根癌土壤杆菌DK-24生产辅酶Q10发酵培养基的优化

【目的】对根癌土壤杆菌(Agrobacterium tume faciens)DK-24发酵生产辅酶Q10的培养基进行优化,为辅酶Q10的生产提供技术支持。【方法】用Plackett-Burman设计法(Plackett-Burman design,P-B)筛选对辅酶Q10产量影响较大的主要因子,采用最陡爬坡试验逼近主要因子的最优水平,通过Box-Behnken设计,利用Design-Expert软件进行回归分析,优化确定各主要因子的最佳质量浓度。【结果】根癌土壤杆菌生产辅酶Q10的4个主要影响因子为蔗糖、玉米浆干粉(CSP)、酵母膏和对羟基苯甲酸(PHB);最陡爬坡试验、Box-Behnken设计及响应面分析表明,根癌土壤杆菌DK-24发酵生产辅酶Q10的发酵培养基中,蔗糖、CSP、酵母膏和PHB的最优质量浓度分别为46.56,22.30,13.46g/L和52.38mg/L。【结论】在优化培养基条件下,辅酶Q10产量可达24.97mg/L,较优化前提高了76.18%。     

光合细菌产辅酶Q10培养条件的优化

[目的]为了对光合细菌培养条件进行优化。[方法]通过单因素试验方法。[结果]在实验室条件下,光照强度为60W,接种量为10%,培养基初始pH6.5,培养温度32℃,培养时间为72h。优化后,辅酶Q10产量达到112.7mg/L,比优化前增加提高了63.57%。[结论]按照优化之后的培养条件进行发酵,辅酶Q10的产量得到大幅提高。     

放射农杆菌产辅酶Q10培养基的优化研究

以放射农杆菌为出发菌株,采用6因素二次通用旋转组合设计法对影响放射农杆菌发酵产辅酶Q10的相关因素进行了研究。结果选取到6种有显著效应的因素：葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、酵母膏、异戊醇和L-甲硫氨酸。运用高压液相色谱法对辅酶Q10的含量进行测定,经DPS模拟寻优,建立二次回归方程,优化了培养基的组成。结果表明,当葡萄糖2g/L、蔗糖1g/L、蛋白胨1．25g/L、酵母膏0．75g/L、异戊醇0．075g/L、L．甲硫氨酸0．0375g/L或葡萄糖1．5g/L、蔗糖1．5g/L、蛋白胨1．5g/L、酵母膏1g／L、异戊醇0．05g/L、L．甲硫氨酸0．025g/L时,辅酶Q10的产量最大。     

根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化条件的优化

利用山东省广泛栽培的马铃薯品种为材料，对影响马铃薯遗传转化的抗生素浓度、农杆菌浓度、预培养时间和共培养时间等进行了研究。结果表明：（1）卡那霉素Km浓度以15－25mg/l作为马铃薯叶圆片转化时的选择压更合适；（2）羧苄青霉素（Cb）比头孢霉素Cefo更适合用于农杆菌介导的马铃薯叶圆片的遗传转化；（3）外植体预培养时间4d，共培养时间3d为最好；（4）菌液浓度以OD600＝0.5左右最好。上述条件的优化大大提高了马铃薯遗传转化效率。     

NC89烟草悬浮细胞生产辅酶Q10的条件优化

研究了NC89烟草悬浮细胞的最佳培养方案,为进一步提高辅酶Q10的产量提供理论依据.通过单因素试验和正交试验考察了培养基种类、蔗糖浓度、接种量、转速、pH值和装液量对烟草细胞生长及辅酶Q10合成的影响.结果表明:接种量对细胞的生长及辅酶Q10合成的影响作用极显著;蔗糖浓度对二者的影响均不显著,优选蔗糖浓度为20g·L-1;装液量对辅酶Q10合成的作用显著,而对细胞生长作用不显著;优选转速为110r·min<-1>,pH值为6.2.可见,适于NC89烟草细胞生长及辅酶Q<,10>合成的优选培养条件为White基本培养基,附加蔗糖20g·L-1,装液量为20mL(100mL三角瓶),接种量75g·L-1,初始pH值为6.2,摇床转速为110r·min-1.在该条件下细胞产量和辅酶Q10含量分别为16.653g·L-1和14.780mg·L-1.     

