皖南地区眼镜蛇毒镇痛组分对大鼠炎性痛作用机制探讨

目的:探讨皖南地区眼镜蛇毒镇痛组分(CVAF)对大鼠炎性痛作用效应及其可能机制。方法:40只雄性SD大鼠在测定基础痛阈后随机分为4组(n=10):正常对照组(NC 组)、炎性痛模型组(CFA 组)、炎性痛模型+CVAF组(CFA+CVAF 组)和炎性痛模型+吗啡组(CFA +Morphine 组)。随后将36只SD雄性大鼠随机分成6组(n=6):正常对照组(NC 组)、炎性痛模型组(CFA 组)、炎性痛模型+CVAF组(CFA+CVAF 组)、炎性痛模型+阿托品＋CVAF组(CFA+Atr＋CVAF)、炎性痛模型+纳洛酮＋CVAF组(CFA+Nal＋CVAF)和炎性痛模型+L-NAME＋CVAF组(CFA+L-NAME＋CVAF)。测定各组大鼠的热痛阈潜伏期(TWL)和机械痛阈值(MWT),制备脊髓匀浆,用于检测其中IL-1和TNF-α的表达。结果:与NC组相比,CFA组大鼠第1天开始TWL和MWT明显降低,出现热痛觉过敏和机械痛觉过敏,持续 14 d 仍存在;CFA组大鼠脊髓匀浆IL-1和TNF-α表达均明显增高(P<0.01)。与CFA组相比,CFA组大鼠腹腔注射CVAF后其TWL和MWT均升高,表明炎性痛大鼠热痛觉过敏和机械痛觉过敏得到改善;脊髓匀浆中IL-1、TNF-α表达显著减少(P<0.01),显示CVAF通过抑制炎性因子的产生而发挥镇痛作用。与CFA+CVAF组大鼠相比,L-NAME+CVAF组大鼠明显增强了CVAF对炎性痛大鼠的镇痛作用,表现为TWL和MWT的明显升高(P<0.01);而CFA+Atr＋CVAF组和CFA+Nal＋CVAF组大鼠TWL和MWT均有不同程度的降低(P<0.01)。结论:初步阐明CVAF通过减少炎性因子的释放对炎性痛大鼠具有镇痛效应。阿片肽受体系统和胆碱能受体系统均部分参与了其对炎性痛大鼠的镇痛作用。     

中华眼镜蛇毒活性组分体外抑制三维血管生成的实验研究

目的: 研究中华眼镜蛇毒活性组分的抗血管生成作用。方法: 采用拟血管生成三维培养法, 观察活性组分对体外血管生成的抑制效应。结果: 活性组分可抑制内皮细胞在培养基质中生成血管网状三维结构的反应, 0. 6 、1. 2 、2. 4 μg·ml^-1的不同浓度组分抑制程度不同。在0. 6 μg·ml^-1 浓度组, 培养基质Matrigel 中的内皮细胞团只形成局部的、不完整的空间网状结构;在1. 2 μg·ml^-1 浓度组, 悬浮于凝胶中的细胞团所形成的管芽不能相互连接而形成空间网状结构;在2. 4 μg·ml^-1 浓度组, 细胞散在悬浮于胶层中大部分不能粘聚, 且随培养时间的延长无明显的结构变化。结论: 中华眼镜蛇毒活性组分具有体外抑制血管生成的生物活性。     

中华眼镜蛇毒组分抑制肺癌细胞H1299的血管生长因子VEGF和Bfgf

目的: 了解中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)对人非小细胞肺癌细胞株H1299 VEGF、bFGF 表达的抑制作用。方法: 采用RT-PCR 方法检测H1299细胞中VEGF、bFGF mRNA 表达的变化;利用ELISA检测培养上清中VEGF、bFGF 蛋白的含量。结果: 不同浓度的(2.0、4.0 μg·ml^-1) CCVAF 对H1299 bFGFmRNA 水平有降低作用, 其中4.0 μg·ml^-1 CCVAF作用7 h 后bFGF mRNA 的表达明显降低, 但对VEGF mRNA 的表达无明显影响。CCVAF 作用H1299 细胞24 h 后, 其细胞上清中VEGF、bFGF 的含量较对照组明显减少(P <0.05), 且呈剂量依赖性。结论: CCVAF 可抑制H1299 细胞bFGF mRNA 和蛋白的表达及VEGF 蛋白的表达。     

