激光解吸电离飞行时间质谱技术及应用

本文简述了激光解吸电离飞行时间质谱(NALDI-TOF-MS)技术及其应用,同时介绍了MALDI-TOF-MS的构造、原理及特点。     

含二硫键的蛋白质/多肽的MALDI-TOF MS源内裂解研究

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)法研究含二硫键的人胰岛素与甘精胰岛素酶解液的源内裂解(ISD)。比较了不同基质种类及不同结晶状态对含二硫键的人胰岛素与甘精胰岛素酶解液的源内裂解的影响。结果表明,含二硫键的蛋白质的ISD发生受激光点照射位置的影响,在不同基质与结晶形态的条件下,含二硫键的蛋白质的ISD碎片信息不同。通过分析比较,含二硫键的蛋白质的ISD较容易控制,并且其基质的种类及结晶状态作用很关键。需要获得大量碎片时,使激光照射在样品和阿魏酸(FA)基质形成的大结晶处;不希望出现碎片时,可使用2,4,6-三羟基苯乙酮(THAP)为基质,或使激光照射在样品和其他基质形成的细小均匀结晶处。     

MALDI-TOF MS磷脂质组学快速分析三文鱼肌肉组织

建立了基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速分析三文鱼肌肉组织磷脂质组学的方法。以非自然磷脂酰胆碱DMPC(14∶0/14∶0)和磷脂酰乙醇胺DPPE(15∶0/15∶0)为标准品,分析其在正离子模式下的主要分子峰与干扰峰,并进行方法学验证。实验结果表明,各化合物平均加标回收率在74%~83%之间,相对标准偏差小于7%,日内和日间精密度的相对标准偏差均低于8.5%。将三文鱼磷脂提取物进样分析,共鉴定出28种磷脂分子,其中m/z806.40([PC38:6+H]~+和[PE38:4+K]~+)信号最强。三文鱼中多不饱和磷脂种类丰富,如m/z 824.38([PC38:8+Na]~+和[PE42:5+H]~+),m/z832.41([PC40:7+H]~+,[PC38:4+Na]~+和[PE40:5+H]~+),部分磷脂分子的脂肪酸链达到了满不饱和,如[PC42:11+H]~+,其sn-1和sn-2上两条脂肪酸链分别为二十碳五烯酸链(EPA-)和二十二碳六烯酸链(DHA-)。该方法稳定可靠,可用于鉴定三文鱼肌肉组织中的磷脂分子结构,并从脂质组学角度为三文鱼营养评价提供理论依据。     

利用MALDI-TOF质谱技术研究胰岛素水解和酶切过程

利用海牛卵制备的模拟微量混合内切酶体系，用基质辅助激光解吸电离-飞行时间(MALDI-TOF)质谱技术研究了胰岛素在不同酸碱度和还原条件下的水解和酶解过程。实验结果为研制具有高生物利用度的胰岛素纳米粒口服制剂及选择具有适当耐酸碱及还原特性的包装材料提供了科学依据。     

MALDI-TOF MS与16SrDNA方法对肠杆菌科微生物鉴定比较分析

为了研究基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)法鉴定肠杆菌科微生物及其对微生物系统分类学相关分析的准确性,采用MALDI-TOF MS对金桔表面分离的10种肠杆菌科微生物进行蛋白质图谱收集,通过比对图谱特征峰实现微生物的鉴定与系统进化学分析;同时对10种微生物进行16SrDNA提取与测序,得到分子生物化学水平鉴定,并采用邻近连接法对16SrDNA序列做系统进化树分析。结果表明:MALDI-TOF MS与16SrDNA测序对10种肠杆菌科微生物鉴定结果中,克雷伯菌属2株菌鉴定种级有偏差,其他8种一致;MALDI-TOF MS与16SrDNA测得的数据都可计算微生物相关性,从而得到微生物系统发育树,两株系统发育树中同属级微生物归类的亲缘位置与方向一致,但不同属肠杆菌科微生物的亲缘距离与位置差异较大。MALDI-TOF MS法鉴定农产品表面微生物具有快速、准确的特点,但准确建立系统发育相关性还需要扩大数据库和优化算法。     

三苯胺偶氮化合物的MALDI-TOF质

利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法分析三苯胺偶氮化合物。在正、负离子检测模式下,考察了基质、离子化试剂、样品浓度对分析结果的影响。结果表明:基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱表征三苯胺偶氮化合物时,用咔啉作基质,负离子检测,可以得到较好的质谱图。     

MALDI-TOF质谱法检测人血清中沙林-丁酰胆碱酯酶加合物

对生物医学样品进行化学毒剂分析检测是禁止化学武器组织（OPCW）核查小组在毒剂指称使用调查中收集事实的方法之一。丁酰胆碱酯酶（BChE）作为有机磷毒剂在体内的作用靶点,是有机磷毒剂染毒检测的最佳生物指示物之一。利用亲和固相萃取（SPE）技术进一步发展了样品预处理方法,建立了血液样品中染毒BChE的分析方法;利用胰蛋白酶酶解方法,采用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）比较了血液中BChE在沙林染毒前后的肽指纹谱变化。该方法灵敏度高、快速简便,可用于OPCW生物医学样品中毒剂暴露染毒的追溯性检测。     

HPLC分离MALDI-TOF-MS鉴定合成多肽的研究

A method for the separation and characterization of synthetic peptide was established using high performance liquid chromatography ans matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry. The influences of several factors on its performance were carefully investigated. The method has been successfully used for the analyses of one hundred synthetic peptide samples.     

