β-1,4半乳糖基转移酶-I在钳夹伤后大鼠坐骨神经中表达的变化

为了观察β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase-I,β-1,4-GalT-I)在正常和钳夹伤后大鼠坐骨神经中表达的变化,本研究采用RT-PCR方法,从小鼠坐骨神经中特异性地扩增β-1,4-GalT-I cDNA片段并将其克隆到pGEM-T载体。采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA探针。通过原位杂交和图像分析的方法,观察β-1,4-GalT-I mRNA在正常和夹伤大鼠坐骨神经中的表达及其变化。结果表明:β-1,4-GalT-I mRNA在大鼠坐骨神经的髓鞘中表达,在夹伤坐骨神经后1~2d,β-1,4-GalT-I mRNA在坐骨神经的表达最高,于夹伤后1周开始下降,在夹伤后1个月恢复至正常水平。上述结果提示坐骨神经夹伤后β-1,4-GalT-I mRNA的表达发生变化,并且主要表达在坐骨神经的Schwann细胞。本研究结果为进一步分析β-1,4-GalT-I在周围神经再生中的调控机制奠定了基础。     

N-糖链合成相关β-1,4-半乳糖基转移酶在大鼠坐骨神经损伤后的表达变化

为了分析与 N-糖链合成相关β-1,4-半乳糖基转移酶 - 、 、 (β-1,4-galactosyltransferase , , ,β-1,4-Gal T- , , ) m RNA在正常和损伤坐骨神经组织的表达变化。本研究采用 RT-PCR方法 ,分析 β-1,4-Gal T- 、 、 在小鼠坐骨神经中的表达存在。以扩增的 c DNA片断标记探针 ,Northern blot分析β-1,4-Gal T- 、 、 m RNA在正常和损伤大鼠坐骨神经的表达变化。结果表明 :通过 RT-PCR方法 ,检测到 β-1,4-Gal T- 、 、 在小鼠坐骨神经中的表达存在 ;采用 Northern blot方法 ,发现β-1,4-Gal T- 、 、 在正常大鼠坐骨神经中有表达 ,并在坐骨神经损伤后发生表达变化 ,但三种同功酶的表达变化各不相同。结论 :本实验发现 β-1,4-Gal T- 、 、 在坐骨神经有表达 ,并在坐骨神经损伤后发生表达变化。提示与 N-糖链合成相关的蛋白修饰调节在周围神经损伤后再生和退变过程中可能发挥一定的作用     

β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ对施万细胞增殖的影响

目的 探讨周围神经施万细胞表达β1，4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1，4-GalT-Ⅰ)对其增殖的影响。方法 将构建的正、反义β-1，4-GalT-Ⅰ表达质粒，转染到施万细胞中，分析转染细胞倍增时间、^3H-TdR掺人情况以及细胞周期变化。结果 转染正义β-1，4-GalT-Ⅰ后施万细胞的增殖受到抑制，这种作用随转染浓度增大而增强；在G1／G0期的细胞数目增加，S期的数目减少。而转染反义β-1，4-GalT-Ⅰ有相反的作用。结论 β-1，4-GalT-Ⅰ对施万细胞的增殖有抑制作用，可能在周围神经施万细胞的增殖调节中发挥重要作用。     

地高辛标记的小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ RNA 探针的制备和应用

为了制备小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶I(β-1,4-galactosyltransferase 1,β-1,4-GalT-1)地高辛标记的RNA探针以探讨β-1,4-GalT-I mRNA在坐骨神经组织的表达定位,本研究用提取的小鼠脑总RNA,采用RT-PCR方法,得到β-1,4-GalT-I的DNA片断,将其克隆到pGEM-T载体;采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA探针;运用点杂交的方法分析标记探针的灵敏度;最后应用该探针,通过原位杂交的方法,分析β-1,4-GalT-I mRNA在小鼠坐骨神经的表达.结果:构建了β-1,4-GalT-I/pGEM-T质粒,获得了高效价的地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA探针,应用该探针发现β-1,4-GalT-J在小鼠坐骨神经髓鞘中有表达.以上结果表明,制备的地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA原位杂交探针可特异地检测β-1,4-GalT-1 mRNA在组织中的表达.本研究为进一步分析β-1,4-GalT-I在坐骨神经及其它神经组织发育和损伤过程中的表达奠定基础.     

