荧光定量PCR检测结核分枝杆菌

目的比较荧光定量PCR与抗酸染色、结核抗体检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,评价荧光定量PCR检测临床标本中结核杆菌的应用价值。方法对48例临床确诊的结核病患者和21例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用荧光定量PCR法和痰涂片抗酸染色法检测,并分离患者外周血血清检测结核抗体,对3种检测方法的结果进行分析比较。结果抗酸染色法检测结核杆菌阳性率为22.9%,特异性为100%;血清结核抗体检测阳性率为77.1%特异性为85.7%;荧光定量PCR检测阳性率为52.1%,特异性为100%。结论荧光定量PCR是一种快速、防污染、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法的建立与应用

目的建立结核分枝杆菌的荧光定量PCR检测方法，探讨荧光PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法根据结核分枝杆菌基因保守序列设计引物和探针，并构建标准品。对102例培养涂阳的结核痰液标本和45例非结核感染者的痰标本，应用荧光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌。结果荧光定量PCR、抗酸染色法检测结核分枝杆菌的特异性分别为100％、30％。结论荧光定量PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法，具有重要的应用价值。     

荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用

目的 探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)在结核分枝杆菌检测中的价值.方法 收集患者痰液、灌洗液、胸水和尿液等标本,分别作涂片检测(萋纳染色和荧光染色)和FQ-PCR检测,比较两者的阳性率.结果 169例标本中,萋纳染色阳性共7例(4.1%),38例疑似标本中荧光染色阳性共15例,FQ-PCR检测结核分枝杆菌 DNA阳性共17例(10.1%),FQ-PCR与荧光染色符合率为88.2%.结论 涂片检查结核分枝杆菌阳性率较低,FQ-PCR法检测结核分枝杆菌 DNA阳性率高于涂片法,可列入结核分枝杆菌实验诊断的常规项目.     

荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用

目的探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)在结核分枝杆菌检测中的价值。方法收集患者痰液、灌洗液、胸水和尿液等标本,分别作涂片检测(萋纳染色和荧光染色)和FQ-PCR检测,比较两者的阳性率。结果169例标本中,萋纳染色阳性共7例(4.1%),38例疑似标本中荧光染色阳性共15例,FQ-PCR检测结核分枝杆菌DNA阳性共17例(10.1%),FQ-PCR与荧光染色符合率为88.2%。结论涂片检查结核分枝杆菌阳性率较低,FQ-PCR法检测结核分枝杆菌DNA阳性率高于涂片法,可列入结核分枝杆菌实验诊断的常规项目。     

荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用

目的探讨荧光定量PCR（FQ-PCR）技术在结核分枝杆菌检测中的应用价值。方法采用荧光定量PCR、抗酸染色和改良罗氏培养三种方法同时检测156例结核患者标本,对检测结果进行比较。结果荧光定量PCR、抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为50%、25.64%、33.33%,以荧光定量PCR检测的阳性率最高。结论荧光定量PCR方法检测结核分枝杆菌具有灵敏度高、简便、快速的特点,可作为结核病诊断的常规方法,在临床上有重要应用价值。     

检测结核分枝杆菌的五种方法的比较

目的:对临床常用的5种检测结核分枝杆菌的方法进行比较。方法:用抗酸染色法、荧光染色法、分离培养法、PCR(聚合酶链式反应)法和结核抗体法检测93例确诊结核病人,并进行相关统计学分析。结果:5种方法检测93例确诊结核病人的阳性数分别为2 9、35、4 1、70、6 0。结论:抗酸染色法阳性率最低而PCR法阳性率最高。     

荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌的价值

目的分析使用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测结核分支杆菌的应用价值。方法收集首都医科大学附属北京同仁医院临床各科室各类结核病或疑似结核病患者检测标本178例,使用FQ-PCR法进行结核分枝杆菌脱氧核糖核酸检测,标本同时进行抗酸染色显微镜下观察。结果 FQ-PCR法和抗酸染色涂片法对不同来源标本检测结核分枝杆菌的结果存在较好的一致性(Kappa=0.615,P<0.01)。使用FQ-PCR法检测结核分枝杆菌的阳性检出率为12.9%,抗酸染色涂片法的阳性检出率为6.2%,二者比较差别有统计学意义(χ2=4.682,P<0.05)。结论 FQ-PCR法检测标本中的结核分枝杆菌的灵敏度高于传统的抗酸染色涂片法,可作为结核病病原学诊断的优先方法。     

结核分枝杆菌自身淬灭探针荧光定量PCR检测方法的建立

目的利用自身淬灭探针技术建立敏感、特异、快速、价廉且能广泛应用的结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒PET-32a（＋）-16srRNA作为标准品,自行设计自身淬灭探针,建立、优化定量PCR体系。并进行方法学评价及临床应用。结果所建立方法的线性检测范围为102～109copies／μL,灵敏度为lcopy／μL,特异性为100％。高拷贝样品的天问CV为2．65％、批内CV为1．86％,低拷贝样品的天间CV为2．12％、批内CV为0．78％。该方法比培养方法更快速、灵敏。结论以自身淬灭探针技术为平台的结核分枝杆菌荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,对结核病的早期快速诊断有较高价值。     

荧光定量PCR对结核分枝杆菌DNA的检测分析

目的探讨宁夏某医院患者结核分枝杆菌(TB)DNA检测的临床应用价值。方法用荧光定量PCR技术对754例结核疑似患者进行TB的DNA检测,比较不同标本类型、不同年份、不同性别感染情况。结果 TB总阳性率为7.82%,尿液和痰液阳性率较高,分别为19.44%和15.58%;男性和女性阳性率分别为7.69%和7.98%;51岁年龄组人群TB病原体感染者所占比例最高(30.51%);2009、2010和2011年阳性检出率分别为10.81%、10.00%和5.15%。结论 2011年TB的DNA感染率明显降低。     

分子信标荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌方法建立及其临床应用

目的 建立结核分枝杆菌的分子信标荧光定量PCR检测方法 ,探讨该方法 检测结核分枝杆菌的临床应用价值.方法 针对结核分枝杆菌Ag85B DNA特异保守序列设计引物和分子信标探针,并构建标准品.采用分子信标荧光定量PCR法、抗酸染色法、集菌培养法检测158例肺结核患者痰液标本,比较3种方法 的检出率.结果 所建立方法 最低检测限度为2个基因拷贝/反应,在2×10~2～2×10~8基因拷贝/mL范围内,Ct值同DNA量的对数呈线性关系.该方法 检测5株非分枝杆菌和6株非结核分枝杆菌结果 均为阴性,检测结核分枝杆菌H37Rv出现75 bp特异条带.分子信标荧光定量PCR法、抗酸染色法、集菌培养法阳性检出率分别为60.13%、16.46%、31.01%,荧光定量PCR法检出率明显高于抗酸染色法和集菌培养法.结论 分子信标荧光定量PCR法具有较高的灵敏度和特异度,对结核病的诊断有一定的临床意义.     

三种结核检测方法临床应用评价

目的评价目前三种检测手段在结核病临床诊断中的应用价值。方法对确诊的280例结核病人进行痰涂片抗酸染色和两种结核抗体检测,并进行比较分析。结果 280例结核病人三种方法联合检测的阳性率为82.85%(232/280)。痰涂片抗酸染色的阳性率为40.00%(112/280),胶体金法(TB-DOT)阳性检出率为74.64%(209/280),免疫层析法(TB-CHECK-1)阳性检出率为50.71%(142/280)。痰涂片抗酸染色的阳性率与TB-DOT、TB-CHECK-1比较,差异均有统计学意义(P<0.05),两种结核抗体检测方法的阳性检出率更高。而TB-DOT和TB-CHECK-1两种方法的阳性率比较差异亦有统计学意义(P<0.05),TB-DOT的阳性检出率更高。结论三种方法联合用于临床结核病检测,可以将痰涂片抗酸染色的阳性率提高1倍。TB-DOT的检测灵敏度最高。     

