黄芪皂苷通过调控蛋白激酶R样内质网激酶途径抑制高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞自噬的研究

目的:探讨黄芪皂苷通过调控蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）途径影响高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19细胞）自噬水平。方法:体外培养人视网膜色素上皮细胞,实验分为正常对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）,高糖组（30 mmol/L葡萄糖）,黄芪皂苷组（30 mmol/L葡萄糖+2.5、5、10 μg/mL黄芪皂苷）。噻唑蓝比色（MTT）法检测ARPE-19细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测自噬相关蛋白及PERK途径关键因子表达水平。添加PERK特异性抑制剂GSK2606414,Western blot检测对细胞自噬水平的影响。结果:与正常对照组比较,高糖组ARPE-19细胞活性降低,凋亡率升高,自噬相关蛋白LC3表达水平明显升高,另一自噬相关蛋白p62蛋白表达水平明显降低。PERK途径关键因子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、Perk和增强子结合蛋白的同源蛋白（CHOP）表达水平明显上调,差异具有统计学意义（P＜0.05）。与高糖组比较,黄芪皂苷组ARPE-19细胞活性升高,凋亡率降低,LC3蛋白表达水平明显下调,p62蛋白表达水平明显上调,GRP78、Perk和CHOP蛋白水平明显降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。PERK特异性抑制剂GSK2606414能够进一步抑制黄芪皂苷组ARPE-19细胞LC3蛋白表达水平,上调p62蛋白表达水平,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:黄芪皂苷能够抑制高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞自噬水平,其作用机制可能与抑制蛋白激酶R样内质网激酶途径有关。     

丹酚酸A抑制TLR4/JNK MAPK改善棕榈酸诱导的心肌细胞损伤

目的：研究丹酚酸A对脂毒性诱导的H9C2心肌细胞损伤的改善作用并初步探究其分子机制。方法：采用棕榈酸体外诱导建立H9C2心肌细胞脂毒性模型并给予丹酚酸A进行干预，采用乳酸脱氢酶法检测细胞损伤，采用细胞增殖-毒性检测试剂盒检测细胞存活率，采用罗丹明123染色观察心肌细胞线粒体膜电位变化，采用蛋白免疫印迹技术研究丹酚酸A改善作用的分子机制。结果：浓度为400 μmol/L的棕榈酸可显著导致H9C2心肌细胞脂毒性损伤（P<0.05）。不同浓度（10、20、40、80 μmol/L）丹酚酸A暴露对心肌细胞无毒性作用（P>0.05）。丹酚酸A干预显著改善脂毒性诱导的心肌细胞损伤及细胞线粒体膜电位降低（P<0.05）。激活Toll样受体4（Toll-like receptors, TLR4）可显著增强脂毒性诱导的心肌细胞损伤（P<0.05），而抑制TLR4显著减轻棕榈酸诱导的细胞脂毒性（P<0.05）。此外，丹酚酸A显著抑制棕榈酸诱导的TLR4及其下游c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase, JNK MAPK）（P<0.05）。 结论：丹酚酸A改善脂毒性诱导的心肌细胞损伤，该保护作用可能与其抑制TLR4/JNK MAPK信号通路有关。     

