HPLC衍生化法分析决明子多糖水解产物中单糖组分及其多糖组成特征的研究

分别利用分光光度法和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化/HPLC法分析了12批不同批次药材的决明子多糖及其水解产物中的单糖组分,以水解的单糖组分建立了决明子多糖的HPLC指纹图谱,并研究了决明子多糖的组成特征。结果表明,经过纯化的决明子多糖含量在93.41%~98.57%之间,以甘露糖为参照峰建立了12批药材的指纹图谱,相似度在0.963~0.999之间,多糖水解产物中单糖组分的含量在1.617~304.5 mg/g之间,7个共有峰组分含量大小分布均依次为:甘露糖木糖半乳糖葡萄糖阿拉伯糖葡萄糖醛酸氨基半乳糖,显示了决明子多糖的基本组成结构特征,12批药材的决明子多糖中各单糖的平均摩尔比为甘露糖∶木糖∶半乳糖∶葡萄糖∶阿拉伯糖∶葡萄糖醛酸∶氨基半乳糖=43.0∶24.2∶15.4∶5.6∶5.5∶3.4∶2.9。指纹图谱相似度分析和多糖的组成特征分析对市售药材的分析鉴定结果一致,可作为决明子多糖结构分析及其质量控制的依据。     

中药大黄多糖中单糖组成的毛细管区带电泳分析

以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为单糖的衍生化试剂,建立毛细管区带电泳(CZE)同时分离分析8种常见还原单糖PMP衍生物的方法。将该方法用于中药大黄多糖(RTP)的单糖组成及其摩尔比率的测定。结果表明,在pH 10.8和150 mmol/L硼砂缓冲溶液、10kV分离电压、25℃柱温的优化条件下,8种单糖衍生物实现了良好的分离,并证实RTP由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸5种单糖组成,其摩尔比为8.01∶5.01∶30.30∶1.00∶1.56;样品测定回收率为96.4%~105.3%。该方法灵敏、快速、准确,可用于中药RTP的组成分析。     

不同加工方式对鹿茸中水溶性多糖含量及单糖组成的影响

采用水提醇沉法提纯鹿茸中的水溶性多糖，苯酚-硫酸法测定其含量；多糖经水解、衍生后通过UPLC分析不同加工方式及不同部位鹿茸中单糖组成及含量的差异。结果表明，煮炸茸蜡片、粉片、纱片、骨片中水溶性多糖含量分别为1.74、1.67、1.03和1.13 g/kg，冻干茸为2.77、3.07、1.22和3.20 g/kg；排血茸4个部位水溶性多糖含量依次为1.55、1.78、0.96和0.77 g/kg，带血茸为1.69、1.64、1.01和1.31 g/kg。不同加工方式鹿茸中水溶性多糖单糖组成均检出甘露糖、氨基葡萄糖、核糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、氨基半乳糖、葡萄糖和半乳糖8个组分，对于同一部位，煮炸茸单糖含量低于冻干茸，排血茸单糖（氨基葡萄糖和氨基半乳糖除外）含量低于带血茸；对于同一加工方式不同部位，表现出蜡片、粉片高于纱片、骨片。研究加工方式对鹿茸中水溶性多糖含量及单糖组成的影响，以期为鹿茸加工及其产品开发提供理论参考。     

毛细管电泳紫外检测法同时分析樟芝多糖水解液中8种单糖

本文报道了同时分析D-木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、D-甘露糖、半乳糖、D-葡萄糖醛酸和D-半乳糖醛酸8种单糖的毛细管电泳紫外检测方法。利用本研究所建立的方法,可以同时检测樟芝多糖水解液中的8种单糖,方法的检测限为0.11～0.22μg/mL,回收率在88%～104%之间,相对标准偏差(RSD)小于3%。本研究为分析表征樟芝多糖提供了一种可靠的方法。     

胶束电动毛细管色谱法测定金花茶和六堡茶中多糖的单糖组成

超声辅助提取茶中多糖,经纯化后以2mol·L~(-1)硫酸溶液降解成单糖、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化后用胶束电动毛细管色谱法测定。优化的电泳条件为:缓冲溶液为pH 10的40mmol·L~(-1) Na2B4O7-20mmol·L~(-1) SDS,分离电压10kV,进样高度10cm,进样时间10s。8种单糖的线性范围均为10.0~180mg·L~(-1),检出限(3S/N)为4.87~8.32mg·L~(-1)。测得相对标准偏差(n=5)为3.0%~7.5%,加标回收率为98.0%~105%。金花茶多糖和六堡茶多糖的单糖组成均为阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、半乳糖醛酸,前者物质的量之比为0.29∶0.02∶0.10∶0.06∶0.42∶0.35;后者物质的量之比为0.13∶0.19∶0.09∶0.05∶0.16∶0.03。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定螺旋藻多糖的单糖组成

