苏云金芽孢杆菌δ—内毒素的杀虫机理及其增效途径

苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,Ｂｔ）制剂是当前应用最广、最有效的微生物杀虫剂。Ｂｔ属于革兰氏阳性细菌,在形成芽孢的同时,产生伴孢晶体。伴孢晶体是Ｂｔ杀虫活性的主要来源,它可能由几种晶体蛋白即δ－内毒素组成。δ－内毒素的专一...     

土壤来源苏云金芽孢杆菌的形态、δ-内毒蛋白质及其毒力特性

在透射和扫描电镜下观察了土壤来源的94株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的菌体、鞭毛、芽孢及伴孢晶体的形态。以快速SDS—PAGE法分析了全部菌株δ-内毒素的蛋白质成分。用鳞翅目、鞘翅且及双翅目的9种昆虫进行了毒力试验。筛选出了数株杀鞘翅目和杀夜蛾科害虫的高效菌。发现了一些新型伴孢晶体,其形态和蛋白质成分均未报道过。     

苏云金杆菌δ—内毒素基因在大肠杆菌中的克隆及表达

分离了苏云金杆菌肯尼亚亚种7404(Bacillus huringiensis subsp．Kenyae 7404)和库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp．Kwrstaki HD-1)的质粒。经凝胶原位杂交证明苏云金杆菌肯尼亚亚种7404的δ—内毒素基因位于约47Md大小的一个质粒上。用蔗糖密度梯度离心法从sau 3 A1部分酶解的上述两种苏云金杆菌质粒DNA酶解片段中分离出大于 4kb的DNA片段,将这些片段克隆到pBR332的Barn HI位点上并转化大肠杆菌HB101。通过菌落原位杂交、菌落原位放射免疫试验及Western blct分析等方法,选到了带有δ—内毒素基因并能在大肠杆菌中表达此毒蛋白的转化体。初步的生物学试验表明,在四个试验过的转化体中带有肯尼亚亚种δ—内毒素基因的转化体TK89及带有库斯塔克亚种δ—内毒素基因的转化体THl2和TH48对烟青虫(Heliothis assulta)有毒杀活性。     

通过原生质体融合产生的苏云金杆菌的新菌株

用苏云金杆菌以色列变种Bacillus thuuringiensis subsp.israelensis和苏云金杆菌库斯塔基变种Bacillus thuringuensis subsp.kurstaki HD-1进行了PEG诱导的原生质体融合实验,探讨了影响原生质体形的几个条件。用抗性标记对融合子进行了选择,在198株融合子中,有17株稳定传代10次以上。它们具有两个亲本菌株所具有的一些特性。在融合子中,BTI比HD-1稳定。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法研究比较了稳定融合子的晶体毒素成分,观察到了代表HD—l毒素蛋白和BTI毒素蛋白的带。杀虫试验结果表明,融合形成的杂种菌株具有毒杀文字孑孓和鳞翅目幼虫的能力。     

土壤来源苏云金芽孢杆菌的形态,δ—内毒蛋白质及其...

94 strains of Bacillus thuringiensis were isolated from soils in southwest and northwest of China. The morphology of cells, spores and parasporal crystals of these strains was investigated under transmission and scanning electro-microscope. Proteins of delta-endotoxins from all strains were analysed by rapid SDS-PAGE. 9 species of insects in Lepidoptera, Coleoptera and Diptera were tested for assay of delta-endotoxins. Some kinds of parasporal crystals were quite different in form and in composition of protein from those reported before. Most of strains were nontoxic to all of 9 species used in bio-assay. Some strains were very effective in species of Coleoptera or Noctuidae.     

球形芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌以色列亚种杀蚊毒素间的协同作用

本研究测定了分别表达苏云金芽孢杆菌Cry4Aa、Cry4Ba、Cry11Aa、Cyt1Aa和球形芽孢杆菌二元毒素Bin的转化菌株Bt B60 1、Bt B611、Bt B640、Bt U 30和Bt CW 3全发酵培养物两两或两两以上不同组合对抗性库蚊的毒力 ,分析了杀蚊毒素间的协同作用。结果表明 ,Bin和Cry4Aa、Bin和Cry 4Ba间有明显的协同作用 ,此外 ,Cry4Aa和Cry4Ba、Cry4Aa和Cry11Aa、Cyt1Aa和Cry4Aa之间也有明显的协同作用     

苏云金杆菌毒素

苏云金杆菌产生的对昆虫有致病作用的毒素有７种,即α－外毒素、β－外毒素、γ－外毒素、δ－内毒素、不稳定外毒素、水溶性毒素、鼠因子外毒素。苏云金杆菌主要是经口感染昆虫,它杀死昆虫可由菌体本身的活动而引起,但是使害虫死亡的更主要的原因是菌体产生的毒素。毒...     

