生存素反义寡核苷酸促进顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡

目的：探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide，ASODN）对顺铂（diamminedichloroplatinum，DDP）诱导骨肉瘤细胞凋亡的促进作用。方法：通过合成靶向survivin的ASODN转染骨肉瘤OS-732细胞并与DDP联合作用，同时设空白对照组、正义（SODN）组及DDP组进行比较。采用RT—PCR、免疫细胞化学法检测各组细胞survivin mRNA和蛋白表达状态，流式细胞仪（flow cytometry，FCM）、吖啶橙／溴化乙锭（acridine orange／ethidium bromide，AO／EB）染色法检测各组细胞凋亡水平和形态，MTT法检测细胞生长抑制情况。结果：与空白对照组、SODN组及DDP组相比，ASODN转染组细胞survivin mRNA及蛋白表达明显减弱，细胞凋亡水平较空白对照组、SODN组相应提高，细胞萎缩、染色质浓缩呈典型凋亡改变，细胞生长相对受抑；上述指标在ASODN＋DDP组变化更为明显。其细胞凋亡指数（apoptotic index，AI）和细胞生长抑制率（inhibition ratio，IR，61．36％）明显高于各单“药”组（SODN组6．81％、ASODN组31．82％和DDP组41．35％）及SODN＋DDP组（45．45％），P〈0．05。结论：As0DN能够特异性封闭骨肉瘤OS-732细胞中survivin基因表达，使其功能相应爱抑，增加细胞对DDP敏感性，进而增进DDP诱导骨肉瘤细胞凋亡效应。     

生存素反义寡核苷酸促进顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡

目的:探讨生存素(survivin)反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide,ASODN)对顺铂(diamminedichloroplatinum,DDP)诱导骨肉瘤细胞凋亡的促进作用。方法:通过合成靶向survivin的ASODN转染骨肉瘤OS732细胞并与DDP联合作用,同时设空白对照组、正义(SODN)组及DDP组进行比较。采用RTPCR、免疫细胞化学法检测各组细胞survivinmRNA和蛋白表达状态,流式细胞仪(flowcytometry,FCM)、吖啶橙/溴化乙锭(acridineorange/ethidiumbromide,AO/EB)染色法检测各组细胞凋亡水平和形态,MTT法检测细胞生长抑制情况。结果:与空白对照组、SODN组及DDP组相比,ASODN转染组细胞survivinmRNA及蛋白表达明显减弱,细胞凋亡水平较空白对照组、SODN组相应提高,细胞萎缩、染色质浓缩呈典型凋亡改变,细胞生长相对受抑;上述指标在ASODN+DDP组变化更为明显,其细胞凋亡指数(apoptoticindex,AI)和细胞生长抑制率(inhibitionratio,IR,61.36%)明显高于各单“药”组(SODN组6.81%、ASODN组31.82%和DDP组41.35%)及SODN+DDP组(45.45%),P<0.05。结论:ASODN能够特异性封闭骨肉瘤OS732细胞中survivin基因表达,使其功能相应受抑,增加细胞对DDP敏感性,进而增进DDP诱导骨肉瘤细胞凋亡效应。     

顺铂诱导人肝癌细胞凋亡机理研究

顺铂是多种化疗方案的核心药物,在对人卵巢癌细胞和大鼠肝癌细胞的研究中,发现其具有诱导凋亡的作用。本实验从细胞形态、ＤＮＡ裂解片段、细胞周期、ＤＮＡ断裂点末端标记,凋亡相关基因观察顺铂诱导人肝癌细胞凋亡的作用机理。1　材料与方法1.1　细胞培养及药物人肝癌细胞ＳＭＭＣ-7721,引自中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库。在含10%小牛血清的ＲＰＭＩ-1640培养基(Ｇｉｂｃｏ产品),37℃,5%ＣＯ2条件下培养。顺氯氨铂(ｃｉｓｐｌａｔｉｎ,ＤＤＰ齐鲁制药厂出品,批号:960601),用含10%正常大鼠血清的ＲＰＭＩ-1640培养液配制,ＤＤＰ终…     

康莱特注射液诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的：探讨康莱特注射液诱导人肝癌细胞凋亡的作用。为康莱特注射液治疗肝癌提供理论依据。方法：采用免疫组织化学及透射电镜技术观察康莱特注射液对肝癌细胞凋亡的影响。结果：肝癌细胞经康莱特注射液培养24h后,其凋亡的百分率明显高于对照组和空白组,有显著性差异（P＜0．05）,且组织细胞凋亡在50％以上者占44．12％（15／34）,而对照组及空白组无1例凋亡超过50％;电镜相可见较为典型的细胞凋亡的形态学变化,细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧贴于核膜周边,核碎裂,凋亡小体形成等。结论：康莱特注射液能诱导肝癌细胞发生凋亡;诱导细胞凋亡可是康莱特注射液治疗作用的重要机制。     

