小儿结核性脑膜炎的诊断新进展

结核性脑膜炎（简称结脑）的发病率近年有上升趋势，早期诊治对患儿的预后至关重要、一般诊断方法对确诊的价值不大。一些新的诊断方法如点状免疫结合法，其敏感性为５５％．特异性达１００％，快速简便。脑脊液聚合酶链反应（ＰＣＲ）的应用也有一定发展，研究者们将目光集中在引物标记的改变上，ＰＣＲ对结脑诊断意义是不确定的，而且该方法对实验室条件要求严格，假阳性率较高。其它如脑脊液中酶的活性测定、化学炎性因子测定等等，都将在文中叙述。     

应用半重叠TCRγ特异性引物的PCR方法检测淋巴细胞白血病

彩更加敏感的半重叠式ＴＣＲγ特异性引物的ＰＣＲ方法，对２８例ＡＬＬ初治、ＣＲ及ＢＭＴ患儿进行检测，并用消化煮沸及酚抽提法分别对所有骨髓标本进行ＤＮＡ提取，将ＰＣＲ结果进行比较。结果表明：消化煮沸法用于微量标本的ＤＮＡ提取优于酚抽提法，２８例ＡＬＬ患儿中１６例检出ＴＣＲγ特异性条带，ＭＲＤ组１８例，阳性检出１２例，其中免疫分型标记为Ｂ细胞型的４例，占２５％，免疫标记为Ｔ细胞型者全部出现ＴＣＲγ阳性条     

应用逆转录聚合酶链反应检测肠道病毒感染

为建立一种能检测出临床上绝大多数肠道病毒（ＥＶ）感染的快速、敏感、特异的逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，通过对ＥＶ基因组的序列分析，在其５′端非编码区设计一对引物，用该引物建立的ＲＴ－ＰＣＲ方法对３１种ＥＶ标准毒株和３４例无菌性脑膜炎及１１例无菌性脑炎患儿的脑脊液（ＣＳＦ）分别进行扩增，其产物做琼脂糖凝胶电泳及斑点杂交检测。研究表明，３１种ＥＶ标准毒株斑点杂交的敏感度达１０－２～１０－３５０％组织培养感染量（ＴＣＩＤ５０）。３４例无菌性脑膜炎中２１例阳性（６１．８％），１１例无菌性脑炎中８例阳性（７２．７％）；阳性患儿恢复期ＣＳＦ，２例无菌性脑膜炎和１例无菌性脑炎仍为阳性。提示用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＥＶ感染是值得推广的。     

PCR技术对脑膜炎奈瑟菌的诊断价值探讨

在脑膜炎双球菌染色体ＤＮＡ中的保守区选择一段核苷酸作为靶ＤＮＡ，用ＰＣＲ技术扩增了该菌标准菌株的Ａ、Ｂ、Ｃ三型，同时检测了８例流脑患儿的１４份标本，其结果均为阳性。该方法的建立，对临床诊断流脑提供了一个简便、特异、快速的检验方法，具有重要的临床应用价值和广泛的应用前景     

中枢神经系统感染时脑脊液白介素-6的变化

近年来发现某些细胞因子为炎症的介体，在炎性反应中具有举足轻重的作用。基中白介素－６（ＩＬ－６）是机体细胞因子网络中的重要成员之一。我们检测了各种中枢神经系统（ＣＮＳ）感染患儿脑脊液（ＣＳＦ）中ＩＬ－６的变化，旨在探讨其与疾病性质、程度及预后的关系。对象和方法一、对象　１．化脓性脑膜炎组（化脑）１１例，男８例，女３例。平均年龄２．５ａ。其中肺炎球菌感染３例，流感杆菌、金葡菌各２例，其余病因不明。２．结核性脑膜炎组（结脑）５例，男３例，女２例，平均年龄２．３ａ。均经ＰＣＲ检测脑脊液结核菌ＤＮＡ阳性。…     

应用聚合酶反应技术检测巨细胞病毒感染尿中巨细胞病毒DNA的研究

为评价聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染诊断的应用，我们选择ＣＭＶＡＤ１６９株基因组ＤＮＡ ＥｃｏＲ ＩＤ片段补序列合成一对引物，对ＣＭＶ标准株、一系列对照样品及两组患儿的尿标本进行ＣＭＶ ＤＮＡ的ＰＣＲ检查，并将结果与其它方法比较。结果表明：用ＰＣＲ方法只能扩增ＣＭＶ ＡＤ１６９株的ＤＮＡ序列而不能扩增人的二倍体细胞（ＨＤＣ）和对照病毒的ＤＮＡ，从而确立了该法特异法。与核酸杂交     

