蛹虫草无性型原生质体制备条件的研究

以蛹虫草无性型为材料,通过液体培养获得菌丝体,经不同浓度的蜗牛酶、纤维素酶在不同条件下酶解处理菌丝体获得原生质体．实验结果表明：以培养6d的蛹虫草菌丝体为材料,0．5mol／L甘露醇溶液为稳渗剂,蜗牛酶浓度为1％,纤维素酶浓度为0．5％,两种酶混合的体积比为1：2,pH6．5,35℃条件下酶解3h,可得原生质体产量最高为1．36×10^8个／mL．这一研究结果为蛹虫草通过原生质体技术进行菌株的遗传改良提供了重要的理论依据．     

蛹虫草多糖除杂蛋白的方法

介绍了蛹虫草多糖提取过程中的除蛋白杂质的方法。在提取的蛹虫草胞内、外粗多糖中 ,含有大量的杂蛋白等杂质 ,如何对杂蛋白定量和去除是纯化蛹虫草胞外多糖的关键问题。制备粗多糖后 ,通过正交试验对粗多糖除蛋白诸多因素的影响进行考察 ,得到样品 /氯仿 正丁醇的配比为1∶2 .4 ,氯仿 正丁醇的体积比为 1∶0 .2 ,萃取时间 5min为最佳 ,得到的多糖得率为 5 0 % ,除蛋白率为 97%的最佳结果     

蛹虫草多糖除杂蛋白的方法

介绍了蛹虫草多糖提取过程中的除蛋白杂质的方法，在提取的蛹虫草胞内，外粗多糖中，含有大量的杂蛋白等杂质，如何对杂蛋白定量和去除是纯化蛹虫草胞外多糖的关键问题，制备粗多糖后，通过正交试验对粗多糖除蛋白诸多因素的影响进行考察，得到样品/氯仿-正丁醇的配比为1：2.4，氯仿-正丁醇的体积比为1：0.2，萃取时间5min为最佳，得到的多糖得率为50%，除蛋白率为97%的最佳结果。     

蛹虫草胞外多糖的提取和纯化

对蛹虫草液体深层发酵液的胞外多糖提取进行研究,确定了提取的工艺条件,并对所提取的粗多糖进行分子筛分,对主要多糖组分的糖成分进行测定。其结果为：蛹虫草液体深层发液的胞外粗多糖的提取率为10.0g／L;其粗多糖主要由4种蛹虫草多糖组成;而第4个组分占总粗多糖的32.14%,由葡萄糖构成。     

蛹虫草水提物细胞毒性和抗氧化能力的评价

为了更好地利用蛹虫草资源,对鲜蛹虫草、干蛹虫草水提物的细胞毒性和抗氧化能力进行评价。按照体质量分别对6组试验小鼠腹腔注射200 mg/kg鲜蛹虫草水提物、200 mg/kg干蛹虫草水提物、10 mL/kg无菌水、4 mg/kg丝裂霉素C、200 mg/kg鲜蛹虫草水提物+4 mg/kg丝裂霉素C和200 mg/kg干蛹虫草水提物+4 mg/kg丝裂霉素C,测定试验组和对照组小鼠骨髓中嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值,用于评价鲜、干蛹虫草的细胞毒性。按照体质量对阴性对照组小鼠灌饲生理盐水,模型对照组小鼠先后腹腔注射80 mg/kg的环磷酰胺并灌饲生理盐水,对试验组小鼠分别先后腹腔注射80 mg/kg的环磷酰胺及灌饲100 mg/kg、200 mg/kg的鲜蛹虫草和干蛹虫草水提物,测定对照组和试验组小鼠心脏、肝脏和肾脏组织中超氧化物酶歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶和丙二醛的含量,用于评价鲜、干蛹虫草抗氧化能力。试验结果表明,鲜、干蛹虫草水提物对细胞无遗传毒性,并具有抗细胞毒性和抗氧化能力,而且鲜蛹虫草抗氧化能力强于干蛹虫草,更适宜作为功能性食品资源。     

复合酶法提取蛹虫草类胡萝卜素工艺优化及其抗氧化能力测定

为确定蛹虫草类胡萝卜素的最佳提取工艺条件,通过单因素实验和响应面实验设计分析探究复合酶法提取蛹虫草类胡萝卜素的最佳工艺条件并采用紫外光谱法测定其体外抗氧化活性并与传统酸热提取法下得到类胡萝卜素的抗氧化能力进行比较.结果显示:纤维素酶:果胶酶(2:1)时,酶解温度50℃、酶解时间45 min、pH=4、酶浓度为0.5％,...     

