miR-150通过调节c-Myb抑制人慢性髓系白血病细胞系K562增殖

目的探讨miR-150在人慢性髓系白血病细胞系K562中的功能和作用机制。方法以临床收集的慢性髓系白血病患者、和健康人外周血中的单个核细胞为实验材料;实时定量PCR检测miR-150和c-Myb mRNA的表达水平;使用miR-150模拟物转染K562细胞;通过CCK-8法检测K562细胞增殖;通过流式细胞计量术检测K562细胞周期;荧光素酶报告基因实验结合Western blot检测miR-150对其下游靶基因c-Myb的调控作用。结果慢性髓系白血病患者与健康人相比,miR-150表达降低,而c-Myb表达升高;过量表达miR-150可以抑制K562细胞的增殖(P0.05),同时,阻滞K562细胞周期的运行;miR-150可以下调靶基因c-Myb的表达。结论 miR-150在慢性髓系白血病中表达下调,其作用机制是通过抑制癌基因c-Myb的表达抑制白血病细胞的增殖。     

circ＿0000376靶向miR-876-3p调控结肠癌细胞进程

目的 探讨circ＿0000376对结肠癌细胞SW480迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制。方法 选取30例结肠癌组织及其相应的癌旁组织;体外培养SW480细胞,根据实际转染蛋白情况分别设si-NC组、si-circ＿0000376组、miR-NC组、miR-876-3p组、si-circ＿0000376和anti-miR-876-3p共转染组以及sicirc＿0000376和anti-miR-NC共转染组。采取RT-qPCR检测circ＿0000376和miR-876-3p的表达水平、Transwell检测细胞迁移和侵袭、流式细胞术检测细胞凋亡、Western blot检测相关蛋白的表达、双荧光素酶报告基因实验检测circ＿0000376和miR-876-3p的靶向关系。结果 结肠癌组织中circ＿0000376较癌旁组织呈高表达（P<0.05）,miR-876-3p较癌旁组织呈低表达（P<0.05）;沉默circ＿0000376或过表达miR-876-3p可有效降低癌细胞恶性行为活性,MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白也呈更低表达,细胞凋亡活性Bax蛋白呈明显高表达...     

Circ-MALAT1靶向miR-101抑制膀胱癌细胞系SW780侵袭和迁移

目的 探讨circ-MALAT1靶向miR-101抑制膀胱癌细胞侵袭和迁移.方法 将膀胱癌细胞系SW780分为si-NC组(转染si-NC)、si-circ-MALAT1组(转染si-circ-MALAT1)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-101组(转染miR-101 mimics)、(si-circ-M...     

miR-203a-3p抑制人肝癌细胞系增殖

目的 探索miR-203a-3p对人肝癌细胞系增殖和凋亡的分子调节机制。方法 RT-qPCR检测临床肝癌(HCC)组织及肝癌细胞系中miR-203a-3p的表达;建立miR-203a-3p过表达的HepG2细胞模型;MTT法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;平板集落形成实验检测集落形成;细胞划痕实验检测细胞迁移;表达谱芯片检测mRNA水平;ELISA检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;Western blot检测TGF-β1表达。结果 miR-203a-3p在HCC组织中低表达(P<0.05),与肿瘤分期呈负相关(P<0.05);HepG2细胞中过表达miR-203a-3p可显著降低细胞增殖速率(P<0.05)、迁移能力(P<0.05)、克隆形成能力(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05);TGF-β1表达降低(P<0.05),而TGFβR1表达升高(P<0.05);细胞培养上清中TGF-β1含量降低(P<0.05);细胞内TGF-β1的蛋白降低(P<0.05);加入TGF-β1重组蛋白可减轻miR-2...     

miR-224-5p靶向GABRE对人结肠癌细胞系SW480增殖的影响

目的 探讨miR-224-5p通过靶点GABRE对结直肠癌细胞系增殖的抑制作用和可能的调控机制。方法 从基因表达综合数据库（GEO）中检索并筛选GPL18058的microRNA(miRNA)表达阵列,筛选出结直肠癌与正常组织差异表达的miR-224-5p后,通过Target Scan Human数据库预测其下游靶点GABRE,并利用UALCAN分析GABRE在结直肠癌组织中的表达情况和结直肠癌预后关系。利用实时定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌细胞系中的miR-224-5p和GABRE的表达水平。在结直肠癌细胞系SW480中,沉默miR-224-5p后,CCK-8法与克隆形成实验分析其增殖情况。RT-PCR和Western blot检测miR-224-5p对GABRE表达的影响。在SW480细胞中低表达GABRE,评估其对结直肠癌调节中的miR-224-5p的选择性作用。结果 在结直肠癌组织和细胞系中,miR-224-5p的表达异常上调,抑制其表达后,SW480细胞的增殖能力降低（P<0.05）。在结直肠癌组织和细胞系的基因和蛋白质水平上,miR-224-5p正调控GAB...     

