甘氨脱氧胆酸对人肝癌细胞增殖抑制与诱导凋亡的实验研究

目的探讨甘氨脱氧胆酸（GDCA）对人肝癌细胞SMMC7721增殖的影响以及细胞凋亡作用。方法采用96孔细胞培养板体外培养人肝癌细胞株SMMC7721,在24、48、96h后加入GDCA,并进行四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验,计算肝癌细胞的生长抑制率;采用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的影响。结果GDCA对肝癌细胞SMMC7721有增殖抑制作用,GDCA作用细胞72h后,200、400、800／μmo／L GDCA抑制率分别为18．18％、29．94％和88．54％;细胞周期分析显示,G1期细胞比例与对照组相比明显升高,GDCA200、400／μmol／L处理组P〈0．05,S期有不同程度的下降,GDCA400／μmol／L处理组P〈0．01。Annexin V-FITC检测结果显示GDCA 200、400μmol／L处理组48和72h后细胞凋亡比例比对照组明显增加,差异具有统计学意义。结论GDCA对人肝癌细胞有增殖抑制作用,并能诱导SMMC7721细胞凋亡。     

大黄素抑制肺癌Anip973细胞增殖作用的量效关系

目的：大黄素是酪氨酸激酶抑制剂，有诱导癌细胞凋亡作用，应用流式细胞仪检测大黄素剂量对人肺腺癌细胞株Anip973增殖抑制作用的量效关系。方法：实验于2004—05／11在哈尔滨医科大学附属第二医院科研试验中心完成。采用四甲基偶氮唑盐比色试验和生长曲线测定活细胞数来比较不同剂量大黄素在不同作用时间内对体外培养的Anip973细胞增殖的影响，并用流式细胞术检测该细胞DNA相对含量来观察细胞增殖周期变化及其凋亡率。结果：①在一定范围内，大黄素的剂量越大、作用时间越长对肿瘤细胞生长的抑制作用越强，凋亡率也越高，给予大黄素干预72h后，通过流式细胞仪可以观察到肿瘤细胞出现凋亡，0，10，20，40，60μmol／L大黄素干预肿瘤细胞凋亡率分别为1．09％，9．40％，17．21％，27．85％，40．71％，这些数据显示细胞凋亡作用，随着大黄素的剂量增加而增强(P&;lt;0．01)。②在大黄素干预条件下，DNA合成前期Anip973细胞比例仍然增加，DNA合成期大黄素可使Anip973细胞比例减少，DNA合成前期阻滞作用随大黄素剂量增加而加强，60μmol／L时其阻滞作用最强(76．18&;#177;1．51,F=150．69，P&;lt;0．01)。结论：大黄素可明显抑制Anip973细胞的增殖，其抑制作用具有量效关系。对细胞周期阻滞发生在DNA合成前期，从而产生了对肿瘤细胞增殖的抑制。     

大黄素抑制肺癌Anip973细胞增殖作用的量效关系

目的:大黄素是酪氨酸激酶抑制剂,有诱导癌细胞凋亡作用,应用流式细胞仪检测大黄素剂量对人肺腺癌细胞株Anip973增殖抑制作用的量效关系。方法:实验于2004-05/11在哈尔滨医科大学附属第二医院科研试验中心完成。采用四甲基偶氮唑盐比色试验和生长曲线测定活细胞数来比较不同剂量大黄素在不同作用时间内对体外培养的Anip973细胞增殖的影响,并用流式细胞术检测该细胞DNA相对含量来观察细胞增殖周期变化及其凋亡率。结果:①在一定范围内,大黄素的剂量越大、作用时间越长对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高,给予大黄素干预72h后,通过流式细胞仪可以观察到肿瘤细胞出现凋亡,0,10,20,40,60μmol/L大黄素干预肿瘤细胞凋亡率分别为1.09%,9.40%,17.21%,27.85%,40.71%,这些数据显示细胞凋亡作用,随着大黄素的剂量增加而增强(P<0.01)。②在大黄素干预条件下,DNA合成前期Anip973细胞比例仍然增加,DNA合成期大黄素可使Anip973细胞比例减少,DNA合成前期阻滞作用随大黄素剂量增加而加强,60μmol/L时其阻滞作用最强(76.18±1.51,F=150.69,P<0.01)。结论:大黄素可明显抑制Anip973细胞的增殖,其抑制作用具有量效关系。对细胞周期阻滞发生在DNA合成前期,从而产生了对肿瘤细胞增殖的抑制。     