中华眼镜蛇毒组分CⅡ抗耐药K562/A02细胞作用机制的研究

目的: 研究中华眼镜蛇毒组分C Ⅱ (FC ⅡNNAV) 对多药耐药白血病细胞K562/A02 的抑制作用及机制。方法: 应用MTT 法观察FC ⅡNNAV 体外对K562 和K562/A02 的毒性作用, 流式细胞仪法观察FC ⅡNNAV 体外对K562/A02 细胞P-gp, Bcl-2 蛋白表达的影响, 比色法检测Caspase-3 活性变化。结果: FC ⅡNNAV 对耐药K562/A02 及敏感K562 细胞均有抑制作用, IC50 分别为0.75±0.01 μg·ml^-1 和0.67±0.11 μg·ml^-1。流式细胞仪检测发现FC ⅡNNAV 能使K562/A02 细胞的P-gp, Bcl-2 蛋白表达明显下调;Caspase-3 活性明显增强。结论: FC ⅡNNAV 对细胞K562/A02 及细胞K562 均有较强的抑制作用, 且抑制作用与剂量呈正相关, FC ⅡNNAV 可能通过抑制K562/A02 细胞P-gp, Bcl-2 蛋白表达, 激活Caspase-3 活性而诱导K562/A02 细胞凋亡。     

萆薢总皂苷抗炎镇痛作用的实验研究

目的:研究萆薢总皂苷（total saponin of dioscorea,TSD）的抗炎镇痛作用。方法:尿酸钠（monosodium urate,MSU）分别致大鼠急性痛风性关节炎模型和小鼠皮下气囊炎症模型,醋酸和热板法分别致小鼠疼痛模型;酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定IL-1β、IL-18和前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)水平。结果:TSD能明显降低大鼠关节肿胀度,降低关节浸出液中IL-1β和IL-18水平(P<0.01或P<0.05),减轻小鼠皮下气囊炎症,降低气囊炎性渗出液中PGE2和IL-1β水平(P<0.01或P<0.05),显著提高热板法小鼠痛阈值,减少醋酸诱导的小鼠扭体次数(P<0.01或P<0.05)。结论:TSD具有较强的抗炎镇痛作用,可能与抑制炎性因子IL-1β、IL-18和PGE2合成与释放有关。     

偏痛胶囊流浸膏镇痛抗炎作用实验研究

目的: 研究偏痛胶囊流浸膏镇痛、抗炎药效学作用。方法: 热板法、醋酸扭体法观察偏痛胶囊流浸膏对小鼠的镇痛作用,二甲苯致小鼠耳肿胀、蛋清致大鼠足肿胀的方法研究偏痛胶囊流浸膏的抗炎作用。结果: 偏痛胶囊流浸膏能明显减少醋酸致小鼠扭体次数,显著提高小鼠痛阈值(P<0.01 或P<0.05);明显抑制小鼠耳肿胀,减少耳重差,对大鼠足跖肿胀有显著抑制作用(P<0.01 或P<0.05)。结论: 偏痛胶囊流浸膏具有较好的镇痛、抗炎作用。     

洛芬待因镇痛作用的组方分析

目的 观察洛芬待因(可待因+布洛芬)的镇痛作用及其组方分析。方法 采用小鼠扭体法、热板法、二甲苯所致小鼠耳廓肿胀法等毒理和药效试验,观察洛芬待因及其各组分的镇痛作用,用金氏法分析药物相互作用性质。结果 可待因和布洛芬按13∶200 配方其镇痛作用增强,同时也能增加布洛芬的抗炎作用,毒性下降。结论 洛芬待因的组方是合理的。     