柞蚕蛹虫草的形态及其发酵液中多糖的含量

论述了人工培养的蛹虫草的形态、性状和液体发酵技术。接种在柞蚕蛹上的蛹虫草多部位丛生 ,长 8.5cm左右。在 30L液体深层培养器中连续发酵 ,获得蛹虫草总多糖( 0 .38～ 0 .67) g/10 0g和虫草素 ( 0 .2～ 0 .3)mg/10 0g。     

高富锗蛹拟青霉菌株的筛选

为了获得高富锗能力的蛹拟青霉菌株,对蛹虫草无性型蛹拟青霉不同菌株进行了富锗培养,并对富锗能力、生物量、有机锗转化率等指标进行了测定.结果表明：富锗能力最强的菌株为28号和14号,在锗浓度为500μg/mL时,生物量分别为15.09 mg/mL和13.84 mg/mL,有机锗转化率分别达到2.3%和1.9%.蛹拟青霉不同菌株具有不同的富锗能力.     

应用大孔树脂提纯蛹虫草多糖的工艺研究

蛹虫草多糖具有抗氧化、抗肿瘤等多种药理活性,在食药用方面有很好的发展前景.植物多糖因含有色素和酚类化合物,导致颜色较深,不利于产品的开发.因此,对蛹虫草粗多糖的脱色纯化工艺的研究势在必行.文章以蛹虫草多糖的保留率、脱色率以及蛋白清除率为指标,通过单因素方差试验初步确定提取过程的主要影响因素,再设计中心组合试验,得到最佳...     

蛹虫草的富硒培养机制研究

设立对蛹虫草的不同培养方式的多浓度梯度,添加富硒酵母和亚硒酸钠两种不同硒源进行对比实验,探究蛹虫草在何种条件下,长势最为良好、富硒化程度更高、营养价值更好。实验结果表明：在以大米25 g、小麦5 g、高粱5 g、磷酸二氢钾1%、硫酸镁0.5%、葡萄糖1.5%、蛋白胨0.5%、维生素B10.1%、柠檬酸铵0.1%、水50 mL条件下,在添加硒来源为0.2%富硒酵母60 mg/L时,固体栽培种的富硒蛹虫草硒含量最高,对人体有益的各种成分也最为丰富,这些都将为富硒蛹虫草的产业化生产提供一定的基础数据。     

虫草深层培养产多糖条件的优化及多糖组分的研究

通过正交实验研究了温度、pH、培养基、接种量和培养时间对菌丝体生物量、菌体产胞内、外多糖量的影响,优化了培养条件,并测定了多糖组成.结果表明:最适培养基为:玉米面2%、蔗糖5%、酵母浸出汁0.03%、NH4NO30.04%、KNO30.08%、MgSO4·7H2O0.02%、K2HPO40.04%、FeSO4·7H2O0.02%;最适温度为:22℃,pH6.0,摇瓶培养5天,每100mL发酵液,菌丝体干重为546mg,胞外多糖为114.8mg,胞内多糖为170.3mg.胞内、外多糖产量与菌丝体生物量呈正相关,且胞内多糖产量高于胞外多糖.胞内、外多糖经硅胶-G薄层层析分析,二者所含组分相同,均为葡萄糖、半乳糖、甘露糖.     