不同途径移植羊膜上皮细胞在肝脏的定居

背景：细胞移植对肝脏疾病具有一定的疗效,与肝脏移植相比有其自身的优点,但有诸多问题尚待解决。目的：探讨不同途径移植的人羊膜上皮细胞在肝脏内定居情况。方法：从剖腹产后的人胎盘羊膜中分离人羊膜上皮细胞,PKH26荧光标记后计数1×107细胞通过大鼠腹腔、门静脉、尾静脉及肝脏内直接注入方式移植入大鼠体内。结果与结论：门静脉、尾静脉及肝脏直接注入途径移植的细胞均在肝脏内定居,但移植细胞数过量时造成局部肝组织的缺血坏死等不良反应。腹腔途径移植入体内的细胞未转移肝脏内。通过门静脉移植入体内的人羊膜上皮细胞在大鼠肝脏内维持存活至少16d。移植细胞过量时,导致肝脏血管堵塞及坏死。证明人羊膜上皮细胞至少在大鼠肝脏中存活2周,提示低免疫原性的羊膜来源细胞可成为肝脏病治疗的候选细胞之一。     

安罗替尼对人肝癌细胞裸鼠移植肿瘤生长及生物钟基因表达的影响

[目的]探讨安罗替尼对人肝癌细胞裸鼠移植后肿瘤生长情况及相应生物钟基因表达的影响.[方法]选取实验无胸腺裸鼠共36只,取人肝癌HepG2细胞,移植于小鼠左侧腋皮下,建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型.接种完成1周后,随机分为安罗替尼处理组和对照组,每组18只.安罗替尼组给予安罗替尼50 mg/(kg·d)灌胃,空白对照组给予二...     

不同途径移植羊膜上皮细胞在肝脏的定居

背景:细胞移植对肝脏疾病具有一定的疗效,与肝脏移植相比有其自身的优点,但有诸多问题尚待解决。目的:探讨不同途径移植的人羊膜上皮细胞在肝脏内定居情况。方法:从剖腹产后的人胎盘羊膜中分离人羊膜上皮细胞,PKH26荧光标记后计数1×107细胞通过大鼠腹腔、门静脉、尾静脉及肝脏内直接注入方式移植入大鼠体内。结果与结论:门静脉、尾静脉及肝脏直接注入途径移植的细胞均在肝脏内定居,但移植细胞数过量时造成局部肝组织的缺血坏死等不良反应。腹腔途径移植入体内的细胞未转移肝脏内。通过门静脉移植入体内的人羊膜上皮细胞在大鼠肝脏内维持存活至少16d。移植细胞过量时,导致肝脏血管堵塞及坏死。证明人羊膜上皮细胞至少在大鼠肝脏中存活2周,提示低免疫原性的羊膜来源细胞可成为肝脏病治疗的候选细胞之一。     

莪术醇对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和迁移的影响

【目的】探讨莪术醇对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和迁移的影响。【方法】10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养小鼠黑色素瘤B16细胞。不同剂量莪术醇(50、100、200μmol/L)处理B 16细胞后,检测细胞增殖、迁移和miR-7-5p含量;miR-7-5p inhibitor预处理后,再用莪术醇100μmol/L处理B16细胞,检测细胞增殖和迁移。【结果】不同剂量莪术醇(50、100、200μmol/L)处理B 16细胞后,细胞490nm吸光度值均低于对照组,且随着莪术醇浓度的增加,细胞490 n m吸光度值降低显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同剂量莪术醇(50、100、200μmol/L)处理B 16细胞后,穿膜细胞数均低于对照组,且随着莪术醇浓度的增加,穿膜细胞数降低显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过real-time PCR验证miR-7-5p inhibitor转染B16细胞后的抑制效果,NC-inhibitor和miR-7-5p inhibitor转染后细胞miR-7-5p表达分别为(1.02±0.10)和(0.41±0.14),差异有统计学意义(P<0.05)。抑制B16细胞miR-7-5p表达后,观察莪术醇对细胞增殖的调控,与NC inhibitor相比(1.413±0.108),miR-7-5p inhibitor升高莪术醇处理B16细胞490nm吸光度值(1.697±0.089),差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】莪术醇能够抑制小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和迁移,其机制可能与增加miR-7-5p表达有关。     