TRAIL联合三氧化二砷诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的：研究TRAIL和三氧化二砷共同作用于骨肉瘤OS732细胞对其产生的的杀伤作用,来探寻临床上骨肉瘤的治疗新策略。方法：选取骨肉瘤OS732细胞作为研究对象,将TRAIL及三氧化二砷分别独自或者共同作用于骨肉瘤细胞,对骨肉瘤细胞的杀伤作用通过MTT法来测定,以抑制率的形式体现出来,并在倒置显微镜、荧光显微镜下分别观察肿瘤细胞的形态改变。结果：50ng/ml的TRAIL与2μmol/L三氧化二砷共同作用于骨肉瘤细胞24小时后,肿瘤细胞抑制率为51.32%±4.71%,此作用明显强于单独应用TRAIL（50ng/ml）时的9.85%±0.97%及单独应用三氧化二砷（2μmol/L）时的20.36%±3.84%（P〈0.01）。从细胞形态结构的改变上体现出此种杀伤作用是通过诱导细胞凋亡实现的。结论：TRAIL与三氧化二砷可以协同杀伤骨肉瘤细胞,这种杀伤效应是通过促进OS732细胞的凋亡来实现的。     

顺铂诱导人卵巢癌细胞系HO—8910细胞凋亡

探讨顺铂对卵巢癌细胞凋亡的诱导作用，以揭示顺铂治疗卵巢癌的作用机理。方法：选用不同剂量顺铂与人卵巢癌细胞系ＨＯ－８９１０共同孵育不同时间后，应用光镜、电镜进行形态学观察。提取细胞ＤＮＡ经琼脂糖凝胶是民泳分析电泳带。结论：顺铂可通过诱导人卵巢癌细胞系 ＨＯ－８９１０发生细胞凋亡达到消灭肿瘤细胞的目的。     

多西紫杉醇诱导骨肉瘤凋亡的实验研究

目的 研究多西紫杉醇对骨肉瘤细胞生长抑制及诱导凋亡作用。方法 应用细胞计数、形态学观察、蛋白含量测定、流式细胞术和电镜等方法对多西紫杉醇诱导的骨肉瘤进行检测和观察,结果 多西紫杉醇在浓度为4ug/ml时,对骨肉瘤细胞有明显的生长抑制作用。并且存在着时间依赖关系和一定范围内的剂量信号2关系。多西紫杉醇可将骨肉瘤细胞阻断于G1期,并诱导凋亡,其凋亡细胞具有典型凋亡细胞特征,用流式细胞仪测定细胞周期,可见明显的凋亡峰,电镜观察染色质沿皱缩的核膜下凝聚,细胞表面出现凋亡小体,基质呈絮状致密化,在紫杉醇短时间作用去除后再培养比持续作用更易促使细胞凋亡,同时,多西紫杉醇对荷瘤小鼠也有明显的抑制作用。结论 多西紫杉醇对骨肉瘤细胞的细胞毒作用是诱导其凋亡的结果。这种诱导商霰亡的能力是紫杉醇疗效的基础,在对骨肉瘤的治疗中,紫杉醇有着巨大的潜力。     

顺铂诱导人结肠癌细胞凋亡的实验研究

 采用细胞培养方法，通过AO染色，DNA微电泳及电镜观察顺铂作用下结肠癌细胞凋亡过程。实验结果表明：结肠癌SW1116细胞在不同浓度的顺铂作用2小时后，呈现不同程度的凋亡。电镜观察到凋亡的细胞表现为细胞核皱缩，核内染色质结块状，趋边缘性分布；DNA微电泳呈拖尾现象，提示凋亡细胞内DNA片断化；凋亡细胞AO染色呈阳性反应，其阳性率随顺铂的浓度增高而递增，与对照组相比，差异有显著意义（P＜0．05）。因此认为顺铂可诱导和促进结肠癌细胞凋亡，这一现象可能是顺铂抗癌作用之一。     

顺铂诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨广谱抗癌药物顺铂的抗肿瘤作用机制.方法采用Hoechst-PI荧光染色、透射电镜和直接免疫荧光法流式细胞术分析法检测细胞凋亡.结果顺铂可以诱导肿瘤细胞凋亡,从药物作用12h即可出现,贯穿全程,且呈逐渐增强趋势,即给药作用12h、24h、36h,凋亡细胞数分别为11.4%、19.1%、39.4%,并出现核浓缩、染色质浓集于核膜处、凋亡小体形成等典型的细胞凋亡结构.结论诱导细胞凋亡是顺铂抗肿瘤作用的主要机制之一.     

