三七对大鼠肺组织内CYP和GST基因表达的影响

目的:研究三七对大鼠肺组织内细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)和谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-trans-ferase,GST)基因表达的影响.方法:雄性SD大鼠,三七2,4 g·kg~(-1),每日1次连续灌胃14 d,用逆转录-实时定量PCR法检测肺组织内的CYP1A1,CYPlA2,CYP1B1,CYP281,CYP2E1,CYP3A1,CYP4A1基因和谷胱甘肽-S转移酶GST-ml,GST-pi基因的表达情况.结果:与空白组相比,三七不影响肺组织内CYP2E1,CYP1A2和GST-pi基因的表达,但2 g·kg~(-1)的三七可诱导CYP3A1基因的表达(4.00倍,P<0.05),2,4 g·kg~(-1)的三七可分别诱导GST-ml基因的表达(分别是1.64倍,P<0.05和1.53倍,P>0.05)和CYP1A1基因的表达(3.44倍,P>0.05和6.05倍,P<0.05),2,4 g·kg~(-1)的三七对CYP1B1基因(0.81倍,P>0.05和0.38倍,P>0.05)有抑制趋势;2,4 g·kg~(-1)的三七明显抑制CYP2B1基因(0.47倍,P<0.05和0.50倍,P<0.05)和CYP4A1基因(0.54倍,P<0.05和0.72倍,P<0.05)的表达.结论:三七对肺组织不同的CYP基因和不同的GST基因的影响有明显的差异,这对临床合理使用三七和研究三七的作用机制具有重要意义.     

银杏内酯对大鼠肝细胞色素P450基因表达的影响

目的:观察银杏内酯对大鼠肝细胞色素P-450基因表达的影响。方法:银杏内酯100mg·kg^-1,大鼠灌胃给药,1日1次,连续4d,取肝组织,用竞争法反转录-聚合酶链式反应(competitiveRT-PCR)检测给药后细胞色素P-450基因表达的变化。结果:反转录反应体系不含目的RNA时,用参考模板竞争RNA反转录后用CYP和看家基因Cyclophilin引物进行PCR,CYP1A1,CYP1A2,CYP281/B2,CYP2C11,CYP2E1,CYP3A1,CYP4A1,Cyclophilin均出现了其预期的特异性片段,无其他非特异性带出现,表明参考模板竞争RNA对CYP和看家基因Cyclophilin引物具有特异性竞争能力。给银杏内酯后,对照组和给药组大鼠肝组织的CYP1A1mRNA均检测不到。CYP2C11和CYP2E1的基因表达水平没有变化;CYP1A2和CYP2B1/B2的基因表达水平下降;CYP3A1和CYP4A1的基因表达水平则明显增加。结论:银杏内酯对大鼠肝组织的细胞色素P-450基因表达水平的影响表现出特异性,对不同的细胞色素P-450成员的作用不同。     

酸枣仁、远志和桔梗水提液对大鼠肝CYP450酶活性 及mRNA表达的调控作用

目的:研究中药酸枣仁、远志和桔梗水提液对P450同工酶在酶活性及mRNA水平的调控作用。方法:大鼠ig给予酸枣仁、远志和桔梗水提液7 d后取肝脏称重并制备肝微粒体,采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素b5(Cytb5),P450的含量及红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性,高效液相色谱法测定非那西汀O-脱乙基酶(PHD)的活性和对硝基苯酚羟化酶(pNPH),采用RT-PCR技术检测大鼠肝中5种P450同工酶CYP1A1,CYP1A2,CYP2E1,CYP3A1及CYP3A2mRNA的表达。结果:与对照组比较,各给药组大鼠肝指数无显著变化;酸枣仁组显著降低Cytb5含量和ERD活性,增加pNPH活性,远志组显著升高pNPH,极显著降低ERD活性,桔梗组显著降低CYP450含量,并明显升高PHD和pNPH活性;在mRNA水平上,各组的CYP1A1基因均未能检出;酸枣仁组诱导CYP2E1,CYP3A1和CYP3A2基因表达,远志组抑制CYP3A1,诱导CYP3A2的mRNA表达,桔梗组诱导CYP1A2,CYP2E1,CYP3A2的mRNA表达;酸枣仁的CYP2E1、桔梗的CYP1A2和CYP2E1mRNA水平基本与酶活性水平相平行。结论:酸枣仁、远志水提液诱导CYP2E1的活性;桔梗水提液诱导CYP1A2,CYP2E1的活性,酶活性变化可能主要通过影响基因转录来实现。提示若酸枣仁和远志与经CYP2E1和CYP3A代谢的药物同用,桔梗若与经CYP1A2,CYP2E1,CYP3A代谢的药物同服,有可能会影响这些药物的临床疗效,临床用药时应慎重考虑。     