姜黄素Ⅲ对体内肺腺癌移植瘤裸鼠血管生成的影响

目的：观察中药姜黄的主要活性单体成分中双脱甲氧基姜黄素(姜黄素Ⅲ)抗肿瘤血管生成作用及对内皮细胞生长的抑制作用。方法：本实验于2003-10／2004-04在解放军第三军医大学大坪医院实验动物中心(动物实验)和解放军第三军医大学西南医院烧伤研究所(细胞培养及免疫组化)完成。实验选用BALB／c裸雄性小鼠15只。建立裸小鼠移植模型后，将15只荷有A549肺腺癌的裸小鼠随机分成3个组：①阴性对照组：含60mL／L无水乙醇和60mL／L聚乙二醇400的水溶液，0．2mL／次，隔日腹腔注射1次，共8次。②阳性对照组：O-(氯乙酰甲酰)夫马菌素醇30mg／kg，0．2mL／次，隔日腹腔注射1次，共8次。③姜黄素Ⅲ组：姜黄素Ⅲ100mg／kg，0．2mL／次，隔日腹腔注射1次，共8次。治疗结束后取移植瘤组织，应用免疫组化染色检测移植瘤中CD34，标记微血管密度、血管内皮生长因子、血管内皮生长因子受体1、血管内皮生长因子受体2的表达。结果：15只小鼠全部进入结果分析。姜黄素Ⅲ组微血管密度显著少于阴性对照组[(40．13&;#177;7．05)，(76．67&;#177;10．48)条／200倍视野，P&;lt;0．01]；姜黄素Ⅲ组血管内皮生长因子及其受体血管内皮生长因子受体1，2表达的阳性组织相对灰度值明显低于阴性对照组(1．63&;#177;0．13，1．47&;#177;0．12，1．48&;#177;0．15；2．49&;#177;0．15，1．78&;#177;0．12，2．27&;#177;0．18，P&;lt;0．01)。结论：姜黄素Ⅲ具有确切的抗人肺腺癌细胞系A549裸鼠移植瘤血管生成作用，可能与其抑制移植瘤中肿瘤细胞和／或内皮细胞血管内皮生长因子及其血管内皮生长因子受体1，2的表达有关。     

不同长度自体静脉移植对管壁细胞增殖的影响

目的 通过动物实验，观察不同长度自体静脉移植对管壁细胞增殖的影响。方法 将兔自体股静脉分别取10、15、20mm倒置移植到同侧股动脉，修复动脉缺损。术后第1、2、4周取材，观察移植静脉组织学变化并进行免疫组化检查。结果 移植后静脉内皮细胞修复管腔，中膜平滑肌层数增多，但仍保持血管壁的3层结构。随着移植血管长度的增加，内膜增生明显，中膜胶原纤维组织增多，内皮细胞修复不完全，弹力纤维增生减少。结论 移植血管长度过长，可能加重移植血管的病理改变。     