根癌农杆菌法转化康乃馨的条件探索

[目的]为构建高效的康乃馨遗传转化体系奠定基础。[方法]以康乃馨叶片为受体材料,通过抗G418筛选,探讨预培养时间、根癌农杆菌菌液浓度、共培养时间等因素对根癌农杆菌介导康乃馨遗传转化的影响。[结果]20 mg/ml G418是康乃馨叶片转化的适宜浓度。随着预培养时间的增加,康乃馨叶片的存活率降低,预培养2~3 d时抗性芽分化率较高。当根癌农杆菌OD600为0.5~0.8时,抗性芽分化率较高,适合康乃馨转化。共培养2~3 d时,康乃馨叶片生长状态好,抗性芽分化率最高。[结论]预培养、共培养各2~3 d,菌液浓度OD600为0.5~0.8是根癌农杆菌介导康乃馨遗传转化的适宜条件。     

根癌农杆菌转基因的分子机制

根癌农杆菌将T-DNA转移并插入寄主细胞的基因组,需要趋化与附着、vir区活化、T-DNA切割及转运、T-DNA整合及表达等步骤。本文对这些步骤分子机制的研究进展进行了综述。     

根癌农杆菌对中华猕猴桃的转化

猕猴桃含有丰富的维生素Ｃ，被誉为“水果之王”本实验用中华猕猴桃无菌苗的茎段和叶片被根癌农杆菌感染后，能够自主生根，但茎段的生根率与叶片的生根率有一定的差异。     

用根癌农杆菌转化获得胡萝卜转化细胞

将悬浮培养的胡萝卜(Daucus carota Var.Sativa DC.)单细胞与野生的胭脂碱型和章鱼碱型根癌农杆菌共同培养,在含羧(艹卡)青霉素的无激素MS培养基上筛选,获得生长旺盛的转化细胞,转化频率为10~(-2)。经基因产物——冠瘿碱检测,这些细胞均有冠瘿碱合成酶活性。     

辅酶Q10产生菌的筛选及产物的定量检测

为了从实验室保存的酵母菌株中筛选产生辅酶Q10的菌株,采用麦芽汁培养酵母菌,皂化法萃取菌体中的辅酶Q10,可见光比色法和高压液相色谱法测定酵母菌中的辅酶Q10的含量。结果表明:筛选出2株较高产量的辅酶Q10产生菌,热带假丝酵母(C.tropicalis(cast).Berkhout)B021产量为7.420 mg/L、粟酒酵母(Schizosaccheromyces pombe Lindner)B147产量为7.488 mg/L。     

辅酶Q10高产菌株的选育

以根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)1．1416为出发菌株，考察了紫外线(UV)、1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(NTG)和硫酸二乙脂(DES)对该菌株产生辅酶Q10能力的诱变效应，并结合辅酶Q10合成途径设计了快速筛选辅酶Q10高产菌株的模型。结果表明：NTG和DES交替诱变处理根癌土壤杆菌1．1416具有较好的诱变效果，筛选到的突变株AGR0619和AGR0610的辅酶Q10总产量分别提高了137．49％和156．07％。     

猪心中提取和纯化辅酶Q10（联产CytC）

辅酶Ｑ１０和细胞以素Ｃ是促生物氧化酶类生化药物,本试验从猪心中提了和纯化辅酶Ｑ１０,并联产细胞以素Ｃ。猪心以酸性水液粗提,细胞色素Ｃ经人造沸石吸附,洗脱,盐析,三氯乙酸沉淀,弱酸性阳离子吸附,真空干燥得２２５ｍｇＣｙｔＣ／ｋｇ猪心,纯度７９％,提取后的猪心渣,用醇皂化法,经硅胶桂层板,无水乙醇结晶,重结晶,每千克猪心中撮辅酶Ｑ１０７５ｍｇ,含量为９５．３％。     

