高效液相色谱-在线柱后衍生荧光检测法同时测定水产品中14种磺胺类药物残留

建立水产品中14种磺胺类药物的高效液相色谱-柱后衍生荧光检测法。均质后的水产品试样用乙酸乙酯提取、盐酸溶液反萃取、正己烷脱脂、反相色谱柱分离、在线柱后衍生、荧光检测器检测、内标法定量。14种磺胺类药物(磺胺、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺5-甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺6-甲氧嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺多辛、磺胺异噁唑、磺胺二甲氧哒嗪、磺胺喹噁啉)的线性范围为2.5～800μg/L,线性相关系数均大于0.9934;在2.5～200μg/kg三个添加水平范围内的平均回收率为88.9%～98.6%,相对标准偏差均小于6.96%。14种磺胺类药物的定量检出限为2.5～20μg/kg。方法重现性好、灵敏度高,杂质干扰少,广泛适用于水产品中磺胺类药物残留的检测。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定漱口水中的11种磺胺类药物

目的 建立一种高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry, HPLC-MS/MS)同时测定漱口水中11种磺胺类药物(磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲异噁唑、磺胺喹噁啉、磺胺硝苯、磺胺苯吡唑)残留的方法。方法 样品经超声提取后, 以Agilent Eclipse XDB-C18(10 cm×4.6 mm, 3.5 μm)色谱柱分离后在高效液相色谱-串联质谱法多反应监测模式下进行测定, 外标法定量。结果 11种磺胺类药物的检出限为15 μg/kg, 在3个添加水平范围内的平均回收率为80.3%~105.4%, 相对标准偏差均小于8.5%。结论 该方法简便、准确, 快速, 适用于漱口水中磺胺类药物的测定。     

分子印迹固相萃取高效液相色谱联用检测猪肉中的磺胺类兽药残留

采用本体聚合法,以磺胺二甲基嘧啶作为模板分子,甲基丙烯酸作为功能单体,甲基丙烯酸羟乙酯作为亲水性功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯和3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基丙烯酸酯同时作为交联剂,偶氮二异丁腈作为引发剂,合成磺胺二甲基嘧啶分子印迹聚合物,印迹聚合物对模板分子的饱和吸附量可以达到11.37 mg/g,选择性实验中印迹聚合物对磺胺类的吸附量明显大于竞争物,对7种磺胺类药物(磺胺二甲基嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺异噁唑、磺胺噻唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶)均具有特异性吸附效果。同时建立了固相萃取与高效液相色谱联用的方法检测猪肉中痕量磺胺类药物含量,结果表明该方法对加标的7种磺胺类药物检测限为1.7~4.5μg/L,回收率可达73.9%~85.4%,且该检测方法简单、便捷、灵敏度高。     

基质固相分散-高压液相色谱-高分辨质谱法测定猪肉中22种磺胺类药物的残留

目的 建立基质固相分散-高压液相色谱-高分辨质谱测定猪肉中22种磺胺类药物残留量的测定方法, 包括磺胺苯酰、磺胺醋酰、磺胺氯哒嗪、磺胺嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺多辛、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲噁唑、磺胺苯吡唑、磺胺吡啶、磺胺喹噁啉、磺胺噻唑、磺胺异噁唑、磺胺胍、甲氧苄啶、磺胺索嘧啶。方法 猪肉样品与弗罗里硅土混合, 研磨均匀, 装入空的固相萃取管中, 用15 mL 1%乙酸二氯甲烷: 乙酸乙酯(1∶3, v/v)洗脱, 洗脱液用氮气吹干, 残渣用1 mL乙腈: 10 mmol/L乙酸铵溶液(15∶85, v/v)溶解。加入1 mL正己烷混合离心, 取下层溶液, 经0.22 μm滤膜过滤后用Agilent Poroshell 120 EC-C18(2.1 mm×150 mm, 2.7 μm)色谱柱分离, 高分辨质谱测定。结果 22种磺胺类药物在 10~100 μg/kg范围内线性关系良好, 相关系数r>0.99, 除磺胺甲噻二唑、甲氧苄啶和磺胺脒/磺胺胍加标回收率小于40%外, 其余均大于60%, 定量限为 5~10 μg/kg。结论 本方法具有前处理快速、高效、有机试剂用量少、成本小等优点, 适用于猪肉中磺胺类药物残留量的测定。     