现代生物质谱及其应用

80年代以来,有机质谱获得突破性进展,其应用已跨入了生物大分子的研究领域,并迅速形成了一个新的分支学科生长点——生物质谱学。已经诞生的生物质谱计已在生命科学的研究中发挥着非常重要的作用。本文主要介绍基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱(MALDI/TOF MS)的构造、原理、功能及主要应用。     

以低浓度异甘草素为基质的MALDI-TOF MS用于小分子的检测研究

以低浓度异甘草素(ISL,0.05 mmol/L)为基质,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对精氨酸、甘露醇和苏氨酸-亮氨酸二肽等小分子物质进行分析检测。实验结果表明,以低浓度异甘草素作为MALDI-TOF MS分析小分子物质的有机基质,所获得的斑点均匀性和重复性、耐盐能力、分辨率等均显著优于常用基质2,5-二羟基苯甲酸(DHB)、2,4,6-三羟基苯乙酮(THAP)。本实验可为有机基质在小分子分析中的应用开辟新的窗口。     

兴奋剂生长激素的MALDI-TOF质谱研究

采用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI TOF MS）法对生长激素（GH）标准品和国产GH制剂进行比对研究。在完整分子的相对分子质量测定中,GH的精确分子质量为22 124 u,检测灵敏度达74 fmol。实验还发现1种GH制剂的相对分子质量为22 254 u,质量数比理论质量多131 u,经胰蛋白酶解产物的二级质谱测序证实是N端多一甲硫酸残基(Met)的GH。GH酶解后的肽段样品可以鉴定出8个GH肽段,覆盖率为45.5%,Mascot蛋白谱库检索蛋白质评分值为132,蛋白质置信区间为100%。测序结果说明,N端的甲硫酸残基可以作为鉴定外源GH的分子标记。     

MALDI-TOF质谱技术分析细胞与组织多肽组成的研究进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MAL DI- TOF- MS)具有高通量和高灵敏度的特点 ,适合分析超微量蛋白质、肽、多糖和核酸。本文综述近年来采用 MAL DI- TOF质谱技术分析中枢神经系统单个细胞或组织内超微量多肽和翻译后修饰多肽组成方面的研究进展 ,说明该技术能更直接和真实地揭示生物体内所进行的生化反应途径和信号传导机理     

稀土金属元素标记行为考察

稀土金属元素因其与双功能试剂的螯合效率高、对肽段的反相色谱行为和质谱的离子化效率影响小、检测背景低,以及过量的金属离子在检测时不会产生干扰等优点,近年来在生物标记结合质谱定量分析研究领域引起了关注。选取稀土金属中单同位素铽（Tb）、钇（Y）、铥（Tm）、钬（Ho）和镥（Lu）5种元素,通过双功能试剂二乙三胺五乙酸双酸酐（DTPA双酸酐）对合成肽段及蛋白质酶切产物标记的过程进行研究,包括对标记条件进行优化,对该质量标签的色谱行为和共洗脱、标记稳定性、离子交换、动态范围、质谱检测限等现象进行考察。结果表明：铥和钬两元素结合效率最高,分别达到了92.5%和89.9%;稳定性考察结果表明,质量标签在4 ℃下放置一周仍可检测到95%,若将标记好的标签用于定量研究,则放置时间不能超过两周;多金属标记质量标签可以共洗脱;两种金属浓度差不超过6倍时,由离子抑制带来的影响较小;离子交换结果表明,只有很少部分发生了离子交换,对标记实验没有影响。     

激光解吸／电离飞行时间质谱法分析富勒烯

本文介绍激光飞行时间访港测定C60的极高的灵敏度（优于2×10－15mol）、研究了富勒烯在激光辐照下的裂解规律及对富勒烯混合物的分析，展示激光飞行时间质论在分析富勒烯材料方面的优异性能。     

MALDI—TOF质谱仪关键技术及进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪是当前研究蛋白质组不可缺少的质谱仪,已经得到广泛的应用,本文对这种仪器的结构原理、构造特点、关键技术和最新进展等作简要介绍。     

MALDI-TOF-MS法测定聚丙烯酸钠的分子量

The sodium salt of poly(acrylic acid) has to be converted to poly(acrylic acid) with ionexchange resin to get clear MALDI/TOF mass spectrum. The average molecular weight, polydispersity and end-group can be determined based on the spectrum.     

合成高分子的定量分析

采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MLADI—TOFMS)技术进行合成高分子的定量分析。通过引入合适的内标物以及对实验条件的优化，取得了良好的实验结果。结果表明，高分子的质谱信号与高分子使用量呈现一定的比例关系。这只是合成高分子定量分析的初步探索，并为将来的深入研究奠定了必要的实验基础。     

MALDI-TOF质谱技术分析加州海兔口腔神经节中超微量 Leu-Leu多肽酶

利用丙酮 -水 -酸 (4 8∶ 5 0∶ 2 V/ V)萃取系统 ,从加州海兔 (Aplysia California,AC)口腔神经节中提取 L eu- L eu多肽酶 ,并用反相 HPL C进行纯化。选用具有三对 L eu- L eu结构的酸性多肽 (acidic peptide,AP)作为探针 ,以基质辅助激光解吸电离飞行时间 (MAL DI- TOF)质谱技术研究了海兔口腔神经节中的超微量 L eu- L eu多肽酶。对 L eu- L eu多肽酶的活性与类型及温度处理效果进行讨论。本技术也适用于分析其他组织与细胞中存在的各种超微量多肽酶     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在蛇毒组分分析中的应用

本文用MALDI－TOFMS对江浙蝮蛇毒混合物及其几个分离样品的组分进行了分析和比较，表明MALDI－TOFMS灵敏度高，且可以直接分析混合物的组分，同时还比较了不同基质对混合物分析结果的影响．