TRAIL增强低剂量阿霉素高效诱导人骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与阿霉素(ADM)联用是否存在协同性杀伤人骨肉瘤细胞的作用以及分子机制。方法TRAIL、ADM或两药联用24h,MTT法测试细胞毒作用,吖啶橙染色荧光显微镜和透射电镜下观察细胞及亚细胞结构形态,流式细胞术检测细胞凋亡比例。RT-PCR和Westernblot分别检测药物作用前后cFLIPmRNA和cFLIP蛋白的表达。结果(1)人骨肉瘤U2OS细胞对TRAIL不敏感,IC50>1mg/L。U2OS细胞对ADM相对敏感,存在剂量依赖性细胞毒效应。(2)TRAIL与ADM联用呈现高效协同作用,表现为亚毒性浓度TRAIL(0.1mg/L)与亚毒性浓度ADM(1.0μmol/L)联用可杀伤49.54%±2.79%的U2OS细胞。(3)流式细胞术、透射电镜及荧光显微镜观察证实,协同性杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现。(4)cFLIPmRNA和cFLIP蛋白的表达下调促进了药物协同诱导凋亡的发生。结论TRAIL与亚毒性浓度ADM联用表现出的高效杀灭肿瘤细胞作用主要由凋亡介导实现,cFLIPmRNA下调和cFLIP蛋白的表达减少可能参与这一过程。     

艾迪与多柔比星联合对骨肉瘤细胞杀伤协同作用的观察

目的:探讨中药制剂艾迪对骨肉瘤化疗的增效作用及其相关机制。方法:将艾迪与多柔比星单独及联合应用于骨肉瘤OS732细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例,倒置相差显微镜及荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变,免疫细胞化学技术分析凋亡相关蛋白Fas表达。结果:艾迪与多柔比星对骨肉瘤细胞都有剂量依赖性杀伤作用,艾迪浓度达到25μL/mL时,细胞生长受到抑制,再增加艾迪浓度抑制率不再明显改变,但如与1μg/mL多柔比星合用将使细胞生长抑制率进一步提升,P=0.003。细胞超微结构观察及凋亡率测定结果也显示,艾迪与多柔比星联用可诱导更多骨肉瘤细胞凋亡,且联用时骨肉瘤Fas表达明显提升,P=0.005。结论:艾迪与小剂量多柔比星合用与单用多柔比星相比可更高效杀伤骨肉瘤细胞,此作用与上调Fas表达诱导骨肉瘤细胞凋亡有关。     

艾迪协同卡铂高效杀伤骨肉瘤细胞的实验研究

目的：研究中药制剂艾迪对骨肉瘤化疗的增效作用及其相关机制。方法：将艾迪与卡铂单独及联合应用于骨肉瘤OS-732细胞,用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例,倒置相差显微镜及荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变,免疫细胞化学技术分析凋亡相关蛋白Fas表达。结果：艾迪与卡铂对骨肉瘤细胞都有剂量依赖性杀伤作用,艾迪浓度达到25μl/ml时,细胞抑制率为38.47%,再增加艾迪浓度抑制率不再明显改变,但如与1μg/ml卡铂合用将使细胞抑制率进一步提升为59.53%（P〈0.01）。细胞超微结构观察及凋亡率测定也显示,艾迪与卡铂联用可诱导更多骨肉瘤细胞凋亡,且联用时骨肉瘤Fas表达明显提升（P〈0.01）。结论：艾迪与小剂量卡铂合用和单用卡铂相比,可更高效杀伤骨肉瘤细胞,此作用与上调Fas表达诱导骨肉瘤细胞凋亡有关。     

TRAIL联合多柔比星作用于骨肉瘤的实验研究

背景与目的：肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TNF related apoptosis inducing ligand，TRAIL）是近年发现的肿瘤坏死因子家族新成员，显著特点是它仅诱导肿瘤细胞凋亡，对正常细胞无毒性作用。TRAIL可作为骨肉瘤靶向治疗的潜在有效药物，但单独使用时已被证明作用有限。而多柔比星可对肿瘤细胞产生广泛的生化效应，为细胞周期非特异性药物，有强烈的细胞毒性作用，可嵌入DNA而抑制核酸的合成导致细胞死亡。本研究旨在探讨TRAIL联合低剂量化疗药物多柔比星对骨肉瘤MG-63细胞的凋亡诱导效应。方法：MTT法测定TRAIL和多柔比星对MG-63细胞单独及联合作用的细胞凋亡率，DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：1000ng／ml的TRAIL与4．3μmol／mL多柔比星合用于MG63细胞24h时后，测细胞抑制率为36．65％，明显高于单用TRAIL（1000ng／ml）时的21．67％及单用多柔比星（4．3μmol／ml）时的10.25％（P〈0．01）。细胞超微结构观察及凋亡率测定均显示，合用比单用有更多的骨肉瘤细胞凋亡。TRAIL联合应用多柔比星能显著增强对MG-63的杀伤、抑制增殖及诱导凋亡作用，明显高于单独应用TRAIL组或多柔比星组（P〈0．05），并且这种作用随培养时间延长及药物浓度增加而增强。结论：TRAIL是一种有望应用于临床的新型生物制剂。TRAIL与多柔比星对诱导骨肉瘤细胞凋亡具有协同作用，能高效杀灭骨肉瘤细胞。     

