荧光原位杂交方法检测人精子染色体

目的：将Ｆ１ＳＨ方法应用于精子间期核检测染色休数目。方法：用二硫苏糖醇破精子表面蛋白壳，使探针容易穿透，再选用１３、２１、ｘ探针与精子核杂交，检测相应染色体数目。结果：可见红色核中绿色信号，结果直观，能准确计数染色体数目。结论：ＦＩＳＨ技术应用于精子间期核，能准确、快速、直观地检出染色体数目异常，使细胞学难以制备精子染色体的难题得以解决。     

双色荧光原位杂交检测男性不育患者精子X和Y染色体

目的建立男性不育患者精子核双色荧光原位杂交技术（FISH）的检测方法。方法将20例男性不育患者精子标本经低渗液处理、固定后制片,用二硫苏糖醇（DTT）使精子去凝集,变性后与双色荧光标记（CEPX、Y）探针杂交。结果20例患者的6672个精子中,X染色体精子率为47．78％,Y染色体精子率为47．24％,性染色体数目异常的精子率为4．53％,有效杂交率为99．55％。结论成功地建立了检测人精子X和Y染色体的检测方法。     

应用染色体荧光原位杂交检测染色体畸变

荧光原位杂交（ｆｌｏｕｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｅｈｙ－ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）是利用已知碱基序列的非同位素标记的核酸探针，依据碱基互补配对原理，通过荧光亲和素免疫组化体系在组织切片、细胞、间期核及染色体标本上对待测核酸进行定性、定位及相对...     

荧光原位杂交技术在检测人精子染色体异常中的应用进展

荧光原位杂交技术(FISH)以其快速、简便、高灵敏度及高特异性的优点,可一次检测成千上万精子染色体而被广泛应用,并逐渐成为检测精子染色体的首选方法.本文总结近10年来国内外相关文献,将FISH技术在检测正常人、不育者、染色体平衡易位者、有毒物接触者及肿瘤患者化疗后精子染色体异常方面的应用加以综述.     

一种快速稳定的人精子核双色荧光原位杂交技术的建立

目的:建立快速稳定的人精子核双色荧光原位杂交的实验方法。方法:采用双色荧光原位杂交(fluores cence in situ hybridization, FISH )方法取精子标本用EDTA/PBS液处理,再用二硫苏糖醇(DTT)使精子去凝集,甲醇/冰醋酸固定后制片,变性后与双色荧光直接标记(CEP X、Y)探针杂交。结果:在荧光显微镜下可见标本背景清晰,精子头部染成蓝色,边界清楚,头部有1个绿色荧光信号的精子为 X精子,有 1 个红色荧光信号的精子为 Y精子。精子头部有2个或2个以上信号的精子为染色体数目异常精子。结论:本方法具有快速、稳定、荧光信号强、易分辨等优点,可用于人性染色体非整倍体率的分析研究。     

男性不育患者的细胞遗传学分析及荧光原位杂交分析

目的:探讨染色体异常与男性不育的关系.方法:采用外周血淋巴细胞培养方法制备染色体,G、C等显带技术进行细胞遗传学分析为主,部分47,XXY标本再行双色荧光原位杂交技术分析.结果:450例男性不育患者的染色体异常率高达20.7%,以性染色体异常为主.对其中细胞遗传学分析染色体核型为47,XXY的20例标本再行双色荧光原位杂交技术分析,结果19例为47,XXY,1例为47,XXY/46,XY嵌合体.结论:性染色体数目异常是男性不育患者的重要病因.双色FISH技术检测性染色体数目异常克氏综合征,快速、准确、识别嵌合体核型有明显优势,是常规细胞遗传学检测的必要补充,两种技术相结合更有利于性染色体异常患者的诊断.     