自噬促进大鼠肠缺血再灌注损伤的细胞铁死亡

目的：探讨自噬对肠缺血再灌注损伤中细胞铁死亡的影响。方法：采用随机数字表法将24只SPF级Wistar大鼠（体质量200～220 g）分为4组（n=6）：伪手术组（sham组）、缺血组（I组）、缺血再灌注组（I/R组）、缺血再灌注+自噬抑制剂组（I/R+3-MA组）。夹闭肠系膜上动脉1 h构建缺血模型,再灌注2 h建立大鼠肠缺血再灌注损伤模型;采用HE染色光镜下观察肠黏膜病理改变并行Chiu评分;比色法检测Fe2+含量;ELISA法检测乳酸脱氢酶（LDH）、过氧化脂质（LPO）含量;Western Blot检测铁蛋白重肽（ferritin heavy polypeptide, FTH）1、核受体共激活子（nuclear receptor coactivator, NCOA）4、LC3-II/I表达,透射电镜检测线粒体形态。结果：与sham组比较,其余3组小肠组织Chiu评分均增高（P<0.01）,LC3II/I表达上调,FTH1、NCOA4表达下调（P<0.01）,I组、I/R组LDH、Fe2+含量升高（P<0.01）,I/R+3-MA组LDH（P<0.05）、Fe2+含量升高（P<0.01）,I/R组LPO含量升高（P<0.01）;与I组比较,I/R组Chiu评分增高（P<0.01)、LDH、Fe2+（P<0.05）、LPO（P<0.01）含量升高,FTH1、NCOA4表达下调、LC3II/I表达上调（P<0.01）;与I/R组比较,I/R+3-MA组Chiu评分下降,LDH、LPO（P<0.01）、Fe2+（P<0.05）含量下降,FTH1、NCOA4表达上调,LC3II/I表达下调（P<0.01）。线粒体形态学变化：sham组可见肠组织结构完整,线粒体数量较多结构完整;I组线粒体嵴数量减少,双层膜结构不完整;I/R组线粒体嵴大量减少,细胞器损伤严重。3-MA抑制后线粒体数量和内嵴有所增多,膜逐渐恢复完整。 结论：肠I/R损伤中,自噬参与细胞铁离子的调控,促进细胞铁死亡的发生,抑制自噬可以减轻I/R肠损伤。     

胡黄连苷Ⅱ对MCF-7乳腺癌细胞自噬的影响及其作用机制研究

目的:探讨胡黄连苷Ⅱ对MCF-7乳腺癌细胞自噬及PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法:50只裸鼠随机分为5组,每组10只,分为模型组、3-MA组、胡黄连苷Ⅱ高剂量（100 mg/kg）、中剂量(10 mg/kg)、低剂量(1 mg/kg)组。体外培养人乳腺癌细胞MCF-7,随后移植于裸鼠体内,建立MCF-7乳腺癌皮下移植瘤模型。测量各组裸鼠体质量;测量乳腺肿瘤体积并计算出肿瘤抑制率;HE染色法观察肿瘤细胞形态;TUNEL法检测MCF-7细胞凋亡情况;Western blot检测Beclin1、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白的表达。结果:胡黄连苷Ⅱ能显著抑制乳腺癌裸鼠体质量的降低（P<0.01）;提高肿瘤抑制率（P<0.01）;改善病理组织结果;促进MCF-7细胞凋亡;增加Beclin1蛋白的表达;降低PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白的表达（P<0.01）。结论:胡黄连苷Ⅱ对MCF-7乳腺癌细胞具有显著抑制作用,其机制与抑制PI3K/AKT/mTOR通路从而增强MCF-7细胞自噬有关。     

钙拮抗剂通过PKCα/ERK1/2通路拮抗心肌细胞缺氧复氧损伤

目的: 观察新型钙拮抗剂碘化N-正丁基氟哌啶醇（N-n-butyl haloperidol iodide, F₂）及经典钙拮抗剂维拉帕米对缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation, H/R）时心肌细胞PKCα/ERK1/2信号通路及损伤的作用。方法: 建立新生大鼠心肌细胞H/R模型,于缺氧液和复氧液中加入F₂（1×10^-6 mol/L）及维拉帕米（2×10^-6 mol/L）。采用Western Blot方法检测心肌细胞磷酸化PKCα（p-PKCα）、总PKCα、磷酸化ERK（p-ERK1/2）和总ERK1/2蛋白表达的变化;双抗体夹心光化学测定法检测培养细胞上清液中肌钙蛋白（cardiac troponin I,cTnI）的含量,Hoechst 33342染色法检测心肌细胞早中期凋亡情况,Cell Counting Kit-8比色法检测心肌细胞存活率。结果: H/R激活培养心肌细胞PKCα和ERK1/2,使细胞cTnI浓度升高,早中期凋亡增加,存活率下降;PKCα抑制剂可下调H/R所致的PKCα和ERK1/2活化程度;ERK1/2抑制剂可抑制H/R所致心肌细胞cTnI漏出,减少细胞凋亡,提高细胞存活率;F₂及维拉帕米能够下调H/R所致PKCα和ERK1/2的活化程度,抑制细胞cTnI漏出,减少细胞凋亡,提高细胞存活率;PKCα激动剂和ERK激动剂可拮抗F₂对H/R心肌细胞PKCα和ERK1/2激活的抑制作用及对心肌细胞损伤的保护作用。结论: H/R可引起心肌细胞PKCα/ERK1/2通路激活,F₂和维拉帕米均可通过调节PKCα/ERK1/2信号通路拮抗心肌细胞H/R损伤。     