Schwann细胞表达β1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ对神经元轴突生长的影响

为了探讨周围神经Schwann细胞中不同β1,4半乳糖基转移酶-1(β-1,4-GalT-I)表达水平对神经元轴突生长的影响,本实验首先构建了正、反义β-1,4-GalT-I表达质粒,然后将构建的不同浓度的正、反义表达质粒超表达于分离、纯化的大鼠Schwann细胞,最后将转染的Schwann细胞与分离的大鼠背根神经节共培养;根据共培养神经元轴突延伸的数目和面积,分析Schwann细胞中不同β-1,4-GalT-I表达水平对神经元轴突生长的影响。结果发现:转染正义β-1,4-GalT-I的Schwann细胞能促进共培养神经节神经元轴突的长出和延伸。在一定的转染浓度内,这种促神经生长作用随转染浓度增大而增强,而转染反义β-1,4-GalT-I却有相反的作用。提示周围神经Schwann细胞中表达β-1,4-GalT-I可能在维持正常神经的功能和促进损伤神经的修复发挥重要作用。     

β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ在树突状细胞中的表达及作用

目的：观察β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ（β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ）在人外周血来源的树突状细胞（Dendritic cells,DCs）中的表达与定位,研究其对DCs免疫功能的影响。方法：人外周血单核细胞经GM-CSF＋IL-4＋TNF-α诱导培养分化为DCs,采用RT-PCR、流式细胞术和激光共聚焦技术观察DCs中β-1,4-GalT-Ⅰ的表达与定位;通过细胞粘附试验分析β-1,4-GalT-Ⅰ表达与细胞粘附能力的关系。用α-乳清蛋白（α-lactalbumin,LA）作为细胞表面β-1,4-GalT-Ⅰ抑制剂,研究β-1,4-GalT-Ⅰ在DCs细胞粘附以及与CD4＋Th细胞形成免疫突触过程中的作用。结果：在人外周血来源DCs细胞表面和细胞浆内可表达长型和短型β-1,4-GalT-Ⅰ;长型β-1,4-GalT-Ⅰ或细胞表面β-1,4-GalT-Ⅰ的表达水平与细胞粘附能力呈正相关;α-LA既可抑制DCs对层粘连蛋白的粘附,又可抑制DCs与CD4＋Th形成免疫突触。结论：β-1,4-GalT-Ⅰ在DCs中表达,他们作为粘附分子参与细胞粘附和免疫突触形成。     

地高辛标记的小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶RNA探针的制备和应用

为了制备小鼠 β-1,4-半乳糖基转移酶 ( β-1,4-galactosyltransferase ,β-1,4-Gal T- )地高辛标记的 RNA探针以探讨β-1,4-Gal T- m RNA在坐骨神经组织的表达定位 ,本研究用提取的小鼠脑总 RNA,采用 RT-PCR方法 ,得到β-1,4-Gal T- 的 DNA片断 ,将其克隆到 p GEM-T载体 ;采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ;运用点杂交的方法分析标记探针的灵敏度 ;最后应用该探针 ,通过原位杂交的方法 ,分析 β-1,4-Gal T- m RNA在小鼠坐骨神经的表达。结果 :构建了β-1,4-Gal T- /p GEM-T质粒 ,获得了高效价的地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ,应用该探针发现 β-1,4-Gal T- 在小鼠坐骨神经髓鞘中有表达。以上结果表明 ,制备的地高辛标记的正、反义 β-1,4-Gal T- RNA原位杂交探针可特异地检测β-1,4-Gal T- m RNA在组织中的表达。本研究为进一步分析β-1,4-Gal T- 在坐骨神经及其它神经组织发育和损伤过程中的表达奠定基础。     