姜黄素Ⅲ对体内肺腺癌移植瘤裸鼠血管生成的影响

目的:观察中药姜黄的主要活性单体成分中双脱甲氧基姜黄素(姜黄素Ⅲ)抗肿瘤血管生成作用及对内皮细胞生长的抑制作用。方法:本实验于2003-10/2004-04在解放军第三军医大学大坪医院实验动物中心(动物实验)和解放军第三军医大学西南医院烧伤研究所(细胞培养及免疫组化)完成。实验选用BALB/c裸雄性小鼠15只。建立裸小鼠移植模型后,将15只荷有A549肺腺癌的裸小鼠随机分成3个组:①阴性对照组:含60mL/L无水乙醇和60mL/L聚乙二醇400的水溶液,0.2mL/次,隔日腹腔注射1次,共8次。②阳性对照组:O-(氯乙酰甲酰)夫马菌素醇30mg/kg,0.2mL/次,隔日腹腔注射1次,共8次。③姜黄素Ⅲ组:姜黄素Ⅲ100mg/kg,0.2mL/次,隔日腹腔注射1次,共8次。治疗结束后取移植瘤组织,应用免疫组化染色检测移植瘤中CD34,标记微血管密度、血管内皮生长因子、血管内皮生长因子受体1、血管内皮生长因子受体2的表达。结果:15只小鼠全部进入结果分析。姜黄素Ⅲ组微血管密度显著少于阴性对照组犤(40.13±7.05),(76.67±10.48)条/200倍视野,P<0.01犦;姜黄素Ⅲ组血管内皮生长因子及其受体血管内皮生长因子受体1,2表达的阳性组织相对灰度值明显低于阴性对照组(1.63±0.13,1.47±0.12,1.48±0.15;2.49±0.15,1.78±0.12,2.27±0.18,P<0.01)。结论:姜黄素Ⅲ具有确切的抗人肺腺癌细胞系A549裸鼠移植瘤血管生成作用,可能与其抑制移植瘤中肿瘤细胞和/或内皮细胞血管内皮生长因子及其血管内皮生长因子受体1,2的表达有关。     

蜈蚣提取物对宫颈癌Caski细胞增殖的抑制效应

目的:观察蜈蚣对宫颈癌Caski细胞生长的抑制作用。方法:实验于2006-06/09在三峡大学医学院免疫学重点学科实验室完成。运用体外细胞培养技术,以不同浓度(8,16,32g/L)的乙醚、乙醇蜈蚣提取物作用于培养的Caski细胞48h,采用MTT法测定细胞代谢率,以流式细胞术观察DNA含量和凋亡的变化情况。结果:①细胞形态由梭形逐渐变圆,胞浆皱缩,体积缩小,细胞数量明显少于阴性对照组。②MTT以浓度依赖方式降低吸光度值,与对照组相比抑制率增高显著。③细胞周期各时相DNA含量改变明显,G0～G1期细胞显著降低(由最初64.0%降至最低37.2%),而S,G2～M期细胞明显上升;凋亡率显著增高,阳性对照药物顺铂组也有上述类似改变。结论:中药蜈蚣乙醚、乙醇提取物在体外对宫颈癌Caski细胞的生长有明显地抑制作用,机制与影响癌细胞的DNA合成,阻止瘤细胞的分裂增殖,并促进其凋亡有关。呈现一定的量效和时效相关性。     

氯化汞对小鼠Lewis肺癌细胞的增殖抑制作用

目的探讨氯化汞(MC)对小鼠Lewis肺癌细胞的增殖抑制作用。方法采用MTT比色法,分别测定不同浓度的MC作用于Lewis肺癌细胞后的吸光度A570值,计算增殖抑制率;并应用皮下注射法建立裸鼠Lewis移植瘤模型,灌胃法给予模型鼠MC或生理盐水,停药后测量肿物长短径,HE染色观察瘤体细胞形态学改变。结果氯化汞对小鼠Lewis肺癌细胞有较强的增殖抑制作用,并存在着时间和剂量效应关系,而且同一时间各浓度之间、同一浓度各时间之问均存在显著性差异(P<0.001);给予MC灌胃的荷瘤鼠肿瘤体积小于对照组,差异有显著性(P<0.05),HE染色见坏死细胞增多。结论 MC对小鼠Lewis肺癌细胞有增殖抑制作用,并存在着时间和剂量效应关系。     

吉非替尼和拉帕替尼对HEL细胞增殖的抑制作用

本研究探讨两种分子靶向治疗药物酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼和拉帕替尼对JAK2 V617F阳性的骨髓增殖性疾病(MPD)的潜在治疗作用。吉非替尼(0.5、1、5、10、25μmol/L)和拉帕替尼(0.5、1、2、4、8、16μmol/L)分别作用于携带JAK2 V617F突变的人红白血病细胞株(HEL细胞系)。用MTT法检测2种药物对HEL细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果表明,吉非替尼可明显抑制HEL细胞的增殖,呈浓度依赖性(24和48 h的相关系数为0.991和0.895),48 h的IC50为5.4μmol/L。拉帕替尼作用48 h抑制细胞增殖的IC50为19.6μmol/L。吉非替尼对HEL细胞有显著的诱导凋亡作用,呈浓度依赖性(相关系数为0.896),随药物浓度的增加,凋亡细胞比例的增加。此外,吉非替尼明显地影响细胞周期,将细胞周期阻滞于G0/G1期。结论:吉非替尼和拉帕替尼对HEL细胞有显著的抑制增殖作用,可进一步用于JAK2 V617F阳性的MPD靶向治疗的研究。     