阿司匹林-烟酰胺-锌络合物镇痛抗炎作用的实验研究

目的: 对阿司匹林-烟酰胺-锌络合物(WUY)的镇痛和抗炎作用进行初步研究。方法: 采用小鼠耳廓肿胀、腹腔毛细血管通透性增加以及大鼠足跖肿胀法研究抗炎作用, 小鼠热板法和扭体法研究镇痛作用。结果: WUY 中、高剂量组的耳廓肿胀度分别为3.3 和2.8 mg, 伊文思蓝渗出量分别为3.1 和1.2 mg·L^-1, 足跖肿胀度(1～4 h) 分别为0.21～0.13 和0.23～0.08 ml 。小鼠热板法可明显延长热痛反应潜伏期, 提高小鼠的痛阈值。醋酸扭体法显示WUY 对小鼠扭体反应次数有明显抑制作用, 且比阿司匹林(ASP) 强。结论: WUY 具有比ASP 更强的镇痛和抗炎作用。     

眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究

目的: 研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法: 采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和Annexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用Western-blot方法测定聚二磷酸腺苷核糖多聚酸-1(PARP-1)切割。结果: NA-LAAO可抑制MGC-803细胞增殖,6、12、24 h 的IC₅₀分别为(2.48±0.41) 、(1.74±0.27) 和(0.83±0.19) mg/L;NA-LAAO可使细胞DNA分布出现亚二倍体凋亡峰,并可促使细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻;NA-LAAO可激活Caspase-3并可促使其底物PARP-1降解。结论: NA-LAAO可能通过激活Caspase-3这一分子机制而诱导细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖。     

一种来自于尖吻蝮蛇毒的新类凝血酶对血液止血机制的研究

目的: 研究尖吻蝮蛇蛇毒止血酶Agacutase的止血机制。方法: 水蛭素、肝素、苯甲基磺酰氟（PMSF）、钙离子或尿素等分别与Agacutase酶混合,在体外研究它们对酶凝结活性的影响。新西兰白兔静脉注射Agacutase,观察新西兰白兔的血凝和纤溶指标。结果: 水蛭素和肝素对该酶没有影响,PMSF和尿素明显抑制酶的凝结活性,而钙离子激活酶凝结活性。静脉注射Agacutase 0.03~0.12 U/kg 剂量后,各组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短,给药后 2 h 药效达高峰,药效持续 24 h。与给药前比较,各组兔血纤维蛋白原含量和血黏度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致,对活化部分凝血活酶时间（APTT）无影响。结论: Agacutase在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白,但不激活凝血因子II和XIII,在伤口部位加速止血。在正常的血管内,不会造成血栓形成。所有实验结果显示,Agacutase是一个有效的潜在止血剂。     

眼镜蛇毒因子对实验性家犬呼吸窘迫综合征的保护作用

目的 观察从中华眼镜蛇(Najanajaatra)蛇毒中分离纯化的眼镜蛇因子对油酸型呼吸窘迫综合征的保护作用。方法 利用质谱仪、呼吸流量计和压力换能器分别连续监测麻醉狗的主要呼吸功能参数, 实验后取肺组织作病理学检查。结果 预先用足量眼镜蛇毒因子使体内补体耗竭95%以上, 可显著减轻油酸引起的肺功能障碍, 组织学检查发现在透明膜形成、肺泡内出血及肺小动脉栓塞等方面均有显著改善。结论 活化的补体在油酸引起的肺损伤的发展过程中发挥着重要作用, 眼镜蛇毒因子通过耗竭血清补体可抑制呼吸窘迫综合征的发展。     

蛇毒抗肿瘤转移的研究现状

蛇毒含有多种酶和多种不同生理、药理活性蛋白。人们对纯化的蛇毒制品和非纯化的蛇毒制品已有了较深入的研究。本文针对血小板、解离素、粘附分子、纤维蛋白以及血管生成等方面, 并首重对蛇毒抗肿瘤转移作了简要综述。     