蛋白激酶C在脂多糖诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达中的作用

目的 研究蛋白激酶c(PKC)对脂多糖(LPS)诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ)表达的调节作用,以及对内皮细胞骨架结构改变及其黏附能力的影响.方法 分别用PKC激动剂或几种不同类型的PKC抑制剂预处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs)30 min,LPS刺激HUVECs 4 h后,RT-PCR、Western blot方法 检测β-1,4一GalT-Ⅰ表达变化,细胞荧光染色观察β-1,4-GalT-Ⅰ催化的糖链表达变化及细胞骨架结构的改变,通过内皮-单核细胞黏附试验观察HUVECs黏附能力的改变.结果 几种不同类型的PKC抑制剂均能不同程度地抑制LPS刺激HUVECs引起的β-1,4-GalT-Ⅰ表达的上调,PKC激动剂能够使上调的β-1,4-GalT-Ⅰ的表达进一步增加;在HUVECs中β-1,4-GalT-Ⅰ与细胞骨架有共同定位,PKC抑制剂显著抑制LPS诱导的内皮细胞骨架蛋白的重构和β-1,4-GalT-Ⅰ细胞内的再分布;PKC抑制剂显著抑制LPS诱导的内皮-单核细胞黏附能力的上调.结论 PKC可能参与调节LPS诱导的HUVECs β-1,4-GalT-Ⅰ的表达,可能多种类型的PKC参与了这一调节过程;PKC可能通过对β-1,4-GalT-Ⅰ的调节进而影响炎症过程中内皮细胞骨架蛋白的重构及内皮细胞与单核细胞的黏附能力.     

细胞表面β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ在免疫突触形成中的作用

目的:研究细胞表面β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase I,β-1,4-GalT-I)在免疫突触形成中的作用。方法:以抗CD3、CD28单克隆抗体活化Jurkat细胞,应用实时荧光定量PCR及流式细胞术检测分析β-1,4-GalT-I的表达变化,激光共聚焦显微镜观察β-1,4-GalT-I在Jurkat细胞活化前后的表达与定位;将Jurkat细胞与SEB负载的Raji细胞共培养以构建Jurkat-Raji细胞免疫突触,观察β-1,4-GalT-I在免疫突触中的定位。结果:β-1,4-GalT-I mRNA表达水平随着Jurkat细胞的活化逐渐增高,在细胞活化后36小时达到高峰;活化后细胞表面β-1,4-GalT-I分子的表达较静止状态高;共聚焦显微镜显示在活化的Jurkat细胞表面及Jurkat-Raji细胞免疫突触部位β-1,4-GalT-I表达信号增强且其分布发生重排和簇集,且与CD3分子共定位,与CD28分子部分共定位。结论:Jurkat细胞表面的β-1,4-GalT-I分子参与了免疫突触的形成。     

PKC在TNF-α诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达中的作用

目的:研究蛋白激酶C(PKC)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-GalT-Ⅰ)表达的调节作用,以及对内皮细胞骨架结构改变及其黏附能力的影响。方法:分别用PKC激动剂或几种不同类型的PKC抑制剂预处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs),再用TNF-α刺激HUVECs,应用RT-PCR、Western blot方法检测β-1,4-GalT-Ⅰ表达变化,应用细胞荧光染色观察β-1,4-GalT-Ⅰ催化的糖链的表达变化及细胞骨架结构的改变,通过内皮-单核细胞黏附试验观察HUVECs黏附能力的改变。结果:几种不同类型的PKC抑制剂均能不同程度的抑制TNF-α刺激HU-VECs引起的β-1,4-GalT-Ⅰ表达的上调,PKC激动剂能够使上调的β-1,4-GalT-Ⅰ的表达进一步增加;在HUVECs中β-1,4-GalT-Ⅰ与细胞骨架有共同定位,PKC抑制剂显著抑制TNF-α诱导的内皮细胞骨架蛋白的重构和β-1,4-GalT-Ⅰ细胞内的再分布;PKC抑制剂显著抑制TNF-α诱导的内皮-单核细胞黏附能力的上调。结论:PKC可能参与调节TNF-α诱导的HUVECsβ-1,4-GalT-Ⅰ的表达,并且可能多种类型的PKC参与了这一调节过程;PKC可能通过对β-1,4-GalT-Ⅰ的调节进而影响炎症过程中内皮细胞骨架蛋白的重构及内皮细胞与单核细胞的黏附能力。     