PUMA通过线粒体途径诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的:研究p53上调凋亡调控因子(PUMA)对骨肉瘤细胞凋亡的影响及机制。方法:在骨肉瘤细胞F5M2中转染PUMA过表达载体,同时转染对照阴性载体,以qRT-PCR和Western blot法测定转染后细胞中PUMA表达情况,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,用JC-1法检测细胞线粒体膜电位,以Western blot法测定线粒体和胞浆中细胞色素C（Cyt C）蛋白表达情况,同时检测细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水 解酶3（Cleaved Caspase-3）、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（Cleaved Caspase-9）蛋白水平。结果:转染PUMA过表达载体后的F5M2细胞中PUMA mRNA和蛋白水平升高,而转染对照阴性载体对F5M2细胞中PUMA mRNA和蛋白水平没有影响。过表达PUMA后的F5M2细胞凋亡率升高,细胞线粒体膜电位下降,线粒体中Cyt C蛋白水平降低,胞浆中Cyt C蛋白水平升高,同时细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平也升高,与未做转染的F5M2细胞比,差异有统计学意义（P<0.05）。转染对照阴性载体后的细胞凋亡率、线粒体膜电位、线粒体和胞浆中Cyt C蛋白水平、Cleaved Caspase-3蛋白水平、Cleaved Caspase-9蛋白水平与未做转染的F5M2细胞相比没有明显变化（P>0.05）。结论:PUMA通过促进线粒体中Cyt C释放,降低线粒体膜电位,激活Caspase-3诱导骨肉瘤细胞凋亡。     

Efficient killing effect of osteosarcoma cells by cinobufacini and cisplatin in combination

Purpose: To study the killing effects on osteosarcoma cells of cinobufacini and cisplatin in combination andthe related mechanisms so as to explore the chemotherapeutic method with integrated traditional Chinese andWestern medicines. Methods: Cinobufacini and cisplatin were applied to OS732 cells singly or jointly and survivalrates were measured by MTT assay. Changes in cellular shape were observed with inverted phase contrast andfluorescence microscopy and apoptosis rates were analyzed with flow cytometry (FCM). Immunocytochemistrywere used to examine the Fas expression of OS732 cells. Results: The combination of cinobufacini and cisplatinhad the effect of up-regulating Fas expression and inducing apoptosis. The survival rate of combined applicationof 100 μg/ml cinobufacini and 1 μg/ml cisplatin on OS-732 cells was significantly lower than with either of theagents alone (p<0.01). Changes in cellular shape and apoptotic rates also indicated the apoptosis-inducing effectsof combined application were much enhanced. Conclusion: The combination of cinobufacini and cisplatindemonstrated strong killing effects on OS-732 cells which might be related to up-regulation of Fas expression.     

低分子量肝素抑制骨肉瘤细胞Livin表达并诱导细胞凋亡的实验研究

Objective： To investigate the inhibitory effects of LMWH suppressing the expression of Livin and inducing the apoptosis of the osteosarcoma cells. Methods： Osteosarcoma cells line MG-63 was cultured in vitro. MTT assay and flow cytometry were used to study the effect of LMWH with different concentration suppressed the prolifetation and induced apoptosis in osteosarcoma cells line MG-63. The expression of Livin of osteosarcoma cells line MG-63 was analysed by the immunohistochemistrical method and PT-PCR. Results： Low molecular weight heparin could inhibit the growth of osteosarcoma cell line MG-63. With the LMWH＇s increasing, the apoptosis rate was increased significantly. Immunohistochemistrical method and PT-PCR showed that the expression of Livin of osteosarcoma cells line MG-63 declined obviously than that before medication. Conclusion： LMWH has very strong anti-tumor effect in vitro. The possible mechanisms of LMWH anti-tumor effect are associate with the effect of suppressing the expression of Livin and inducing cell apoptosis.