miR-203靶向PIK3CA对结肠癌SW480细胞增殖的影响

目的探讨miR-203对结肠癌SW480细胞增殖的影响及可能机制。方法采用脂质体介导的miR-203模拟物转染结肠癌SW480细胞,通过实时定量PCR进行验证,Western blot检测miR-203过表达后SW480细胞中p110α蛋白的表达。采用CCK-8法检测miR-203过表达后,SW480细胞增殖能力的变化,采用生物信息学网站预测PIK3CA是否为miR-203的靶基因,进一步应用双荧光素酶报告基因实验进行验证。结果 miR-203模拟物转染SW480细胞组,miR-203的表达水平显著升高,p110α蛋白表达下调,miR-203过表达能抑制SW480细胞体外增殖,生物信息学分析结果显示PIK3CA是miR-203的靶基因之一,双荧光素酶实验证实PIK3CA为miR-203的下游靶基因。结论 miR-203通过靶向调控PIK3CA抑制结肠癌SW480细胞增殖。     

长链非编码RNA MCM3AP-AS1靶向调控 miR-876-5p促进人结直肠癌细胞系的增殖和迁移

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)微小染色体维持蛋白3相关蛋白-反义链1(MCM3AP-AS1)靶向调控miR-876-5p对结直肠癌(CRC)细胞的增殖和迁移的作用.方法 实时定量聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测CRC组织和细胞中MCM3AP-AS1的表达;用MTT法、划痕愈合实验和Transwell小...     

Circ-DDX5靶向miR-3940抑制人乳腺癌细胞系的增殖和侵袭

目的 探讨环状RNA-DDX5(circ-DDX5)在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌患者临床分期的关系,分析circ-DDX5对人乳腺癌细胞系增殖和侵袭能力的调控机制。方法 通过TCGA数据库分析circ-DDX5在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌患者临床分期的相关性。生物信息学分析和双荧光素酶报告实验验证circ-DDX5和miR-3940的靶向关系。通过TCGA数据库分析乳腺癌组织中circ-DDX5与miR-3940表达的相关性。RT-qPCR检测circ-DDX5在乳腺癌细胞系SK-BR-3、MDA-MB-231、BT-549、MCF-7、HCC-1937中表达。将circ-DDX5过表达质粒和阴性对照质粒转染至MDA-MB-231细胞,分别命名为circ-DDX5组和NC组。集落形成实验和Transwell小室法检测circ-DDX5组和NC组MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭。Western blot检测MDA-MB-231细胞增殖表型蛋白和侵袭表型蛋白表达。RT-qPCR检测circ-DDX5组和NC组MDA-MB-231细胞中miR-3940表达水平。结果 乳腺癌组织中...     

CARMA3基因敲减对结肠癌细胞HCT116生长和侵袭转移的抑制

目的:探讨CARMA3基因在人结肠癌细胞HCT116生长和侵袭转移中的作用及其机制。方法:选取高表达CARMA3的人结肠癌细胞株。应用慢病毒技术敲减CARMA3基因,puromycin筛选后构建稳定转染的HCT116-sh CARMA3细胞株。Real-time PCR和Western blot鉴定mRNA和蛋白表达的抑制情况。WST-1法和RTCA S16系统分析细胞增殖情况。集落形成实验观察集落形成。流式细胞术检测细胞周期。显微镜下观察上皮-间充质转化(EMT)形态变化。划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力的改变。Western blot分析相关分子变化,探讨可能机制。结果:4株人结肠癌细胞株中HCT116细胞的CARMA3 mRNA和蛋白表达量最高,构建稳定沉默CARMA3的HCT116-sh CARMA3细胞株,其中HCT116-sh CARMA3-93细胞中CARMA3的mRNA和蛋白受抑制最明显,将其作为细胞模型。相比于对照组,HCT116-sh CARMA3-93细胞形态发生EMT逆转,其增殖、集落形成、迁移和侵袭能力明显下降(P0.01)。HCT116-sh CARMA3-93的G_0/G_1细胞所占比例明显升高,S期细胞比例相应下降(P0.05)。信号通路分子Bcl10和NF-κB表达明显下调,MALT-1变化不明显;细胞周期相关蛋白cyclin D1显著下调,cyclin A表达略有下降;侵袭转移相关分子MMP-2和MMP-9的表达下调,MMP-7未见改变,TIMP-1和TIMP-2的表达上调;EMT相关分子E-cadherin的表达水平升高,N-cadherin、Snail、Slug和Twist的表达水平呈不同程度降低。结论:CARMA3可通过改变细胞周期和侵袭转移分子的表达、调控EMT来影响结肠癌细胞HCT116的生长和侵袭转移。这可能与NF-κB信号通路发生改变有关。     