β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达质粒在许旺细胞中的转染与鉴定

目的构建β1,4-半乳糖基转移酶-I(β1,4-galactosyltransferase I, β-1,4-GalT-I)表达质粒,并将其转染到许旺细胞中,为探讨周围神经许旺细胞表达β-1,4-GalT-I的生物学意义提供研究基础.方法构建β-1,4-GalT-I表达质粒,并将其转染到分离培养的许旺细胞中;用特异识别β1,4-半乳糖苷键的蓖麻凝集素-I(Ricinus Communis Agglutinin-I, RCA-I)免疫组织化学方法和Northern Blot鉴定转染情况.结果通过酶切鉴定和测序分析,实验成功构建β-1,4-GalT-I表达质粒.将构建的表达质粒转染到许旺细胞中,经鉴定表明,转染的表达质粒在许旺细胞中能表达β-1,4-GalT-I,并随转染浓度增高而表达增加.结论β-1,4-GalT-I在许旺细胞中的转染和表达,对分析许旺细胞表达β-1,4-GalT-I的意义如对其自身增殖的影响和对神经元生长作用,提供了研究基础.     

β1,4-半乳糖基转移酶-I表达质粒在许旺细胞中的转染与鉴定

目的　构建 β1,4 半乳糖基转移酶 I(β1,4 galactosyltransferaseI,β 1,4 GalT I)表达质粒 ,并将其转染到许旺细胞中 ,为探讨周围神经许旺细胞表达 β 1,4 GalT I的生物学意义提供研究基础。 方法　构建 β 1,4 GalT I表达质粒 ,并将其转染到分离培养的许旺细胞中 ;用特异识别 β1,4 半乳糖苷键的蓖麻凝集素 I(RicinusCommunisAgglutinin I,RCA I)免疫组织化学方法和NorthernBlot鉴定转染情况。结果　通过酶切鉴定和测序分析 ,实验成功构建 β 1,4 GalT I表达质粒。将构建的表达质粒转染到许旺细胞中 ,经鉴定表明 ,转染的表达质粒在许旺细胞中能表达 β 1,4 GalT I,并随转染浓度增高而表达增加。 结论　β 1,4 GalT I在许旺细胞中的转染和表达 ,对分析许旺细胞表达 β 1,4 GalT I的意义如对其自身增殖的影响和对神经元生长作用 ,提供了研究基础     

