P=0.047）,但两组患者的中位总生存期（overall survival,OS）差别无统计学意义（P=0.265）。与治疗前相比,两组患者的肿瘤标志物均明显下降,但联合组的CEA和CYFRA21-1水平比化疗组更低（P<0.05）。联合组皮疹和腹泻的发生率高于化疗组（P<0.05）,两组之间其它不良反应的发生率无明显差别（P>0.05）。结论:晚期NSCLC患者一线化疗失败后,采用培美曲塞/顺铂化疗联合吉非替尼靶向治疗较单用化疗显示出更高的ORR和中位PFS,且不良反应可以耐受,值得临床推广运用。     

国产吉西他滨联合顺铂治疗28例晚期非小细胞肺癌

目的：评价国产吉西他滨（gemcitabine,GEM）联合顺铂方案治疗晚期非小细胞肺癌的疗效和不良反应。方法：对经病理组织学或细胞学证实的28例晚期非小细胞肺癌患者采用GP方案化疗：GEM1000mg/m^2ivdrip第1、8日,DDP30mg/m^2ivdrip第1-3日,21日为1周期。结果：CR0例,PR12例,SD14例,PD2例,总有效率为42.8%,初治、复治各14例,均有6例PR,有效率均为42.8%,不良反应以消化道反应及白细胞、血小板下降为主,均可耐受。结论：国产吉西他滨联合顺铂对晚期非小细胞肺癌有较好疗效,毒副反应可以耐受,可作为一线或二线化疗方案。     

吉西他滨联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究

目的评价吉西他滨(gemcitabine)联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的疗效及毒副反应。方法选择经病理证实的晚期非小细胞肺癌41例住院患者采用GP方案行静脉化疗，具体为Gemcitabine 1250mg/m^2d1、d8，DDP30mg/m^2d1-d3，21天重复，至少使用2周期以上。结果完全缓解(CR)4．9％(2／41)，部分缓解(PR)43．9％(18／41)，稳定(SD)34．1％(14／41)，进展(PD)17．00k，(7／41)，总有效率(RR)48．80%；肿瘤控制率(CR PR SD)为82．19％；中位缓解期7．1m，中位生存期11m(4．5～20m)；毒副反应以白细胞及血小板下降、消化道反应、乏力为常见，均可耐受，无化疗相关死亡。结论吉西他滨联合顺铂对晚期非小细胞肺癌有较好疗效，毒副反应可以耐受，值得临床推广。     

LINC01426通过EZH2调节非小细胞肺癌顺铂耐药的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01426对非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂(DDP)耐药的影响,并研究其潜在机制。方法:体外培养A549细胞和抗DDP细胞株A549/DDP,逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中LINC01426、zeste增强子同源物2(EZH2)mRNA表达;LINC01426和EZH2之间的相互作用通过RNA-蛋白质相互作用预测(RIP-seq)、RNA免疫沉淀(RIP)、RT-qPCR和染色质免疫沉淀(ChIP)测定进行验证。将A549/DDP细胞分为对照组(Control组)、si-NC组、si-LINC01426组、si-LINC01426+pc-NC组、si-LINC01426+pc-EZH2组,转染培养48 h,用RT-qPCR检测各组细胞中LINC01426、EZH2 mRNA、PTEN mRNA表达,CCK-8检测细胞对DDP的敏感性,集落形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹(Western blot)分析细胞中EZH2、PTEN、AKT、p-AKT蛋白表达。裸鼠移植瘤模型验证LINC01426是否...     

安素泰联合顺铂方案治疗非小细胞肺癌疗效观察

目的：评价安素泰联合顺铂方案疗效、耐受性和不良反应。方法：安素泰和顺铂联合方案治疗晚期非小细胞的肺癌（NSCLC）26例。化疗方案以顺铂（DPP）75mg／m2静脉滴注，d1；安素泰（ANZATAX）135mg／m^2静脉滴注，d1，每21—28天重复。结果：全组共完成72个周期，有效率42．31％，一年生存率46．15％。常见的不良反应为骨髓抑制，发生率96．13％。其中Ⅰ度19．23％，Ⅱ度57．69％，Ⅲ度15．39％，Ⅳ度3．85％。结论：患者对安素泰和顺铂联合方案耐受良好，不良反应较轻，初步疗效令人满意，值得进一步研究。     

非小细胞肺癌组织ERCC1表达与顺铂化疗耐药关系的研究

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中ERCC1表达水平与顺铂(DDP)化疗耐药的相关性。方法:应用免疫组化SP法检测82例NSCLC组织中ERCC1的表达并分析其与DDP化疗耐药的关系。结果:ERCC1表达水平与NSCLC患者年龄、性别、临床分期及组织学类型无关,P>0.05。ERCC1阴性表达组的化疗有效率为53.5%(23/43),而ERCC1阳性表达组的化疗有效率为17.9%(7/39),两组比较差异有统计学意义,χ2=4.76,P=0.04。结论:ERCC1在NSCLC组织中的表达水平与DDP化疗耐药有关。