姜黄素调控食管癌Eca-109细胞分化、增殖、凋亡的机制

目的探讨姜黄素对食管癌Eca-109细胞的分化、增殖、凋亡及分泌信号蛋白(Wnt)信号通路的影响及机制。方法 MTT法检测8、16、32、64μmol/L的姜黄素作用于食管癌Eca-109细胞24、48、72 h后细胞存活情况,计算细胞凋亡率,原位末端标记法(TUNEL)检测48 h后细胞凋亡情况,RT-PCR检测48 h后细胞中β连环蛋白(β-catenin)、GSK-3β、c-myc的mRNA的表达情况,Western印迹检测48 h后细胞中β-catenin、GSK-3β、c-myc蛋白的表达情况。结果姜黄素对食管癌Eca-109细胞的抑制作用随着作用时间和作用浓度的增加而增加,姜黄素作用24 h IC50为28.1μmol/L,48 h为23.2μmol/L,72 h为15.6μmol/L。TUNEL检测细胞凋亡率随着药物作用浓度的增加而增加。β-catenin、c-myc的转录水平随着药物浓度的增加而减弱。GSK-3β的转录水平随着药物浓度的增加而加强。β-catenin、c-myc蛋白表达量随着药物浓度的增加而减弱。GSK-3β蛋白表达水平随着药物浓度的增加而加强。结论姜黄素可以抑制食管癌Eca-109细胞增殖,促进细胞凋亡。姜黄素可以上调Wnt信号通路中GSK-3β酶的表达、促进β-catenin蛋白降解,从而抑制c-myc基因的转录,抑制癌细胞生长增殖。     

SOX1过表达抑制食管癌细胞的增殖并促进凋亡的发生

目的 探索SOX1过表达对食管癌细胞增殖及凋亡的作用及其机制。方法 构建SOX1过表达细胞株，检测SOX1 mRNA和蛋白表达，CCK-8检测细胞增殖，细胞划痕及结晶紫染色检测细胞的迁移及克隆形成能力，Hochest染色实验检测细胞凋亡情况，Western blotting检测GSK-3β及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达水平。结果 SOX1过表达组mRNA显著高于对照组(P<0.01)。CCK-8 OD值及增殖曲线绘制表明SOX1过表达组增殖速率显著降低(P<0.05);SOX1过表达组细胞的迁移速率和克隆形成能力明显下降(P<0.05);显微镜下观察到SOX1过表达组细胞的皱缩明显，提示凋亡的发生；Western blotting检测结果表明，SOX1过表达组GSK-3β上调，Wnt信号通路相关基因β-catenin、Cyclin D1、c-Myc蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论 SOX1通过抑制Wnt/β-catenin信号传导抑制食管癌细胞的增殖和促进凋亡。     

葛根素对H_2O_2诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响及机制

目的探讨葛根素对过氧化氢(H_2O_2)诱导颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响及机制。方法分离培养大鼠颈椎间盘纤维环原代细胞,将细胞分为对照组、H_2O_2组和葛根素组,氯化锂(LiCl)为Wnt信号通路激活剂。噻唑蓝(MTT)及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)探针检测活性氧(ROS)水平。Western印迹检测Wnt1、β-catenin、糖原合成酶激酶(GSK)-3β和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,H_2O_2组细胞活力降低,凋亡率升高,ROS水平升高,Wnt1、β-catenin和GSK-3β蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与H_2O_2组比较,葛根素组细胞活力升高,凋亡率降低,ROS水平降低,Wnt1、β-catenin和GSK-3β的蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P0.05)。葛根素+LiCl组细胞活力显著高于葛根素组,凋亡率显著低于葛根素组(P0.05)。结论葛根素可降低由H_2O_2诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡,机制与细胞内ROS水平降低及激活Wnt信号通路有关。     