小干扰RNA靶向血管内皮生长因子基因抑制胆囊癌细胞的增殖体内外实验

背景:已有研究发现RNA干扰可通过抑制血管内皮生长因子基因表达抑制肿瘤细胞增殖,但目前关于应用RNA干扰胆囊癌血管内皮生长表达的研究国内外尚无相关报道.目的:构建并筛选靶向血管内皮生长因子的shRNA,观察RNA干扰血管内皮生长因子的效果及对胆囊癌细胞增殖的影响.方法:设计VEGF-shRNA片段,连接到pCYU6/GFPINeo-shRNA质粒载体上.shRNA转染胆囊癌细胞.建立裸鼠胆囊癌模型,随机分成空白组、阴性对照组、实验组(干扰pShRNA-VEGF2),每组6只.瘤内注射shRNA.荧光显微镜观察细胞生长状态,半定量反转录-聚合酶链反应法与实时荧光定量聚合酶链反应检测RNA干扰效果,观察胆囊癌裸鼠模型肿瘤体积变化. 结果与结论:RNA干扰血管内皮生长因子后,胆囊癌细胞细胞变圆,皱缩,部分细胞死亡脱落.ShRNA片段血管内皮生长因子2、血管内皮生长因子1均可抑制VEGF mRNA表达,抑制率可达86%,82%.裸鼠肿瘤模型中实验组肿瘤与对照组、阴性组相比明显变小,且生长缓慢(P<0.05),而对照组和阴性组在肿瘤大小及生长趋势上没有明显的差别.实验构建的hVEGF-shRNA质粒表达载体通过抑制血管内皮生长因子的表达,抑制胆囊癌细胞增殖,从而达到间接治疗肿瘤的目的.     

超声波对体外培养猪前脂肪细胞增殖分化的抑制效应

背景:软组织充填是临床的难题,已经证实超声波作用后的成熟脂肪细胞不能用于细胞移植,脂肪组织工程有希望解决这一问题。目的:观察超声波对前脂肪细胞体外培养与增殖的影响,验证超声辅助吸脂术后前脂肪细胞作为脂肪组织工程种子细胞的可行性。设计:对照观察实验。单位:武汉大学人民医院整形外科。材料:实验于2003-07/2004-09在武汉大学医学院完成。3月龄本地杂交猪1头(武汉大学医字院实验动物中心提供)氯胺酮麻醉后,于背部两侧各标记10cm×20cm的矩形取材区,右侧为实验组,左侧为对照组。方法:实验组用体外超声波预处理8min,能量3W/cm2。无菌条件下掀开皮肤层,分别切取两侧皮下脂肪组织各100g,放入预先已备好的盛有冷D-hanks液容器中待用。将经过超声波作用后的实验组脂肪组织猪前脂肪细胞进行分离和体外培养,并每隔2d测定其细胞数量及脂质含量,结果以3孔的细胞均数表示。对照组除了不进行超声波预处理处,前脂肪细胞的培养方法同实验组。绘制两组生长曲线。采用油红O染色提取法测定细胞内的脂肪含量,于HITACHIG2000型分光光度计510nm波长处测定吸光度。主要观察指标:①猪前脂肪细胞培养的形态学观察。②实验组及对照组的生长曲线。③实验组与对照组脂质含量的变化。结果:①对照组6～24h细胞完成贴附,实验组一两天才基本贴壁,且未贴壁细胞较多;4d后对照组细胞内见脂肪颗粒积聚,实验组6d后才见到;12d时对照组基本分化成单脂滴或多脂滴的细胞,并有少量漂浮的成熟脂肪细胞,实验组产生脂滴的细胞较少。②在细胞数量相同的情况下,实验组细胞倍增时间约为72h,对照组为36h,培养9d后实验组与对照组的细胞总数分别为13×104个/孔、18×104个/孔,实验组细胞增殖速率缓慢。③实验组脂质出现时间约为培养后6d,对照组为4d,吸光度峰值分别为0.32、0.68。结论:超声波对前脂肪细胞的增殖分化有明显的抑制作用,经超声波处理的前脂肪细胞不宜用作种子细胞。     