LASP-1稳定转染对人结肠癌细胞株SW480细胞增殖及成瘤能力的影响

目的 探讨LIM和SH3蛋白1(LASP-1)对人结直肠癌细胞株体内外增殖能力的影响.方法 用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测LASP-1在结直肠癌细胞株中的表达,筛选LASP-1不/低表达细胞株;将LASP-1 cDNA导入内源性低表达LASP-1基因的人结直肠癌细胞株SW480细胞中,同时构建带绿色荧光蛋白(CFP)的表达载体转染SW480细胞株,G418筛选抗性克降,经鉴定后利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测LASP-1对细胞体外增殖的影响,通过整体成像系统观察LASP-1对细胞在裸鼠体内成瘤能力及肿瘤生长能力的影响.结果 成功构建pcDNA3-LASP-1和pEGFP-LASP-1表达载体,将其稳定转染低表达LASP-1的SW480细胞中.通过7 d连续比较,LASP-1基因的导入明显促进结直肠癌细胞的体外增殖能力.裸鼠皮下注射携带GFP的稳定细胞系,整体成像观察过表达LASP-1的细胞成瘤能力和肿瘤生长速度均强于对照细胞.结论 LASP-1基因具有促进结直肠癌细胞增殖的能力,可能作为结直肠癌发生过程中一个有价值的指标.

Abstract：

Objective To investigate the effect of LIM and SH3 protein 1 (LASP-1)expression on the proliferative ability of human colorectal cancer cells in vitro and in vivo. Methods RT-PCR and Western blot were used to screen cells of the colorectal cancer cell line with no or with minimal endogenous LASP-1 expression. LASP-1 cDNA with or without GFP was transfected into SW480 colorectal cancer cells with minimal LASP-1 expression. Stable transfectants were established after G418 selection. Cell proliferative capacity was assessed by MTT assay. Tumor growth was visualized by whole-body imaging system. Results pcDNA3-LASP-1 and pEGFP-LASP-1 vectors were successfully constructed and transfected into the SW480 cells. After comparative study for 7 days, LASP-1 over-expression was found capable of enhancing signific antly the proliferation of colorectal cancer cells in vitro. Stable transfectants with GFP expression were inoculated subcutaneously into the nude mice. Tumorigenesis and proliferation ability of LASP-1-overexpressed transfectants were higher than those of the control cells. Conclusion LASP-1 gene expression enhances proliferation of colorectal cancer cells and may serve as a useful marker for colorectal cancer progression.     