染色体荧光原位杂交快速产前诊断染色体数目异常

目的探讨产前诊断常见染色体数目异常的技术策略。方法 2010年4月-2012年8月来我院产科门诊进行产前诊断的孕妇,常规穿刺采集羊水或脐带血样本,同时采用常规的染色体核型和荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）方法进行检测,比较两种方法的产前诊断结果。结果染色体核型分析报告时间平均为4~5周,494例羊水或脐血样本中有2例分析失败;总染色体异常为8.74%（43/492）;数目异常占异常总数的81.40%（35/43）,结构异常占18.60%（8/43）。在数目异常中,21三体占74.29%（26/35）,18三体17.14%（6/35）,性染色体数目异常8.57%（3/35）。染色体荧光原位杂交报告时间平均为72~96 h;染色体数目异常为7.09%（35/494）,21三体占数目异常的74.29%（26/35）,18三体17.14%（6/35）,性染色体数目异常8.57%（3/35）,对于染色体数目异常的分析结果与核型分析结果一致。FISH未能检出染色体结构异常。结论针对常见的染色体数目异常（21三体、18三体、13三体、性染色体单体或三体）,FISH可直接进行产前诊断;FISH联合染色体核型分析是较全面了解染色体畸形的产前诊断技术策略。     

Y染色体无精子症因子缺失与男性不育的关系

目的探讨Y染色体无精子症因子(AZF)缺失与男性不育的关系。方法随机选取男科门诊不育症患者728例,其中正常精子密度46例,少精子症459例,严重少精子症93例,非梗阻性无精子症71例,梗阻性无精子症45例,射精功能障碍14例;另设正常对照组50名。应用PCR对Y染色体序列标准位点sY84、sY86、sY127、sY134、sY254及sY255进行检测。结果728例不育症患者中,AZF缺失共18例,缺失发生率为2.47%,与正常对照组(0%)比较有统计学差异(P=0.000)。其中严重少精子症8例(8.60%),非梗阻性无精子症10例(14.08%)。结论AZF缺失是男性不育症,特别是无精子症和严重少精子症发病的重要原因之一,其基因检测为男性不育的病因诊断、治疗及预后提供了一定依据。     

Y染色体无精子症因子缺失与男性不育的关系

目的 探讨Y染色体无精子症因子(AZF)缺失与男性不育的关系.方法 随机选取男科门诊不育症患者728例,其中正常精子密度46例,少精子症459例,严重少精子症93例,非梗阻性无精子症71例,梗阻性无精子症45例,射精功能障碍14例;另设正常对照组50名.应用PCR对Y染色体序列标准位点sY84、sY86、sY127、sY134、sY254及sY255进行检测.结果 728例不育症患者中,AZF缺失共18例,缺失发生率为2.47%,与正常对照组(0%)比较有统计学差异(P=0.000).其中严重少精子症8例(8.60%),非梗阻性无精子症10例(14.08%).结论 AZF缺失是男性不育症,特别是无精子症和严重少精子症发病的重要原因之一,其基因检测为男性不育的病因诊断、治疗及预后提供了一定依据.     

47,XYY综合征患者精子染色体的FISH研究

目的 分析47,XYY 综合征患者的精子染色体组成,评估其子代染色体异常的风险.方法 采用多色荧光原位杂交(FISH)技术,利用CSPX、Y、18 及GLP13、21 探针和精子核杂交,杂交信号归类计数,与对照进行统计学分析.结果 经χ2检验和Fisher精确概率检验,47,XYY 患者的精子常染色体异常数明显高于正常对照(P＜0.05),性染色体异常数与正常对照相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 47,XYY患者不增加其子代性染色体异常的风险,而常染色体发生次级不分离的风险却远高于对照.因此,通过应用FISH技术分析该类患者的精子染色体,可为评估其子代染色体异常风险提供客观的实验数据.     

精子形态与活力检测在不育症中的研究

目的探讨精子形态与活力检测在男性不育症中的临床研究和诊断意义。方法选取我院2010年3月～2011年3月84例不育症男性的精液作为观察组，对其进行精子形态和精液常规分析，同时选取同期84例正常男性精液样本作为对照组进行对比。分析两组患者精液的精子活力、正常精子和畸形精子所占比例。结果观察组84例患者中，精子活力不足、正常精子和畸形精子所占比例分别为54．76％（46／84）、29．76％（25／84）和70．23％（59／84）．与对照组相应的三组数据30．95％（26／84）、91．67％（77／84）和8．33％（7／84）比较，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论精子的形态和活力是男性精液质量的重要组成部分，是检测男性不育症的重要指标，对男性不育或者生育能力低下有着重要的参考价值，值得临床广泛应用。     

