荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床意义

乙型肝炎病毒（HBV）引起的传染病称为乙型肝炎.我国是乙型肝炎高发国家,人群累计感染率〉10%[1].HBV血清标志物检测是常用的方法之一,而酶联免疫吸附试验（ELISA）只能提供阴、阳性判断结果,不能提供病毒的具体载量.而对HBV-DNA进行定量检测能直接了解HBV在体内的复制情况及传染性程度,并能对治疗效果、耐药性及是否复发进行动态监测.笔者对538份血清标本的HBV-DNA检测结果与其HBV血清标志物检测结果进行了对比分析,现报道如下.     

鼻咽癌放疗过程中血浆EBV DNA水平的动力学研究

目的探讨过程中鼻咽癌患者外周血EBVDNA水平的动态变化规律及与临床疗效的关系。方法运用荧光定量PCR技术动态检测22例鼻咽癌患者放疗期间血浆EBVDNA水平，放疗期间每周第1d检测1次；临床观察放疗过程中鼻咽部肿瘤消退情况与外周血EBVDNA水平变化的关系。结果放疗完成2周时。血浆EBVDNA阳性率及拷贝数较前显著下降，其余各周之间阳性率及拷贝数均无明显差异。放疗过程中血浆EBVDNA水平变化表现为三种动力学曲线形式。每周临床观察鼻咽肿块消退情况发现：随着放疗剂量增加。鼻咽肿块逐渐缩小，血浆EBVDNA水平逐渐下降。结论放疗过程中血浆EBVDNA水平变化与鼻咽癌患者临床疗效关系密切。值得进一步研究。     

EBV—DNA定量检测对鼻咽癌的诊断

目的通过对鼻咽癌患者经治疗后EBV—DNA含量变化的观察,为临床诊治陔病寻求最佳方法。方法血浆EBV—DNA检测采用荧光定量PCR法,选择确诊的145例鼻咽癌患者为研究对象,对其EBV-DNA进行定量检测,并以同期健康者140名的血浆情况进行对比研究。结果鼻咽癌组中有136例（93．79％）患者血浆EBV—DNA呈阳性：健康组中有10例（7．14％）血浆EBV—DNA呈阳性,鼻咽癌组患者出浆EBV—DNA阳性检出率明显高出健康组（P〈0．01）;血浆EBV-DNA呈阳性的患者在治疗过程中,血浆EBY—DNA含量呈逐渐下降趋势。结论给予鼻咽癌患者EBV—DNA定量检测,对诊断和指导治疗价值明显。     

DNA提取后24h对荧光定量PCR检测HBV—DNA的影响

目的目前国内较多的医院采用荧光定量的方法对血清中的HBV-DNA进行定量检测。而在HBV-DNA检测过程中因多种因素的影响,需要HBV-DNA提取后存放一定时间再进行检测。该文旨在评价标本DNA提取后存放24h对荧光定量PCR检测HBV-DNA的影响。方法收集我院首诊和慢性肝炎血清标本15例。将此15例标本各取部分血清进行DNA提取后4℃保存24h为实验组;此15例标本剩余血清4℃保存于次日实验当天进行DNA提取为对照组,采用实时荧光定量PCR技术两组同时上机进行HBV-DNA的检测。结果对实验组与对照组检测结果进行配对t检验,DNA当天提取组结果为（4.07±1.68）1U/ml,DNA提取后存放24h组结果为（4.13±1.75）1U/ml。t=0.692,P=0.263。两组定量检测HBVDNA结果无显著性差别。结论标本DNA提取后存放24h对荧光定量PCR检测HBV-DNA的定量结果无影响,提示可定期成批检测HBV-DNA,更科学有效地使用实验室的人力、物力资源和更有利于为患者服务。     

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的研究

目的用荧光定量PCR对HBV-DNA载量进行实验性研究。方法扩增含有3个乙肝病毒基因组pBR322质粒中的乙肝病毒目的序列,并通过AT亚克隆至pBS-T载体中。经过筛选、鉴定及测序验证保证相对更高的拷贝数。对3个保守序列进行了常规PCR退火温度的优化和灵敏度的检测,建立荧光定量PCR反应体系从而制备标准曲线。结果曲线相关系数为99.5%,具有较高的可信度。负相关范围在5×10^3-5×10^9copies/μl。不论是批内还是批间其变异系数值均小于5%。结论荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA可以灵敏度好,准确度高,应加大研究降低成本应用于检验应用。     