吡格列酮通过Wnt/β-catenin信号通路减轻大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的:探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂吡格列酮(PIO)对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化的作用及其相关机制。方法:利用10 mmol/Lβ甘油磷酸(β-GP)诱导大鼠VSMC钙化,建立钙化模型(即钙化组);同时以完全培养基培养大鼠VSMC为正常对照组,并分别以不同浓度(5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L)PIO干预,观察培养12d,用茜素红染色法检测细胞钙沉积并检测细胞外基质钙离子浓度来观察VSMC钙化程度。Western Blot检测大鼠VSMC的α平滑肌动蛋白(α-SMA)、Runx2、BMP2、Wnt/β-catenin通路相关蛋白(β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β)及核蛋白cyclin-D1的表达情况。选择合适的PIO浓度(20μmol/L)并以PPARγ拮抗剂GW9662(20μmol/L)干预,观察以上指标的变化。结果:(1)钙化组钙离子浓度较正常对照组明显增高(P0.05),而不同浓度PIO均可减轻VSMC细胞外基质的钙离子浓度(P0.05),同时钙化组茜素红染色较正常对照组明显,而20μmol/L PIO干预组茜素红染色较钙化组减轻最为明显;(2)钙化组大鼠VSMC表达Runx2、β-catenin、p-GSK-3β、BMP2、cyclin-D1较正常对照组升高;20μmol/L PIO可显著下调钙化大鼠VSMC表达Runx2、β-catenin、p-GSK-3β、BMP2和cyclin-D1,并上调α-SMA的表达;(3)PPARγ拮抗剂GW9662可部分阻断PIO对钙化大鼠VSMC的干预作用。结论:PPARγ激动剂PIO可减轻β-GP诱导的大鼠VSMC的钙化,其作用机制与下调Wnt/β-catenin信号通路活性有关。     

葛根素对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖的影响及机制研究

目的分析葛根素对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖的影响及其机制.方法取处于对数生长期的HeLa细胞,分别加入不同剂量为0、12.5、25、50μmol/L的葛根素,按照剂量分为四组,不加药物的正常细胞视为对照组.经处理2 d后采用MTT法和流式细胞术检测葛根素对HeLa细胞体外增殖抑制和诱导凋亡水平;采用Western blotting法检测葛根素对β-catenin、Wnt、p21、p53及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.结果在12.5~50μmol/L浓度范围的葛根素能抑制HeLa细胞增殖并促进细胞凋亡,呈良好的剂量依赖关系,促进Bax表达,减少β-catenin、Wnt、p21、p53及Bcl-2的表达,呈浓度依赖性.结论葛根素能够对宫颈癌HeLa细胞的增殖进行显著抑制并诱导HeLa细胞凋亡,其作用机制与抑制β-catenin/Wnt/p53信号通路有关.     

白花丹素对涎腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移、凋亡的干预作用及其机制

目的 观察白花丹素（PLB）对涎腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移、凋亡的干预作用，并探讨其作用机制。方法 取涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞进行体外培养，将细胞分为0、12.5、25、50μmol/L PLB组，分别加入含0、12.5、25、50μmol/L PLB的DMSO培养基培养24 h。采用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞毒性；CCK-8实验观察细胞增殖能力；Transwell试验观察细胞迁移能力；TUNEL染色法观察细胞凋亡情况；荧光探针法检测活性氧（ROS）水平，微量法检测丙二醛（MDA）含量；荧光探针法检测线粒体膜电位；Western blotting法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、Caspase-3表达，计算Bcl-2/Bax、Cleaved Caspase-3/Caspase-3。结果 12.5、25、50μmol/L PLB组细胞LDH释放量均高于对照组，其中25、50μmol/L PLB组高于12.5μmol/L PLB组，50μmol/L PLB组高于25μmol/L PLB组（P均<0.05）。不同浓度PLB组细...     

miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌SGC-7901细胞生物学特性的研究

背景 miR-183在胃癌、乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤组织中低表达,发挥抑癌基因的作用,但其在胃癌中作用机制目前尚不十分清楚.研究表明, miR-183可以通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤细胞的生长、迁移和侵袭,而Wnt/β-catenin信号通路在胃癌中高度激活与胃癌的发生和转移密切相关.但miR-183是否调节Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞生物学特性尚不清楚.目的探讨miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞生物学特性的影响.方法采用q RT-PCR检测miR-183在不同胃癌细胞株中的表达情况,在胃癌细胞SGC-7901中转染miR-183mimics或mimics对照,分别设为miR-183组和miR-NC组, qRT-PCR检测转染效率,噻唑蓝增殖实验检测SGC-7901细胞增殖变化,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡情况, Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力, Western blot法检测凋亡相关及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平.使用Wnt/β-catenin信号通路激动剂氯化锂处理过表达miR-183的SGC-7901细胞,观察SGC-7901细胞生物学特性的变化.结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比, 4株胃癌细胞中miR-183的表达水平明显降低(P 0.05).转染miR-183mimics后SGC-7901细胞中miR-183的表达水平显著升高(P0.05).过表达miR-183后SGC-7901细胞OD值降低(P0.05),凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P 0.05),侵袭和迁移细胞数减少(P0.05),β-catenin、p-GSK-3β和Cyclin D1蛋白表达水平下调(P0.05), GSK-3β蛋白表达水平上调(P 0.05).激活Wnt/β-catenin信号通路部分逆转了过表达miR-183对SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及凋亡促进作用(P0.05).结论miR-183可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路阻碍人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡.     

阿托伐他汀对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路的干预作用

目的探讨阿托伐他汀对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路的干预作用。方法 36只SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和阿托伐他汀组,各组分别设7 d、14 d两个时间点。HE、Masson、PAS染色法观察肾脏病理改变;免疫组化观察Wnt4和β-catenin蛋白在肾组织的表达;Western印迹检测各组大鼠肾皮质Wnt4、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、Ecadherin、α-SMA和CollagenⅠ蛋白的相对表达量。结果与假手术组相比,模型组肾皮质Wnt4和β-catenin、p-GSK-3β、α-SMA蛋白表达显著增多(P<0.05),CollagenⅠ沉积增多(P<0.01),E-cadherin蛋白表达显著减少(P<0.01),GSK-3β在各组大鼠肾组织表达无差异;与模型组相比,阿托伐他汀组肾组织Wnt4、β-catenin、p-GSK-3β和α-SMA蛋白表达减少(P<0.05),CollagenⅠ蛋白沉积显著减少(P<0.05),并伴有E-cadherin蛋白表达显著增多(P<0.05),而GSK-3β蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论 Wnt4/β-catenin信号通路的活化促进了UUO大鼠肾脏纤维化的发生发展,阿托伐他汀能改善肾脏纤维化病变,减轻肾间质细胞外基质的沉积,可能与其抑制Wnt4/β-catenin信号通路的激活和传导有关。     

结直肠癌细胞周期的研究

目的探讨转录活化因子3(STAT3)信号通路在纳米硒对结直肠癌细胞的作用。方法用1、3、6、12μmol/L纳米硒的细胞生长液作用于结直肠癌细胞HT29,SW620,SW480,作用6、12、24、48、72、96 h后MTT检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测结直肠癌细胞SW480经4μmol/L纳米硒作用48 h后细胞凋亡和细胞周期。Western blot检测结直肠癌细胞SW480经4μmol/L纳米硒作用48 h后细胞中STAT3、p-STAT3、Cyclin A1的表达水平。结果纳米硒对结直肠癌细胞增殖均有抑制作用,且随作用时间和浓度增加而增加。结直肠癌细胞HT29,SW620,SW480经纳米硒作用48 h后的半数抑制浓度分别为:(6.8±0.6)、(10.4±1.1)、(4.2±0.4)μmol/L。4μmol/L纳米硒作用后的SW480细胞凋亡率明显高于0μmol/L(P0.01)。纳米硒作用后的结直肠癌细胞中Bax表达增多,Bcl-2表达降低,G0/G1期细胞百分比与0μmol/L组相比明显降低(P0.01),S期、G2/M期细胞百分比明显增高(P0.01)。4μmol/L纳米硒作用后的结直肠癌细胞中p-STAT3、Cyclin A1水平与0μmol/L相比显著下降(P0.01),而STAT3表达水平无变化。结论纳米硒可以阻断STAT3信号通路抑制结直肠癌细胞增殖,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期。     