pFLAG-AMPKα2真核表达质粒构建及对心肌缺氧/复氧损伤的作用

目的: 构建大鼠pFLAG-AMPKα2真核表达质粒,分析AMPKα2过表达对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法: 提取H9c2心肌样细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增AMPKα2基因的cDNA全长,并将其克隆至pFLAG-CMV-4构建pFLAG- AMPKα2重组质粒。转染pFLAG-AMPKα2至H9c2细胞,Western Blot测定AMPKα2的蛋白表达情况,建立缺氧/复氧(A/R)损伤模型,MTT法检测心肌细胞的存活率,生物自动分析仪检测LDH活性,流式细胞术检测各实验组心肌细胞凋亡程度、细胞内ROS的变化,试剂盒检测细胞内抗氧化酶(SOD、GSH-Px)活性。结果: AMPKα2全长基因序列克隆至真核表达载体pFLAG-CMV-4,酶切鉴定片段大小为1700 bp,Western blot检测转染pFLAG-AMPKα2后,AMPKα2蛋白在H9c2细胞中高表达。H9c2细胞遭受A/R损伤,心肌细胞存活率下降,LDH活性增加,细胞凋亡加重,ROS生成增加,SOD及GSH-Px的酶活性下降,pFLAG-AMPKα2重组质粒的导入可明显逆转、改善上述各项指标,从而对抗A/R损伤。结论: 构建成功的pFlAG- AMPKα2重组质粒能对抗A/R所致的心肌细胞损伤,其机制与改善心肌细胞的氧化应激作用有关。     

自噬在米诺环素保护大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用研究

目的:探讨自噬在米诺环素保护脑缺血再灌注损伤中的作用。方法:制备大鼠脑中动脉栓塞(MCAO)模型后,注射米诺环素或3-MA进行干预,对大鼠神经功能进行评分;采用TTC法测定脑梗死体积;透射电镜法观察大脑皮层细胞的超微结构及其自噬小体数目的变化;Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ、p62的表达。结果:22.5 mg/kg和45 mg/kg米诺环素组能够显著降低大鼠神经功能评分,减少脑梗死体积,提高LC3Ⅱ和Beclin1的表达,增加p62的降解;高剂量米诺环素（90 mg/kg）组能够进一步提高LC3Ⅱ和Beclin1的表达,然而其大鼠神经功能评分和脑梗死体积却显著增加;自噬小体数也显著增多;当同时给予自噬抑制剂3-MA后,能显著逆转米诺环素（45 mg/kg）的神经保护作用。结论:低剂量米诺环素能够通过增加LC3Ⅱ和Beclin1的表达、促进p62的降解,诱导自噬从而减轻大鼠脑缺血再灌注损伤;而高剂量米诺环素可能是因为其过度激活自噬导致大鼠脑缺血再灌注损伤加重。     

地高辛抗血清对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及机制

目的: 观察地高辛抗血清对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法: 原代培养乳鼠心肌细胞,制备缺血再灌注模型,实验分为4组：正常对照组（Control）、缺血再灌注组（I/R）、哇巴因+I/R（Oua+I/R）、地高辛抗体+I/R（DigAb+I/R）;采用Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,采用Western blot检测内质网应激相关蛋白GRP78及CHOP蛋白的表达水平。结果: 缺血再灌注组（I/R）和哇巴因+I/R组与对照组比较凋亡细胞显著增加（P﹤0.001）,地高辛抗血清预处理心肌细胞凋亡显著减少（P﹤0.001）,提示地高辛抗血清能减少I/R诱导的心肌细胞凋亡。I/R组和哇巴因+I/R组心肌细胞GRP78和CHOP蛋白表达与对照组比较明显增加（P﹤0.01）;地高辛抗血清预处理心肌细胞GRP78蛋白、CHOP蛋白表达明显被抑制（P﹤0.05）,表明地高辛抗血清可以减轻I/R诱导的心肌细胞内质网应激。结论: 地高辛抗血清对缺血再灌注心肌细胞具有抗凋亡作用,其机制至少部分通过抑制内质网应激。     