结核病实验室3种快速检测方法的评价

用聚合酶链反应技术建立的扩增结核杆菌复合体特异重复序列ＩＳ９８６基因的方法和用单克隆抗体ＴＢ１５－Ｃ３经酶联免疫吸附测定夹心法检测结核杆菌特异性抗原决定簇，以及用抗酸染色的方法，对１０种抗酸杆菌，２种非分枝杆菌进行检测。     

结核杆菌快速诊断方法的临床应用评价

目的　探讨抗酸染色法、抗体测定法、PCR 杂交法在临床结核病快速诊断中的作用与地位。方法　采用单盲法 ,以临床诊断为黄金标准 ,以敏感性、特异性、阳性预测性、阴性预测性和准确性作为评价指标 ,对上述三种方法用于临床结核的快速诊断进行评价。结果　结核病组 6 5例病人的临床样品 ,抗酸染色法阳性 9例 ,抗体测定法阳性 47例 ,PCR 杂交法阳性 5 3例 ;非结核病组 80例病人的临床样品 ,抗酸染色全部阴性 ,抗体测定法阴性 73例 ,PCR 杂交法阴性 71例。上述五项评价指标 ,抗酸染色法依次是 13 .85 %、10 0 %、10 0 %、5 8.82 %、6 1.38% ,抗体测定法依次是 72 .31%、91.2 5 %、87.0 4%、80 .2 2 %、82 .76 % ;PCR 杂交法依次是81.5 4%、88.75 %、85 .48%、85 .5 4%和 85 .5 2 %。经 χ2 检验 ,上述 5项指标抗体测定法和PCR 杂交法均显著高于抗酸染色法 (P <0 .0 1) ,但抗体测定法和PCR 杂法之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　抗体测定法和PCR 杂交法方法先进 ,操作简便迅速 ,不需特殊设备 ,结果可靠 ,是值得推广的临床结核病快速诊断技术。文中对假阴性和假阳性结果也进行了分析讨论。     

荧光定量PCR法在结核杆菌检测中的价值

目的探讨荧光定量PCR法检测技术在结核病诊断中的价值。方法采用荧光定量PCR法和抗酸染色法同时检测231例结核患者体液标本(121例痰标本、67例胸腹水及43例尿液标本),对检测结果进行比较。结果荧光定量PCR法的检测灵敏度为102Copy/ml,是抗酸染色法方法检测灵敏度100倍,且对除结核杆菌外的其他呼吸道病原体检测结果均为阴性。本研究痰标本、胸腹水标本及尿液标本的荧光定量PCR法阳性率均要高于抗酸染色法阳性率,比较差异均有显著性(﹤0.01)。结论荧光定量PCR方法检测结核杆菌具有特异性强、灵敏度高、简便、快速的特点,明显优于抗酸染色法,可作为结核病诊断的常规方法。     

PCR反向膜杂交技术检测临床标本中结核分支杆菌的临床意义

目的探讨聚合酶链反应(PCR)反向膜杂交技术检测临床标本中结核分支杆菌(TB)DNA的价值.方法用PCR反向膜杂交技术检测522例结核及60例非结核患者临床标本中的TB-DNA,同时用培养、抗酸染色涂片及常规PCR法作对照.结果PCR反向膜杂交法阳性率为80.6%(556/690),培养为18.1%(125/690),镜检为13.9%(96/690),常规PCR为59.6%(411/690),PCR反向膜杂交法与常规法比较(P＜0.001),差异具显著意义.PCR反向膜杂交法阳性检出率高于常规PCR,差异具显著意义(P＜0.001);该技术假阳性为零.结论PCR反向膜杂交技术检测临床标本中TB-DNA具有快速、高度特异性和敏感性,可为结核病的临床早期诊断提供一种新的病原学诊断手段.     

