解淀粉芽胞杆菌K103对黄瓜穴盘苗的促生作用

为了探明解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）K103对黄瓜穴盘苗的促生效果及作用机理,以草炭、蛭石、珍珠岩混合物料为基质,播种前基质接种K103,测定黄瓜穴盘苗生长发育参数,并采用454焦磷酸测序技术分析穴盘苗根际细菌群落结构和多样性。结果表明：解淀粉芽胞杆菌K103具有较高的固氮和溶解有机磷活性;基质接种K103提高了黄瓜穴盘苗根系活力和矿质养分吸收积累量,促进黄瓜生长;K103可在黄瓜穴盘苗根际定殖,并显著提高了根际食菌蛭弧菌,鞘氨醇单胞菌CHNTR37、CL01,德氏嗜酸菌,鹰嘴豆中慢生根瘤菌等9种细菌的相对丰度,这些细菌对植物多具有促生潜力。     

贝莱斯芽胞杆菌菌株P2-1对草莓褐色叶斑病菌的抑制活性及其促生作用

【目的】探究内生菌贝莱斯芽胞杆菌菌株P2-1对草莓褐色叶斑病的防治效果,以及对草莓的促生作用,为该拮抗菌在草莓病害生物防治中的应用奠定基础。【方法】通过平板对峙实验分析菌株P2-1对草莓褐色叶斑病菌落生长以及菌丝形态的影响,并利用离体草莓叶片鉴定菌株P2-1对草莓褐色叶斑病的防治效果。同时,分析菌株P2-1对草莓植株生长的影响。【结果】菌株P2-1对草莓褐色叶斑病菌具有强烈的拮抗活性,抑制率达到66.38%,抑菌带为0.76 cm。菌株P2-1代谢产物具有蛋白酶和纤维素酶活性。菌株P2-1能在草莓叶片定殖,处理10 d后仍可维持在4.07×108CFU左右。菌株P2-1对草莓褐色叶斑病具有良好的防治效果,同时能促进草莓植株生长,使草莓株高、根长、湿质量和干质量分别提高24.83%、40.74%、28.88%和55.69%。【结论】贝莱斯芽胞杆菌菌株P2-1对草莓褐色叶斑病具有较好的防治效果,并具有草莓促生作用,表现出潜在的应用价值。     

解淀粉芽胞杆菌防治番茄果实灰霉病及其抑菌物质分析

通过对峙培养法筛选对灰葡萄孢菌有显著拮抗性的产芽胞细菌,利用番茄果实检测拮抗菌及其发酵上清液对灰霉病的防治效果,采用ESI-MS检测拮抗菌发酵上清液粗提取物中主要抑菌物质并利用PCR检测合成抑菌物质的相关基因,通过菌体菌落形态观察、生理生化试验、16S rDNA及gyrB分析对拮抗细菌进行种属鉴定。结果表明,分离筛选的拮抗菌fqhm-13及其发酵上清液对番茄果实灰霉病防治效果分别达到69.0%和78.1%。fqhm-13发酵上清液粗提取物中主要抑菌物质为脂肽抗生素C14 ~ C16的surfactin A和C15 ~ C17的iturin A。fqhm-13基因组中含有脂肽抗生素合成基因ituC、ituD、fenD和srfAB。fqhm-13菌株为解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。该研究为利用芽胞杆菌及其代谢产物防治番茄果实灰霉病奠定了材料基础。     

东北油豆角腐皮镰孢菌根腐病拮抗芽胞杆菌的筛选与鉴定

以东北油豆角腐皮镰孢菌为靶标菌,采用室内平板对峙培养和温室防效测定方法,从发病油豆角根际(围)土壤中筛选拮抗能力强的芽胞杆菌菌株,以期获得腐皮镰孢菌根腐病的生防资源。结果表明:该试验筛选到一株拮抗芽胞杆菌WJ-126,初步鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis),在温室人工接种条件下,该菌株对油豆角腐皮镰孢菌根腐病的相对防效可达60.92%。     