栀子苷通过抑制VPO1/ERK1/2信号通路减轻糖尿病心肌病大鼠的心肌细胞凋亡

目的：探讨栀子苷（geniposide, GE）改善大鼠糖尿病心肌病的作用及其具体机制。方法：24只成年雄性SD大鼠,随机分为3组：正常组（Control组,8只）、糖尿病心肌病组（DCM组,8只）、糖尿病心肌病组+栀子苷组（DCM+GE组,8只）,采用高脂饲料联合链脲佐菌素（STZ）构建糖尿病心肌病大鼠模型,应用次氯酸（HOCl）诱导H9C2损伤模型。干预12周后,HE和Masson染色观察心脏组织病理学改变;TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡水平;免疫组化检测及Western blot检测法检测VPO1/ERK1/2信号通路及凋亡相关蛋白表达水平。给予次氯酸刺激心肌细胞后,Western blot检测法检测ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的改变。给予ERK1/2酶抑制剂U0126后,用Western blot检测法再次检测ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的改变。结果：HE及Masson染色显示,与Control组相比,DCM组出现心肌纤维排列紊乱、心肌胶原含量明显增多,而DCM+GE组心肌损伤情况明显改善（P<0.05）。与Control组相比,DCM组心肌细胞凋亡水平及Bax/Bcl-2比值明显增加,而DCM+GE组心肌凋亡情况得到明显好转（P<0.05）。免疫组化和Western blot结果显示,在DCM组中VPO1、p-ERK1/2蛋白表达水平升高,而DCM+GE组中VPO1、p-ERK1/2蛋白表达水平得到了抑制（P<0.05）。进一步对H9C2细胞行HOCl干预发现,与Control组相比,次氯酸组出现p-ERK1/2蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值增加,而加入ERK1/2酶抑制剂U0126后p-ERK1/2蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值下降（P<0.05）。 结论：栀子苷通过抑制VPO1/ERK1/2信号通路抑制心肌细胞凋亡从而改善糖尿病引起的心肌损伤。     

天麻素联合地塞米松保护缺糖缺氧诱导的H9C2细胞损伤

目的：探讨天麻素（gastrodin, GAS）联合地塞米松（dexamethasone, DEX）在缺糖缺氧诱导心肌细胞损伤中的作用及可能机制。方法：建立缺糖缺氧细胞（oxygen-glucose deprivation, OGD）模型,细胞分为5组,即正常对照组（normal group）,缺糖缺氧组（OGD group）,DEX组,GAS组,DEX+GAS组。利用CCK-8实验检测各组心肌细胞活性,利用比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）的活性;利用TUNEL法检测各组心肌细胞的凋亡情况;利用ELISA实验检测各组心肌细胞培养液中炎性因子;利用Western blot检测各组心肌细胞中Notch1、Bax、Bcl-2及Beclin1的表达情况。结果：结果显示GAS与DEX联合使用可显著提高损伤心肌细胞的活性,减少心肌细胞的凋亡;降低促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的产生及促进抑炎因子IL-10的产生,降低LDH的释放;Western blot结果显示GAS与DEX联合使用可促进Notch信号通路中Notch1的表达,显著降低受损心肌细胞中促凋亡蛋白Bax的表达,促进抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进自噬相关基因Beclin1的表达。 结论：GAS与DEX联合使用,可能通过促进Notch信号通路的激活,促进其自噬,提高细胞的活性,抑制心肌细胞的凋亡,减轻炎症反应,从而减轻OGD诱导的心肌细胞损伤。     