基质固相分散-高效液相色谱法测定蜂蜜中10种磺胺类药物

目的 建立基质固相分散一高效液相色谱法测定蜂蜜中10种磺胺类药物残留量的方法,包括磺胺、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑和磺胺二甲异噁唑.方法 蜂蜜样品与C,:固相吸附荆于玻璃研钵中研磨均匀,得半干状混合物,装入空的固相萃取管中,盖上一层滤纸,以1+3二氯甲烷-乙酸乙酯(V/V)为洗脱剂洗脱,洗脱液经氮气吹干,用流动相溶解残渣,经0.45 μtm滤膜过滤,Agilent TC-C_18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱分离,高效液相色谱法测定.结果 10种磺胺类药物的线性范围为0.10～10.00 mg/L,相关系数r > 0.999,样品加标回收率60.0%～109.3%,相对标准偏差小于10%,方法检出限0.016-0.025 mg/L,样品中磺胺类检出限为0.050～0.079 mg/kg.     

胶体金免疫层析法检测猪肉中3种磺胺类物质残留

采用胶体金免疫层析方法同时检测猪肉组织中3种磺胺类物质。用胶体金标记磺胺二甲基嘧啶单克隆抗体,包被在金标垫上,磺胺二甲基嘧啶与卵清蛋白蛋白偶联物和羊抗鼠二抗分别包被在硝酸纤维素膜(NC)上作为检测线(T线)和质控线(C线),制成免疫层析快速检测试剂条,用于快速检测组织中磺胺类物质残留量。T线与待测样品中所含磺胺类物质竞争结合胶体金标记的磺胺二甲基嘧啶单克隆抗体,并通过胶体金显色直接观察检测结果。检测阴性样品时,在检测带和质控带会形成肉眼可见的红色条带。本方法简便、快速,药物交叉反应好,适合多残留检测,具有广泛的发展前景。     

高效液相色谱法同时测定鳗鱼及其制品中八种磺胺类药物

建立了高效液相色谱测定鳗鱼及其制品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺甲嗯唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹嗯啉等八种磺胺类药物残留量的方法。研究了鳗鱼及其制品中八种磺胺类药物残留的提取、净化和高效液相色谱条件。样品经二氯甲烷提取、MCX阳离子固相萃取小柱净化，以Cloversil C18柱，甲醇、1％乙酸(V／V)梯度洗脱分离，紫外检测器检测、外标法定量。结果表明，样品添加0．1mg／kg的回收率为80％～93％，定量测定低限为0．02mg／kg。方法已应用于实际样品的测定。     

高效液相色谱法同时测定水产品中13种磺胺类药物残留的研究

建立了一种同时测定水产品(鳗鱼、鮰鱼、龙虾)中13种磺胺类药物残留的高效液相色谱法。样品经乙腈提取,正己烷液-液分配,阳离子固相萃取小柱净化后,采用高效液相色谱分离,紫外检测器检测,外标法定量。13种磺胺类药物在0.1～5.0μg/ml范围内线性关系良好,相关系数R2为0.9997～0.9999,加标回收率为62%～97%,相对标准偏差为2.01%～10.46%。定量测定低限磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺-6-甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异恶唑、磺胺二甲异恶唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉为0.02mg/kg,磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑为0.05mg/kg。     