蝮蛇毒血小板抑制因子对动脉血栓形成的影响及机制研究

目的: 探讨皖南蝮蛇毒血小板抑制因子(AHV-PI) 对家兔动脉血栓形成的影响及可能机制。方法: 新西兰家兔24只,随机分成假手术组、动脉血栓模型组、阳性对照组(奥扎格雷钠,5 mg/kg),AHV-PI(0.1 mg/kg)实验组共4组,每组6只。应用70% FeCl₃溶液化学损伤的方法来制备家兔颈动脉血栓模型,采用血栓弹力仪(TEG)描计血栓弹力图,比浊法测定家兔血小板聚集率,ELISA测定各组血浆中α颗粒膜蛋白(GMP-140)和血栓素B₂(TXB₂)水平,光镜和透射电镜分别观察动脉血栓形成和血小板形态的改变。结果: AHV-PI实验组与模型组相比,血栓弹力图凝血时间(R)值和血凝块形成时间(K)值延长(P<0.01 和P<0.05),Alpha角度、最大幅度(MA)和凝血指数(CI)减小(P<0.05 和P<0.01);血小板聚集率的各项指标均明显降低(P<0.05);血浆中GMP-140和TXB₂含量降低(P<0.01)。AHV-PI实验组光镜下动脉内未见血栓形成,血小板电镜显示血小板形态基本规则,与模型组相比伪足较少,α-颗粒和致密颗粒无明显减少,胞浆空泡化现象减轻。结论: AHV-PI可以通过抑制血小板聚集,防止动脉血栓的形成,其机制可能与之保护血小板超微结构,减少血小板脂质代谢和颗粒内容物的释放有关。     

蝎毒活性多肽对内皮细胞释放PGI2 和NO 的影响

目的 探讨蝎毒活性多肽(SVAP)抗栓作用机制。方法 酶消化法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),放射免疫分析法测定HUVEC 培养液中6-Keto-PG F1α的含量以反映PGI₂ 的变化, 硝酸还原酶法测定NO 的含量。结果 SVAP 1、5、10、20 mg·L^-1均可明显增加HUVEC PGI₂ 的释放, 而SVAP 1、5 mg·L^-1 对NO 的释放无明显影响,SVAP 10、20 mg·L^-1 可使NO 释放量显著增加,PGI₂ 和NO 释放量之间呈正相关。结论 SVAP抗栓机制可能与影响VEC 合成或(和)分泌PGI₂,NO 以及NO 与PGI₂ 二者之间协同及相互介导作用有关。     

蝎毒组分Ⅲ对人头颈部鳞状细胞癌细胞生长的影响

目的 观察蝎毒组分Ⅲ(SVC-Ⅲ)对人头颈部鳞状细胞癌细胞株(AGZY-973)生长的影响,试图找出SVC Ⅲ抑制鳞状细胞癌的最佳浓度。方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测经不同浓度SVC-Ⅲ 作用下AGZY-973 生长抑制率。结果 SVC Ⅲ能抑制该细胞的生长,SVC-Ⅲ可导致AGZY-973 细胞代谢MTT 的能力显著低于对照组,生长抑制率达68.96%(P <0.01)。当SVC Ⅲ的浓度<40 mg·L^-1时,剂量效应关系明显;而SVC-Ⅲ的浓度>40 mg·L^-1时无剂量效应关系。5-Fu 治疗组生长抑制率达55.27% P <0.01)。结论 SVC-Ⅲ是存在于东亚钳蝎蝎毒中的一种抗肿瘤成分,能够抑制AGZY-973 的生长,并在一定浓度范围内存在剂量效应关系。     