circUBE2D2 靶向 miR-376a-3p 调控结直肠癌 SW620 细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨 circUBE2D2 对结直肠癌 SW620 细胞增殖、 迁移及侵袭的影响及其可能作用机制。 方法 收集 2020 年 1 月至 2020 年 5 月大连大学附属新华医院肛肠外科收治的 45 例结直肠癌患者的癌组织及 其相应癌旁组织标本, 采用 qRT-PCR 法检测 circUBE2D2、 miR-376a-3p 的表达量; 以人结直肠癌细胞 SW620 为研究对象, 随机分为 si-NC 组、 si-circUBE2D2 组、 miR-NC 组、 miR-376a-3p 组、 si-circUBE2D2 + anti-miR-NC 组和 si-circUBE2D2 + anti-miR-376a-3p 组; CCK-8 法、 平板克隆形成实验、 划痕实验与 Transwell 实验分别检测细胞增殖、 克隆形成、 迁移及侵袭; 双荧光素酶报告实验检测 miR-376a-3p 过表达对野 生型载体 WT-circUBE2D2 的荧光素酶活性; Western 印迹法检测上皮型钙黏蛋白 (E-cadherin)、 神经型钙 黏蛋白 (N-cadherin) 蛋白表达量。 结果 与癌旁组织比较, 结直肠癌组织中 circUBE2D2 的表达量升高 (P< 0. 05), miR-376a-3p 的表达量降低 (P< 0. 05); 与 si-NC 组比较, si-circUBE2D2 组细胞活力、 划痕愈 合率和 N-cadherin 蛋白水平降低 (P< 0. 05), 细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少 (P< 0. 05), E-cadherin 蛋 白水平升高 (P< 0. 05); 与 miR-NC 组比较, miR-376a-3p 组细胞活力、 划痕愈合率和 N-cadherin 蛋白水平 降低 (P< 0. 05), 细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少 (P< 0. 05), E-cadherin 蛋白水平升高 (P< 0. 05); miR-376a-3p 过表达可抑制野生型载体 WT-circUBE2D2 的荧光素酶活性 (P< 0. 05); 与 si-circUBE2D2 + anti-miR-NC 组比较, si-circUBE2D2 + anti-miR-376a-3p 组细胞活力、 划痕愈合率和 N-cadherin 蛋白水平升高 (P< 0. 05), 细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多 (P< 0. 05), E-cadherin 蛋白水平降低 (P< 0. 05)。 结论 干扰 circUBE2D2 表达可通过靶向调控 miR-376a-3p 表达而降低结直肠癌细胞增殖、 克隆形成、 迁移及侵袭 能力。     

过表达miR-299-3p抑制人肾癌细胞系增殖和迁移

目的探讨miR-299-3p在肾癌细胞系增殖、迁移和侵袭的作用及机制。方法 RT-qPCR检测肾癌细胞系(786-O、769-P、ACHN和A498)和人正常肾小管上皮细胞系(HK-2)中miR-299-3p的表达;MTT法、细胞划痕实验、Transwell小室法检测miR-299-3p mimic对肾癌786-O细胞系增殖、迁移和侵袭的影响;在线生物信息学数据库对miR-299-3p的靶基因进行了预测。Western blot检测E-cadherin,N-cadherin、vimentin和MAP3K12的蛋白表达。结果 miR-299-3p在肾癌细胞系中均低表达(P0.05),且在786-O细胞中表达最低。过表达miR-299-3p可显著抑制肾癌细胞系786-O增殖、迁移、侵袭、体外成瘤和上皮间质转化(EMT),综合4个数据库的结果,发现预测的miR-299-3p的共同靶基为MAP3K12,荧光素酶报告基因验证了miR-299-3p与MAP3K12的靶向关系。miR-299-3p+MAP3K12共转染786-O细胞后,能够有效降低miR-299-3p mimic诱导的细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-299-3p在肾癌细胞中的作用机制可能是通过miR-299-3p靶向下调MAP3K12表达,调控EMT途径影响肾癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-211通过靶向调控TFAM抑制人乳腺癌细胞系增殖

目的探讨miR-211靶向线粒体转录因子A(TFAM)对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法用miR-211及TFAM作为研究对象。首先,在乳腺癌细胞中转染miR-211 mimics或miR-211抑制剂以实现miR-211过表达或miR-211沉默,并检测miR-211过表达或沉默时TFAM蛋白质的表达水平;其次,构建了在TFAM的5'端有或无6对碱基突变的荧光酶报告基因质粒(mut-TFAM/wt-TFAM),与miR-211 mimics或miR-211抑制剂共转染后检测荧光酶活性变化;然后,构建pc DNA3.1/TFAM质粒,与miR-211 mimics或miR-211抑制剂共转染后检测TFAM蛋白质表达水平变化;最后,检测pc DNA3.1/TFAM和mimics NC/miR-211 mimics共转染后乳腺癌细胞增殖的增殖。结果miR-211过表达抑制TFAM蛋白质表达(P0.01),miR-211沉默促进TFAM蛋白质表达(P0.01);miR-211可靶向结合TFAM调控其表达;pc DNA3.1/TFAM可实现TFAM过表达(mRNA P0.01,蛋白质P0.01),并可恢复miR-211对TFAM的抑制作用;miR-211可抑制乳腺癌细胞的增殖和增殖(P0.05),TFAM可促进乳腺癌细胞增殖增殖(P0.01),TFAM可回复miR-211对乳腺癌细胞增殖增殖的抑制作用(P0.05)。结论 miR-211靶向TFAM基因抑制人乳腺癌细胞的增殖。     