维生素K2调控Wnt/β-catenin信号对肝癌细胞侵袭、凋亡的影响及机制研究

目的探讨维生素K2调控Wnt/β-catenin信号对肝癌细胞侵袭、凋亡的影响及机制。方法 5、10、20、40、80μmol/L的维生素K2处理人肝癌SMMC-7721细胞24、48、72 h后,CCK8实验检测细胞的增殖情况;22μmol/L的维生素K2处理细胞48 h后,Transwell小室检测细胞的侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blotting检测MMP-2、MMP-9、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果 10、20、40、80μmol/L的维生素K2处理肝癌细胞不同时间均可显著抑制癌细胞的增殖,具有浓度依赖性和时间依赖性(P0.01)。根据IC50值选择22μmol/L的维生素K2为研究对象,维生素K2组细胞的凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达均显著高于对照组,细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达均显著低于对照组(P0.01)。结论维生素K2可通过下调Wnt/β-catenin信号抑制肝癌细胞的增殖及侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

急性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区细胞凋亡与β-catenin、GSK-3β蛋白表达的关系

目的探讨急性脑缺血再灌注(IR)大鼠海马CA1区细胞凋亡与Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)蛋白表达的关系。方法选择雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组6只、脑IR组30只,脑IR组又分为IR后3、6、24、48、72 h各6只,采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。应用原位末端标记法检测各组细胞凋亡情况,免疫组化法及Western blotting蛋白印记法分别检测β-catenin、GSK-3β蛋白表达;并对IR组的β-catenin、GSK-3β蛋白表达与细胞凋亡进行相关性分析。结果与假手术组比较,IR组各时间点细胞凋亡数、GSK-3β蛋白阳性数及β-catenin蛋白表达量明显增加(P均<0.01),β-catenin蛋白阳性数、GSK-3β蛋白表达量增加,但无统计学意义(P均>0.05)。脑IR后不同时间点的细胞凋亡数与GSK-3β蛋白阳性数呈正相关(P<0.05),与β-catenin蛋白阳性数无相关性(P>0.05)。结论 Wnt信号通路在脑IR组损伤中可能发挥重要作用,GSK-3β蛋白对缺血性脑损伤的细胞凋亡起促进作用。     

Wnt/β-catenin信号通路可能调节胰腺癌细胞TBX2基因表达

目的探讨Wnt／β-catenin信号途径是否参与胰腺癌细胞中TBX2基因的表达调节。方法运用免疫细胞化学sP法，检测胰腺癌细胞株SW1990中是否有Tbx2和β-catenin蛋白表达；以不同浓度的糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）的特异性抑制剂氯化锂作用于SW1990，应用RT-PCR检测TBX2基因及Wnt／β-catenin信号通路的已知靶基因c-myc的mRNA表达变化；Western印迹法检测β-catenin、Tbx2蛋白的表达变化。结果在SW1990细胞中有Tbx2和β-catenin蛋白表达；氯化锂作用于SW1990细胞后，TBX2、c-myc、β-catenin表达水平均升高（P〈0．05）；Tbx2蛋白随着β-catenin表达水平的升高而升高（r=0．583，P〈0．05）。结论Wnt／β-catenin信号通路可能参与了胰腺癌细胞中TBX2基因表达的调节。     