核糖体DNA聚合酶链反应诊断新生儿败血症

目的比较１６ＳｒＤＮＡ高度保守区引物聚合酶链反应（ＰＣＲ）与血培养及非特异性诊断指标对新生儿败血症的诊断价值。方法对１３１例拟诊为败血症的新生儿血标本进行细菌ＤＮＡ检测。结果１３１例中，ＰＣＲ检测阳性５６例，阳性率为４３％，明显高于血培养的阳性率（血培养阳性２３例，阳性率１８％）。１３１例拟诊败血症中，发现２３例确诊败血症及３１例临床败血症，对这５４例败血症（血培养阳性２３例＋临床败血症３１例）作ＰＣＲ检查，结果阳性４８例，阴性６例；对１３１例中的７７例“非败血症”病例，ＰＣＲ检测阴性６９例，阳性８例。对血培养阳性的２３例进行ＰＣＲ，结果阳性２２例。以血培养作为确诊标准，ＰＣＲ检测的敏感性为９６％，并不受抗生素治疗的影响。３０例阴性对照组ＤＮＡ的ＰＣＲ分析均为阴性。结论在严格控制污染的条件下，细菌共同引物ＰＣＲ技术能为新生儿败血症提供可靠的病原菌诊断依据     

聚合酶链反应诊断结核性腹膜炎二例

聚合酶链反应诊断结核性腹膜炎二例李明珠乐景浩聚合酶链反应（ＰＣＲ）已较多应用于结核病的诊断，如在痰、胸水或脑脊液中可检出结核菌ＤＮＡ。现就２例诊断为肠梗阻的患儿，应用ＰＣＲ技术诊断为结核性腹膜炎者报告如下。例１女，３岁半，因腹痛呕吐急诊入院。６天来持...     

单纯疱疹病毒性脑炎诊断方法与治疗观察

目的探讨单纯疱疹病毒性脑炎（ＨＳＶＥ）的诊断方法，了解对ＨＳＶＥ的治疗效果。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术和酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，对２７例病毒性脑炎患儿的脑脊液进行单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）ＤＮＡ和特异性ＩｇＭ抗体检测。结果ＨＳＶＤＮＡ阳性１１例；ＨＳＶＩｇＭ阳性４例，其中Ⅰ型３例，Ⅱ型１例；ＤＮＡ与ＩｇＭ同时阳性３例。将脑脊液检查ＨＳＶＤＮＡ阳性或ＨＳＶＩｇＭ抗体阳性者１２例诊断为ＨＳＶＥ，占４４％。对ＨＳＶＥ患儿予以静脉滴注无环鸟苷，连续用药一周，结果治愈８例，好转２例，自动出院及死亡各１例。结论ＰＣＲ与ＩｇＭ抗体检测两种方法相结合有助于ＨＳＶＥ病原学早期诊断，并指导ＨＳＶＥ的临床治疗     

用PCT—SSCP方法检测中国人Alport综合征COL4A5基因突变

目的 检测中国人Ａｌｐｏｒｔ综合征（ＡＳ）患者编码Ⅳ型胶原α链的ＣＯＬ４Ａ５基因突变。方法 提取１８例中国Ｘ连锁显性遗传型ＡＳ患者基因组ＤＮＡ，据ＣＯＬ４Ａ５基因中与外显子相邻的内含子序列设计引物，分别作ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰＣＲ），扩增了该基因第２０～５１外显子。以琼脂糖凝胶电泳鉴定产物，作单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析检测ＰＣＲ产物，对迁多率异常者进行ＤＮＡ测序。结果 ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析发     