丹参酮ⅡA对大鼠细胞色素P450酶的诱导作用

目的 研究丹参酮ⅡA对大鼠细胞色素P450酶的诱导作用.方法 丹参酮ⅡA 7、20、60、180 mg/(kg·d)4个剂量组,雄性SD大鼠连续ig 7 d,取肝脏组织,应用体外"coclctail"方法 ,反转录-聚合酶链反应,免疫印迹杂交方法 分别检测CYP450酶活性、基因表达和蛋白表达的变化.结果 丹参百同ⅡA能显著诱导CYP1A2及CYP2E1的活性以及基因、蛋白表达,且呈剂量依赖性;高剂量组能增强CYP2C19的活性,但对基因、蛋白表达没有影响;对包括CYP3A1在内的其他亚型没有影响.结论 丹参酮ⅡA对大鼠多种CYP450亚型有诱导作用.     

丹参酚酸A对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响

目的:研究丹参酚酸A对大鼠肝微粒体细胞色素P450和细胞色素b_5含量以及CYP1A2和CYP2E1活性的影响.方法:将大鼠分成溶剂对照组和丹参酚酸A给药组,每组10只,雌雄各半,丹参酚酸A给药组尾静脉注射给予丹参酚酸A 20 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续给药5 d;溶剂对照组给予相同剂量的溶剂,紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素P450和细胞色素b_5含量;探针底物法评价CYP1A2和CYP2E1的活性.结果:丹参酚酸A尾静脉注射连续给药5 d后,大鼠细胞色素P450和细胞色素b_5含量与对照组比较均无显著性差异;CYP1A2和CYP2E1的活性与对照组比较也无显著性差异.结论:丹参酚酸A对CYP1A2和CYP2E1没有诱导或抑制作用,与经过CYP1A2和CYP2E1代谢的药物发生相互作用的可能性较小.     

三七总皂苷对大鼠肝脏药物代谢酶酶活性、mRNA及蛋白表达的影响

研究三七总皂苷对大鼠肝脏药物代谢酶酶活性、mRNA及蛋白表达的影响。将Wistar雄性大鼠随机分为9组,给予受试药后,提取肝脏微粒体,肝脏总RNA和总蛋白,分别采用底物探针法、荧光定量PCR技术和Western blot,检测三七总皂苷对肝脏药物代谢酶相关亚型酶活性、mRNA和蛋白质表达3个水平的调节作用。实验的结果是三七总皂苷能显著诱导CYP1A2和CYP2E1酶活性和mRNA表达,同时对CYP2E1的蛋白表达水平也有显著诱导作用;三七总皂苷显著诱导CYP3A mRNA表达,但对CYP3A酶活性水平无明显的影响;三七总皂苷对CYP1A1和CYP2B mRNA表达和酶活性均无明显影响。三七总皂苷对不同的P450亚型的调节作用具有选择性,主要的调节亚型是CYP1A2和CYP2E1,临床应用时,尤其是与CYP1A2和CYP2E1代谢有关药物合用时,应充分考虑到可能产生的药物相互作用以避免潜在的不良反应和毒副作用,同时对CYP2E1的诱导作用是否与人参皂苷清除自由基作用有关值得进一步研究。     