建立了同时测定螺旋藻多糖水解产物中鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、甘露醇、核糖、岩藻糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸12种糖类化合物的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。螺旋藻样品经超声波辅助提取,用三氟乙酸水解,经Waters Acquity BEH Amide色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,以10mmol/L甲酸铵和10 mmol/L甲酸铵-乙腈为流动相,在电喷雾电离源负离子(ESI-)模式下,用多反应监测(MRM)模式检测。结果表明,12种糖类化合物的定量限为0.005~0.15 mg/kg,线性范围为0.05~5 mg/L。按照样品中每种糖本底含量的50%、100%、150%进行添加,回收率为80.21%~121.6%。应用该方法对螺旋藻样品进行分析,结果发现:大部分样品都能检测到岩藻糖、半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、木糖、核糖,含量在0.3~889.4 mg/g之间。此外,测定的15个样品中岩藻糖、半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、木糖、核糖是共有组分,含量差异较大,但在所有样品中均未检测到甘露醇和甘露糖。该方法的建立可为阐明螺旋藻多糖的结构组成及其活性提供技术支撑及基础数据。     

气相色谱-质谱联用同时分析新型细菌多糖中的单糖和糖醛酸

对纯化的新型细菌多糖进行酸水解,用乙硫醇-三氟乙酸和醋酐-吡啶体系先后对酸水解物进行衍生,与之前报道不同的是糖醛酸得到有效衍生化。以木糖为内标,采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)定量分析该多糖酸水解物中单糖和糖醛酸衍生物发现,该多糖的糖链由岩藻糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸和半乳糖组成,其相对物质的量比为1.50:1.0:0.79:2.06;中性糖比例与糖醇乙酸酯化分析岩藻糖、葡萄糖和半乳糖的相对物质的量比(1.76:1.0:1.98)接近;糖醛酸咔唑法与该方法分析葡萄糖醛酸的含量分别为16.19%和14.85%。以上结果表明所建立的衍生化方法及GC-MS同时定量分析多糖酸水解物中单糖和糖醛酸的方法可行。此外还对葡萄糖醛酸的质谱裂解机理进行了阐述。     

柱前衍生超高效液相色谱-串联四极杆质谱法测定仙草多糖组成及其含量

建立了测定仙草多糖组成及其含量的超高效液相色谱-串联四极杆质谱分析方法。仙草样品在碱性条件下用沸水提取,提取液经固相萃取小柱净化后加三氟乙酸在110℃水解,然后采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生。以Waters ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm i.d.×50 mm,1.7μm)为分析柱,乙腈和缓冲盐溶液(0.5 mmol/L乙酸铵-0.05%乙酸)为流动相进行梯度洗脱分离,流速0.5 mL/min,电喷雾正离子多反应监测模式检测,内标法定量。结果显示8种单糖在1～100μmol/L浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数r2均大于0.96,方法的回收率为84%～112%,相对标准偏差(RSD)不高于4.7%。仙草多糖由甘露糖、鼠李糖、核糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和木糖8种单糖组成,其摩尔百分比为7.4%、5.7%、4.2%、0.9%、28.4%、26.5%、16.4%和10.6%。该法简单、快速、灵敏高、重现性好,可用于仙草多糖的单糖组成分析和含量测定。     

基于高效阴离子色谱-脉冲安培法优化阿拉伯木聚精单精组成分析

以大粒车前子来源阿拉伯木聚糖为研究对象,采用完全酸水解结合高效阴离子色谱-脉冲安培法测定单糖组成,系统优化酸的种类和浓度、水解温度和时间、水解后样品放置时间等水解条件.结果表明,将车前子多糖置于2 mol/L H2 SO4、120℃常压油浴条件下水解2 h时,效果较好,但水解后稀释液放置时间不宜超过6 h.大粒车前子多糖主要由阿拉伯糖(8.89%)和木糖(41.52%)组成,同时检测出半乳糖醛酸(0.73%)、葡萄糖醛酸(3.44%)和微量的半乳糖、葡萄糖,结果重现性良好.利用上述最优条件水解黍子壳、燕麦麸皮和青稞来源阿拉伯木聚糖并分析单糖组成,均获得较好结果.本研究为分析各种来源阿拉伯木聚糖的单糖组成提供了参考.     