秦皮乙素对Lewis肺癌小鼠凋亡及Wnt/β-catenin通路的影响

目的 观察秦皮乙素对Lewis肺癌小鼠凋亡及Wnt/β-catenin通路的影响.方法 右腋皮下注射Lewis肺癌细胞复制小鼠Lewis肺癌模型,分为模型组、顺铂组、秦皮乙素高剂量组及秦皮乙素低剂量组,每组12只.顺铂组(1 mg/kg)腹腔注射给药,秦皮乙素高剂量组(100 mg/kg)及秦皮乙素低剂量组(50 mg/kg)灌胃给药,模型组灌胃等体积溶媒;造模后第2天开始给药,1次/d.给药14 d后,测定瘤质量,凋亡率,Bax及Bcl-2 mRNA表达,caspase3、8和9活性,β-catenin、Cyclin D1和c-Myc蛋白表达.结果 与模型组比较,顺铂组、秦皮乙素高剂量组及秦皮乙素低剂量组瘤质量、Bcl-2 mRNA表达均显著降低,而细胞凋亡率、Bax mRNA表达显著增加,caspase3、8和9活性均显著增加,而β-catenin、Cyclin D1和c-Myc蛋白表达显著降低(均P<0.05).结论 秦皮乙素可以通过诱导凋亡及抑制Wnt/β-catenin通路激活,发挥抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的作用.     

亚砷酸钠对Hacat细胞GSK-3β及CyclinD1表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对人上皮角质形成细胞系(Hacat细胞)PI3K/AKT信号通路中细胞周期相关分子GSK-3β、CyclinD1的影响。方法将人Hacat细胞暴露于浓度分别为0、10、25、50、100μmol/L的亚砷酸钠6 h,采用Western Blot法检测细胞总蛋白的GSK-3β,磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β),CyclinD1和磷酸化CyclinD1(p-CyclinD1)的蛋白表达水平。结果与对照组比较,10、25、50、100μmol/L染砷组总蛋白中p-GSK-3β和CyclinD1蛋白表达水平均显著增高(P<0.05),而p-CyclinD1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论亚砷酸钠可影响Hacat细胞中的GSK-3β分子,使其磷酸化失活,进而失去对细胞周期相关蛋白CyclinD1的磷酸化作用,从而促进CyclinD1的表达。     

白藜芦醇通过SDF-1/CXCR4信号通路诱导大肠癌细胞株SW480凋亡

[目的]探讨白藜芦醇(Res)对大肠癌细胞株SW480增殖、凋亡的影响,并研究Res对SDF-1/CXCR4信号通路的作用。[方法]以20、40、80μmol/L Res处理SW480细胞后,采用CCK8方法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot方法分析细胞中凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2及SDF-1/CXCR4信号通路相关蛋白的表达水平。[结果]Res处理SW480细胞后,细胞增殖抑制率明显升高,且呈时间和剂量依赖性(P0.05);Res处理后SW480细胞凋亡率也显著升高(P0.05);药物处理组中促凋亡蛋白Cleaved caspase-3、Bax表达显著升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2及SDF-1、CXCR4蛋白表达水平显著降低,表现出剂量依赖性(P0.05)。[结论]Res抑制大肠癌细胞株SW480增殖、诱导其凋亡,其作用机制可能与降低SDF-1/CXCR4信号通路活化相关。     

