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自 1 936年 Klobusitzki和 Konig首次从美洲矛头蝮蛇 ( Bothrops jararaca)毒中获得部分纯化的类凝血酶以来 ,迄今已发现 30多种蛇毒中含有类凝血酶组份 ,并有 2 0多种先后得到分离和纯化。尤其近年来基于有关蛇毒类凝血酶分子结构及酶学性质的研究成果 ,部分蛇毒类凝血酶已经作为治疗药物而广泛应用于临床 ,如国外的 Ancrod和Batroxobin蛇毒抗凝剂 ,国内的五步蛇毒去纤酶、东北白眉蝮蛇抗栓酶 (清栓酶 )、江浙蝮蛇抗栓酶等已广泛用于临床治疗脑血栓形成、脉管炎、冠心病、心肌梗死 ,也有用于治疗癌痛综合症 [1]。但目前有关蛇毒类凝血酶… 相似文献
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蛇毒类凝血酶的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
蛇毒类凝血酶(TLE)属胰蛋白酶家族中的丝氨酸蛋白酶,在序列上与胰蛋白酶有更多的保守序列。具有精氨酸酯酶活性,能直接作用于纤维蛋白原,催化纤维蛋白原分子的特定部位Arg—Gly肽键的裂解,释放血纤肽A(FPA)或B(FPB),导致纤维蛋白的单体首尾聚合而凝固,故被称为类凝血酶。但它在体内不激活凝血因子瑚,由它水解生成的纤维蛋白凝块不产生侧链交联,对纤溶酶的消化高度敏感,易被天然网状内皮系统或正常的纤溶作用所清除。因此导致胞浆中纤维蛋白原浓度显著下降,表现降纤、抗凝的效果。 相似文献
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蛇毒类凝血酶试验方法研究 总被引:2,自引:0,他引:2
本文用蛇毒酶制剂和凝血酶对三种试验用稀释液和三种底物进行了凝固敏感性比较,然后选出最佳试验条件测定了8批蛇毒酶制品和三种蛇毒毒素。A、B、C三中稀释液以B液凝固敏感性最高。0.2%牛纤原、0.2%人纤原和绵羊血浆三种底物以0.2%牛纤原敏感性最好。在没有牛纤原的情况下也可考虑选用人纤原,但牛纤原来源容易、成本低、不含人类传染病原体,应为首选底物。 相似文献
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蛇毒类凝血酶的研究概况 总被引:2,自引:2,他引:0
自 1 936年 Klobusitzki和 Konig首次从美洲矛头蝮蛇 ( Bothrops jararaca)毒中获得部分纯化的类凝血酶以来 ,迄今已发现 30余种蛇毒中含有类凝血酶组份 ,并有 2 0余种先后得到分离和纯化。尤其是近几年来 ,有关蛇毒类凝血酶分子结构及酶学性质的研究取得了很大进展 ,部分已作为治疗药物而广泛应用于临床。兹就近几年来蛇毒类凝血酶的研究进展作一简要综述。1 蛇毒类凝血酶的分布 以前认为蛇毒类凝血酶仅在于蝮亚科蛇毒中 ,蝰亚科中只有一种沙蝰 ( Vipera ammodytes)具有凝血酶样活性。随后不但从另一种蝰蛇加蓬咝蝰( Bitis gabonica)… 相似文献
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蛇毒类凝血酶Calobin cDNA的设计合成与克隆 总被引:3,自引:0,他引:3
人工合成了朝鲜蝮蛇(Agkistrodon cnliginosus)类凝血酶Calobin的编码序列。在设计引物时选择大肠杆菌和酵母茵的偏爱密码子,通过相互搭桥的方式,将全长为789bp的编码序列分成14个片段,每个片段长度为78个碱基左右,采用“核心模板法”并加以改进,通过4次PCR延伸反应,得到了全长基因。经扩增后回收目的片段,双酶切后连接到克隆载体,将得到的转化子酶切鉴定后,任意选择6个克隆进行双向测序,得到了全序列正确的3个克隆。本工作为类凝血酶在大肠杆菌和酵母系统中的高效表达奠定了基础,也为长度为700-900bp片段的合成提供了帮助。 相似文献
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蝮蛇类凝血酶基因的分析及表达研究 总被引:17,自引:1,他引:17
从蝮蛇(AgkistrodonhalysPalas)毒腺中抽提总RNA,经RTPCR扩增该基因,克隆后经全序列测定,蝮蛇类凝血酶palase的cDNA长708个核苷酸,即编码236个氨基酸;根据同源性,推测该类凝血酶palase的活性中心为His41、Asp86和Ser182;二硫键为Cys7Cys139、Cys26Cys42、Cys74Cys234、Cys118Cys188、Cys150Cys167和Cys178Cys203;该蝮蛇毒类凝血酶cDNA序列及推导的氨基酸序列均为首次报道。构建T7启动子控制下的palase的大肠杆菌表达质粒,IPTG诱导palase获得表达。 相似文献
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蕲蛇蛇毒中一个新的类凝血酶的分离纯化与表征 总被引:2,自引:0,他引:2
使用DEAE-Sephadex A-50、POROS 50HS及POROS 20PI等色谱分离技术,从蕲蛇粗毒中分离提纯得到1个具有凝血活力的组分,经SDS-PAGE和PAGE检测均为一条带,非还原条件下相对分子质量24.3kDa,还原条件下相对分子质量33.0kDa;其凝血活力为91.0NIH u/mg。该组分不具有激活因子ⅩⅢ的活性,肝素不影响该组分的凝血活性,EDTA部分抑制其活性,苯甲基磺酰氟(PMSF)则会产生不可逆抑制作用,该酶N-末端氨基酸序列为VIGGNGXDINEHRFLVAFF,经分析表明该酶是一种新的类凝血酶。 相似文献