不同添加物对苏云金芽孢杆菌杀虫活性的增效作用研究进展

苏云金芽孢杆菌（Bacillius thuringiensis,Bt）制剂是当前应用最广、最有效的生物杀虫剂之一,因其对多种昆虫具有特异性杀虫活性,而被广泛用于农林业和公共卫生等领域的害虫防治,但田间施用后,其速效性差、持效期短和防效不稳定等弊端限制了其进一步的推广。将Bt制剂与增效物质（剂）、因子混合使用以提高其杀虫活性和田间防效稳定性,是最快速、有效的途径之一,因而国内外对此开展了广泛而深入的研究。主要介绍了化学添加剂、化学杀虫剂和生物杀虫剂等添加物对Bt制剂杀虫活性的增效作用研究进展,并探讨了增效物质（剂）、因子的开发和应用前景,以期为开发安全、高效的Bt制剂的增效物质（剂）、因子提供一定的参考。     

电脉冲穿孔法将苏云金杆菌δ-内毒素基因导入野生型芽孢杆菌

利用电脉冲穿孔法将带有苏云金杆菌毒蛋白基因的穿梭质粒导入几株野生型芽孢杆菌中。它们是野生型的蜡状芽孢杆菌、短芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。通过观察在新霉素和氨苄青霉素平板上长出的抗性菌落数,计算出转化效率为10~1—10~4转化子/μgDNA。从转化子中分离到的质粒DNA大小及其用HindⅢ酶切的片段与原始质粒DNA相同,毒性测试表明重组转化子对烟青虫六天的致死率达90—100％。     

棉铃虫中肠类胰蛋白酶的部分纯化和性质测定及其对苏云金杆菌δ—内毒素的降解作用

将棉铃虫Helicoverpa armingera中肠液经SephadexG-75、DEAE-SephadexA-50阴离子交换和CM-SephadexC-50阳离子交换柱层析进行分离纯化,得到部分纯化的24.5kD蛋白,该蛋白可以水解胰蛋白酶的专性底物BApNA和TAME,不能水解胰凝乳蛋白酶的专性底物BTEE,蛋白酶抑制剂的抑制试验显示,TLCK、PMSF、STI及SBBI均可显著抑制该蛋白对BApNA的水解作用,而TPCK无抑制作用,由此推断,24.5kD蛋白是棉铃虫的类胰蛋白酶。以BApNA为底物,类胰蛋白酶的最适pH为10.5-11.0。SephadexG-75分离得到了4个洗脱峰,电泳结果显示,各洗脱峰均能使苏云金杆菌库斯塔克变种Bacillus thuringiensis var.kurstakiHD-1原毒素降解为60.5kD的活力片段,峰Ⅳ虽然不能水解BApNA和TAME,但仍可对原毒素进行降解,而类胰蛋白酶活力最高的峰Ⅱ已将60.5kD蛋白完全降解,当减少用量至1/3时,才出现60.5kD蛋白。因此,苏云金杆菌δ-内毒素在棉铃虫中肠内的降解有多种蛋白酶参与,类胰蛋白酶在其中起重要作用,CM-SephadexC-50进一步分离得到的类胰蛋白酶可对原毒进行降解,其降解作用受到TLCK、PMSF、STI及SBBI的显著抑制,不受TPCK的影响。     

恒定磁场对苏云金芽孢杆菌的生长及毒力的影响

目的:研究恒定磁场对苏云金芽孢杆菌的生长和毒力的影响.方法:通过0-100 Gs的恒定磁场下对苏云金芽孢杆菌G-02、HD-1菌株的发酵,测定其生长和毒力的变化.结果:G-02、HD-1菌株分别在磁场强度43Gs和14Gs条件下发酵48h后的芽孢量和毒力达到最高,芽孢增长比分别为1.26和2.0,毒力增效比分别为1.27和1.25,苏云金芽孢杆菌G-02适宜的磁场强度为43-50Gs,HD-1菌株为7-29Gs.结论:低磁场强度对两种菌株的生长有一定的促进作用,而高强度磁场会对其生长产生抑制作用.     