人参皂苷Rb1通过AKT/GSK-3β/NFAT途径抑制硫化砷诱导的神经细胞PC12毒性

目的探索人参皂苷Rb1抑制硫化砷诱导的神经细胞——嗜铬细胞瘤细胞(PC12)毒性的作用机制。方法以PC12细胞为研究对象,加入0、2.5、5、10、15、20、50μmol/L硫化砷后观察细胞的损伤情况,采用噻唑蓝法检测细胞活性。在硫化砷损伤的PC12细胞培养基内加入5、10、20μmol/L人参皂苷Rb1,采用磺酰罗丹明B法检测其对细胞增殖能力的影响;用流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响;ATP试剂盒荧光素酶法测定其对细胞内ATP含量的影响;2′,7′-二氯四氟乙烷双乙酸盐探针染色法检测其对细胞内活性氧(ROS)含量的影响。Western blot检测PC12细胞中蛋白激酶B(AKT)、糖原合成酶激酶3(GSK-3β)、活化T细胞核因子(NFAT)、细胞色素C(Cyt C)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达。结果不同浓度硫化砷对PC12细胞有损伤,且随着浓度升高及作用时间延长,细胞损伤越严重;硫化砷可抑制PC12细胞的增殖。人参皂苷Rb1对硫化砷损伤的PC12细胞有保护作用,可有效抑制硫化砷诱导的PC12细胞的凋亡。硫化砷可降低PC12细胞内的ATP含量,增加ROS的含量;人参皂苷Rb1可增加ATP的含量,降低ROS的含量,加强细胞代谢。硫化砷刺激PC12细胞后细胞内p-AKT、p-GSK-3β、NFAT-c3、Bcl-2、Cleaved Caspase-3蛋白的表达显著降低,Caspase-3与Bax蛋白的表达明显提高,线粒体内Cyt C表达明显提高(P0.01);人参皂苷Rb1干预后,细胞内p-AKT、p-GSK-3β、NFAT-c3、Bcl-2、Cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,Caspase-3与Bax蛋白的表达明显降低,线粒体内Cyt C表达明显降低(P0.01)。结论人参皂苷Rb1可抑制硫化砷诱导的PC12细胞凋亡,从而保护神经细胞,其可能是通过调节AKT/GSK-3β/NFAT信号通路来实现的。     

EZH2抑制剂DZNeP对人乳腺癌细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响

目的探讨EZH2抑制剂DZNe P对人乳腺癌细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响。方法取对数生长期乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231,经2.5、5、10、20μmol/L DZNe P处理后(设不加DZNe P仅添加完全培养基组为对照组),采用四甲基偶氮唑盐比色法检测各组24、48、72 h的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测各组24、48 h的凋亡率,收集20μmol/L DZNe P处理72 h的MCF-7、MDA-MB-231细胞,采用Western印迹检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路和Wnt/β-连接素(β-catenin)通路中的蛋白变化。结果 DZNe P在2.5~20μmol/L范围内可抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖,且与对照组相比增殖抑制率升高(P0.05),该抑制效应呈浓度和时间依赖性;与对照组相比,DZNe P处理组的凋亡率均升高(P0.05),DZNe P各浓度处理48 h的凋亡率均高于24 h(P0.05);PI3K/Akt通路中,与对照组相比,20μmol/L DZNe P处理72 h后MCF-7、MDA-MB-231细胞的PTEN水平均升高,Akt水平均降低(P0.05);而在Wnt/β-catenin通路上,20μmol/L DZNe P处理72 h后两细胞株中的β-catenin、Cyclin D1和C-myc水平均降低(P0.05)。结论 DZNe P可抑制人乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡,可能与抑制肿瘤恶性行为相关的PI3K/Akt、Wnt/β-catenin通路有关,在乳腺癌治疗上有一定应用前景。     