肥胖对男性不育症患者精液质量与精子DNA完整性的影响

目的探讨肥胖对男性不育症患者精液质量与精子DNA完整性的影响。方法选择2018年2月～2019年6月就诊于本院男科门诊的男性不育症患者93例;根据患者BMI值分组,18.5 kg/m~2≤BMI24 kg/m~2为正常体质组(n=50),年龄(32.60±3.95)岁,BMI(21.18±1.44)kg/m~2;BMI≥28 kg/m~2为肥胖体质组(n=43),年龄(32.23±5.03)岁,BMI(29.60±1.27)kg/m~2。比较两组患者精子浓度、精液量、精液pH值、PR值、NP值、正常精子百分率及DFI值。结果肥胖体质组与正常体质组精液量比较,采用独立样本t检验,差异无统计学意义(P=0.065,P0.05);精子浓度降低[(40.50±23.80)×10~6/mL,(53.27±35.47)×10~6/mL],差异有统计学意义(P=0.048,P 0.05);PR降低[(20.62±7.86)%,(24.76±9.04)%],差异有统计学意义(P=0.021,0.05);正常精子百分率比较差异无统计学意义(P=0.080,P0.05);DFI值升高[(19.21±6.68)%,(16.20±5.73)%],差异有统计学意义(P=0.022,P0.05)。经Mann-Whitney U检验,精液pH值降低[7.3(7.3,7.5),7.3(7.2,7.4)],差异有统计学意义(P=0.006,P0.01);NP值比较,差异无统计学意义(P=0.416,P0.05)。经Pearson相关性分析,患者的BMI值与精液量、精子浓度呈负相关(P0.05),与DFI值呈正相关(P0.05);精液量与PR呈正相关(P0.05);精子浓度值与PR呈显著负相关(P0.01);PR与正常精子百分率呈正相关(P0.05)。结论肥胖可降低男性精液质量,加重精子DNA损伤,是男性生育能力受损的危险因素。     

国产荧光原位杂交探针在产前染色体异常诊断中的应用研究

目的：探索国产13、18、21、X和Y染色体荧光原位杂交（FISH）探针在产前染色体疾病诊断中的应用价值。方法：收集妊娠17～32周产前检查先天缺陷高危孕妇的羊水标本85例,采用国产13／21、18／X／Y号染色体探针对间期羊水细胞进行FISH检测,同时与羊水细胞培养G显带核型分析对比。结果：所有探针杂交良好,背景暗、信号明显。核型分析的报告率为98．82％,国产FISH各探针的信号率为100％,与核型分析的一致性为100％,且假阴性率和假阳性率均为0％。从采集羊水标本至得到核型分析结果平均需（15±5）d。FISH发出报告的时间为24h内。羊水细胞培养成功的84例中,发现1例染色体结构异常,核型为46,XX,-4,-15,＋t（4;15）,＋mar,本例应用13、21、18、X和Y号染色体探针进行FISH检测未见异常。结论：国产染色体荧光原位杂交（FISH）探针具有较高的细胞遗传学的检测效率,可以与核型分析相结合用于染色体病的诊断及产前诊断。     

荧光原位杂交对197例慢性淋巴细胞白血病的诊断

目的 探讨荧光原位杂交技术(FISH)在慢性淋巴细胞白血病(CLL)诊断与预后评估中的应用,指导CLL患者的精准个体化诊疗。 方法 对2014年1月至2021年1月收治的197例CLL患者采用 RB1(13q14.1)、D13S25(13q14.3)、p53(17p13.1)、ATM(11q22.3)及CSP12(+12)5组基因探针进行FISH检测,对其中62例进行染色体核型分析、75例进行免疫球蛋白重链可变区(IGHV)突变状态检测,分析FISH检测细胞遗传学改变在CLL中的临床意义。 结果 197例初诊CLL患者分子遗传学标志物异常总检出率为56.4%(111/197),其中D13S25(13q14.3)占63.1%(70/111)、RB1(13q14.1)占43.2%(48/111)、p53(17p13.1)占29.7%(33/111)、ATM(11q22.3)占22.5%(25/111)、CSP12(+12)占13.5%(15/111)。同时伴有2种染色体异常患者占34.2%(38/111),其中RB1与D13S25双阳性患者占25.2%(28/111)。同时伴有3种及3种以上染色体异常患者占16.2%(18/111)。相比于CLL患者的染色体核型分析结果,FISH 检测阳性率相对较高(P<0.001)。另外,FISH检测结果与CLL国际预后指数(CLL-IPI)有关。FISH检测阳性CLL患者中CLL-IPI评分为高危/极高危的比例高于FISH检测阴性患者(P=0.009)。FISH-p53阳性CLL患者的CLL-IPI评分均为高危/极高危(P<0.001)。FISH阳性患者中IGHV基因突变者占78%,未突变者占22%。 结论 FISH技术是一种敏感的CLL分子遗传学检测手段,对CLL患者的预后评估和治疗均有重要的指导意义。     