解淀粉芽孢杆菌ZJ01对苹果轮纹病菌抑制作用

以解淀粉芽孢杆菌ZJ01和苹果轮纹病菌ZZ26,MX1,LW048,LS1为试材,采用平板对峙、牛津杯、混合培养基等方法研究了解淀粉芽孢杆菌ZJ01对苹果轮纹病菌的抑制作用。结果表明,解淀粉芽孢杆菌ZJ01对苹果轮纹病菌菌丝生长有着很强烈的抑制作用。平板对峙试验中ZZ26的被抑制率最大(61.3%),MX1的被抑制率最小(50%);牛津杯试验中苹果轮纹病菌ZZ26的被抑制率最大(67.5%),MX1的被抑制率最小(46.0%);菌液与PDA混合培养基试验中ZZ26的抑制率最大为97.0%,LW048最小为71.3%;另外,解淀粉芽孢杆菌ZJ01对苹果苹果轮纹病防治试验发现,LS1的被抑制率最大,为55.6%,LW048最小,为10.3%。     

根癌农杆菌介导甘蓝枯萎病菌的遗传转化

采用根癌农杆菌介导的方法,以农杆菌介导丝状真菌遗传转化的载体PCH-sGFP对尖孢镰刀菌甘蓝专化型两个生理小种进行转化,该载体含有报告基因-绿色荧光蛋白基因（gfp）和筛选基因-潮霉素磷酸转移酶基因（hph）。获得转化菌株后,经检测表明：T-DNA目的片段成功整合到枯萎病菌基因组中,并且单孢继代培养6代后荧光蛋白仍能稳定遗传。对转化菌株的生长速度和致病力进行分析,结果表明：野生菌株和转化菌株在生长速度和致病力上没有显著差异。因此,转化菌株可用于甘蓝枯萎病菌的组织病理学研究。     

解淀粉芽胞杆菌TR2复配育苗基质对西瓜幼苗生长的影响

以解淀粉芽胞杆菌TR2和不同育苗基质以及西瓜幼苗为试材,采用稀释涂布平板法和盆栽试验法,研究了9种不同配方基质对解淀粉芽胞杆菌TR2的定殖量随时间变化的影响,以及盆栽条件下复配TR2对西瓜幼苗各项生长指标的影响,以期筛选出草炭使用量低、TR2稳定定殖以及西瓜幼苗健康生长的基质配方。结果表明：解淀粉芽胞杆菌TR2在供试基质中均能定殖,并且30 d内的平均定殖量在5×10⁶ CFU·cm^-3左右,其中B6基质中定殖量最高,为8.1×10⁶ CFU·cm^-3。西瓜幼苗在含有蚯蚓粪的基质(B2、B6、B7、B8)中在株高和鲜质量方面的生长均明显优于不含蚯蚓粪的基质,含有椰糠的基质B8在根长方面表现最好。基质复配解淀粉芽胞杆菌TR2后,西瓜幼苗的株高和鲜质量相较于不加生防菌有明显增加,其中基质B2复配菌株TR2对西瓜促进作用最明显,比未添加生防菌高出44.2%。基质中添加生防菌对西瓜幼苗的根长和根鲜质量的促进作用不明显。     

番茄枯萎病菌RT-PCR检测技术的建立与应用

根据番茄枯萎病病原菌尖孢镰刀菌番茄专化型(Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici,FOL)蛋白激酶基因序列,设计1对番茄枯萎病特异性引物209F/361R,构建番茄枯萎病菌的RT-PCR(real-time PCR)检测体系,并利用该体系定量检测盆栽番茄茎基部病原菌。RT-PCR结果表明该引物只对番茄枯萎病菌有唯一产物吸收峰,对其他供试菌株都未检到荧光信号。利用该引物建立的RT-PCR检测体系线性关系良好,灵敏度为5.76×10³ copies·μL^-1,是普通PCR的10倍。人工接种番茄枯萎病菌定植后7 d即可在茎基部检测到病原菌;田间采集的24个自然发病样本中有16个能够检测到番茄枯萎病菌。基于RT-PCR技术构建的番茄枯萎病菌快速检测方法检测速度快、灵敏度高、特异性强、重现性好,能够为该病的早期诊断和流行监测提供理论依据。     

