青钱柳粗多糖CP50制备工艺优化及对黄嘌呤氧化酶抑制作用研究

青钱柳是珍贵的药食同源型植物,青钱柳多糖CP50是具有较强生物活性的果胶类酸性多糖。黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase, XO)是一种嘌呤分解代谢酶,与高尿酸血症和痛风形成有关。该研究采用正交法优化了从青钱柳干叶中制备青钱柳多糖CP50的最佳工艺为提取温度100℃、料液比1∶40(g∶mL)、提取时间2 h,此条件下多糖得率为1.67%。以黄嘌呤氧化酶作为靶点,并结合分子模拟手段探究了青钱柳多糖CP50对XO的抑制机理。试验结果显示,青钱柳多糖CP50(0～1 mg/mL)对XO有一定抑制作用,且对XO的抑制活性呈浓度依赖性,IC₅₀为0.825 mg/mL。分子对接结果进一步表明,青钱柳多糖作用于XO时,CP50分子插入XO的疏水腔,占据催化中心,导致XO活性受到抑制而达到降低尿酸的效果。该研究旨在为青钱柳CP50作为一种有效的膳食多糖应用于高尿酸血症患者的日常饮食提供方法借鉴和数据支持。     

黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶活性的抑制作用

黄嘌呤氧化酶是尿酸生成的关键酶,通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性可以有效降低机体内尿酸的含量。为探究黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶的抑制作用,采用紫外分光光度法测定单位时间内酶促反应体系中酶活力的变化,计算不同质量浓度的黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶的抑制率,得到半抑制浓度IC₅₀。双倒数作图法判断黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶的抑制类型,并计算抑制常数Ki值,等毒法评价黄芪多糖与别嘌呤醇的联合作用效果。黄芪多糖能够抑制黄嘌呤氧化酶的活性,其IC₅₀为1.37 mg/mL。动力学分析表明,黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶为竞争性可逆抑制作用,抑制常数Ki为0.59 mg/mL。黄芪多糖与别嘌呤醇的联合作用表现为拮抗作用,黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶的活性有抑制作用。     

英红九号茶蛋白降尿酸肽的酶解制备及不同分子量组分的活性对比

以英红九号红茶渣为原料,通过碱提酸沉提取茶叶蛋白,以黄嘌呤氧化酶抑制率为指标,采用单因素和响应面实验优化酶解制备降尿酸肽,对其氨基酸组成进行分析,并对最优酶解物进行超滤分离和活性评价。结果表明,在底物浓度2%（m/V）、加酶量0.3%（m/V）、温度39 ℃、pH值7.5和酶解时间3.4 h条件下,得到的降尿酸肽的黄嘌呤氧化酶抑制率为85.42%。氨基酸分析表明,降尿酸肽中必需氨基酸含量丰富（38.49%）,高比例的疏水性氨基酸（48.00%）和碱性氨基酸（13.67%）对黄嘌呤氧化酶抑制活性有重要作用。酶解物经过超滤分离后,与原酶解物的活性（IC50 0.72 mg/mL）比较,<3 ku组分的黄嘌呤氧化酶抑制活性显著提升（IC50 0.41 mg/mL）。该研究可为茶叶蛋白的高值化利用提供参考,为茶叶源新型降尿酸健康食品的开发提供了理论依据。     

筛选降尿酸肽的体外测定方法的建立与优化

由于紫外分光光度法、NBT/PMS显色法、荧光分析法,MTS/PMS还原法等黄嘌呤氧化酶(XO)抑制活性检测方法对多肽检测的局限性,本文建立了适用于筛选降尿酸多肽类物质的体外测定方法,采用双酶偶联法联合高效液相色谱法(HPLC法)测定多肽类物质的体外黄嘌呤氧化酶抑制活性。以双酶偶联法优化样品测定的反应体系,得到最适反应条件:黄嘌呤浓度0.22 mmol/L,酶浓度0.52 u/m L,缓冲液pH 8.0,反应温度30℃,反应时间20 min;优化尿酸分离的液相条件,确定最适检测条件:95%15 mmol/L NH4H2PO4+5%甲醇,pH 6.5,流速1 m L/min,柱温25℃,检测波长290 nm。实验表明,最适条件下双酶偶联法和HPLC法检测精密度良好,准确度达95%以上。双酶偶联法联合HPLC法可高效、准确进行多肽降尿酸活性检测。双酶偶联法联合HPLC法证明还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)具有黄嘌呤氧化酶抑制活性,可作为降尿酸肽。     