458份痰抗酸染色涂片和结核杆菌快速培养的结果比较

目的：评价痰抗酸染色和快速结核菌培养检测结核分枝杆菌的临床诊断价值,分析两种方法的优缺点.方法：对458份痰标本同时采用抗酸染色涂片法和快速结核菌培养法进行检测,并对其阳性率进行比较.结果：458例痰标本抗酸染色阳性160例,阳性率34.9％;结核菌培养阳性223例,阳性率48.7％;其中痰抗酸染色涂片与结核菌培养均阳性150例,阳性率32.8％;痰抗酸染色涂片阳性,结核菌培养阴性10例,阳性率2.2％;痰抗酸染色涂片阴性,结核菌培养阳性73例,阳性率15.9％;痰抗酸染色涂片与结核菌培养均阴性225例.结论：痰快速结核菌培养阳性率高于抗酸染色涂片,但不能过分依赖仪器,应对可疑标本做好涂片验证.抗酸染色报告时间短,价格低廉,两种方法在结核病的诊断中相互弥补,缺一不可.     

两种结核分枝杆菌感染检测试剂盒性能的评估

目的评估两种γ干扰素(IFN-γ)释放试验(IGRA)检测结核分枝杆菌(MTB)感染试剂盒的临床检验性能。方法共检测105份临床血液标本(结核组61份,非结核性肺部疾病组31份,健康对照组13份),其中两种试剂对比检测82份(结核组43份,非结核性肺部疾病组26份,健康对照组13份),以澳大利亚Cellestis公司的QuantiFERON-TB Gold产品为参比试剂,评估考核试剂对感染判定的准确性;并对结核组与健康对照组的IFN-γ释放水平进行分析,初步探讨结核患者的基础免疫状况。结果参比试剂对诊断结核感染的敏感性为81.39%(35/43),特异性为76.92%(30/39),阳性预测值为79.55%(35/44),阴性预测值为78.95%(30/38),诊断有效性为79.27%(65/82);考核试剂对结核感染诊断的敏感性为73.77%(45/61),特异性为84.09%(37/44),阳性预测值为86.54%(45/52),阴性预测值为69.81%(37/53),诊断有效性为78.09%(82/105),两种试剂的检测结果有86.56%的一致率(Kappa=0.734);结核组IFN-γ的释放水平显...     

荧光定量PCR在结核分枝杆菌快速诊断中的研究

目的 在痰液标本中,探讨荧光定量PCR技术快速检测结核分枝杆菌应用的诊断价值。方法 选取210例初诊的疑似结核病患者的痰液标本,分别进行痰涂片、MGIT960液体培养以及荧光定量PCR的检测,其中103例标本还进行了Xpert MTB/RIF检测,通过比较来分析荧光定量PCR在检测结核分枝杆菌方面的敏感度和特异性。结果 荧光定量PCR方法从痰液中检出结核分枝杆菌的阳性率高达28%,显著高于痰涂片15.2%的检出率,并且与结核培养的30.9%检出率相接近。以MGIT960液体培养为金标准,荧光定量PCR方法检测痰液标本中的结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为67.7%、 89.7%,阳性预测值和阴性预测值分别为74.6%和86.1%,两者之间差异没有统计学意义。将荧光定量PCR方法与Xpert MTB/RIF诊断方法相比较,分析发现荧光定量PCR方法的敏感度和特异度分别为85.9%、94.9%,阳性预测值和阴性预测值分别为96.5%和80.4%,两者之间差异没有统计学意义。结论 荧光定量PCR方法在检测结核分枝杆菌时具有较好的敏感度和特异度,效果优于传统的痰涂片方法,并且与Xpert MTB/RIF方法具有较好的一致性。荧光定量PCR检测成本较低,且结果准确,在快速检测结核菌方面具有比较好的应用前景。