巨噬细胞移动抑制因子siRNA对肺泡上皮细胞Toll样受体及其下游信号转导通路的影响

目的: 研究巨噬细胞移动抑制因子siRNA对脂多糖刺激的肺泡上皮细胞Toll样受体(TLR)及其下游信号转导通路的影响和作用机制。方法: 用LPS刺激A549细胞,脂质体法分别将巨噬细胞移动抑制因子(MIF) siRNA和非特异性siRNA加入A549细胞进行干预。RT-PCR法检测MIF和TLR2、TLR4 mRNA的表达,Western Blot法分析TLR下游信号转导通路元件髓样分化因子88(MyD88)和干扰素调节因子3(IRF3)蛋白表达,细胞免疫荧光法观察NF-κB核迁移,ELISA法测定细胞培养上清炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6,免疫介质IFN-β分泌水平。结果: MIF siRNA对LPS刺激诱导的MIF和TLR2、TLR4 mRNA高表达有显著的下调作用和部分阻断NF-κB(p65)核迁移。LPS刺激诱导后,MIF siRNA显著降低MyD88蛋白表达和炎症介质TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平,但MIF siRNA对IRF3蛋白表达和免疫介质IFN-β分泌水平无影响。结论: MIF siRNA能抑制A549细胞的炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6过度分泌,其机制可能是MIF siRNA降低了LPS刺激A549细胞诱导的MIF和TLR2、TLR4高表达,及阻断TLR下游信号转导通路元件MyD88和NF-κB核迁移。     

自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用

目的: 探讨自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用。方法: 构建PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧模型,采用米诺环素(MC,1、10、100 μmol/L)或3-甲基腺嘌呤(3-MA,5 mmol/L)进行干预,MTT检测细胞活力,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬泡,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ)、泛素结合蛋白P62/SQSTM l的表达。结果: 氧糖剥夺处理后,1 μmol/L 和 10 μmol/L的MC能显著提高PC12细胞的存活率,而 100 μmol/L 则会加重细胞的损伤。蛋白LC3Ⅱ和Beclin1的表达与MC的浓度呈正相关性,自噬抑制剂3-MA能够降低LC3Ⅱ和Beclin1,增加P62/SQSTM l的表达逆转MC的保护作用。结论: 低剂量(1、10 μmol/L)MC能够通过增加LC3Ⅱ和Beclin1的表达,诱导PC12细胞产生自噬从而保护氧糖剥夺-复糖复氧处理后的PC12细胞。     

金丝桃苷通过调节自噬水平减轻心肌梗死小鼠心脏及胸主动脉的损伤

目的：探讨金丝桃苷（hyperoside, Hyp）对心肌梗死小鼠心脏和胸主动脉的保护作用及可能的机制。方法：通过永久结扎小鼠冠状动脉左前降支构造心梗模型,然后将小鼠分为假手术组（生理盐水,0.1 mg/10 g）、模型组（生理盐水,0.1 mg/10 g）、金丝桃苷低、中、高浓度组（金丝桃苷,9、18、36 mg/kg）、福辛普利组（福辛普利,15 mg/kg）、金丝桃苷高剂量+3-MA组（金丝桃苷,36 mk/kg;3-MA,30 mg/kg）。药物治疗两周后检测小鼠心重指数、心电图、心功能变化、血清氧化应激水平,另外还检测小鼠胸主动脉重塑以及血管内皮功能变化。结果：心肌梗死模型组小鼠与假手术组小鼠相比,心重指数增加（P<0.01）、心电图QRS波宽度上升、高度降低（P<0.01）、心腔变大（P<0.01）、血清氧化应激水平升高（P<0.01）、胸主动脉重塑、内皮功能紊乱（P<0.01）。给予不同剂量的金丝桃苷以及福辛普利治疗两周后,小鼠心电图异常有所恢复,血清氧化应激水平降低,胸主动脉重塑及内皮功能紊乱得到一定程度的改善（P<0.05或P<0.01）。而金丝桃苷联合自噬抑制剂3-MA治疗后能够逆转金丝桃苷对心脏和血管的保护作用（P<0.05或P<0.01）。 结论：金丝桃苷对心肌梗死小鼠的心脏损伤和胸主动脉重塑以及内皮功能紊乱具有一定的保护作用,3-MA能够逆转金丝桃苷对心梗小鼠心血管的保护作用。提示金丝桃苷对心梗小鼠的心血管保护作用机制可能与金丝桃苷提高了心肌梗死后小鼠心脏自噬水平并抑制氧化应激损伤有关。     