血府逐瘀汤对大鼠肝组织内CYPs, UGTs和GSTs基因表达的影响

目的: 研究血府逐瘀汤对大鼠肝组织内药物代谢酶细胞色素P450（CYPs, cytochrome P450）,谷胱甘肽-S-转移酶GSTs,glutathione S transferase）和尿甘二磷酸葡糖醛酸转移酶（UGTs,UDP-glucuronosyl transferase）基因表达的影响。 方法: 将25只大鼠随机分为5组,每组5只。大鼠按3.51,7.02,14.04 g·kg^-1分别ig给予血府逐瘀汤水提物,空白组给等体积纯净水,连续给药15 d,苯巴比妥钠于第13天按80 mg·kg^-1腹腔注射,连续3 d。取200 mg左右肝脏,用逆转录-实时荧光定量PCR法检测肝组织内的CYP基因CYP1A1,CYP1A2,CYP2B1,CYP2C11,CYP2E1,CYP3A1,CYP3A2,CYP4A1,CYP7A1,CYP17A1,CYP27A1,GST基因GSTA2,GSTM1,GSTp1和UGT基因UGT1A1,UGT2B1的表达情况。 结果: 与空白组比较,苯巴比妥钠组（阳性组）可明显诱导CYP2B1,CYP3A1,CYP3A2,GSTA2和UGT2B1基因表达（84.57,5.44,5.11,7.76,13.27倍,P<0.01）;血府逐瘀汤3.51,7.02 g·kg^-1分别诱导GSTA2和CYP1A1的基因表达（1.54倍,P<0.05;57.92倍,P<0.05）;14.04 g·kg^-1明显抑制CYP2C11的基因表达（55%,P<0.05）;3.51,7.02,14.04 g·kg^-13个剂量对GSTM1有明显的抑制作用（53%,55%,51%,P<0.05）;血府逐瘀汤对CYP1A2,CYP2B1,CYP2E1,CYP3A1,CYP3A2,CYP4A1,CYP7A1,CYP17A1,CYP27A1,GSTp1,UGT1A1和UGT2B1的基因表达无明显影响。 结论: 血府逐瘀汤可明显诱导CYP1A1,GSTA2基因的表达,对CYP2C11,GSTM1的基因有明显的抑制作用,而对其余的亚型无显著影响。提示临床上与CYP1A1及CYP2C11的底物合用时,要注意药物代谢性相互作用,且其可能参与肝脏对毒物、致癌物以及其他物质的解毒和排泄,对多种恶性肿瘤的发生可能起到一定的作用。     

参芎葡萄糖注射液对小鼠肝细胞色素P450酶活性及表达的影响

目的:研究参芎葡萄糖注射液(Shenxiong glucose injection,SGI)对小鼠肝脏细胞色素P450 2_(E1)(CYP2_(E1)),2_(A11)(CYP2_(A11)),1_(A2)(CYP1_(A2))和2_(D22)(CYP2_(D22))酶活性以及mRNA表达水平的影响。方法:将昆明小鼠随机分为正常组,苯巴比妥组(0.70 g·kg~(-1)),以及SGI低、中、高剂量组(13.0,19.5,26.0 g·kg~(-1))。各组小鼠每天尾静脉注射药物1次,连续注射7 d后处死。取其肝脏制备肝微粒体进行体外代谢实验,测定CYP2_(E1),CYP2_(D22),CYP1_(A2)和CYP3A的酶活性。并用实时荧光定量聚合酶链式反应q PCR技术定量分析小鼠肝组织中CYP2_(E1),CYP2_(D22),CYP1_(A2)和CYP2_(A11)的mRNA表达水平。结果:与正常组比较,各给药组小鼠肝指数没有显著差异。体外代谢实验表明,相较正常组,高剂量SGI能下调CYP2_(E1)酶活性0.45倍(P0.05);中剂量和高剂量的SGI可上调CYP1_(A2)酶活性1.2~1.23倍(P0.05);而SGI对CYP3A和CYP2_(D22)的活性无显著影响。q PCR分析发现,相较正常组,高剂量SGI组CYP2_(E1)mRNA的表达下调了0.6倍(P0.01);SGI中剂量和高剂量组的CYP1_(A2)mRNA的表达分别上调了1.7倍和2.6倍(P0.05)。SGI组和正常组之间的CYP2_(A11)和CYP2_(D22)mRNA表达量无显著性差异。结论:中高剂量的SGI能上调小鼠肝CYP1_(A2)的表达,并诱导小鼠肝CYP1_(A2)的酶活性。而高剂量的SGI能下调小鼠肝CYP2_(E1)的表达,并抑制小鼠肝CYP2_(E1)的酶活性。     