黄嘌呤氧化酶肽类抑制剂的研究进展

痛风是由于嘌呤类物质代谢增加或尿酸排泄异常引起的一种反复发作的炎症性疾病。在嘌呤类物质代谢成尿酸的过程中,黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase,XO）是调控尿酸生成的关键酶,其作用是将次黄嘌呤转化成黄嘌呤,将黄嘌呤转化成尿酸。通过抑制XO的活力可以抑制尿酸的生成,缓解高尿酸血症。近年来,蛋白来源的小分子降尿酸肽具有制备成本低、安全性高、易吸收、高活性、高稳定性和特异性等特点,已引起研究者的关注。本文首先对XO进行介绍,然后概括了XO分离鉴定的通用步骤,归纳总结了研究发现的混合肽类抑制剂及单一肽类抑制剂,并找到这些抑制剂的结构共性。为研究者发现新的XO肽类抑制剂提供思路和方向。     

蛹拟青霉代谢产物清除自由基和抑制单胺氧化酶活性的研究

用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)—TLC法和酶标仪法对1株蛹拟青霉RCEF0892摇瓶发酵菌丝体及发酵液甲醇-乙酸乙酯[V(甲醇)∶V(乙酸乙酯)=1∶1]提取物清除自由基活性进行了定性和定量分析,发现该菌株发酵液提取物具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0mg/mL,于37℃下保温10min时,它对0.4mg/mL的DPPH自由基的清除率可达79.92%。同时,以大鼠肝脏线粒体单胺氧化酶为靶标的体外实验发现,RCEF0892菌株菌丝体提取物具有较强的抑制单胺氧化酶活性,且其活性和浓度呈量效关系,其对大鼠肝脏线粒体单胺氧化酶的半数抑制浓度IC50为81.39μg/mL。     

蜜柚叶黄酮的提取及其抗氧化与降尿酸活性研究

研究蜜柚叶总黄酮的提取工艺、抗氧化活性及其对黄嘌呤氧化酶的抑制活性。采用正交实验对蜜柚叶黄酮的提取工艺进行优化,探究蜜柚叶黄酮的最佳提取工艺条件。并通过DPPH自由基、羟自由基及超氧阴离子清除实验探究蜜柚叶黄酮对自由基离子的清除活性;通过黄嘌呤氧化酶活性抑制实验初步判断其降尿酸功效。结果表明:蜜柚叶黄酮的最佳提取条件为料液比1:30(g/mL)、乙醇浓度80%、浸提时间6 h、浸提温度80℃,黄酮得率为12.41 mg/g。蜜柚叶黄酮对DPPH自由基、羟自由基及超氧阴离子均表现出较强的清除活性,IC50值分别为:1.47、1.04、1.49 mg/mL。同时,蜜柚叶黄酮对黄嘌呤氧化酶抑制活性的IC_(50)值为4.8 mg/mL。     

蛹拟青霉不同菌株液体发酵代谢产物的抑菌活性研究

以大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,黑曲霉为指示菌,采用杯碟法对蛹拟青霉不同菌株的液体发酵液及菌丝体甲醇提取物进行抑菌试验。结果表明:蛹拟青霉各菌株液体发酵菌丝体的甲醇提取物对4种指示菌均无抑制活性。当各菌株发酵液甲醇提取物样品浓度为5 mg/mL时,PM27菌株的发酵液样品对大肠杆菌抑制效果最好,PM38菌株发酵液样品对金黄色葡萄球菌抑制效果最好,PM33菌株发酵液样品对枯草芽孢杆菌抑制效果最好,PM27菌株发酵液样品对黑曲霉抑制效果最好,其最小抑菌浓度MIC分别为0.32 mg/mL,0.32 mg/mL,0.64 mg/mL,0.16 mg/mL。     

桑色素对黄嘌呤氧化酶活性的抑制作用

在磷酸盐缓冲体系（pH 7.5）中,利用紫外光谱法、荧光光谱法和圆二色谱法,结合分子模拟技术研究了桑色素对黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase,XO）活性的抑制机理。结果表明：桑色素是一种有效的可逆性混合型抑制剂,其半数抑制浓度（IC50）和抑制常数（Ki）分别为1.35×10–5 mol/L和1.21×10–5 mol/L;桑色素通过疏水作用力与XO形成基态复合物导致XO内源荧光的猝灭,并诱导XO的二级结构发生改变;分子模拟结果进一步证实桑色素主要通过疏水作用力结合到XO的活性中心,与Phe914、Phe649、Phe1009、Leu648、Leu1014和Leu873等主要氨基酸发生作用。推测桑色素进入XO的疏水腔,阻碍了底物黄嘌呤进入XO活性中心并影响了XO活性中心的形成,从而抑制了XO对黄嘌呤的催化活性。     

