脑中磷脂酰丝氨酸(PS)的合成

脑中磷脂酰丝氨酸（PS）是在基团交换酶作用下生成的．在神经细胞膜上基团交换产生PS的能力大,活性高．25天的大鼠的胎鼠脑神经元、C1300鼠成神经细胞瘤、138MG人胶质细胞系、PC12细胞系均可作为细胞工程合成PS的种子细胞．二十二碳六烯酸、乙醇、丝氨酸、胆碱、乙醇胺NGF和SBEE是调节PS合成的重要因素．PS分子群的研究是生物定向合成某种PS的必然。     

大肠杆菌 aroL 基因敲除及其对莽草酸合成的影响

以E.coli DH5α基因组为模板克隆莽草酸激酶Ⅱ基因(aroL),构建质粒pMD-aroL,经HpaⅠ、BsaBⅠ酶切后插入卡那霉素抗性基因(kan)得pMD-aroL::kan,利用pKD46的λ重组系统,用该质粒上的kan及两端的aroL同源序列替换E.coli Top10F′基因组上的aroL基因,再运用质粒pCP20编码的FLP重组酶消除kan基因.Southern blot证实基因敲除是成功的,测序结果表明kan已经从基因组上消除,摇瓶发酵显示构建的基因工程菌的莽草酸产量是原始菌株的1.57倍.     

醇对磷脂酰胆碱CMC影响的研究

前文测定了磷脂酰胆碱的临界胶束浓度(CMC),在此工作的基础上,本文研究了醇对此临界胶束浓度的影响。发现随醇浓度的增加和碳链的增长,临界胶束浓度值呈有规律的下降趋势,与醇类对十二烷基磺酸钠CMC的影响相似。     

兽疫链球菌磷脂酰甘油磷酸合成酶基因的分离

根据化脓链球菌(Streptococcus pyogenes)磷脂酰甘油磷酸合成酶（phosphatidylglycerophosphate synthase, PGPS）基因序列设计引物,通过PCR从兽疫链球菌（Streptococcus zooepidemicus）基因组中克隆得到开读框为531bp的同源序列pgsa-sz。pgsa-sz的预测编码蛋白含有176个氨基酸残基,分子量19400,等电点8.8,其中含有63个疏水氨基酸,预示其可能的膜结合特性。二级结构预测发现该蛋白含3个跨膜域。此外,该蛋白与S. pyogenes的PGPS具有85％的氨基酸序列相似性。将该蛋白与金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的PGPS进行序列比对,发现该蛋白包含PGPS中保守的活性位点区域。上述结果表明,pgsa-sz为S. zooepidemicus细胞膜中PGPS的编码基因。     

磷脂酰胆碱对大鼠术后腹腔粘连的影响

腹腔粘连是外科手术的一个常见并发症，也是腹膜透析失败的原因之一。本文观察了可溶性和不溶性磷脂酰胆碱对大鼠术后腹腔粘连的影响。结果发现生理盐水对照组（ｎ＝１５）平均粘连程度为２．５度，可溶性膦脂酰胆碱组（ｎ＝１５）腹腔粘连程度显著减轻，平均为１．３度，而不溶性磷脂酰胆碱组（ｎ＝１５）腹腔粘连程度加重，平均为３．４度，本文提示，可溶性磷脂酰胆碱腹腔应用可有效的防止术后腹腔粘连发生。     

yigP——大肠杆菌生长所必需的基因

yigP基因在大肠杆菌基因组上位于辅酶Q生物合成相关基因ubiE和ubiB之间,3者构成一个操纵子。利用温敏质粒pMAK705系统敲除大肠杆菌基因组上的yigP基因后,发现二次重组子内的温敏质粒无法通过高温培养丢失,即染色体上的yigP基因被敲除后,必须依靠质粒上完整的yigP基因才能存活;通过功能回补yigP基因的表...     

从L-丝氨酸合成新型旋光活性环状磷脂的替加氟(Tegafur)和尿苷缀合物

从Ｌ－丝氨酸出发,经酯化、环磷酰化、磷酰化、加硫等步骤得到替加氟、尿苷硫代环磷酰胺酯缀合物２、３．Ｌ－丝氨酸酯经Ｎ－烷基化,然后再与磷酰二氯关环,进一步与替加氟乙醇反应得到环磷脂缀合物４．考察了两种环磷酰化反应中碳手性中心对磷原子的不对称诱导效果,并用硅胶柱层析分离了产物２、３、４ 的非对映异构体．基于ＮＭＲ数据,对它们的构型进行了讨论和初步的确定,它们的抗癌活性正在测试当中．     

PTPa基因敲除对小鼠海马CA1区突触可塑性的影响

通过PTPa基因敲除(knock out)小鼠来研究海马突触可塑性的变化,在海马schaffer collateral-CA1通路中采用场电位记录的方法研究发现,与Wild Type相比较,基因敲除小鼠的Long Term Potentiation(LTP)增强而Long Term Depression(LTD)受到抑制,去增强效应消失,θ频率诱导的LTP增强,但是其基本的突触传递性质并没有发生变化.     