牛心肌中辅酶Q10的提取及测定

辅酶Q10是一种很好的生化药物,具有重要的生理作用,是细胞自身产生的天然抗氧化剂和激活细胞呼吸的细胞代谢激活剂。笔者研究了从提取细胞色素C后的牛心残渣中分离纯化辅酶Q10的工艺。采用醇碱皂化法,经石油醚萃取、硅胶柱层析,无水乙醇结晶、重结晶得到辅酶Q10。经标准曲线法测定在最佳条件下,分离得到的辅酶Q10纯度较高,达91.2%。     

碱蓬中辅酶Q10的提取分离

[目的]为碱蓬中辅酶Q10的提取分离和工业化生产提供科学依据。[方法]用10%KOH-甲醇的醇碱皂化法从碱蓬中提取辅酶Q10,并用硅胶柱层析,经无水乙醇重结晶后,得黄色结晶。用熔点测定法和薄层层析法对黄色结晶进行定性鉴定,用HPLC法和Craven氏颜色试验法对其进行定量测定。[结果]无水乙醇重结晶后得到的晶体,其熔点为48.6~50.3℃,在碱性条件下,加入氰基乙酸乙脂后,生成了蓝色化合物,证明该结晶是辅酶Q10。用Craven氏颜色试验法测得碱蓬干粉中辅酶Q10的含量约为63.3μg/g,精制辅酶Q10结晶的纯度为93.2%。用HPLC法测得的辅酶Q10含量约为63.1μg/g。两种定量分析方法存在良好的线性关系。[结论]碱蓬是获取辅酶Q10的良好材料,有很好的开发前景。     

辅酶Q10应用的研究进展

辅酶Q10是一种脂溶性醌类化合物,在人体呼吸链中参与电子传递,具有促进细胞新陈代谢的功能。基于辅酶Q10的特点和作用,为进一步开发辅酶Q10,并对其进行有效的利用,以发挥其重要的价值,综述了辅酶Q10在医药卫生和美容护肤等领域中的应用及研究状况,并分析了辅酶Q10与其它药物之间的互作关系,并对其开发前景进行了展望。     

几个烟草品种辅酶Q10含量的比较

研究了6个烟草品种(中烟98、中烟99、中烟100、心叶烟、NC89、K326)的叶片和根系中的辅酶Q10含量.结果表明:在烟草幼苗叶片中,以中烟98辅酶Q10含量最高,NC89 次之,心叶烟最低;在烟草幼苗根系中,以中烟99辅酶Q10含量最高,NC89和心叶烟次之,K326最低;中烟99、中烟100、K326、NC89、心叶烟等5个品种的根系辅酶Q10 含量均明显高于其叶片中辅酶Q10的含量.     

丙酮研磨法提取麦麸中辅酶Q_(10)的工艺研究

采用丙酮研磨、石油醚萃取工艺提取麸皮中的辅酶Q10,研究不同提取条件对辅酶Q10提取量的影响,并采用正交试验对萃取料液比、温度、时间进行优化,确定了辅酶Q10的最佳提取条件,旨在为辅酶Q10的工业化生产提供理论依据。结果表明,丙酮研磨的最佳料液比为1∶4,石油醚萃取的最佳条件为料液比1∶6、温度85℃、时间75min,在此条件下辅酶Q10的提取量达到最大,为40.771μg/g。     

秦川牛心肌渣辅酶Q10的萃取方法研究

为综合利用资源,以提取细胞色素C后的秦川牛心肌渣为原料,采用醇碱皂化,石油醚萃取,硅胶柱层析,无水乙醇重结晶得到CoQ10。研究结果表明,醇碱皂化适宜温度为90℃,皂化时间为30min,萃取2次。经薄层层析样品仅有一个斑点,Rf=0.56（a=7.5 cm,c=13.5 cm）,样品与标准CoQ10的紫外吸收光谱相同,在275nm处有最大吸收峰,定量测定样品的纯度为91.2%。从牛心肌渣萃取CoQ10的方法是可行的。