超声辅助提取苦丁茶多糖的工艺优化及其对黄嘌呤氧化酶抑制活性

目的：优化苦丁茶多糖的提取工艺，分析其对黄嘌呤氧化酶的抑制活性。方法：以得率为指标，采用响应面优化超声辅助法研究料液比、超声时间、超声温度、超声功率对苦丁茶多糖的得率的影响；通过体外实验测定苦丁茶多糖对黄嘌呤氧化酶的抑制率及其动力学常数K_i。结果：响应面试验优化条件为：料液比1:25 g/mL，超声时间60 min，超声温度40℃，超声功率260 W，得到得率为5.85%。苦丁茶多糖对黄嘌呤氧化酶的抑制率随物质量浓度增大而增加，IC₅₀为1.28 mg/mL，其对黄嘌呤氧化酶抑制作用类型属于竞争性可逆抑制，抑制动力学常数K_i为0.62 mg/mL，结论：苦丁茶多糖能够抑制黄嘌呤氧化酶的活性，其可作为潜在的预防高尿酸血症的食品或保健品进行深入研究，以期对苦丁茶的综合利用提供理论数据。     

五种药食同源花提取物体外协同抗氧化作用

通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除试验和2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(2,2-azobis-(2-amidinopropane)dihydrochloride,AAPH)诱导红细胞溶血试验评价菊花、金银花、槐花、代代花、白扁豆花水提物和水提物的复配物(菊花50%,槐花18%,白扁豆花15%,代代花12%,金银花5%)的抗氧化性,并讨论五种药食同源花的协同抗氧化作用。结果表明五种药食同源花的提取物及其复配物均具有一定程度的抗氧化能力。在DPPH体系中,根据自由基的半数清除率(IC₅₀值),各提取物抗氧化能力大小顺序为复配物(IC₅₀=97.83 μg/mL) > 槐花(IC₅₀=98.63 μg/mL) > 菊花(IC₅₀=140.79 μg/mL) > 金银花(IC₅₀=146.35 μg/mL) > 代代花(IC₅₀=692.24 μg/mL) > 白扁豆花(IC₅₀=701.51 μg/mL),复配物表现出明显的协同抗氧化效果。AAPH诱导红细胞溶血体系中,复配物和槐花提取物表现出很强的溶血抑制作用,而金银花、菊花、代代花以及白扁豆花提取物仅表现出较弱的抑制作用。剂量在50~300 μg/mL时槐花提取物对红细胞的溶血抑制率小于复配物,当剂量达到300 μg/mL时,槐花提取物和复配物对红细胞的溶血抑制率分别为77.83%±1.85%和80.94%±1.46%,这说明五种药食同源花提取物之间存在协同抗氧化作用。     

基于黄嘌呤氧化酶活性抑制和斑马鱼高尿酸血症模型的降尿酸功效食药材筛选

结合体外（黄嘌呤氧化酶活性抑制）和体内（斑马鱼高尿酸血症模型）方法,对15种食药材乙醇粗提物的降尿酸活性进行筛选。体外实验设置空白组、酶反应组、抑制剂组、对照组,酶标仪295 nm测定吸光度,计算15种食药材对黄嘌呤氧化酶（XOD）活性的抑制率;体内实验随机选取受精后第5 d（5dpf）的斑马鱼,设置空白组、模型组（200 μmol/L PO+10 μmol/L XSS）、食药材给药组（200 μmol/L PO+10 μmol/L XSS+不同浓度提取物）、阳性对照组（200 μmol/L PO+10 μmol/L XSS+APL 2 mmol/L）,水溶浸泡,28.5 ℃培养箱中孵育24 h,测定尿酸含量,对具有良好XOD抑制活性的食药材做进一步降尿酸活性验证。体外试验结果表明,15种乙醇粗提物均具有XOD抑制活性,其中8种在400 μg/mL时抑制率达到50%以上,分别为:红景天、兔耳草、牡丹皮、败酱草、黄柏、绿萝花、决明子、雪菊。体内试验结果表明,8种处理组尿酸水平与模型组相比显著降低（P<0.05或P<0.01）,均显示出降尿酸活性。     