大鼠HPRT基因敲除载体的构建

根据已知大鼠HPRT基因的外显子序列,从大鼠HPRT基因BAC中用酶切和PCR方法分别分离得到用于构建基因敲除载体的3.0kb和1.7kb的长臂(LongArm,LA)和短臂(ShortArm,SA),并克隆到pSL1180和pKO中.3.0kb长臂片段包含5′端部分序列和exon1部分序列,1.7kb短臂位于exon6和exon7之间.依次将neor、SA、LA克隆到pBS相应酶切位点,得到pBS-HPRT,再将LA-neor-SA片段由pBS中切出,克隆到pKO的KpnI和NotI位点之间,得到大鼠HPRT基因敲除载体pKO-HPRT.     

小鼠基因敲除的研究进展

随着人类基因组计划(HGP)的顺利完成,后基因时代的生物学研究迫切需要一种有效的基因功能分析方法。基因敲除小鼠模型的应用,为研究基因的功能和寻找新的治疗人类疾病的干预措施提供了有力支持。基因打靶和基因捕获是两种不同的通过胚胎干细胞(ES细胞)制作基因敲除小鼠的技术。基因捕获具有高通量、随机性、序列标记等特点,而基因打靶则是针对特定基因的敲除。自基因打靶和基因捕获小鼠首次亮相距今已有近20年的时间。近年来,针对基因打靶和基因捕获的新工具不断涌现,并且相应的组织也已经成立。这些组织能够利用这两种方法敲除小鼠基因组中的基因。国际基因捕获协会(The International Gene Trap Consortium,IGTC)和基因敲除小鼠计划(The Knockout Mouse Project,KOMP)已着手创建世界范围内用于科研的便利资源,并且计划敲除所有小鼠的基因。KOMP的组织者认为这与HGP一样具有重要意义。从传统的基因打靶到现在的高通量的条件基因打靶,基因打靶的方法已经发生了很大的变化。捕获和打靶两者的组合优势大大提升了基因捕获的范围和基因打靶的效率。作为一种新开发的插入式突变系统,转座子在捕获基因方面比逆转录病毒更具有优势。国际基因敲除小鼠协会(The International Knockout Mouse Consortium,IKMC)的出现标志着全球性合作的开始。该组织致力于系统地敲除小鼠基因组中所有基因,进而开展功能基因组的研究。     

小链霉菌HCCB10043敲除硫酯酶基因的工程菌株构建及其代谢产物的研究

小链霉菌(Streptomyces parvus)HCCB10043的主要代谢产物为脂肽类化合物A21978C,其基因组序列中包括了非核糖体肽合成酶(NRPS non ribosomal peptide synthetase)、聚酮合酶(PKS polyketide synthases)以及NRPS-PKS混合的多酶体系基因簇,它们的共同特点是在代谢产物生物合成簇中连接有一个硫酯酶域,即TE(thioesterase)domain.硫酯酶可以使已经合成的化合物链的合成过程终止,并且具有水解释放成熟脂肽以及环化线性脂肽链的功能.通过对联二吡啶类代谢产物合成簇中TE基因的敲除构得工程菌株,工程菌发酵结果表明联二吡啶类代谢产物产量减少.     

负电荷磷脂DSPG双层保护的金纳米粒子的合成与表征

采用一步法制备了负电荷磷脂DSPG双层保护的金纳米粒子,并用透射电镜、紫外-可见光谱、X-射线光电子能谱和红外光谱进行了表征.结果表明,所制备的金纳米粒子直径为3～5 nm,具有良好的水溶性和稳定性.     