黄药子与当归配伍对大鼠肝脏CYP1A2、CYP2E1基因mRNA表达的影响

目的：观察单用黄药子和黄药子配伍当归后对大鼠肝CYP1A2、CYP2E1基因mRNA表达的影响。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法测定大鼠肝CYP1A2、CYP2E1基因mRNA在给药后的变化。结果：黄药子组明显诱导CYP1A2、CYP2E1基因mRNA表达，黄药子配伍当归后mRNA表达受到抑制。结论：黄药子诱导P450酶系CYP1A2和CYP2E1mRNA的表达，导致肝中毒。当归配伍黄药子后抑制mRNA表达拮抗肝中毒。     

制何首乌对大鼠肝脏P450酶5种亚型mRNA表达的影响

考察制何首乌水提物作用后大鼠肝脏P450酶5种亚型的mRNA表达变化。SD大鼠随机分为正常对照组、制何首乌高、低剂量组(5.40,1.08 g·kg~(-1)),连续灌胃给药7 d。给药结束后,检测大鼠血清生化指标,并采用实时荧光定量PCR测定各实验组大鼠肝脏P450酶5种亚型mRNA表达。实验结果显示AST在高、低剂量组都显著下降;ALT在低剂量组显著降低,在高剂量组显著升高。高、低剂量组的大鼠肝组织P450酶5种亚型mRNA的表达均下调,且下调程度与给药剂量成一定的剂量性依赖。特别是高剂量制何首乌水提物能够显著抑制大鼠的CYP1A2和CYP2E1的mRNA表达。该研究发现大剂量制何首乌水提物具有肝毒性,且随着剂量增加其肝损伤程度增加。其中制何首乌水提物5.40 g·kg~(-1)对大鼠肝CYP1A2和CYP2 E1的mRNA的表达有明显抑制作用。     

复方丹参方对大鼠心脏细胞色素P450酶的影响

目的 研究复方丹参方及其单味药对大鼠心脏细胞色素P450酶（CYPs）主要亚型的影响。方法 雄性SD大鼠随机分为5组,分别用复方丹参方 [0.32 g/(kg?d)]、丹参 [0.27 g/(kg?d)]、三七 [0.05 g/(kg?d)]、冰片 [0.003 g/(kg?d)] 或生理盐水连续ig诱导处理28 d,取各组大鼠心脏组织,利用Real Time荧光定量PCR技术检测各组大鼠心脏CYPs各亚型mRNA表达水平的变化。结果 与对照组比较,复方丹参方对大鼠心脏CYP1B1、CYP2B1、CYP2E1、CYP4A1和CYP4F4的mRNA表达有下调趋势（P＜0.05）。丹参对CYP1A1、CYP1B1、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP2J3、CYP4A1、CYP4F4和CYP4F5的mRNA表达有下调趋势（P＜0.05、0.01）,而对CYP4A3、CYP4F1和CYP4F6的mRNA表达有上调趋势（P＜0.05）。三七对CYP1A1、CYP1B1、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP2J3、CYP4A1、CYP4A3、CYP4F4、CYP4F5和CYP4F6的mRNA表达均有不同程度的抑制趋势（P＜0.05、0.01）。冰片对CYP1A1、CYP1B1、CYP2B1、CYP2C11、CYP4A1和CYP4F4的mRNA表达有下调作用（P＜0.01）。结论 复方丹参方全方对心脏CYPs 亚型mRNA表达影响弱于方中各单味药对CYPs的影响,显示复方对CYPs影响可能是各单味药作用的综合和叠加,同时全方及单味药对CYP2家族和CYP4家族的影响显示其对心脏均有双向调节作用。     