液相色谱-荧光检测法同时测定肠衣中八种磺胺类兽药残留

建立了一种专属性强的高效液相色谱-同时测定肠衣中八种磺胺类药物残留(磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉、磺胺甲基异恶唑、磺胺甲氧嗪和磺胺二甲嘧啶)的检测方法。采用1%乙酸/乙腈对肠衣中的磺胺类药物残留进行提取,用正己烷净化,净化后的样品,经荧光胺衍生,供液相色谱仪测定。实验结果表明,八种磺胺药物在2.00～5.00×102ng/ml浓度范围内,具有良好的线性关系,线性相关系数在0.9982～0.9997,添加浓度为5～50ng/ml时,回收率在63.7%～87.8%之间,该方法的最低检测限为5ng/ml,完全可以达到日常检测要求。     

液相色谱-电喷雾质谱测定肉类中的磺胺类药物

通过溶剂提取分离、液相色谱-电喷雾质谱联用技术定量测定肉制品中常见的9类磺胺类药物(磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺异噁唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹沙啉、磺胺苯吡唑)。[M H] 是阳离子模式下的主要监测离子,采用选择离子模式用于定量测定。以[苯基-13C6]磺胺甲嘧啶用作内标,每一种化合物的线性范围为0.1~10μg/mL,空白样品的加标范围为50~500μg/kg,检测限低于10μg/kg。本方法适用于各种牛肉、猪肉及鸡肉样品的分析检测。     

胶体金免疫层析技术快速检测沙丁胺醇残留

建立胶体金免疫层析检测法,用于动物组织或饲料样品中沙丁胺醇残留的快速检测。采用胶体金免疫竞争法,将兔抗沙丁胺醇多克隆抗体-胶体金标记物包被在胶体金聚酯结合垫上,并将沙丁胺醇-BSA抗原包被在硝酸纤维素膜上作为检测线,与待测试样中的沙丁胺醇竞争结合胶体金标记的兔抗沙丁胺醇多克隆抗体,从而判断试样中是否有沙丁胺醇存在。本文优化了检测试剂,可检测出猪肉等组织和饲料试样中沙丁胺醇的低限浓度为2 ng/mL,与盐酸克伦特罗的交叉反应率为2.67%,且试验在3 min内完成,肉眼可判断结果。本检测方法检测沙丁胺醇,灵敏度高,特异性好,可用于现场的快速检测和筛查。     

胶体金免疫层析法测定牛羊肉中掺杂鸡肉

目的建立胶体金免疫层析法快速检测牛羊肉中掺杂鸡肉的方法。方法采用柠檬酸三钠制备胶体金溶液,以真空干燥的方式制备有金标抗体的微孔试剂,将鸡IgY包被于硝酸纤维素膜(NC膜)的检测线(T线),兔抗羊抗体包被于硝酸纤维素膜(NC膜)的质控线(C线),向硝酸纤维素膜依次贴上吸水纸和样品垫,切条组装成试纸条。样品经磷酸盐处理,加入至金标抗体的微孔中,用试纸条检测,胶体金分析仪检测T/C线的颜色信号。结果该方法对牛羊肉中掺入鸡肉的检出限为3%,重复性和特异性较好,其他动物组织对其无干扰,检测时间仅需要15 min。结论该方法操作简便,具有较高的灵敏度和特异性,适用于牛羊肉中掺杂鸡肉的现场快速筛查和检测。     

高灵敏度磁荧光免疫层析试纸模式构建及在呕吐毒素检测中的应用

构建基于磁荧光纳米材料的免疫层析试纸模式,弥补现在免疫层析技术的不足,为更灵敏的免疫学快速检测提供技术支撑。以呕吐毒素（deoxynivalenol,DON）为靶标,采用溶剂热法制备羧基修饰的超顺磁颗粒,碳二亚胺法将磁颗粒、绿色荧光蛋白及DON单克隆抗体进行偶联,一步法制备磁荧光抗体探针,以DON人工抗原（DON-BSA）为检测线建立磁荧光免疫层析试纸。同时用胶体金标记DON单克隆抗体,以DON-BSA为检测线建立胶体金免疫层析试纸;制备的磁荧光抗体探针具有很好的磁性、荧光特性及抗体反应性,基于该探针成功制备了DON磁荧光免疫层析试纸,该试纸回归方程为y=－0.562x＋0.921,R2=0.990,IC50为5.611 ng/mL,检出限为1.089 ng/mL;制备了DON胶体金免疫层析试纸,该试纸裸眼检测灵敏度为500 ng/mL;定量检测回归方程为y=－0.543x＋1.485,R2=0.991,IC50为65.16 ng/mL,检出限为11.94 ng/mL。DON磁荧光免疫层析试纸的灵敏度是胶体金免疫层析试纸的10.96 倍。本实验建立的磁荧光免疫层析试纸模式可以同时实现样品的富集及荧光信号检测,提高检测灵敏度,并成功用于DON的检测,为磁荧光纳米颗粒广泛应用于免疫层析领域提供参考。     