苏云金芽孢杆菌杀虫活性的增效机制研究进展

为了克服苏云金芽孢杆菌（Bacillius thuringiensis, Bt）制剂在实践过程中存在的速效性差、持效期短、防效不稳定以及使害虫逐渐产生抗药性等诸多缺陷,各类添加剂已经被广泛应用于防治过程中以起到增效作用。就目前国内外已开展的各类添加剂对苏云金芽孢杆菌杀虫活性的增效机制和方式的研究进行了概述,并指出其作用方式的潜在可能与途径,以期为苏云金芽孢杆菌生物农药作用机制的研究提供参考。     

苏云金芽孢杆菌几丁质酶的研究进展

苏云金芽孢杆菌制剂作为无公害农药已经得到社会的认可,如果再开发其几丁质酶抑制真菌和杀虫增效功能,不仅可充分利用这一农业微生物菌种资源,也将给予传统生物农药以新的生命力。综述了苏云金芽孢杆菌几丁质酶方面研究的国内外最新进展。     

谷氨酸对苏云金杆菌的芽孢和伴孢晶体的影响

研究了不同浓度的谷氨酸对苏云金芽孢杆菌形态、菌体浓度及芽孢和件孢晶体的影响.研究表明,一定浓度的谷氨酸有利于菌体的生长并能够提高菌体的增殖速度,对芽孢和伴孢晶体的形态没有明显的影响,但对芽孢的裂解有明显地抑制作用.     

球形芽孢杆菌C3—41二元毒素基因在苏云金芽孢杆菌以色列亚种中的？…

球形芽孢杆菌Ｃ３－４１是我国分离的一株对蚊幼虫有毒杀作用的高毒力菌株,对库蚊、按蚊幼虫的毒性高于２３６２菌株,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明Ｃ３－４１总ＤＮＡ中３．５ＫｂＨｉｎｄＩＩＩ片段上带有４１．９和５１．４ｋＤ二元毒素基因。     

紫外线诱变苏云金芽孢杆菌最佳条件探索

为寻找高毒性的苏云金芽孢杆菌(BT菌)菌株,我们用紫外线对苏云金芽孢杆菌的库尔斯塔克亚种进行诱变,再对得到的突变菌株进行筛选,得到高毒性的菌株。本文设计实验,先对苏云金芽孢杆菌进行生长曲线的测定和表征,再通过控制变量法对苏云金芽孢杆菌进行外线诱变,最后总结出最佳的诱变条件。     

硅酸盐细菌和苏云金芽孢杆菌原生质体融合

具有解钾活性的硅酸盐细菌──胶质芽孢杆菌（R．mucilaginesus）W9－12与具有杀虫活性的苏云金芽孢杆菌（B．thuringensis）Bt179208原生质体质进行了融合。W9－12原生质体形成率为99．7％．再生率为24．9％,Bt179208原生质体形成率为99．9％,再生率为35％。以PEG为助融剂进行原生质体融合．得到56个融合子．融合率为5．92×10－6。融合子在双抗选择培养基上连续传代10次,得到12个稳定的融合子,生物测定表明,融合子既具有一定的杀虫活性又具有一定的解钾活性。     

叶面分离苏云金芽孢杆菌的研究进展

苏云金芽孢杆菌是一种在芽孢形成的同时能形成杀虫晶体蛋白的细菌,广泛存在于土壤、昆虫、贮藏物、仓库尘埃、植被等昆虫接触物上.植物叶片作为Bt分离的重要来源,目前对这方面的研究相对较少,国内刚刚起步.本文就叶面分离Bt的研究成果、叶片采样及分离方法进行阐述.     

苏云金芽孢杆菌发酵上清中增效物质生成的相关研究

利用BIOSTAT ^?-CL1 5L全自动发酵罐和 2 0t不锈钢发酵罐 ,对苏云金芽孢杆菌不同菌株 (GC-91 ,MP342 ,HD-1 )发酵上清液中增效物质的生成进行了研究 ,发现增效物质于对数生长期前期开始产生并积累 ,至对数生长期末期达到高峰 ,并保持稳定 ;不同菌株的发酵上清中增效物质生成量不同 ,其中GC-91最强 (增效倍数f=6.0 ) ,MP342次之 (f=3.7) ,HD 1最弱 (f=1.5 ) ;GC-91菌株上清液中增效物质生成曲线与晶体含量 ,效价代