何首乌水提物对大鼠肝脏CYP1A2,CYP2E1酶活性及mRNA表达抑制作用研究

大鼠连续灌胃不同剂量的何首乌水提物(1,10g·kg-1)7 d,取肝脏制备肝微粒体,分别用Cocktail体外孵育法和实时荧光定量PCR技术观察何首乌水提物对大鼠肝脏主要CYP450酶活性及mRNA表达的影响.与空白对照组相比,1,10g·kg-1何首乌水提物组大鼠肝脏CYP2E1酶活性和mRNA的表达均受到明显抑制(CYP2E1酶活性,P＜0.01;CYP2E1的mRNA表达1 g·kg-1组P＜0.05,10 g·kg-1组P＜0.01),CYP3A1酶活性虽显示明显升高(P＜0.01),但mRNA的表达没有显著变化;10 g·kg-1何首乌水提物组大鼠肝脏CYP1A2酶活性和mRNA的表达受到明显抑制(P＜0.01).     

多反应监测方法评估丹参和人参对大鼠肝药酶的调控作用

目的建立新型特异性强的高通量细胞色素P450(CYP)丰度测定方法,以人参和丹参为工具药考察药物对肝药酶的调控作用。方法采用基于质谱多反应监测(MRM)模式方法,以串联配体法(QconCAT)表达合成的重标肽段作为内标对丹参与人参处理后,对9种大鼠肝脏CYP(CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1、CYP2B2、CYP2C6、CYP2C11、CYP3A1、CYP3A2、CYP17A1)蛋白特异肽段进行定量,探讨丹参和人参对肝脏CYP酶的表达上调或者下调作用。结果 QconCAT重标合成内标肽段与肝脏样品肽段质谱表征一致,与对照组相比,丹参与人参作用后,对大鼠肝内CYP1A1、CYP2B2的表达均具有下调作用,对CYP1A2、CYP2B1的表达均具有上调作用。丹参同时下调CYP3A2、CYP2C11和CYP17A1的表达,而人参则上调这3种蛋白的表达。建立了MRM方法对大鼠肝脏CYP蛋白定量方法,定量方法相对标准偏差在5.9%以内,相对误差在6.8%以内,定量标准曲线的线性系数大于0.9。结论对9种大鼠肝脏CYP酶进行定量研究,其中CYP2B1、CYP2B2和CYP17A1是首次进行蛋白质定量研究。丹参与人参对CYP亚型产生的调控作用存在差异性,为药物配伍实践中提供临床参考价值,避免不良药物相互作用反应。     

雷公藤复方配伍对大鼠肝脏代谢酶基因表达的影响

目的:从调控代谢酶角度探讨雷公藤复方配伍减轻雷公藤肝脏毒性的作用及分子机制。方法:SD大鼠给药1个月筛选雷公藤的肝毒性剂量;雷公藤单药和复方分别ig给药大鼠1个月,基因芯片检测大鼠肝脏基因表达谱,实时定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测核受体组成型雄甾烷受体(CAR),孕烷X受体(PXR),过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPAR),芳香烃受体(AhR)的表达。结果:雷公藤肝毒性剂量为15.6 g生药/kg;基因芯片结果显示,雷公藤可抑制细胞色素P450酶(CYP)2E1,CYP8B1,CYP2B等表达,诱导CYP7A1的表达。雷公藤复方可诱导代谢酶CYP3A4,CYP2E1,CYP8B1,CYP2B等表达。实时定量PCR结果显示,雷公藤可抑制核受体CAR,PXR,PPAR基因表达,雷公藤复方可改善雷公藤对核受体的抑制作用。结论:雷公藤复方配伍可影响核受体,调控代谢酶的表达,这可能进而调节内外源代谢过程,从而起到减毒作用。     