竹黄多糖的化学研究

竹黄是高等真菌,腐生于箣竹上.子实体经分离后按常规发酵,再分离、纯化得到竹黄多糖SB1及SB2两个组分.物理化学性质测定证明分别为单一的均匀组分.经定性及定量气相层析分析表明SB1含D-葡萄糖、D-半乳糖和L-阿拉伯糖,摩尔比为0.37:1:0.07;SB2含D-葡萄糖、D-半乳糖、D-甘露糖和L-阿拉伯糖,摩尔比为0.25:1:0.47:0.12.经甲基化、过碘酸盐氧化、Smith降解和逐步水解等证明SB1的重复结构中含8种类型的单糖连接方式,非还原末端基团为葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖,主要键的连接方式为1,3-和1,3,6-葡萄糖及1,4-,1,6-和1,3,6-半乳糖.SB2的重复结构中含7种类型的单糖连接方式,非还原末端基团为葡萄糖和阿拉伯糖,主要单糖的连接方式为1,2-和1,3,6-甘露糖及1,4-,1,6-和1,3,6-半乳糖.上述多糖为一种新的杂多糖.     

柱前衍生化-高效液相色谱法分析缅甸刺梧桐胶多糖的单糖组成

利用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化-高效液相色谱法,优化10种常见单糖的色谱分离条件,并用于不同等级的自制刺梧桐胶多糖的单糖组成分析.对自制刺梧桐胶多糖的单糖组成分析结果表明,自制刺梧桐胶多糖由葡萄糖醛酸(GlcUA)、鼠李糖(Rha)、半乳糖醛酸(GalUA)、半乳糖(Gal)、阿拉伯糖(Ara)和岩藻糖...     

离子色谱法测定不同产地葛根多糖中的单糖组成

建立了葛根中岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖、核糖、甘露醇、木糖醇、果糖等11种单糖的离子色谱方法,并应用此方法分析了不同产地葛根多糖中单糖组成及含量。葛根多糖经超声提取,Box-Behnken响应面优化超声提取条件,三氟乙酸水解,以Carbo Pac PA20(150 mm×3 mm)色谱柱分离,20 mmol/L NaOH溶液等度洗脱。结果表明,11种单糖的定量限为0.03~0.07 mg/kg,在0.2~5 mg/L线性范围内线性关系良好(r~20.9990),加标回收率为80.3%~112.4%。经Box-Behnken响应面优化后的最佳提取工艺为液料比28:1(mL/g),超声时间44 min,超声温度65℃。经离子色谱方法测定不同产地的葛根样品中均含有岩藻糖、鼠李糖、葡萄糖,其中葡萄糖的含量最高含量在114.3~622.2 mg/g之间。方法可为葛根质量评价提供技术支撑。     

海水小球藻中多糖的提取及其单糖组成的气相色谱-质谱分析

在温度为70℃、功率为600 W、提取时间为30 m in的条件下,海水小球藻中的多糖可以得到较好的提取。经过优化,当超声波作用时间为90 m in、超声波功率为300 W、水解液为1 mol/L乙酸时,小球藻多糖的超声水解效果最好。碱提、水提、酸提海水小球藻多糖中的单糖组成,经过GC-MS分析,它们的单糖组成各不相同。碱提粗多糖中所含单糖为鼠李糖、L-岩藻糖、D-阿拉伯糖、D( )-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖,各单糖百分含量分别为20.68%、0.32%、1.0%、2.20%、4.58%、50.28%、20.91%(W/W);水提海水小球藻粗多糖中含鼠李糖、核糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖8种单糖,它们百分比分别为2.32、2.36、0.24、0.89、0.56、3.44、78.21、11.99%(W/W);酸提粗多糖中所含单糖为鼠李糖、核糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,各单糖百分含量分别为2.75、1.75、0.23、1.04、0.61、5.99、74.33、13.30%(W/W)。本实验所建立的微波辅助提取、超声水解多糖、GC-MS分析多糖中的单糖组成等方法,具有简便、快速、准确的特点。可用于海藻和其它植物中的多糖研究。     

高效液相色谱法分析新型细菌多糖中单糖和糖醛酸组成

建立了柱前1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生-高效液相色谱法,分离检测新型细菌多糖中5种单糖及糖醛酸组成的分析方法。新型细菌多糖中加入单糖内标木糖后,经3mol/L三氟乙酸水解,再用PMP进行衍生化,采用XBridgeTMC18柱(250×4.6mm,5μm),以50mmol/L KH2PO4溶液(pH=5.5)和乙腈为流动相,在245nm波长检测。定量分析结果表明,该多糖由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖组成,其质量比为1.77∶0.44∶8.52∶1.32∶1.67。该方法重现性良好,能够快速对多糖样品进行组成分析。     

柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生化反相高效液相色谱（HPLC）法,建立了9种常见单糖的分离模式,并成功地用于当归多糖的单糖组成分析,具有良好的重复性。结果表明,当归多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖7种单糖组成,其摩尔比为0．57：1．00：0．13：3．06：8．16：7．17：12．69。该HPLC方法是简单、快速、灵敏、方便的分析技术,可用于当归多糖的质量控制。     