siRNA特异性沉默hTERT基因对人结肠癌LoVo细胞生物学行为的影响

目的:探讨靶向端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的siRNA抑制人结肠癌LoVo细胞生物学行为的影响和机制。方法:构建针对hTERT基因的siRNA(pU6-hTERT-siRNA),LipofectamineTM2000转染LoVo细胞,以同源性的pU6作阴性对照,以未转染的细胞作空白对照。MTT法检测细胞生长率。建立裸鼠结肠癌皮下移植瘤模型,瘤内注射法将pU6-hTERT-siRNAs、pU6转导,观察各组移植瘤生长情况。RT-PCR和荧光定量PCR检测细胞株和移植瘤细胞hTERTmRNA水平的变化。Western blotting检测hTERT蛋白水平的变化。结果:LoVo细胞转染pU6-hTERT-siRNA72 h后,细胞增殖抑制率达42.1%,显著高于阴性对照组(3.2%),P0.01。裸鼠皮下移植瘤转染pU6-hTERT-siRNA14 d后,种植瘤体积为(85.9±18.7)mm3,显著小于阴性对照组[(157.4±55.6)mm3]和空白对照组[(155.2±54.2)mm3],P0.01。荧光定量PCR和Western blotting结果显示转染pU6-hTERT-siRNA后,细胞株和移植瘤内的hTERT mRNA以及细胞株蛋白水平表达显著减少(P0.01),阴性对照和空白对照间无显著差异。结论:pU6-hTERT-siRNA在体内外能有效抑制结肠癌LoVo细胞中hTERT基因表达,对裸鼠皮下结肠癌细胞移植瘤有明显的抑制生长作用。     

BCL-3基因沉默对BCL-3高表达的人大肠癌RKO细胞增殖和药物敏感性的影响

 目的：构建针对人BCL-3基因的RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒载体,观察其对大肠癌细胞株中BCL-3基因的沉默效应,以及基因沉默对细胞生物学行为及药物敏感性的影响。方法：运用RT-PCR及Western blotting方法检测5株大肠癌细胞株中BCL-3的表达状况;构建人BCL-3基因的RNAi慢病毒载体,并转染BCL-3高表达的大肠癌细胞株,运用Western  blotting方法鉴定其对BCL-3基因的沉默效果;BCL-3基因沉默后运用细胞增殖实验及软琼脂克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响,运用MTT方法检测大肠癌细胞株对化疗药物敏感性的变化。结果：BCL-3高表达于大肠癌细胞株RKO中;成功构建了BCL-3　RNAi慢病毒载体,Western blotting实验显示其可抑制RKO细胞中BCL-3蛋白的表达;抑制BCL-3的表达后,增殖实验表明RKO细胞增殖能力下降,软琼脂克隆形成实验表明RKO细胞的克隆形成率下降;MTT实验表明BCL-3表达抑制后奥沙利铂对RKO细胞的半数抑制浓度（median inhibitory concentration, IC50）显著降低。结论: BCL-3表达抑制后,BCL-3高表达的大肠癌细胞株RKO的增殖能力下降,并且其对奥沙利铂的敏感性增强。     

lncRNA CERS6-AS1 通过调控 miR-138-2-3p 抑制人胶质瘤细胞系增殖

目的 探讨 lncRNA CERS6-AS1 对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。 方法 qRT-PCR 法检测胶质瘤组织、 癌旁组织中 CERS6-AS1 和 miR-138-2-3p 的表达量; Pearson 法分析胶质瘤组织中 CERS6-AS1 与 miR-138-2-3p 表达量的相关性; 体外培养人胶质瘤细胞 T98G, 将 si-NC、 si-CERS6-AS1、 miR-NC、 miR-138-2-3p mimics、 si-CERS6-AS1 与 anti-miR-NC、 si-CERS6-AS1 与 anti-miR-138-2-3p 分 别 转 染 至 T98G 细胞; CCK-8 法、 平板克隆形成实验、 Transwell 小室实验分别检测细胞增殖、 克隆形成、 迁移及侵袭 能力; 双荧光素酶报告基因实验检测 CERS6-AS1 和 miR-138-2-3p 的靶向关系。 结果 与癌旁组织比较, 胶 质瘤组织中 CERS6-AS1 的表达量升高 (P< 0. 05), miR-138-2-3p 的表达量降低 (P< 0. 05); CERS6-AS1 与 miR-138-2-3p 呈负相关 (r = - 0. 8899, P< 0. 001); si-CERS6-AS1 组细胞活力、 克隆形成细胞数、 迁移及侵 袭细胞数均低于 si-NC 组 (P< 0. 05); CERS6-AS1 可靶向调节 miR-138-2-3p 的表达; miR-138-2-3p 组细胞活 力、 克隆形成细胞数、 迁移及侵袭细胞数均少于 miR-NC 组 (P< 0. 05); si-CERS6-AS1 + anti-miR-138-2-3p 组细胞活力、 克隆形成细胞数、 迁移及侵袭细胞数均比 si-CERS6-AS1 + anti-miR-NC 组增多 (P< 0. 05)。 结论 干扰 CERS6-AS1 表达可通过调控 miR-138-2-3p 而抑制胶质瘤细胞增殖、 克隆形成、 迁移及侵袭。     