不同剂量前列腺素E2对H9c2心肌细胞肥大的影响

目的: 研究前列腺素E2(PGE2)对H9c2心肌细胞的肥大作用,并分析其量效关系,为寻找抗心肌肥大的潜在靶点提供理论依据。方法: 将H9c2心肌细胞分为空白对照组(C组)和PGE2处理组,PGE2处理组又分为小剂量PGE2组(D1组)、中剂量PGE2组(D2组)和大剂量PGE2组(D3组)。各组细胞培养液中PGE2终浓度分别为0、0.1、1及 10 μmol/L。给药孵育 48 h 后,利用荧光显微镜观察大鼠H9c2心肌细胞形态及体积;通过测量细胞直径大小、BCA法测定细胞总蛋白含量来确定心肌细胞是否肥大;RT-PCR技术测量心钠肽(Atrial natriuretic peptide, ANP)、脑钠肽(Brain natriuretic peptide, BNP) mRNA的表达水平,以此判断是否发生病理性肥大。结果: 与C组比较,免疫荧光显示D1组、D2组及D3组细胞形态改变、体积增大;细胞直径及总蛋白含量显著增加(P<0.05),不同剂量PGE2组间亦具有统计学差异(P<0.05);D2组及D3组较C组细胞内ANP、BNP mRNA表达水平显著增高(P<0.05)。结论: PGE2可剂量依赖地诱导H9c2心肌细胞肥大,较大剂量PGE2引发心肌细胞病理性肥大。抑制PGE2合成有望为抑制心肌肥大提供靶点。     

23-羟基白桦酸对阿霉素所致H9c2心肌细胞损伤的保护作用及抗氧化机制研究

目的: 基于细胞水平研究23-羟基白桦酸(23-HBA)对阿霉素(DOX)心肌损伤的保护作用并探讨其抗氧化机制。 方法: 采用H9c2心肌细胞,考察对照组、DOX组、23-HBA组及23-HBA联合DOX组给药后心肌细胞形态学变化,测定细胞体积及蛋白含量,Real time-PCR测定心钠素(ANP)、脑钠素(BNP)的mRNA水平。考察心肌细胞内Caspase-3活性及Hoechst荧光染色后细胞核形态从而评价细胞凋亡水平。利用DCFH荧光探针测定细胞ROS水平,同时检测细胞内脂质过氧化物(MDA)生成量,评价细胞氧化损伤水平,寻找23-HBA心肌保护的可能机制。 结果: 5 μmol/L DOX诱导心肌细胞肥大,表现为细胞体积增大,蛋白含量增多,并显著上调细胞内ANP与BNP的mRNA水平,提高细胞内Caspase-3活性,导致细胞凋亡。23-HBA与DOX联合用药后,浓度依赖地降低DOX给药后心肌细胞内ROS水平,清除脂质过氧化物MDA,逆转DOX诱导的心肌肥大、心肌损伤标志物上调、心肌细胞凋亡等过程。 结论: 23-HBA可通过其抗氧化作用降低DOX所致的心肌损伤。     

一氧化氮诱导心肌细胞预适应早期保护作用的信号转导途径

目的: 探讨一氧化氮(NO)诱导心肌细胞预适应早期保护作用及可能的信号转导途径。方法: 体外培养新生大鼠心肌细胞,分别以NO合成前体L-精氨酸(L-Arg)和NO供体SNAP处理细胞,观察心肌细胞在随后6h的缺氧损伤程度,以明确NO是否诱导心肌细胞预适应早期保护作用;分别以cGMP阻断剂亚甲基蓝、蛋白激酶C(PKC)抑制剂D-鞘氨醇、钙拮抗剂拉西地平和ATP敏感的钾通道[K(ATP)通道]阻断剂格列苯脲作用心肌细胞30min后加入SNAP作用60min,观察心肌细胞缺氧损伤程度,检测指标为心肌细胞存活率及乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果: SNAP和L-Arg均可诱导心肌细胞预适应早期保护作用,一氧化氮合酶抑制剂LNAME可阻断L-Arg的保护作用,亚甲基蓝可完全取消SNAP对缺氧心肌细胞的保护作用,D-鞘氨醇、拉西地平和格列苯脲均可减弱SNAP的作用。结论: NO可能通过cGMP依赖途径诱导心肌细胞预适应早期保护作用,而PKC 的活化和钙通道、K(ATP)通道的开放是其下游重要的环节。