皱瘤海鞘抗人肺癌A549细胞组分的分离纯化及化学成分分析

采用四氮甲唑蓝比色法检测皱瘤海鞘（Styela plicata）被囊及内脏团甲醇提取物对体外培养的人肺癌A549细胞增殖的抑制作用,利用倒置显微镜、流式细胞仪及荧光显微镜观察,分析其对A549细胞的形态和细胞凋亡的影响,并且用气相色谱-质谱联用（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）技术分析高活性组分6号内脏团柱层析组分（column eluted fraction 6 from visceral methanol extract,VCEF-6）的化学成分。结果表明：在低质量浓度（25～75 μg/mL）范围内,被囊及内脏团醇提物对A549细胞生长没有抑制作用,当质量浓度增大到100 μg/mL以上时,被囊及内脏团醇提物表现出对A549细胞明显的生长抑制作用。醇提物柱层析组分的体外抗肿瘤检测表明,共有8 个组分在100 μg/mL时对A549细胞表现出明显的生长抑制作用,其中VCEF-6抑制A549细胞生长活性最强,24 h时半数抑制浓度为168.7 μg/mL。通过流式细胞术以及荧光显微镜观察表明,VCEF-6抑制肿瘤细胞生长与诱导细胞凋亡有关。GC-MS分析VCEF-6的化学成分结果表明,VCEF-6含有22 种已知物质,其中甾醇类6 种、烷烃类6 种、脂肪酸酯类6 种、芳香族化合物4 种。综上所述,在体外实验中VCEF-6能够抑制A549细胞生长并诱导其凋亡。     

Phenolic composition,enzyme inhibitory,and antioxidant activity of <Emphasis Type="Italic">Bituminaria bituminosa</Emphasis>

This study aimed to evaluate the in vitro antioxidant and enzyme inhibitory activities of ethyl acetate, methanol, and water extracts of Bituminaria bituminosa. In phosphomolybdenum assay, the methanol extract showed the highest activity (166.78 μmol TEs/g dry plant). The water extract exhibited the highest scavenging activity on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH^?) and 2,2-azino-bis (3-ethylbenzothiazloine-6-sulphonic acid) (ABTS^?+). In addition, it exhibited the highest activity in cupric ion reducing (CUPRAC) and ferric reducing antioxidant power (FRAP) assays (41.26 and 46.82 μmol TEs/g dry plant). The extracts did not show cholinesterase and tyrosinase inhibitory activity. However, α-glucosidase inhibition assay resulted in the superiority of water extract (1233.86 μmol ACEs/g dry plant). In the case of α-amylase inhibitory assay, the ethyl acetate extract showed the highest activity (53.65 μmol ACEs/g dry plant). The water extract exhibited the highest phenolic content (31.70 μmol GAEs/g dry plant). In contrast, the methanol extract was found rich in flavonoid compounds (5.29 μmol REs/g dry plant). The water extract contained considerable amounts of rosmarinic acid, luteolin, quercetin, and rutin. Therefore, it can be used as a source of new and alternative antioxidant and enzyme inhibitory agents.     

ANTIFUNGAL,AFLATOXIN INHIBITORY AND FREE RADICAL‐SCAVENGING ACTIVITIES OF SOME MEDICINAL PLANTS EXTRACTS

ABSTRACT

The antifungal, aflatoxin inhibitory and antioxidant activity of methanol–aqueous extract (2:1) of 62 medicinal plants was explored. Based on the antifungal results, the extracts of 25 plants showed more than 50% antifungal activity and were further investigated for their aflatoxin inhibition and antioxidant properties. Methanol–aqueous extracts of Phyllanthus emblica and Terminalia chebula fruits caused 100% inhibition of aflatoxin production by the toxigenic strain of Aspergillus flavus in semisynthetic medium at 1 mg/mL. In addition, P. emblica (IC₅₀ = 4.1 µg/mL) and T. chebula (IC₅₀ = 6.9 µg/mL) fruits extracts exhibited strong antioxidant activity during the 2,2‐diphenyl‐1‐picrylhydrazyl radical‐scavenging assay in comparison with butylated hydroxytoluene (IC₅₀ = 8.1 µg/mL) and butylated hydroxyanisole (IC₅₀ = 6 µg/mL).

PRACTICAL APPLICATIONS

Based on the results of the present study, methanol–aqueous extracts of Phyllanthus emblica and Terminalia chebula, being endowed with strong antifungal, aflatoxin inhibitory and antioxidant activity, may be recommended as plant‐based preservatives for the enhancement of shelf life of food items and their protection from the undesirable harmful effects of molds, aflatoxin and free radical‐mediated damages.     

Antioxidant and tyrosinase inhibitory activities of different parts of guava (<Emphasis Type="Italic">Psidium guajava</Emphasis> L.)