桑叶多糖SJB的结构分析和蛋白酪氨酸磷酸酯酶PTP1B抑制活性

通过DEAE-纤维素和凝胶过滤柱色谱对桑叶碱提粗多糖进行分级分离, 获得均一多糖SJB, 进行结构鉴定. 采用蛋白酪氨酸磷酸酯酶PTP1B体外模型对SJB进行降血糖活性测定. 结果表明: SJB的相对分子质量为5.4×104, 由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸组成的酸性杂多糖; 主链由1,2-、1,2,4-连接的鼠李糖和1,4-、1,3,4-连接的半乳糖醛酸组成; 侧链包括末端、1,5-、1,3,5-连接的阿拉伯糖; 末端、1,4-连接的葡萄糖以及末端、1,3-、1,4-、1,6-连接的半乳糖, 主要通过鼠李糖的O4位和半乳糖醛酸的O3位与主链相连. 该多糖为首次从桑叶中获得的酸性杂多糖. 20 μg/mL SJB对PTP1B的抑制率为31.7%.     

柱前衍生化-HPLC法分析不同产地厚朴叶多糖的单糖组成

建立了1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化-高效液相色谱法(HPLC)同时测定厚朴叶多糖中的6种单糖含量的方法。采用Phenomenex(4.6 mm×250 mm, 4μm)为色谱柱，流动相为0.2%磷酸溶液-乙腈(体积比为82∶18),流速为1.0 mL/min,检测波长为245 nm,柱温为35℃。结果显示，基于HPLC法所建立的单糖检测方法，6种单糖成分在各自线性范围内线性关系良好(R²≥0.9994),平均加标回收率为97.17%～100.22%,相对标准偏差(RSD,n=6)为1.67%～2.82%。16批不同产地厚朴叶单糖组成相似，主要是由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖和阿拉伯糖组成。主成分分析结果显示，湖北和重庆样品间的单糖组成得到明显区分。该试验所建立的方法操作简便，重复性和准确度高，适用于厚朴叶多糖中单糖成分的含量测定。     

纳米铜/石墨烯修饰电极用于离子交换色谱测定五种单糖

把纳米铜和石墨烯修饰在玻碳电极表面,制备了纳米铜/石墨烯复合修饰电极。采用电化学方法,在!1.5~0 V的循环扫描电位条件下,氧化石墨烯(GO)和Cu2+同时在玻碳电极上被电化学还原,形成石墨烯(Gr)和纳米铜(CuNPs)复合膜。所制备的修饰电极对葡萄糖等单糖化合物具有较高的电催化活性,且电极稳定性和重现性均良好。将此修饰电极作为电化学检测器,与高效阴离子交换色谱联用,分离测定了5种单糖化合物(岩藻糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖)。结果表明,岩藻糖和阿拉伯糖的线性范围为0.1~100 mg/L,半乳糖、葡萄糖和甘露糖的线性范围为0.5~100 mg/L,5种单糖化合物的线性相关系数均大于0.998,相对标准偏差RSD(n=6)为1.9%~2.5%,检出限在0.02~0.10 mg/L之间;将此方法用于测定样品桑黄粗多糖的单糖组成,测得5种单糖的回收率为84.8%~94.5%,准确度和精密度均较好。     

半叶马尾藻粗糖中单糖的离子色谱法分析

以60～80 ℃的水从半叶马尾藻干粉中提取粗多糖,用Sevage溶剂去蛋白纯化后,将粗多糖用4.0 g/L 的三氟乙酸在 80 ℃下水解,水解液在CarboPacTM PA10离子色谱柱(2 mm i.d.×250 mm)上以14.0 mmol/L NaOH溶液为流动相进行 分离,以电化学检测器检测半叶马尾藻粗糖水解产生的单糖成分及含量。结果表明,半叶马尾藻粗糖中木糖、半乳糖、阿 拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖和果糖的含量分别为2200,820,98,4560,358和740 mg/kg,加标回收率范围为86.0%~108.0%,检出限范围为5.6～89.6 μg/kg。该方法具有灵敏度高、精密度好、样品不需 要衍生化处理等优点,适合藻类样品中单糖的分析。     

多粘类芽孢杆菌HY96-2胞外多糖的分离纯化

多粘类芽孢杆菌HY96-2发酵液经乙醇沉淀,Sevag法去蛋白,透析和DEAE-52离子交换柱等手段纯化,获得HY96-2胞外多糖组分B和寡糖组分D,其中多糖组分B纯度为91.39%。进而采用凝胶渗透色谱法(GPC)、气相色谱法(GC)测定了多糖组分B的分子量,得组分B的分子量为1.22×10~6 Da。实验对组分B的单糖组成进行了分析,确定其含有5种单糖:鼠李糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖,它们的摩尔比为:2.52∶0.25∶1∶1.61∶2.24,为一种新结构多糖。