不同剂量蛇毒抗高凝状态酶对小鼠肝癌H22 生长作用的实验研究

目的: 探讨不同剂量蛇毒抗高凝状态酶(AHCSE)对小鼠肝癌H22 生长作用的影响。方法: 小鼠皮下接种小鼠肝癌(H22) 后, 待肿瘤长成10mm² 分别经腹腔注射不同剂量AHCSE, 每天1 次, 连续10 d, 观察瘤重抑制率、瘤体积、抑瘤率、脾指数和白细胞及其组成成分, 统计采用LDS-t, 检验水准α=0.05 。采用白细胞及其组分与脾指数的相关和回归。结果: 中、高剂量组AHCSE 具有明显的抗肿瘤作用, 而低剂量组抗肿瘤作用效果不佳, 但高剂量组的小鼠体重降低明显。实验组的脾系数明显高于对照组, 并且随着AHCSE 的剂量增大脾系数也增大。白细胞随着AHCSE 剂量的增大而增大, 白细胞及其组分与脾指数存在相关性和回归直线。结论: 在一定的范围内, 随着AHCSE 的剂量增大, 抗肿瘤效果增强, 但副作用也增大, 其机制可能与凋亡和激活免疫系统有关。     

皖南地区脑卒中人群MTHFR C677T基因多态性分布研究

目的:探讨皖南地区脑卒中人群中5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR) C677T遗传基因多态性分布特征,分析皖南群体该基因分布特点,为皖南地区脑卒中的防治提供参考。方法:选取2018年1月至2019年10月我院脑卒中人群114例,利用荧光染色原位杂交分析技术对患者进行MTHFR C677T基因分型。检测MTHFR C677T位点基因型,用皖南地区脑卒中人群MTHFR C677T基因多态性分布数据,与已报道的中国其他地区汉族脑卒中人群基因分布数据进行比较。结果:114例患者中MTHFR C677T位点TT、CT、CC基因型频率分布为28.90%、50.00%、21.10%,C、T两个等位基因分布频率分别为53.95%、46.05%。该基因在皖南地区分布无性别差异,但CC型与重庆地区、黑龙江地区、广州地区比较,差异有统计学意义（P<0.05）。TT型与重庆地区、豫北地区、黑龙江地区比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:皖南地区汉族脑卒中人群的MTHFR C677T基因多态性分布与其他地区之间比较存在差异,可通过基因检测技术为皖南地区高风险人群脑卒中防治提供科学依据。     

皖南地区高血压患者MTHFR基因多态性分布及与血Hcy相关性研究

目的：探讨皖南地区高血压患者MTHFR基因多态性分布特征及与血同型半胱氨酸（Hcy）相关性,为皖南地区H型高血压预防和治疗提供参考。方法：选取2019年10月至2020年8月就诊本院657例高血压人群为研究对象,采用荧光染色原位杂交法进行MTHFR C677T和A1298C位点基因分型,采用酶循环法测定血Hcy浓度。对皖南地区汉族高血压人群MTHFR基因分布特征进行分析,并与已报道的其他地区及种族高血压人群MTHFR基因分布数据进行比较,同时分析不同MTHFR基因型的高血压患者血Hcy水平差异。结果：657例患者中MTHFR基因C677T位点CC、CT、TT型分布为212（32.27%）,321（48.86%）,124（18.87%）,A1298C位点AA、AC、TT型分布为467（71.08%）,171（26.03%）,19（2.89%）。该基因两位点在皖南地区高血压人群中分布无性别差异（P>0.05）。C677T位点CC基因型分布频率低于佛山地区及广西地区,高于河南地区、新疆地区、内蒙古地区;CT基因型分布频率高于佛山地区及广西地区;TT基因型分布频率高于佛山地区及广西地区,低于河南地区、新疆地区、内蒙古地区,差异有统计学意义（P<0.05）。657例患者血Hcy平均值为（15.8±7.80）μmol/L,其中符合H型高血压诊断的患者共510（77.62%）例。男性Hcy水平显著高于女性,差异有统计学意义（P<0.000 1）。C677T位点不同基因型间Hcy水平比较TT型高于CT型和CC型,差异均有统计学意义（P<0.05）。A1298C位点不同基因型间Hcy水平比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论：皖南地区汉族高血压人群MTHFR基因多态性分布与其他地区比较存在明显差异,并且和Hcy水平也显著相关,具有明显的地区特征,可通过基因检测技术结合Hcy浓度测定为皖南地区H型高血压防治提供科学依据。