苦瓜枯萎病病原的鉴定及植株体内菌量测定

从福建省福州市的苦瓜枯萎病病株上分离到19个镰刀菌菌株,经Booth镰刀菌鉴定方法及尖孢镰刀菌特异性引物(FOF1/FOR1)PCR鉴定,确定19个菌株均为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。将该菌株回接健康苦瓜幼苗,植株表现枯萎症状,重新分离又获得相同的病原物。采用分段取不同病株样本的方法研究了该菌在植株体内的数量分布,结果表明无症植株、中度病株和重度病株体内均存在尖孢镰刀菌,无症植株含菌量最低,中度病株含菌量最高,重度病株含菌量次之,但均表现为茎基部含菌量最高,根部次之,茎中部则低于根部,茎顶部和叶片均未分离到病原菌。     

枯萎病菌侵染后间作小麦对西瓜生理指标的影响

为了探讨间作小麦提高西瓜枯萎病抗性的生理机制,采用西瓜品种‘早佳’(8424)和小麦品种‘鄂麦18’为试验材料,设置西瓜单作(M)、西瓜单作+FON(MF)、西瓜与小麦间作(I)、西瓜与小麦间作+FON(IF)共4个处理,研究间作小麦和接种西瓜专化型尖孢镰刀菌对西瓜生理生化指标的影响。结果表明,接种FON 15 d时,间作小麦与单作相比,西瓜叶片净光合速率、胞间CO_2浓度和气孔导度分别升高6.98%、15.52%和36.88%,西瓜根系β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性分别升高14.09%和11.85%,根系类黄酮和总酚含量分别增加13.03%和21.31%,根系MDA和H_2O_2含量分别降低5.49%和11.56%,均达到显著差异水平;接种FON 25 d时,小麦间作与单作相比,西瓜叶片净光合速率、胞间CO_2浓度和气孔导度分别升高5.40%、9.92%和30.23%,西瓜根系β-1,3-葡聚糖酶增加81.11%,根系类黄酮和总酚含量分别提高51.89%和15.03%,根系MDA和H_2O_2含量分别降低6.69%和12.43%,均差异显著。总之,接种FON后,与单作西瓜相比,小麦间作提高了西瓜叶片光合能力,增加根系次生代谢产物的积累,降低了膜脂过氧化程度的伤害,有助于增强西瓜植株的抗病性。     

大花惠兰根腐病拮抗细菌ZL7-5菌株的筛选与鉴定

 从各地大花惠兰种植地采集的土样中共分离到细菌519株,初筛出对大花惠兰根腐病病原菌尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporium）具有拮抗活性的细菌菌株26株,经过复筛,选出1株具有较高拮抗活性的菌株ZL7-5。通过16S rDNA序列相似性分析,菌株ZL7-5与解淀粉芽孢杆菌标准菌株(NBRC 15535)的16S rDNA序列相似度达100%,通过比较菌株ZL7-5和模式菌株的形态特征和生理生化特性,最终将菌株ZL7-5鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。     