儿童布氏杆菌脑膜炎1例并文献复习

目的 探讨布氏杆菌脑膜炎的临床特征及治疗措施.方法 布氏杆菌脑膜炎患儿1例.患儿,男,10岁.因发热、咳嗽0.5个月,头痛3d入院.家中养羊,但否认与羊密切接触.回顾性分析该患儿临床资料.检索国内外文献,进行总结分析.结果 患儿为亚急性病程,主要表现为发热、头痛和脑膜刺激征阳性,脑脊液的改变类似于结核性脑膜炎,WBC轻度升高,以淋巴细胞为主,蛋白增高,糖和氯化物降低.血清布氏杆菌抗体阳性,凝集效价为1:160.经利福平、米诺环素和头孢曲松钠三联抗生素治疗,2周后脑脊液恢复正常.出院后继续口服米诺环素、利福平和复方磺胺甲噁唑8周,恢复良好.检索国内外文献发现,儿童布氏杆菌病神经系统并发症的发生率明显低于成人,以急性脑膜炎/脑膜脑炎为主.布氏杆菌脑膜炎为亚急性病程,脑脊液改变与结核性脑膜炎类似,临床易误诊为结核性脑膜炎.本病的治疗目前主张3种抗生素联合治疗,应选用易通过血脑脊液屏障的药物,总疗程不短于8周.结论 对于儿童诊断不明的脑膜炎/脑膜脑炎,尤其表现与结核性脑膜炎类似者,应考虑布氏杆菌脑膜炎,需进行流行病学调查,并行血清凝集试验和脑脊液培养,以早期确诊.     

巨细胞包涵体病的临床及早期诊断

本文观察１９９２年９月至１９９４年３月我科收治的人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染患儿３４例。部分阳性患儿同时检测母亲ＰＣＲ－ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率为８０％，说明患儿ＨＣＭＶ感染与母亲有明显关系。本文采用了聚合链式反应（ＰＣＲ）检测患儿血ＨＣＭＶ－ＤＮＡ的方法，并与血清免疫学方法比较，结果表明，该方法具有高度的特异性和敏感性，操作简便，反应周期短，不存在交叉反应，是目前临床检测ＨＣＭＶ感染较好的方法。     

不同中枢神经系统感染患儿脑脊液肝细胞生长因子水平变化的意义

目的通过观察病毒性脑炎、细菌性脑膜炎及结核性脑膜炎患儿脑脊液肝细胞生长因子(HGF)水平变化,探讨其是否可以作为一个鉴别诊断的生化指标,为临床疾病的诊断提供依据。方法选择临床确诊病毒性脑炎30例、细菌性脑膜炎21例、结核性脑膜炎19例及对照组24例,采用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测各组患儿脑脊液HGF水平。同时将HGF水平分别与脑脊液中白细胞计数和蛋白定量进行直线相关分析,观察脑脊液中HGF水平与脑脊液中白细胞计数和蛋白定量的关系。结果细菌性脑膜炎组、结核性脑膜炎组脑脊液HGF水平高于病毒性脑炎组和对照组,结核性脑膜炎组高于细菌性脑膜炎组患儿,细菌性脑膜炎组、结核性脑膜炎组及病毒性脑炎组与对照组患儿比较均有显著性差异(Pa<0.05),病毒性脑炎组与对照组患儿比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HGF有可能成为鉴别细菌性脑膜炎、结核性脑膜炎及病毒性脑炎的指标之一。     

原核生物16S rDNA的PCR-ELISA检测方法的研究

目的建立一种可以用于支原体、细菌等原核生物感染的快速诊断方法。方法根据原核生物１６ＳｒＤＮＡ独特的序列特性，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增１６ＳｒＤＮＡ，扩增产物与结合在酶联免疫吸附反应（ＥＬＩＳＡ）板上的特异性探针杂交，经酶显色，计算吸光度比值来检测标本。以肺炎支原体为例，对上述方法进行了特异性、重复性、敏感性等方面的检验。结果（１）多种原核生物均可扩增出１６ＳｒＤＮＡ；（２）各种原核生物的１６ＳｒＤＮＡ片断仅与其特异性探针杂交；（３）经３次重复杂交试验结果均相同；（４）对肺炎支原体感染流行期所取标本进行对照检验，ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法检出率与传统ＰＣＲ方法差异无显著意义。结论利用原核生物１６ＳｒＤＮＡ序列特性的ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法具有特异性高、重复性好、灵敏度高等优点，是一种可检测原核生物感染的快速诊断方法     

逆转录聚合酶链反应快速检测呼吸道合胞病毒

为探索一种快速、可靠的呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）的检测方法，对逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测ＲＳＶ进行研究。结果：ＲＴ－ＰＣＲ方法可检出病毒量为１０ＴＣＩＤ５０／ｍｌ（ＴＣＩＤ５０为半数组织培养感染量）；用于扩增Ｆ蛋白基因的引物经计算机基因库检测与其他病毒无同源性，实验同步扩增其他常见呼吸道感染病毒均无阳性扩增带；实验过程６小时内完成。在ＲＳＶ好发季节对５３例拟诊为病毒性急性下呼吸道感染婴儿咽拭子进行检测，ＲＳＶ阳性２８例（５２．８％）。提示ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＲＳＶ具有快速、敏感性高、特异性好等特点，适合于临床应用。     