荧光原位杂交技术在尿路上皮肿瘤诊断中的临床应用

目的探讨通过荧光原位杂交检测3、7和17号染色体及p16位点异常在预测尿路上皮肿瘤的临床应用价值。方法收集尿路上皮肿瘤患者和健康成人作正常对照组尿液,同时行尿脱落细胞学及FISH检测3、7、17号染色体及p16位点异常。采用正常对照组各染色体异常数据设定阈值用于肿瘤患者的实验室诊断。分别计算FISH和尿脱落细胞对尿路上皮肿瘤诊断的敏感度和特异度。分析各染色体畸变与尿路上皮肿瘤病理分级的关系。结果 1尿脱落细胞学检查的肿瘤阳性检出率为11.5%,FISH为97.1%,两者差异有统计学意义(P<0.01)2各染色体及区带均呈现较高的畸变发生率,其中多体畸变发生率由高到低依次为82.6%(7号)、71.7%(17号)、66.6%(3号)和49.2%(p16位点),单体畸变发生率由高到低依次为53.6%(p16位点)、36.9%(7号)、34.7%(3号)和28.9%(17号),单体缺失畸变p16位点17.3%。37号染色体的多体畸变与肿瘤的病理分级间呈正相关(r=18.632,P<0.001),其余三种染色体畸变与肿瘤的病理分级无相关性。结论对尿路上皮肿瘤患者进行FISH检侧是一种无创、有效的检测方法。尿路上皮肿瘤在3、7和17号染色体及p16位点同时存在多种畸变类型,7号染色体多体畸变可预测尿路上皮肿瘤的进展。     

Y染色体微缺失与男性不育相关

目的：探讨Y染色体微缺失原因不明性无精症、少精症所致男性不育的相关性。方法；特发性少精症18例、特发性严重少精症12例，特发性无精症5例及正常已生育健康男性10例作为研究对象和正常对照，应用多重PCR技术，对精液基因组DNA进入Y染色体上连续的18个序列标记位点检测。结果：少精症18例中发现Y染色体微缺失2例，严重少精症12例中发现Y染色体微缺失3例，无精症5例和正常已生育男性10例均末发现Y染色体微缺失，缺失形式3种。结论：Y染色体微缺失与精子发生障碍相关。     

男性不育患者精液质量指标和精浆电解质浓度的测定与分析

目的探讨男性不育患者精液质量指标以及精浆电解质的变化。方法所有病例均选自男科门诊。分为：（1）延迟液化组（B组）20例;（2）少精子组（C组）34例;（3）无精子组（D组）15例;选择正常生育健康志愿者对照组（A组）17例。分别测定各组精液质量指标和精浆中钾、钠、钙、氯等离子浓度。结果延迟液化组和少精子组在精子密度、精子计数精子活动度及精子活动性低于正常生育组;各组精浆电解质K^＋、Na^＋、Ca^2＋、Cl^-浓度比较,差异有统计学意义。结论男性不育患者与健康正常组相比,精液质量指标有显著变化,精浆K^＋、Na^＋、Ca^2＋、Cl^-差异有统计学意义。     

荧光原位杂交技术的应用

荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization, FISH））技术是一门新兴的分子细胞遗传学技术,在疾病诊断中发挥了重要作用。本文主要对FISH技术的原理特点以及临床应用作一综述。