草酸青霉A1菌株的鉴定及对苹果4种镰孢病菌的拮抗作用

从连作条件下的平邑甜茶健康根系分离得到1株内生真菌A1,通过形态学特征、培养特性观察鉴定该菌属于青霉属,将其ITS r DNA序列和β-tubulin序列与Gen Bank中已知标准菌株的ITS r DNA序列和β-tubulin序列进行比对,并利用MEGA5.05软件构建青霉菌A1菌株进化树。结果表明,青霉菌A1与草酸青霉Penicillium oxalicum(KF152942.1,KC344990.1)序列同源性最高,为100%,最终将青霉菌A1鉴定为草酸青霉A1。在马铃薯培养基(PDA)和玉米粉培养基上分别将内生真菌A1与尖孢镰孢菌、串珠镰孢菌、层出镰孢菌和腐皮镰孢菌进行对峙试验,结果在PDA培养基上对菌丝生长抑制率分别为42.0%、74.0%、47.0%和54.5%,拮抗系数达到Ⅱ级或Ⅰ级,在玉米粉培养基上菌丝生长抑制率分别为60.5%、82.2%、68.4%和53.4%,拮抗系数达到Ⅱ级或Ⅰ级,说明草酸青霉A1对4种苹果连作障碍病原镰孢属真菌具有较好的抑制作用。平邑甜茶盆栽试验结果表明,与连作土对照相比,A1菌肥显著促进了连作平邑甜茶幼苗鲜样质量、干样质量的增加,分别增加2.53倍和2.35倍,说明草酸青霉A1菌肥能在一定程度上减轻苹果连作障碍。使用实时荧光定量技术对土壤中的尖孢镰孢菌基因拷贝数进行检测,发现A1菌肥处理的土壤中尖孢镰孢菌的基因拷贝数量大幅下降,说明草酸青霉菌A1可以抑制其生长。A1菌株可作为防控苹果连作障碍的拮抗菌进一步研究。     

尖孢镰刀菌Cu02对黄瓜的致病性及防治根结线虫的效果

通过在黄瓜品种9330上接种尖孢镰刀菌Cu02（Fusarium oxysporum）,分析Cu02对黄瓜的定殖及致病性。结果表明：Cu02在黄瓜植株内的定殖率达到100%,但是对黄瓜并不致病。通过在接种Cu02的黄瓜上接种南方根结线虫,研究Cu02对南方根结线虫的防治效果。结果表明：Cu02能减少根结线虫对黄瓜的侵染,黄瓜根结数减少38.0%,与对照差异显著。     

解淀粉芽孢杆菌BaA-007鉴定及其对苹果腐烂病的抑制作用

从苹果韧皮组织分离获得1株潜在的生防菌菌株。基于形态和16S rDNA、gyrA鉴定其为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),命名为BaA-007(中国农业微生物菌种保存中心,菌种编号:ACCC60382)。该菌株及其次生代谢物对苹果腐烂病菌(黑腐皮壳菌,Valsa mali)生长具有抑制作用,离体条件下可显著降低腐烂病病斑的扩散速度。以BG培养基为基础培养基,筛选其最佳培养条件为蔗糖0.5%、细菌学蛋白胨1%、硫酸二氢钾0.1%、温度36℃、pH 7.0。BaA-007处理后,苹果水杨酸(SA)响应性基因PR1、PR2和NPR1,茉莉酸(JA)响应性基因PDF1.2、CORONATINE INSENSITIVE 1(COI1)和AOS,乙烯(ET)响应性基因ETR1、ERF1和HEL以及几丁质合成酶B基因(Chitnase B,ChiB)在接种处理后的不同时间点均上调。综上所述,菌株BaA-007对苹果腐烂病有显著的拮抗效果,有望作为防治苹果腐烂病制剂开发的生防菌株。     

食用菌废料（菌糠）木霉发酵物对黄瓜土传病害防治及促生作用的初步研究

研究生防木霉的菌糠发酵物对黄瓜立枯病和枯萎病的防治作用,并评价其对黄瓜植株生长的影响。通过盆栽试验证明,含菌糠木霉发酵物的栽培基质对黄瓜根部立枯病和枯萎病具有较好防治效果,达到70．00％以上。采用菌糠木霉发酵物栽培黄瓜植株,20d后测定黄瓜叶绿素含量、株高等生长指标,发现植株的长势及叶绿素的含量显著升高。试验证明菌糠不但可以丰富植物根际的营养,促进生防木霉在植物根际的定殖,而且能够促进光合作用。     