基因敲除动物模型的建立

基因敲除是 80年代后半期应用ＤＮＡ同源重组原理发展起来的一门新技术。它是指对一个结构已知但功能未知的基因 ,从分子水平上设计实验 ,将该基因去除 (ｋｎｏｃｋｏｕｔ) ,或用其它顺序相近基因取代 ,然后从整体观察实验动物 ,推测相应基因的功能。80年代初 ,胚胎干细胞分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。 1985年 ,首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础[1] 。 1989年Ｔｈｏｍｐｓｏｎ等通过基于ＥＳ细胞囊胚注射的基因敲除 ,建立了次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶 (ｈｒｐｔ)基因被定点剔除的小鼠模型[…     

磷脂酰甘油的脂肪酸组成与蔬菜冷敏感性的相关关系

测定了９种蔬菜叶中磷脂酰甘油的脂肪酸组成，其饱和脂肪酸水平分布在５１－７２％之间，用电导法和田间观察确定９种蔬菜的冷敏感性，实验结果表明，饱和脂及酸水平和双饱和磷脂酰甘油分子的含量与蔬菜的冷敏感性密切相关。     

从L—丝氨酸合成新型旋光活性环状磷脂的替加氟（Te …

从Ｌ－丝氨酸出发,经酯化、环磷酰化、磷酰化、加硫等步骤得到替加氟、尿苷硫代环磷酰胺酯缀合物４．考察了两种环磷酰化反应中碳手性中心对磷原子的不对称诱导效果,并用硅胶柱层析分离了产物２、３、４的非对映异构体。基于ＮＭＲ数据,对它们的构型进行了讨论和初步的确定,它们的抗癌活性正在测试当中。     

DRD1基因敲除影响雄鼠生育的分子机理研究

目的 研究DRD1基因敲除引起雄鼠生殖功能下降的机制.方法 本研究以DRD1基因敲除鼠(KO)和野生鼠(WT)为研究对象,对8周龄KO与WT雄鼠进行基因型鉴定,测体质量并计算睾丸系数,一侧睾丸HE染色观察形态,另一侧睾丸TRIzol法提取RNA,通过qRT-PCR反应,采用相对定量法,分析与生殖密切相关基因的表达差异倍...     

PTPα基因敲除对小鼠海马CA1区突触可塑性的影响

通过PTPα基因敲除（knockout）小鼠来研究海马突触可塑性的变化，在海马schaffer collateral—CA1通路中采用场电位记录的方法研究发现，与Wild Type相比较，基因敲除小鼠的Long Term Potentiation（LTP）增强而Long Term Depression（LTD）受到抑制，去增强效应消失。θ频率诱导的LTP增强，但是其基本的突触传递性质并没有发生变化．     

二棕榈酰磷脂酰胆碱LB膜诱导下草酸钙晶体生长的SEM研究

目的：利用二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）的Langmiur-Blodgett膜（简称LB膜）作为模板诱导草酸钙晶体的生长,进而模拟生物体内尿结石的形成和抑制。方法：采用扫描电子显微镜（SEM）,对磷脂DPPC的L膜诱导过饱和溶液中生长的草酸钙晶体的密度增加、尺寸增大。但很小（π=1mN/m)时,几科没有草酸钙晶体,随着膜压增大,草酸钙晶体的密度增加、尺寸增大。但当膜压增加到35mN/m时,晶体却特别稀少。结论：作为模板的DPPC的LB膜的膜压不同时,可以诱导生成具有不同形状、不同密度和尺寸的CaC2O4晶体。LB膜中DPPC分了间的距离与CaC2O4晶体的结构相匹配是CaC2O4晶体定向生长的主要原因。     

脂蛋白酯酶基因敲除小鼠的繁育

目的　摸清脂蛋白酯酶基因敲除小鼠的繁殖规律,建立可靠的检测方法。方法　采用杂交、回交、互交的方法进行培育;采用从LPL(- / - )基因敲除小鼠的个体组织(鼠尾)中提取基因组DNA进行PCR分析,对其LPL(- / - )基因型作出鉴定。结果　繁育出脂蛋白酯酶基因敲除小鼠新品系,并建立了可靠的繁殖方法和检测方法。结论　建立了脂蛋白酯酶基因敲除小鼠动物模型。     

亚油酸对大白鼠血胆固醇浓度及磷脂分子组成的影响

探讨亚油酸降胆固醇的机理。将Wister大鼠随机分为胆固醇不添加组和胆固醇添加组 ,分别给予含亚油酸饲料喂养 ,检测其血脂的含量。其结果是胆固醇添加组的血胆固醇明显降低 ,胆固醇不添加组则无明显变化 ;血和肝微粒体中的磷脂酰胆碱 (PC)的亚油酸含量与饲料中亚油酸含量成正比 ;亚油酸使 1 6∶0 -1 8∶2磷脂酰胆碱 (PC)增加。亚油酸通过影响磷脂酰胆碱 (PC)的重建来降低胆固醇。