探讨实时荧光定量PCR在乙型肝炎病毒DNA定量检测中应用价值

目的:探讨实时荧光定量PCR在乙型肝炎病毒DNA定量检测中应用价值。方法:选择2021年4月至2023年4月我院收治的120例疑似慢性乙型病毒性肝炎患者为研究对象,分别采用实时荧光定量PCR与酶联免疫吸附法(ELISA)对所有患者HBV-DNA含量进行检测。以试纸法检测结果为标准,比较实时荧光定量PCR、ELISA检测结果的一致性;比较实时荧光定量PCR、ELISA对慢性乙型肝炎的诊断效能;比较不同HBV感染状态下HBV-DNA含量的差异。结果:120例疑似慢性乙型肝炎患者经试纸法检查确诊为慢性乙型肝炎107例。Kappa检验分析结果显示,实时荧光定量PCR检查结果与试纸法检查结果具有高度的一致性(Kappa值=0.897,P<0.05)。实时荧光定量PCR对慢性乙型肝炎的诊断灵敏度、特异性与准确率均高于ELISA(P<0.05)。大三阳HBV-DNA含量均高于小三阳与急慢性感染期(P<0.05);小三阳HBV-DNA含量与急慢性感染期比较无明显差异(P>0.05)。结论:实时荧光定量PCR在慢性乙型肝炎诊断中的应用价值较高,不但能完成疾病的准确诊断,还能通过对...     

实时荧光定量PCR法检测门冬氨酸鸟氨酸原料药中毕赤酵母菌DNA残留量

目的 建立可定量检测门冬氨酸鸟氨酸原料药中毕赤酵母菌DNA残留量的实时荧光定量PCR方法。方法 采用宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒（磁珠法）提取毕赤酵母菌DNA,利用毕赤酵母残留DNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法）进行扩增反应,绘制标准曲线,建立毕赤酵母菌DNA残留量的Real-time PCR检测方法,并验证其准确性和精密性。结果 毕赤酵母菌DNA质量浓度在0.03~300 pg·μL^-1内线性良好（r>0.99）,定量限为0.03 pg·μL^-1;应用该法对3批门冬氨酸鸟氨酸原料药进行测定,毕赤酵母菌DNA残留量均远低于每剂10 ng。结论 该方法可用于门冬氨酸鸟氨酸原料药中毕赤酵母菌DNA残留量的定量测定。     

荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染者免疫学检测与HBV-DNA的关系,为合理治疗乙肝患者提供准确的依据。方法采用荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒进行研究。结果在HBV-DNA阳性的血清标本中,HBcAb阳性率为94.0%;在HBV-DNA阴性但HBsAg阳性标本中,HBcAb阳性率为94.7%。结论定量PCR可真实反映HBV感染、复制及病程变化,对乙型肝炎的诊断及治疗均有一定的临床意义。     

实时荧光定量PCR检测乙型肝炎血清DNA的临床观察

目的:探讨乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒DNA定量与乙型肝炎标志物关系.方法:采用荧光探针杂交技术为基础的实时荧光定量PCR检测259例乙型肝炎患者血清中DNA含量,与HBV标志物作对比分析.结果:血清HBeAg阳性组HBV-DNA阳性率为98.6%,HBeAb组阳性率为61.5%;HBeAg组阳性率含量明显高于HBeAb阳性组.结论:实时荧光定量PCR检测具有较高的灵敏度和特异性,定量准确、结果可靠,为临床了解病毒复制情况,制定治疗方案及疗效观察提供了确切依据.     

荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌DNA的应用价值

目的探讨荧光定量PCR技术在痰结核分枝杆菌检测中的应用价值。方法对289例结核病住院患者的同一份痰标本,分别采取荧光定量PCR、抗酸菌涂片染色和改良罗氏培养三种方法进行检测,对结果进行比较。结果荧光定量PCR、抗酸菌涂片染色和改良罗氏培养检测痰中结核分枝杆菌的阳性率分别为72.66%、28.37%、48.10%,荧光定量PCR检测的阳性率最高。结论荧光定量PCR方法检测痰中结核分枝杆菌具有灵敏度高、操作简便、快速的特点,可作为结核病的常规诊断方法,在临床上有重要的应用价值。     