茯苓酸对结肠癌细胞增殖凋亡、迁移侵袭及PERK/ATF4信号通路蛋白表达的影响

目的 观察茯苓酸（PA）对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、迁移、侵袭和蛋白激酶RNA样ER激酶（PERK）/转录激活因子4(ATF4)信号通路表达的影响。方法 将SW480细胞分为四组，PA组加入8μmol/L的PA,PA+PERK抑制剂GSK2656157组加入8μmol/L的PA+2μmol/L的GSK2656157, PERK激活剂组加入8μmol/L的CCT020312，对照组用正常培养基培养。培养24 h时采用MTT法测算各组细胞存活率，培养24 h时采用细胞克隆形成实验测算各组细胞克隆数，培养24 h时采用流式细胞仪术测算各组细胞凋亡率，采用Transwell小室观察各组细胞侵袭、迁移情况，采用WESTERN Blotting法检测各组细胞细胞通路相关蛋白（PERK、ATF4）、内质网应激相关蛋白C/EBP同源蛋白（CHOP）、上皮间质转化（EMT）相关蛋白[E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）]。结果 与PA组比较，PA+GSK组细胞存活率及克隆形成数低、细胞凋亡率低、迁移细胞数及侵袭细胞数多（P均<0.05）；与对照组比较，PA组和...     

miR-92a对H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响

目的探讨miR-92a对过氧化氢(H2O2)诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响。方法通过Lipofectamine~(TM)2000将miR-92a抑制物(inhibitor)及阴性对照组转染大鼠心肌细胞H9C2,RT-PCR检测转染后细胞中miR-92a的表达;将后续实验分为空白对照组、H2O2组和miR-92a inhibitor+H2O2组,利用CCK8法、流式细胞仪及Western印迹分别检测3组细胞的增殖、凋亡、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)和c-Myc的蛋白表达。结果 miR-92a inhibitor组miR-92a mRNA表达显著低于空白对照组(P0.05),阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P0.05);与空白对照组比较,H2O2组细胞增殖显著降低,凋亡率显著增加,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著上调表达,Bcl-2蛋白显著下调表达(均P0.05),与H_2O_2组比较,miR-92a inhibitor+H_2O_2组细胞增殖显著升高,凋亡率显著降低,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著下调表达,Bcl-2蛋白显著上调表达(均P0.05)。结论抑制miR-92a的表达可促进H2O2诱导的H9C2心肌细胞增殖,抑制细胞的凋亡,其机制与调节Bax、Bcl-2蛋白及Wnt信号通路表达有关。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨阿魏酸对大强度力竭运动大鼠软骨细胞损伤的保护作用

目的探讨阿魏酸(FA)对大强度力竭运动大鼠软骨细胞损伤的保护作用及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将5周龄的SPF级SD雄性大鼠随机分为空白对照组、力竭运动模型组(E组)、低剂量组、高剂量组,各组建模后,对软骨细胞进行染色鉴定,并采用透射电镜观察细胞超微结构的形态学变化;取软骨细胞体外培养后,CCK-8法检测细胞增殖情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胰岛素样生长因子(IGF)-1和前列腺素(PG)E2水平,Western印迹检测Wnt2、p-GSK-3β、β-catenin、基质金属蛋白酶(MMP)13、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达。结果模型组软骨细胞基质着色深,出现严重变形,细胞核均着色;而低剂量组及高剂量组着色较浅,部分细胞核着色,尤其是高剂量组改善明显。超微结构显示,模型组细胞大部分呈现肿胀状态,细胞核形态异常,线粒体数目明显减少,大部分粗面内质网高度扩张,部分溶解断裂;而高剂量组细胞变化明显,少部分细胞肿胀,细胞核基本正常,可见线粒体空泡化及轻度扩张的粗面内质网。与空白组相比,模型组细胞增殖率、IGF-1及Bcl-2水平均显著降低,而Bax、PGE2和MMP13水平均显著升高;与模型组相比,低剂量组、高剂量组细胞增殖率、IGF-1及Bcl-2水平均显著升高,而Bax、PGE2和MMP13水平均显著降低,且高剂量组升高及降低幅度更明显(均P<0.05)。与空白组相比,模型组Wnt2、p-GSK-3β、β-catenin水平明显升高,FA呈剂量依赖性抑制Wnt2、GSK-3β、β-catenin蛋白表达(P<0.05)。结论FA可以降低溶解蛋白表达,提高OA软骨细胞增殖,抑制OA软骨细胞凋亡,其作用机制可能与Wnt/β-catenin通路有关。