乳香没药对细胞色素P450活性的影响

目的:考察乳香没药对细胞色素P450活性的影响。方法:56只小鼠分为对照组和乳香+没药3.15,2.10,1.05 g.kg-1剂量组,连续ig给药7 d;48只小鼠分为对照组和乳香、没药、乳香+没药组,ig给药3.15 g.kg-11次。所有小鼠末次药后30 min ip给予戊巴比妥钠,观察乳香没药对P450的影响。40只大鼠分为对照组、乳香组、没药组、乳香+没药组,以3.00 g.kg-1连续ig给药14 d,取肝脏制备各组动物肝微粒体,并用cocktail探针法考察乳香没药对大鼠CYP1A2,CYP2E1,CYP3A4的影响。结果:乳香+没药3.15,2.10,1.05 g.kg-1剂量连续给药7 d均可使戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠率降低(P<0.05,P<0.01),而单次给药3.15g.kg-1有使戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠率升高的趋势。乳香、没药及乳香+没药混合物组大鼠肝微粒体体外对非那西丁、氯唑沙宗代谢率显著高于对照组,而氨苯砜无明显差异。结论:乳香、没药连续用药均使CYP1A2,CYP2E1活性增强,而对CYP3A4则无显著影响。     

重金属Cd胁迫下三七主要药效成分与其合成关键酶DS和P450基因表达相关性研究

目的研究外源性镉(Cd)对三七主要药效成分合成中关键酶2,3-氧化鲨烯被达玛烯二醇合成酶(DS)和细胞色素P450单加氧酶(P450)基因表达的影响。方法设置9个Cd的质量分数梯度(0.0、0.1、0.3、0.6、1.0、3.0、6.0、10.0、30.0 mg/kg)分别对三七进行胁迫实验,两年后采集成熟三七,通过q RT-PCR检测手段对其根部DS及P450基因进行表达量测定,并以GAPDH基因作为内参基因进行DS及P450基因相对表达量的计算,通过相关性分析计算DS和P450基因表达与三七主要药效成分三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1以及总皂苷的相关性。结果 Cd在低质量分数下能促进DS的表达,高质量分数下抑制DS的表达;随着Cd质量分数的增加,对P450表达的抑制作用更加明显;而DS和P450基因表达与三七主要药效成分三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1以及总皂苷无显著相关性(P0.5)。结论重金属Cd对三七药效成分中关键酶DS和P450基因表达影响不同,对同一种酶,Cd质量分数不同其影响也不同。但主要药效成分并未因此受明显影响。     

S(+)-盐酸氯胺酮在大鼠体内药动学研究

 目的S(+)-盐酸氯胺酮是盐酸氯胺酮右旋光学异构体,研究大鼠静脉注射给药后体内血浆药动学、组织分布、代谢及排泄特征,为临床应用提供参考依据。方法本实验采用LC-MS测定生物样品中S(+)-盐酸氯胺酮浓度。结果大鼠静脉注射不同剂量S(+)-盐酸氯胺酮(6.25,12.5,25mg·kg^-1)后,ρ_max及AUC与给药剂量呈正相关;体内分布以肾、肾上腺最高,脑、小肠、肌肉、胃、心脏等次之,肝、肺等组织水平最低。S(+)-盐酸氯胺酮静脉注射后经粪、尿、胆汁排泄,排泄量分别占给药量的0.007%,0.66%,和16%。S(+)-盐酸氯胺酮在大鼠体内可经CYP2E1,CYP3A和CYP2C同工酶代谢,氧化成去甲基代谢物和双键去甲基代谢物。结论研究S(+)-盐酸氯胺酮的血浆药动学、组织分布、代谢及排泄特征可为该药临床应用的安全性和有效性提供重要的参考依据。