传染性单核细胞增多症患儿EBV-DNA检测及其意义

目的 探讨应用PCR技术检测EB病毒DNA(EBV-DNA)的临床应用价值.方法 应用PCR和荧光检测技术检测外周血EBV-DNA,对100例阳性病例的临床特点进行回顾性分析.结果:病例年龄1个月至12岁,中位年龄3岁,＜3岁65例,3～7岁25例,＞7岁10例;传染性单核细胞增多症(IM)组EBV-DNA的阳性率为84.0%(84/100),对照组阳性率为5.0%(2/40),差异有统计学意义(P＜0.01);IM患儿早期EBV的含量[(75.52±175.11)×103 copies/ml],明显高于恢复期EBV的含量[(0.67±2.27)×103 copies/ml](P＜0.01).结论 PCR法检测EBV-DNA时间短,准确性好,灵敏度高,在EB病毒感染相关疾病诊断中有一定价值.     

荧光定量PCR法在检测246例小儿巨细胞病毒感染中的应用

目的：探讨FQ-PCR在诊断小儿巨细胞病毒感染的临床应用价值。方法：分别应用血清抗体检测和荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）的方法对患者进行血液和尿液病毒的检测,并对确诊的患者进行母乳CMV病毒的检测。结果：在怀疑为活动性CMV感染的169例患儿中,PCR法的阳性检出率为75.1%,血清IgM法为52.1%,两种方法的阳性符合率为86.4%;18例尿液CMV-DNA阳性的患者查出母亲乳汁中CMV-DNA,含量为1.7×10～4.5×103copies/mL。结论：FQ-PCR可以准确检测患儿体液及血液中的CMV含量,提示体内复制情况,对于临床的诊断和治疗有一定的指导意义。     

利用多重荧光定量PCR检测阿胶原料驴、马、驴骡和马骡皮张的源性

目的 建立快速检测阿胶原料皮张源性的方法.方法 根据马、驴、驴骡和马骡的核基因肌酸激酶CKM和线粒体基因组DNA(mtDNA)的16S rRNA基因序列设计特异,并引入18S rDNA作为内参质控,建立能检测4种动物源性的5重多色荧光定量PCR检测体系.结果 本研究开发的引物和分子信标探针的特异性强,能同时区分同源性相近的驴、马、驴骡和马骡源性;灵敏度高,检测限为0.01 ng·μL-1.通过对某阿胶制品公司收购的驴皮源性检测,检测结果与DNA测序一致率达100％.结论 本方法在一管PCR反应中能同时检测4种动物源性,更简单、准确和高效,为驴皮、马皮及骡子皮张的源性鉴定探索了新的途径.     

恶性肿瘤干细胞标记物CD44在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的研究恶性肿瘤干细胞标记物CD44在鼻咽癌组织中的表达及与放、化疗疗效之间的关系。方法通过纤维鼻咽镜取30例鼻咽癌组织和10例声带息肉,通过Trizol法提取总RNA后,进行逆转录,SYBR方法进行实时荧光定量PCR反应检测各组织中CD44的表达,对20例初治鼻咽癌病人予诱导化疗加同步放、化疗治疗。结果鼻咽癌组织和声带息肉组织中均表达CD44;鼻咽癌组织CD44表达均高于声带息肉组织;CD44在鼻咽癌组织和声带息肉组织中表达具有明显差异(P<0.05)。鼻咽癌组织CD44表达与N分期的关系有明显差异(P<0.05);CD44表达和T分期、病理类型、性别、年龄、及近期疗效间的关系均无明显差异(P>0.05)。结论鼻咽癌肿瘤组织中有CD44表达,且高于声带息肉组织;CD44的表达与N分期相关;还需扩大病例数,进一步研究加以证明。     

定量PCR法和DNA杂交法检测聚乙二醇修饰尿酸酶原液中DNA残留量的比较

目的 建立快速准确的聚乙二醇修饰重组尿酸酶(PEGylated uricase,PEG-UHC)原液DNA残留量测定法,为其他多位点PEG修饰蛋白药物的DNA残留量检测提供参考。方法 参照中国药典2020年版三部“外源性DNA残留量检测法”第一法DNA探针杂交法和第三法定量PCR法,检测PEG-UHC原液DNA残留量;对定量PCR法进行检测限度、线性范围、准确度和精密度等方法学验证;进行3批次PEG-UHC原液DNA残留量测定。结果 探针杂交法DNA残留量测定线性范围为1×10^-4~0.1 ng·µL^-1,3批次PEG-UHC原液未见明显显色,DNA残留量均低于每剂10 ng。PCR法检测限度为1×10^-5 ng·µL^-1,DNA浓度在1×10^-4~100 ng·µL^-1内线性关系良好(R²=0.999)。不同浓度的标准DNA在PEG-UHC原液中的回收率范围为92.57%~114.17%,表明PEG偶联物对定量PCR影响较小。3批次PEG-UHC原液中DNA残留量分别为每剂0.143,0.187,0.154 ng,符合国家药品监督管理局限量要求。结论 DNA探针杂交法为传统定性检测,耗时较长,准确度较低。定量PCR法操作简便快速、灵敏度高,且可定量分析,适于PEG-UHC等多位点PEG修饰蛋白药物DNA残留量测定。     