豆虫草活性成分测定

以豆虫为寄主接种蛹虫草菌种,培育出豆虫草,比较了豆虫草与蚕蛹虫草、冬虫夏草的主要活性成分.结果表明：豆虫草的虫草素是冬虫夏草的35倍,虫草及其菌核的腺苷含量与冬虫夏草的相当,豆虫草SOD酶活性是冬虫夏草的1.5倍,豆虫草所含有的多糖是普通蚕蛹虫草的2倍.豆虫草是一种有良好前景的虫草新资源.     

虫草中腺苷含量的快速测定

通过超声波提取,用薄层色谱(TLC)法定性和高效液相色谱(HPLC)定量来测定天然冬虫夏草、蛹虫草子实体及其液体培养菌丝体中腺苷及其含量。TLC分析显示三种样品均含腺苷,HPLC测得腺苷含量分别为48.17±0.61μg/g,(130.23±0.62)μg/g,(437.67±2.40)μg/g.HPLC结果表明:蛹虫草子实体及培养菌丝体中腺苷含量明显高于冬虫夏草。本文的TLC与HPLC比以往采用的同类方法具有分离速度快、样品处理较简单的特点,可作为虫草类产品的质量控制指标。     

冬虫夏草液体发酵产胞外多糖的实验条件

为提高虫草多糖产率,优化了冬虫夏草液体发酵条件。最佳发酵条件为:葡萄糖30 g/L,豆粕20 g/L,MgSO42 g/L,KH2PO44 g/L,pH值为7.0,接种量10%,培养温度24℃,摇床转速140 r/min。在此条件下,胞外多糖的最高产量为3.928 g/L。利用液体发酵生产胞外多糖,可有效地缩短生产周期。     

冬虫夏草液体发酵产胞外多糖的实验条件

为提高虫草多糖产率,优化了冬虫夏草液体发酵条件。最佳发酵条件为:葡萄糖30 g/L,豆粕20 g/L,MgSO42 g/L,KH2PO44 g/L,pH值为7.0,接种量10%,培养温度24℃,摇床转速140 r/min。在此条件下,胞外多糖的最高产量为3.928 g/L。利用液体发酵生产胞外多糖,可有效地缩短生产周期。     

反相高效液相色谱法测定蛹虫草中虫草素的含量

建立了反相高效液相色谱法定量分析蛹虫草中虫草素(cordycepin)的方法。实验方法:色谱柱为Waters NOVAPAK C183.9mm×300mm,颗粒直径4μm;流动相为KH2PO4-K2HPO4缓冲液(0.01mol／L,PH=6.86)+1％四氢呋喃;流速为1.0mL／min,检测波长为260nm。在该实验条件下,虫草素的线性范围为3.23μg/mL-129.0μg／mL(r=0.9999),最小检出限为0.25ng。虫草素回收率平均值为97.5％,RSD为0.887％。该方法灵敏、快速、准确,适用于人工培植虫草中活性成分虫草素的检测。     

蛹虫草菌产腺苷的培养基优化

以蛹虫草菌丝体中腺苷含量为指标,进行发酵培养,优化液体发酵培养基。通过单因素实验结果,选出最适宜的碳源是玉米淀粉,氮源是玉米浆粉和NH4Cl,金属离子是ZnSO4;然后采用9因素2水平Plackett-Burman设计实验得出对蛹虫草发酵水平影响显著的因素,分别为玉米淀粉、玉米浆粉和MgSO4;最后运用响应面分析方法对3个因素3个水平进行优化,获得最优组合浓度为玉米淀粉13.35g/L、玉米浆粉45.74g/L、MgSO4为0.40g/L,此时菌体腺苷含量为4 751μg/g。验证结果表明蛹虫草腺苷含量提高了210%,优化效果极为显著。     

分光光度法用于枸杞、当归中锗含量的测定

采用分光光度法在505 nm处测定锗的含量(质量浓度ρ),实验结果表明,锗的含量在0.25～1.10 μg/mL范围内,吸光度与含量成线性关系.实验测定了枸杞、当归等实际样品,回收率为92.0％～103.5％.该方法不需对样品进行分离,适用于对实际样品中微量锗含量的测定.