新霉素半定量胶体金试纸条的研制

建立了一种快速、简单的检测牛乳中新霉素残留量的胶体金免疫层析法。将不同浓度的新霉素人工合成完 全抗原包被在硝酸纤维素膜上作为检测线（T1、T2线）,与待测牛乳样品中的新霉素竞争结合新霉素单克隆抗体- 胶体金标记物,通过两条T1、T2线显色情况使传统新霉素胶体金试纸条由定性检测准确到半定量检测。试纸条对 牛乳样品的半定量检测限分别为200 μg/kg和400 μg/kg,该检测限满足欧盟及国家对新霉素检测的需求,且检测牛 乳样品能够满足现场快速检测的要求,为现场快速检测牛乳中新霉素残留提供了更精确的参考依据。     

胶体金标免疫固相膜检测动物性食品中氟甲喹

氟甲喹(flumequine,FLU)是动物专用的抗生素,滥用或超标使用会造成动物性食品中的残留问题,对人类健康造成危害。以活泼酯法制备氟甲喹完全抗原,免疫新西兰大耳白兔获得抗血清,通过间接竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定抗血清的效价和亲和性,效价为1∶12 800,纯化后抗体的IC50达到0.055 ng/mL。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,并用于标记FLU多克隆抗体制备免疫金。以硝酸纤维素膜为固相载体,包被上包被原和酶标二抗作为检测线和控制线,优化检测条件:封闭液为5%脱脂乳、酶标二抗稀释40倍、包被量1.0μg、免疫金稀释度1∶5(体积比)、金标抗体与待测溶液混合比例1∶5(体积比)。在最优条件下,制成FLU胶体金标记免疫固相膜,最低检出限达40μg/L。建立的胶体金标记固相膜免疫检测方法适于大量样品的快速定性筛查。     

牛β-乳球蛋白胶体金免疫层析试纸条的研制及检测应用

研制了一种可快速检测羊乳及制品中牛源β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-lg)的胶体金免疫层析试纸条。通过杂交瘤技术制备牛β-lg特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),利用柠檬酸钠还原氯金酸,形成30 nm胶体金颗粒,并用于标记牛β-lgmAb。采用竞争法研制免疫层析试纸条,将胶体金标记的牛β-lgmAb包被于金标垫,牛β-lg和羊抗鼠IgG标记于硝酸纤维素膜分别作为检测线(T线)和质控线(C线),牛β-lg和二抗的最佳包被浓度均为1.0 mg/mL。制得的单克隆抗体纯度都在90%以上,效价均在10000以上且特异性较好。该试纸条对牛β-lg的检测限(limit of detection,LOD)值为3.13μg/mL,对牛源α-CN,牛源β-CN,牛源κ-CN,牛源α-LA,BSA均未产生交叉反应,对脱脂羊乳粉中掺杂脱脂牛奶粉的LOD值为5%,并用该方法对市售羊奶及配方羊奶粉进行分析,检测结果与商品化的ELISA试剂盒一致。该方法前处理快速简单,可在5 min内对牛β-lg进行检测,可用于羊乳制品的现场快速检测。     