实时荧光PCR在人乳头瘤病毒临床检测中的应用

目的分析和探讨实时荧光PCR技术在人乳头瘤病毒（HPV）中的检测价值。方法随机选取2010年10月～2011年10月于本院妇产科接受诊治的人乳头瘤病毒感染患者102例,分别使用第二代杂交捕获法（HCⅡ）和实时荧光PCR对102例患者的标本进行检测,结合患者的病理资料对两种检测方法的结果进行比较分析。结果病理资料显示本组病例中宫颈上皮内瘤变（CIN）的有38例,慢性宫颈炎和鳞状上皮病变的36例,HC1I和实时荧光PCR对CIN的HPV阳性检出率分别为86．84％和94．74％,对慢性宫颈炎和鳞状上皮病变的阳性检出率分别为36．11％和58．33％：HCⅡ的HPV总阳性检出率为62．75％,实时荧光PCR为71．57％,两组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）,两种方法的总符合率为82．35％;两种手段在高危型宫颈病变的检测具有较好的相关性,实时荧光PCR的灵敏性和特异性要略好于HCⅡ。结论实时荧光PCR和第二代杂交捕获法是临床上检测人乳头瘤病毒的有效方法,实时荧光PCR具有较好的灵敏性和特异性,为宫颈类疾病的早发现和治疗提供可靠的依据。     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA及其与血清标志物的关系探讨

目的　用荧光定量聚合酶链反应 (fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ- PCR)方法定量检测血清中乙型肝炎病毒 (hepatitis B virus,HBV)的数量及探讨其与 HBV标志物 (HBV M)表现模式的关系 ,以指导临床。方法　共 2 4 4份临床血清标本 ,HBV DNA定量采用荧光定量 PCR分析系统 ,HBV M采用 EL ISA法。结果　经 FQ- PCR检测 ,99例 HBs Ag(+) / HBe Ag(+) / HBc Ab(+)的标本 ,其血清标本 HBV DNA亦全部阳性 ,平均 HBV DNA拷贝数为 1.82× 10 7copies/ ml;96例 HBs Ag (+) / HBe Ab (+) / HBc Ab (+)的标本 ,其 HBV DNA检出率为 6 6 .7% (6 4例 ) ,平均拷贝数为 1.82× 10 4 copies/ m l;11例 HBs Ag (+) / HBc Ab (+)的标本其 HBV DNA检出率为 6 3.6 % (7例 ) ,平均拷贝数为 7.94× 10 4 copies/ ml。结论　血清 HBV DNA水平与 HBV M表现模式有关 ,HBs Ag (+) / HBe Ag (+) / HBc Ab (+)的标本 HBV DHA值显著高于 HBs Ag (+) / HBe Ab (+) / HBc Ab (+)的标本和 HBs Ag (+) / HBc Ab (+)的标本 ,提示 HBs Ag与 HBe Ag的存在影响 HBV DNA水平。 FQ- PCR能实现准确定量 ,可以检测 HBV的真实感染和复制情况 ,对于乙型肝炎的临床诊断、治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义     

食管癌、贲门癌和胃癌DNA倍体分析及其临床意义

目的 探讨食管癌、贲门癌和胃癌患者DNA倍体的临床应用价值。方法 应用流式细胞术测定100例上消化道恶性肿瘤患者癌细胞DNA含量，并进行DNA倍体和细胞周期各时相比例的分析。结果 食管癌、贲门癌和胃癌患者的异倍体率分别为33．3％、60．0％及73．7％；S期增高率分别为36．7％、70．0％及83．6％。腺癌明显高于鳞癌（P〈0．05），随病理分级的增高，异倍体率及S期异常率也呈增高趋势。结论 三种恶性肿瘤患者DNA倍体的分析，有助于了解肿瘤细胞的增殖情况及恶性程度，可为临床治疗和判断预后提供参考依据。