β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ在CD4+TH细胞中的表达及对其黏附能力的影响

目的研究β-1，4-半乳糖基转移酶I（β-1，4-galactosyltransferase I，β-1，4-GalT I）在CD4^＋TH中的表达与定位以及β-1，4-GalT I对CD4^＋ TH细胞黏附能力的影响。方法采用免疫磁珠阳性分选法分离纯化CD4^＋ TH细胞，通过RT-PCR、荧光免疫细胞化学法和激光共聚焦技术鉴定CD4^＋ TH细胞中β-1，4-GaIT I的表达与定位；分别用rhIL-2、rhIL-12、rhIL-4等细胞因子组合诱导CD4^＋ TH细胞活化分化，通过半定量RT-PCR、FCM检测CD4^＋ TH细胞中β-1，4-GaIT I的表达变化，运用层黏连蛋白结合实验比较CD4^＋ TH细胞黏附能力的改变；用α-乳清蛋白干扰CD4^＋ TH细胞表面β-1，4-GaIT I的活性及底物特异性，用层黏连蛋白结合实验分析其对CD4^＋ TH细胞黏附能力的影响。结果CD4^＋ TH细胞表面和细胞浆内表达长型和短型β-1，4-GalT I；rhIL-2活化的CD4^＋ TH细胞长型β-1，4-GaIT I mRNA水平及细胞膜表面β-1，4-GaIT I表达水平、细胞黏附能力均高于未经活化的CD4^＋ TH细胞，rhIL-2＋rhIL-12诱导培养的CD4^＋ TH细胞增强更明显；CD4^＋ TH细胞长型β-1，4-GaIT I mRNA水平及细胞膜表面β-1，4-GaIT I表达水平均与CD4^＋ TH细胞黏附能力呈正相关；α-乳清蛋白干扰后CD4^＋ TH细胞黏附能力降低。结论β-1，4-GalT I在CD4^＋ TH细胞中表达，且与细胞黏附能力密切相关，提示β-1，4-GalT I可能在CD4^＋ TH细胞的黏附过程中发挥重要作用。     

β-1,4-半乳糖基转移酶6在淋巴细胞迁移中的分子机制研究

目的:研究β-1,4-半乳糖基转移酶6(β4galt6)在炎症条件下调节淋巴细胞迁移的分子机制。方法:CRISPR/Cas9敲除小鼠胰岛血管内皮细胞MS1上的β4galt6基因;黏附试验比较淋巴细胞与野生细胞株和基因敲除细胞株的黏附能力;RT-PCR及流式细胞术比较野生细胞株和基因敲除细胞株表面黏附分子的表达情况;Transwell模型比较淋巴细胞穿过野生细胞株和基因敲除细胞株的迁移能力。结果:基因敲除细胞株β4galt6 KO构建成功;淋巴细胞在炎症条件下与野生细胞株MS1的黏附显著高于与基因敲除细胞株β4galt6 KO;野生细胞株MS1表面细胞间黏附分子1(ICAM1)、血管内皮细胞黏附分子1(VCAM1)、P-selectin的表达显著高于基因敲除细胞株β4galt6 KO;淋巴细胞穿过野生细胞株MS1的能力显著高于基因敲除细胞株β4galt6 KO。结论:在炎症条件下,β4galt6能够促进淋巴细胞的迁移。     

SchWann细胞表达β1,4半乳糖基转移酶-I对神经元轴突生长的影响

为了探讨周围神经Schwann细胞中不同β1，4半乳糖基转移酶-I(β-1，4-GalT-I)表达水平对神经元轴突生长的影响，本实验首先构建了正、反义β-1，4-GalT-1表达质粒，然后将构建的不同浓度的正、反义表达质粒超表达于分离、纯化的大鼠Schwann细胞，最后将转染的Schwann细胞与分离的大鼠背根神经节共培养；根据共培养神经元轴突延伸的数目和面积，分析Schwann细胞中不同β-1，4-GalT-I表达水平对神经元轴突生长的影响。结果发现：转染正义β-1，4-GalT-I的Schwann细胞能促进共培养神经节神经元轴突的长出和延伸。在一定的转染浓度内，这种促神经生长作用随转染浓度增大而增强，而转染反义β-1，4-GalT-1却有相反的作用。提示周围神经Schwann细胞中表达β-1，4-GalT-I可能在维持正常神经的功能和促进损伤神经的修复发挥重要作用。     

β-1，4-半乳糖基转移酶Ⅱ、V表达的亚细胞结构定位研究

为了研究β-1，4-半乳糖基转移酶Ⅱ和V(β-1，4-GalT-Ⅱand V)蛋白表达的亚细胞结构定位，本实验构建了β-1，4-GalT-Ⅱ和V融合绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒，分别将构建的质粒转染到PC12细胞和肝癌7721细胞中，在荧光显微镜下观察β-1，4-GalT-Ⅱ和V在其中表达的亚细胞结构定位。发现，β-1，4-GalT-Ⅱ和V主要表达在这两种细胞的细胞核旁的Golgi复合体，说明它们主要分布在Golgi复合体上。提示它们可能是在Golgi复合体参与蛋白质的糖链修饰。     