双甲脒胶体金免疫快速检测试纸条研制及其在蜂蜜中的应用

目的 基于胶体金免疫层析原理研制双甲脒快速检测试纸条,评价其在蜂蜜检测中的应用效果。方法 使用双甲脒-BSA偶联物作为人工抗原免疫小鼠获得单克隆抗体,制备胶体金微孔试剂,使用双甲脒-OVA偶联物和羊抗鼠IgG抗体分别作为试纸条的检测线和控制线,并对蜂蜜样品进行添加检测。结果研制的试纸条可以定性检测蜂蜜中双甲脒的残留,对蜂蜜中双甲脒的检测限为0.2mg/kg,检测用时约25min,,与双甲脒功能和结构相似的其他药物时无交叉反应,特异性较好。结论 本试验研制的试纸条适用于蜂场现场快速检测以及基层实验室中大量样本的筛查,为蜂蜜中抗生素残留控制提供有效监管手段。     

牛奶样品中志贺氏菌胶体金免疫试纸条检测方法的建立

通过用超声波破碎的宋内氏志贺氏菌和福氏志贺氏菌的菌体碎片为免疫原免疫BALB/c小鼠,获得4株能稳定分泌抗志贺氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取其中一株制备单抗,并用胶体金标记。同时抗志贺氏菌的兔多抗和驴抗鼠抗体(二抗)分别喷涂于硝酸纤维素膜作为检测线(T线)和质控线(C线),研制了志贺氏菌胶体金快速检测试纸条。结果显示试纸条的灵敏度为105mL-1,并只与两株志贺氏菌有阳性反应外,而与其它23株常见的细菌无交叉反应。同时在检测添加有阪崎肠杆菌和长双歧杆菌的牛奶样品中,结果显示试纸条的灵敏度为106mL-1。志贺氏菌免疫胶体金试纸条的建立,为加强食品中志贺氏菌的检测工作,建立一种快速、简便的筛查方法具有重要的意义。     

胶体金免疫层析法快速检测猪肉及牛奶中磺胺二甲嘧啶残留

目的:以胶体金为标记物,根据竞争抑制免疫层析原理,建立一种快速检测猪肉及牛奶中磺胺二甲嘧啶残留的方法.方法:采用柠檬酸三钠法制备40nm胶体金.电镜鉴定后标记磺胺二甲嘧啶多克隆抗体:磺胺二甲嘧啶半抗原-OVA和羊抗兔二抗分别包被在硝酸纤维素膜上,金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,制成免疫层析快速检测试纸条.结果:所建立的检测体系方法检出限为1 μg/L,将该法与高效液相色谱法(HPLC)对比检测猪肉和牛奶样品,在试纸务的检测范围内,与HPLC法检测结果一致性好,从而验证了该方法的有效性.结论:通过消除基质影响,成功检测到猪肉及牛奶中的磺胺二甲嘧啶残留.该方法灵敏度高,样品前处理简便、快速,整个检测过程可在10min内完成.该方法适用于动物源性食品中磺胺二甲嘧啶残留的大批量现场检测.     

侧向层析免疫试纸法快速检测蔬菜中的腐霉利

目的建立基于胶体金标记的侧向层析免疫试纸快速检测新技术检测多种蔬菜中腐霉利的分析方法。方法利用喷膜仪以0.5μL/cm的喷速将1 mg/mL的羊抗鼠抗体、1 mg/mL的腐霉利包被原喷到NC膜上。再通过静电吸附的方式将腐霉利单克隆抗体标记到胶体金表面,制备成偶联物滴加到标记垫上。最后依次将样品垫,标记垫、划好的NC膜以及吸水垫粘贴到底板上,两者之间均有2 mm的重叠,使标记垫处于样品垫之下、NC膜之上的位置,组装好完整的试纸条,测试过程中在样品垫上滴加样品,观察C、T线位置显线情况进行判定。结果该方法不受蔬菜中本身复杂成分以及背景颜色的影响,能够对蔬菜中腐霉利进行特异性识别鉴定, 10 min便可获得检测结果。结论该方法测试的结果与仪器法检测结果一致,检测灵敏度满足国标限量要求。