miR-197-3p调控DMBT1抑制甲状腺癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-197-3p是否通过靶向调控恶性脑瘤缺失1基因(DMBT1)影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法RT-qPCR检测健康人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1和甲状腺癌细胞SW579、CGTHW-1中miR-197-3p表达;MTT法检测SW579细胞增殖;Transwell小室法检测SW579细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验验证miR-197-3p是否靶向DMBT1;Western blot检测细胞DMBT1、cyclinD1、p21、MMP-2和E-cadherin蛋白表达。结果与Nthy-ori 3-1细胞比较,SW579和CGTHW-1细胞中miR-197-3p相对表达量升高(P<0.05);抑制miR-197-3p表达后,SW579细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显受到抑制,细胞中cyclinD1蛋白和MMP-2蛋白表达降低而p21蛋白和E-cadherin蛋白表达升高;SW579细胞中miR-197-3p靶向负调控DMBT1的表达;过表达DMBT1明显抑制SW579细胞增殖、迁移和侵袭,而抑制DMBT1则能逆转miR-197-3p对SW579细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论miR-197-3p通过靶向调控DMBT1的表达,抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

敲减lncRNA RP11-626G11.3通过调控miR-532-3p抑制人肾癌细胞系的增殖和迁移

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA) RP11-626G11.3在肾癌组织和细胞系中的表达,探究敲减RP11-626G11.3对肾癌细胞生物学行为的影响。方法 用GEPIA数据库分析RP11-626G11.3在肾癌组织和癌旁组织中的表达情况,用TCGA数据库分析RP11-626G11.3表达水平与肾癌患者生存期的关系。QPCR检测RP11-626G11.3在多种肾癌细胞系中的表达。选择RP11-626G11.3表达最高的肾癌细胞系,分别转染对照质粒(si-NC组)和RP11-626G11.3沉默质粒(si-RP11-626G11.3组)。MTT法和细胞划痕实验检测细胞的增殖和迁移。通过生物信息学方法找到与RP11-626G11.3结合的微小RNA(miRNA),并用双荧光素酶报告实验进行验证。QPCR检测两组细胞中miR-532-3p的表达。Western blot检测两组细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白的表达。结果 与癌旁组织相比,肾癌组织中RP11-626G11.3表达量上调(P<0.01)。与RP11-626G11.3高表达的患者相比,RP11-626G1...     

茯苓酸抑制人结肠癌细胞系HT-29增殖

目的 探讨茯苓酸(PA)对人结肠癌细胞系HT-29增殖和凋亡的影响及可能的分子机制。方法 将细胞分为空白组、20、40和80μmol/L PA组。MTT法检测HT-29细胞增殖;流式细胞仪测定HT-29细胞周期和凋亡;Western blot检测HT-29细胞中细胞周期、凋亡以及Akt/MDM2/p53信号通路相关蛋白质表达。构建HT-29细胞的肿瘤异种移植模型,随后将成瘤裸鼠随机分为对照组、腹腔注射10、30和60 mg/kg PA组(每组6只),测量肿瘤体积、质量;免疫组化测定Ki-67、cleaved caspase-3蛋白表达;Western blot检测肿瘤组织中Akt/MDM2/p53信号通路相关蛋白表达。结果 各剂量PA均可呈浓度依赖性显著降低HT-29细胞增殖活力,S、G₂/M期细胞比例,细胞中B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)蛋白表达水平和p-Akt/Akt、p-MDM2/MDM2比值(P<0.05),同时升高细胞凋亡率、G₀/G_1...