单纯交疹病毒性脑炎诊断方法与治疗观察

目的 探讨单纯疱疹病毒性脑炎（ＨＳＶＥ）的诊断方法，了解对ＨＳＶＥ的治疗效果。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）的技术和酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，对２７例病毒性脑炎患儿的脑脊液进行单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）ＤＮＡ和特异性ＩｇＭ抗体检测。结果 ＨＳＶ－ＤＮＡ阳性１１例，ＨＳＶ－ＩｇＭ阳性４例，其中Ⅰ型３例，Ⅱ型１例；ＤＮＡ与ＩｇＭ同时阳性３例。将脑脊液检查ＨＳＶ－ＤＮＡ阳性或ＨＳＶ－Ｉdisplay stat     

应用聚合酶链反应技术检测肺炎支原体的研究

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测肺炎支原体（ＭＰ）ＤＮＡ，结果表明该方法具有很高特异性和敏感性不存在交叉反应，能检测到１００ｐｇ的ＭＰ－ＤＮＡ反应周期短，该方法应用于临床咽拭子标本的检测，同时用ＥＬＩＳＡ法检测ＭＰ抗体进行对比试验，１５９例呼吸系统感染患儿ＰＣＲ法检测结果２７例阳性，与ＥＬＩＳＡ法比较，具有良好的符合率，又较后者敏感和特异，ＰＣＲ法操作简便，自动化，适用于常规临床检测。     

新疆自治区人民医院PICU婴幼儿结核性脑膜炎17例分析

目的 通过对PICU收住结核性脑膜炎患儿早期临床特点的分析,探讨婴幼儿结核性脑膜炎的早期临床诊断方法.方法 回顾性分析新疆自治区人民医院2011至2012年收治的17例婴幼儿结核性脑膜炎患儿的病历资料.结果 17例患儿中,16例（94％）伴有发热及意识障碍;脑脊液检查呈较典型改变者14例（82.35％）;头颅MRI检查结果异常12例（71％）,脑室扩大10例（83％）;而腺苷脱氨酶增高仅4例（24％）;结核抗体阳性1例（6％）;PPD试验阳性2例（12％）.结论 婴幼儿结核性脑膜炎早期临床症状缺乏特异性.脑脊液葡萄糖、氯化物降低;蛋白升高.头颅MRI或CT异常.胸部X线改变,有结核接触史等依据可协助诊断,脑脊液腺苷脱氨酶、乳酸脱氢酶并不比蛋白和氯化物更有意义.临床上可疑结核性脑膜炎患儿或不典型化脓性脑膜脑炎治疗效果欠佳时,应在积极寻找结核感染证据的同时尽早开始抗结核治疗.     

巨细胞病毒PCR检测及巨细胞病毒肺炎的临床研究

巨细胞病毒ＰＣＲ检测及巨细胞病毒肺炎的临床研究申昆玲，江载芳，照日格图选用ＨＣＭＶＡＤ１６９株ＥｃｏＲＩＤ片段上的两段互补序列为引物，建立了聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＣＭＶＤＮＡ方法。其特异性经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印及探针杂交证实；敏感性可检出１ｐｇ同...     

�����Լ�Һ���������Ż�PCR���ϵͳ�Խ������Ĥ�׻�������ϼ�ֵ

目的改良脑脊液样本处理方法和优化PCR检测系统,提高结核性脑膜炎诊断阳性率。方法建立微波碱性非离子型表面活性剂氯仿法,并用二甲基亚砜(DMSO)优化结核杆菌插入序列IS6110PCR检测系统;分别用微波碱性非离子型表面活性剂氯仿法和简易氯仿法处理1998年7月至2004年11月间华中科技大学同济医学院同济医院收集的108份脑脊液样本,经5%DMSO优化的PCR诊断系统扩增,将结果进行比较。结果微波碱性非离子型表面活性剂氯仿法处理脑脊液模板PCR诊断结核性脑膜炎阳性率为88%,简易氯仿法为71%,假阳性率均为0。结论微波碱性非离子型表面活性剂氯仿法和5%DMSO优化的IS6110PCR检测系统可有效提高结核性脑膜炎诊断的阳性率。