Flavopiridol enhances the effect of docetaxel in vitro and in vivo in human gastric cancer cells

Gastric cancer is one of the leading causes of cancer death throughout the world. It is a disease in desperate need of new therapeutic approaches. Docetaxel, a semisynthetic taxane, has shown potent activity against a broad range of solid tumors. However, in gastric cancer, response rates to docetaxel remain only approximately 20%. In these studies we show that flavopiridol, a cyclin-dependent kinase inhibitor, potentiates docetaxel-induced apoptosis 3-fold in MKN-74 human gastric cells. This effect is sequence dependent, such that flavopiridol must follow docetaxel to induce this effect. Docetaxel induces transient arrest in the M phase of the cell cycle. Cells exit mitosis in a specific time window without cytokinesis with a decrease in cyclin B1/cdc-2 kinase activity and MPM-2 labeling. Flavopiridol treatment of docetaxel-treated cells enhances the exit from mitosis with a more rapid decrease in mitotic markers including MPM-2 labeling and cyclin B1/cdc2 kinase activity. In contrast, pretreatment with flavopiridol prevents cells from entering mitosis by inhibiting cyclin B1/cdc-2 kinase activity, thus antagonizing the docetaxel effect. The testing of this combination against MKN-74 xenografts confirms the sequence dependency. Treatment of MKN-74 tumor-bearing xenografts with docetaxel at a dose of 10 mg/kg followed 3-7 h later by flavopiridol at a dose of 2.5 mg/kg resulted in a 1-18% decrease in tumor volume. In contrast, treatment with docetaxel alone at this same dose resulted in a 394% increase in tumor volume. When flavopiridol was given immediately after docetaxel, the effect was not statistically different from that of docetaxel alone. The reverse combination of flavopiridol followed 7 h later by docetaxel was similar to treatment with docetaxel alone. Flavopiridol alone had no effect in this tumor model. Thus, flavopiridol, when combined with docetaxel in a sequence-specific manner, may provide a completely new therapeutic approach in the treatment of gastric cancer.     

人巨细胞病毒感染致造血祖细胞增殖抑制与更昔洛韦的影响

背景:临床研究显示,骨髓移植后人巨细胞病毒感染可阻碍血小板植入、出现表型异常的外周血白细胞,导致骨髓移植失败,这可能是由于人巨细胞病毒感染直接影响了造血祖细胞所致.目的:观察更昔洛韦对人巨细胞病毒感染所致脐血粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞体外增殖抑制的影响及更昔洛韦对此的保护作用. 设计:对比观察性实验.单位:泸州医学院附属医院分子生物学实验室.对象:正常足月顺产新生儿脐血标本20例,每份10 mL,由泸州医学院附属医院妇产科提供,产妇对本实验知情同意.实验经医院伦理委员会批准.方法:实验于2004-06/2006-12在泸州医学院附属医院分子生物学实验室完成.采用脐血标本造血祖细胞培养技术,观察、计数100 TCID50人巨细胞病毒-AD169感染粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞后各祖细胞集落数,记录集落维持时间.用PCR和荧光定量PCR技术检测集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA.将7.5 mg/L更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的造血祖细胞,再分别计集落数、集落维持时间及集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA.设正常培养的造血祖细胞为空白对照组,设与含灭活性人巨细胞病毒的正常造血祖细胞培养系统为灭活对照组.主要观察指标:①祖细胞集落数、祖细胞集落维持时间.②祖细胞集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA. 结果:①集落数和集落维持时间:人巨细胞病毒感染的祖细胞集落数较对照组明显减少(P < 0.01),集落维持时间较对照组明显缩短(P < 0.01).在人巨细胞病毒感染的集落细胞内检测到人巨细胞病毒-DNA的存在;更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的祖细胞后,与人巨细胞病毒感染的祖细胞比较集落数明显提高,差异有非常显著性意义(P < 0.01) ,集落维持时间明显延长,差异有非常显著性意义(P < 0.05).②集落增殖提高率: 粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞、巨核系祖细胞分别为37.4%,74.2%,40.1%,67.4%,38.9%.③集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA:荧光定量PCR显示更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的祖细胞后核酸载量较人巨细胞病毒感染的祖细胞降低,差异有非常显著性意义(P < 0.01).结论:人巨细胞病毒-AD169株在体外能明显抑制粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞集落细胞的增殖;在体外更昔洛韦有抗人巨细胞病毒的活性,能促进人巨细胞病毒感染的造血祖细胞增殖.     