Galβ-1,4-GlcNAc在钳夹伤后大鼠坐骨神经中的表达变化

目的:分析Galβ-1,4-GlcNAc在正常和钳夹伤后大鼠坐骨神经中的表达变化.方法:采用免疫荧光和凝集素组织化学的方法检测Galβ-1,4-GlcNAc在正常和夹伤的大鼠坐骨神经中的表达定位.然后用图像分析的方法分析Galβ-1,4-GlcNAc在正常和夹伤的大鼠坐骨神经中的表达变化.结果:运用免疫荧光、凝集素组织化学方法和图像分析的方法检测Galβ-1,4-GlcNAc在夹伤后的坐骨神经中的表达定位及变化,发现其表达在外周神经中的雪旺细胞中并于夹伤后的一周达到高峰,于夹伤后两周恢复至正常水平.结论:提示Galβ-1,4-GlcNAc在坐骨神经夹伤后发生表达变化,并且主要表达在坐骨神经的雪旺细胞中,说明Galβ-1,4-GlcNAc在周围神经再生的早期发挥着重要的作用.     

β-1,4-半乳糖苷键在周围神经损伤后的表达变化

为了探讨正常和损伤的周围神经中β-1,4-半乳糖苷键的表达定位和表达变化 ,本研究用特异识别β-1,4-半乳糖苷键的蓖麻凝集素 -I免疫组织化学方法结合 S-10 0和 neurofilam ent免疫双标记 ,研究了大鼠坐骨神经损伤对 β-1,4-半乳糖苷键的合成影响。结果表明 ,β-1,4-半乳糖苷键主要分布在正常和损伤坐骨神经的 Schwann细胞中 ,图像分析表明β-1,4-半乳糖苷键的表达在周围神经损伤后 1～ 2 d内有所增高 ,以后随时间延长表达量逐步下降。本研究结果提示 ,周围神经损伤对 β-1,4-半乳糖苷键的表达有影响 ,Schwann细胞表达的β-1,4-半乳糖苷键可能参与周围神经损伤修复相关因子的修饰调控     

Ga1β-1，4-G1cNAc在钳夹伤后大鼠坐骨神经中的表达变化

目的：分析Ga1β-1，4-G1cNAc在正常和钳夹伤后大鼠坐骨神经中的表达变化。方法：采用免疫荧光和凝集素组织化学的方法检测Ga1β-1，4-G1cNAc在正常和夹伤的大鼠坐骨神经中的表达定位。然后用图像分析的方法分析Ga1β-1，4-G1cNAc在正常和夹伤的大鼠坐骨神经中的表达变化。结果：运用免疫荧光、凝集素组织化学方法和图像分析的方法检测Ga1β-1，4-G1cNAc在夹伤后的坐骨神经中的表达定位及变化，发现其表达在外周神经中的雪旺细胞中并于夹伤后的一周达到高峰，于夹伤后两周恢复至正常水平。结论：提示Ga1β-1，4-G1cNAc在坐骨神经夹伤后发生表达变化，并且主要表达在坐骨神经的雪旺细胞中，说明Ga1β-1，4-G1cNAc在周围神经再生的早期发挥着重要的作用。     

β-1,4-半乳糖苷转移酶生物学功能的研究进展

β1,4-半乳糖苷转移酶是糖基转移酶的家族成员之一。近年来随着编码该家族成员基因的分离与克隆,进一步探求其重要生物学功能已成为国际酶学界的研究热点,目前的研究结果表明该酶具有与受精过程、神经元细胞迁移、癌细胞转移、表皮细胞增殖及自体免疫性疾病等相关的重要生物学功能。