The antioxidant and the tyrosinase inhibitory activities of 4 different solvents (acetone, ethanol, methanol, and water) for preparation of extracts from guava (branch, fruit, leaf, and seed) were evaluated by measuring total phenolic contents (TPC), DPPH radical scavenging activity, ABTS radical scavenging activity, reducing power (RP), and tyrosinase inhibitory activity. The extracts of branch and leaf showed relatively higher antioxidant properties than those of fruit and seed. The highest TPC (141.28 mg/g gallic acid equivalents), DPPH radical scavenging activity (IC₅₀=34.01 μg/mL), ABTS radical scavenging activity (IC₅₀=3.23 μg/mL), and RP (IC₅₀= 75.63 μg/mL) were found in acetone extract of leaf, while water extract of seed had the lowest antioxidant activity. The tyrosinase inhibitory activity of ethanol extract from guava leaf was 69.56%, which was the highest activity among the extracts. These results indicate that useful bioactive substances exist in the guava branch as well as leaf extracts.     

8种别样茶对AGEs抑制能力的筛选及其抑制机制探究

目的:本研究通过检测非酶糖基化终末产物（advanced glycation end-products,AGEs）生成量评价8种别样茶的糖基化抑制能力,并探究抑制效果较好的别样茶对AGEs生成各阶段的抑制作用机制。方法:本研究首先对8种别样茶水提液中总黄酮含量进行检测,接着通过构建体外蛋白质非酶糖基化模型实验检测了8种别样茶抑制AGEs生成的能力,最后择优测定其对糖基化早期产物果糖胺、中期产物活性羰基化合物以及蛋白质交联的抑制能力,从而探究其对非酶糖基化反应的抑制机制。结果:大叶苦丁茶（Ilex latifolia Thunb）和甜茶（Rubus suavissimus S. Lee）对AGEs的抑制效果在8种别样茶中较为突出,50 μg/mL时AGEs抑制率分别达到了76.31%±0.87%和81.75%±0.41%;大叶苦丁茶和甜茶主要通过抑制糖基化早期、中期产物的生成量来减少AGEs的产生。其中,500 μg/mL甜茶对果糖胺抑制率最高（59.12%）,蛋白质交联抑制率最高（81.41%）,5000 μg/mL大叶苦丁茶对活性羰基化合物抑制率最高（94.24%）。结论:大叶苦丁茶及甜茶可以作为抑制糖基化反应的功能食品,本研究可为具有抑制AGEs产生功效原料的综合开发利用提供一定的理论依据。     

石榴皮提取物的抗氧化作用研究

分别以水、甲醇、丙酮和乙酸乙酯为溶剂,对石榴皮中的多酚进行了提取,得到4种提取物。采用油脂过氧化值(POV)法和二苯三硝基苯肼(DPPH)自由基法研究了提取物的抗氧化活性。结果显示,4种提取物均具有抗油脂过氧化和清除DPPH自由基的能力,其抗氧化活性随添加量的增加而增加。4种提取物中,丙酮提取物的抗油脂过氧化作用最大,其次为水提取物和甲醇提取物,乙酸乙酯提取物的抗油脂过氧化作用最小。当丙酮提取物添加量为猪油质量的0.1%时,其抗油脂过氧化活性接近添加量为0.02%茶多酚或BHT。4种提取物对DPPH自由基的清除能力大小顺序依次为:水提取物、丙酮提取物、甲醇提取物和乙酸乙酯提取物。浓度为0.0175 mg/mL的水提取物对DPPH自由基的清除率高达85.2%,高于BHT,但略低于茶多酚。石榴皮多酚是一种有效的天然抗氧化剂。     

In vitro antioxidant/free radical scavenging and antibacterial properties of endemic oregano and thyme extracts from Greece

The present investigation was to evaluate the antioxidant and antibacterial activities of hexane and methanol extracts from Origanum vulgare ssp. hirtum and Thymus vulgaris (Komotini, Greece). The methanol extracts of oregano and thyme against DPPH radical were more active than the hexane extracts (mean values 0.94 and 0.47, respectively) and oregano exhibited stronger activity than thyme (mean values 0.82 and 0.55, respectively). The results from the β-carotene/linoleic acid assay showed that all plant extracts inhibited linoleic acid oxidation up to 70.78±1.17%. The oregano extracts exhibited the strongest inhibition against Escherichia coli, Listeria monocytogenes, and Staphylococcus aureus using the disc diffusion assay. The chemical composition of the hexane and methanol extracts, by using GC-MS, showed that carvacrol, thymol, and p-cymene were the most prominent compounds. The methanol extract of oregano was found the most potent antioxidant with the highest content of total phenolics (138.92 mg GA/g extract) and carvacrol (76.7%).