Effects of xuezhikang on proliferation and adhesion capacity of cultured endothelial progenitor cells: An in vitro study

BACKGROUND: Endothelial progenitor cells (EPCs) might be useful in the management of coronary artery disease (CAD).OBJECTIVE: The aim of this study was to investigate the effects of xuezhikang, an extract of Chinese red yeast rice, on the proliferation and adhesion capacity of EPCs from the peripheral blood of patients with stable CAD.METHODS: Mononuclear cells from 20 Chinese patients (14 men, 6 women; mean [SD] age, 64.5 [2.8] years [range, 60-69 years]) were isolated using densitygradient centrifugation. After 4 days in culture, the attached cells were treated with different concentrations of xuezhikang (50, 125, 250, and 500 ng/mL; 20 samples/group), atorvastatin (10 ng/mL; n = 20), or phosphate-buffered saline (control, n = 20) for 3 days. Cells that were positive for 1,1′-dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine-labeled acetylated low-density lipoprotein and lectin were defined as EPCs. They were counted by 2 independent investigators in ≥4 randomly selected highpower fields per well. EPCs were then treated and adherent cells were counted by the independent investigators who were blinded to study drug administration.RESULTS: The mean (SD) number of cultured EPCs in the xuezhikang 50-, 125-, 250-, and 500-ng/mL groups (205 [28], 244 [31], 283 [42], and 334 [43] cells, respectively; all, P < 0.001) was significantly increased in a dose-dependent manner compared with the control group (167 [36] cells). The adhesion capacity of the EPCs was significantly greater in the 4 xuezhikang groups (51 [9], 62 [10], 71 [11], and 83 [12] cells; all, P < 0.001) when compared with that of the control group (41 [7] cells). Both the number of EPCs (327 [49] cells) and the number of adhesive EPCs (84 [15] cells) in the atorvastatin group were also significantly increased compared with the control group (both, P < 0.001); however, these increases were not significantly different from those in the xuezhikang 500-ng/mL group.CONCLUSIONS: Xuezhikang was associated with significantly enhanced proliferation and adhesion capacity of EPCs derived from the peripheral blood of these patients with stable CAD. These effects were not significantly different between xuezhikang and atorvastatin.     

SATB1促进肝癌增殖与转移能力的初步研究

目的本研究拟观察SATB1在肝癌中表达情况,并在此基础上利用RNA干扰技术对SATB1进行封闭,观察肝癌生长和转移情况。方法运用实时定量PCR方法检测正常肝组织、肝硬化、良性肝肿瘤及原发性肝癌组织中SATB1的表达情况,并通过实时定量PCR及Western blot检测高转移肝癌细胞株HC-CLM3、低转移肝癌细胞株MHCC-97L及正常肝脏细胞株HL-7702中SATB1的表达。运用RNA干扰技术对高转移肝癌细胞株HCCLM3中的SATB1进行干扰并验证干扰效果,干扰前后的细胞株进行MTT、划痕实验及裸鼠体内移植瘤实验,观察SATB1对高转移肝癌细胞株HCCLM3增殖及转移能力的影响。结果原发性肝癌组织中的SATB1的mRNA水平明显高于正常肝组织、肝硬化组织及良性肝肿瘤组织,且高转移肝癌细胞株HCCLM3中的SATB1表达水平显著高于正常肝脏细胞株HL-7702及低转移肝癌细胞株MHCC-97L;在HCCLM3细胞株中成功干扰SATB1,干扰后细胞株的增殖及迁移能力均明显降低,裸鼠体内肿瘤增殖能力明显减弱。结论 SATB1在肝癌中显著表达,并有促进肝癌细胞株的增殖和转移的作用。