三种拮抗菌对苗木立枯病病原菌的影响

采用PDA综合培养基对3种拮抗菌和2种苗木立枯病病原菌进行对峙培养,研究3种拮抗菌对苗木立枯病病原菌的抑制效果.结果表明:绿色木霉(Trichoderma viride)、桔绿木霉(Trichoderm citrinoviridevs)、球毛壳(Chaetomium globosum)3种拮抗菌对2种苗木立枯病病原菌尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)、腐皮镰刀菌(Fusarium solani)均有抑制作用,对Fusarium oxysporum的抑制效果最好的为Trichoderma citrinoviridevs,对Fusarium solani抑制效果最好的为Trichoderma viride.     

苏云金芽孢杆菌NBIN863菌株对番茄根结线虫的防治效果和促生作用

在温室条件下,研究苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)NBIN863菌株对番茄根结线虫的生物防治效果,对番茄植株的促生作用及在番茄根际周围的定殖能力。结果表明:NBIN863菌株对番茄根结线虫的温室防效达到54.48%;对番茄植株具有促生作用,株高、根长和全株鲜质量分别比空白对照增加49.10%、43.69%和52.50%;该菌株能稳定在番茄根际周围定殖,接种30d后,其定殖浓度为8.37×105cfu·g-1。     

不同抗性香蕉品种根系分泌差异酚酸对尖孢镰刀菌的抑制

通过高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）测定香蕉枯萎病感病品种‘巴西蕉’和抗病品种‘南天黄’根系分泌物中10种酚酸物质的含量,并选取含量具有明显差异的酚酸物质验证其对尖孢镰刀菌古巴专化型（Fusarium oxysporium f. sp. cubense,Foc）4号生理小种菌落生长的抑制效果。研究发现,接种Foc4诱导后,对羟基苯甲酸和肉桂酸仅在抗病品种‘南天黄’根系分泌物中检测到,邻苯二甲酸的含量在抗病品种中高于感病品种近2倍。在PDA培养基中邻苯二甲酸、对羟基苯甲酸和肉桂酸对Foc4菌落生长的抑制率随着含量的增加而显著增强。研究结果表明香蕉根系分泌物中酚酸物质与香蕉品种抗性之间存在密切的相关性。     

海洋多粘类芽孢杆菌L1-9菌株对黄瓜的促生作用和诱导抗性研究

以黄瓜种子为试材,采用盆栽法研究了L1-9菌株发酵液浸泡黄瓜种子后,对黄瓜幼苗的根长、须根数、黄瓜枯萎病发生的影响,并测定了黄瓜根组织的过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物歧化酶(SOD)和多酚氧化酶(PPO)4种防御酶的酶活性变化。结果表明:L1-9菌株发酵液浸泡黄瓜种子,可促进黄瓜须根的增加和根伸长,对黄瓜枯萎病具有明显的防治效果;浸种处理后黄瓜幼苗根部PAL、POD、PPO、SOD 4种酶活性明显高于对照,4种酶活性高峰时期不同,表明L1-9菌株发酵液浸泡种子能够明显诱导黄瓜对枯萎病的抗性。     

化学农药与芽胞杆菌M3、S11菌株对西芹黄萎病的防治效果

利用化学药剂与生防菌结合,对由尖孢镰刀菌芹菜专化型引起的西芹黄萎病进行综合防治研究。结果表明：苗期使用50 %多菌灵可湿性粉剂（WP）、50 %福美双•多菌灵WP（活根菌灭）或40 %噁霉灵WP（噁霉敌）灌根均能显著消除育苗基质中的病原菌孢子,孢子下降率达99.00 %以上;大田继续使用上述3种化学药剂或改用生防菌芽孢杆菌S11和M3,都能够显著降低西芹黄萎病发病率,防治效果最高为85.98 %;其中持续单独使用50 %多菌灵WP或苗期使用50 %多菌灵WP、大田改用生防菌芽孢杆菌对西芹的生长没有不良影响。