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五步蛇毒中低分子量蛇毒类凝血酶的分离纯化 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 寻找五步蛇毒新的蛇毒类凝血酶组份。方法 用DEAE-Sepharose-Fast Flow(-FF),cm-Sepharose-FF纯化经常规化学提纯的五步蛇毒;以血凝活性和精氨酸酯酶活性(BAEE)检测酶活力;以SDS-PAGE电泳法测定分子量。结果 得到分子量为14000左右的电泳纯蛇毒类凝血酶组份。结论 五步蛇毒中含有低分子量蛇毒类凝血酶。 相似文献
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从长白蝮蛇(Agkistrodon halys Ussuriensis)毒腺中抽提总RNA,采用RT-PCR扩增其类凝血酶基因,经全序列测定,类凝血酶基因Ussurin全长为708个核苷酸,即编码236个氨基酸;根据同源性,推测它的活性中心为His^43,Asp^88和Ser^182;二硫键为Cys^7-Cys^141,Cys^28-Cys^44,Cys^76-Cys^234,Cys^120-Cys^188,Cys^152-Cys^167和Cys^178-Cys^203。该蛇毒类凝血酶cDNA序列及推导的氨基酸序列均为首次报道。 相似文献
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Purification and characterization of jararassin-I, A thrombin-like enzyme from Bothrops jararaca snake venom 总被引:1,自引:0,他引:1
Vieira DF Watanabe L Sant'ana CD Marcussi S Sampaio SV Soares AM Arni RK 《Acta biochimica et biophysica Sinica》2004,36(12):798-802
Snake venoms of the Viperidae family contain a numberof proteins that cause hemostatic disturbances. Enveno-mation of this family is characterized by hemorrhage,edema, local tissue damage, myonecrosis, fibrinolytic andkinin releasing activities [1]. In southeastern Brazil, theviper Bothrops jararaca (Viperidae) is responsible for 90%of snakebite accidents [2]. The enzymes that have proteolytic, coagulate andhemorraghic activities can activate or interfere withthe process of coagulation, and… 相似文献
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蛇毒类凝血酶calobin在毕赤酵母中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
蛇毒类凝血酶是临床上防治血栓栓塞性疾病的有效药物。参照朝鲜蝮蛇(Agkistrodon caliginosus,Korean Viper)类凝血酶calobin基因序列(GenBank AccessionNo.U32937.1),将人工合成的calobin基因克隆到酵母表达载体pPICZαA,于毕赤酵母中表达,得到了分子量约为32kD的重组calobin蛋白,经甲醇诱导培养,表达产物可获得3.5g/L的高表达量。重组蛋白经过阴离子交换柱Q-Sepharose Fast Flow和分子筛Sephacryl-S-100凝胶过滤层析等纯化步骤进行了初步纯化。纯化后的重组calobin可以在纤维蛋白原平板上形成水解圈,经SDS-PAGE实验显示,重组蛋白能水解纤维蛋白原的Aα链,产生一条约40kD左右的降解带。在实验中未能发现重组calobin对纤维蛋白原的凝固作用。 相似文献
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Sant'Ana CD Bernardes CP Izidoro LF Mazzi MV Soares SG Fuly AL Zingali RB Magro AJ Braz AS Fontes MR Stábeli RG Sampaio SV Soares AM 《Biochimie》2008,90(3):500-507
A thrombin-like enzyme, named BjussuSP-I, isolated from Bothrops jararacussu snake venom, is an acidic single-chain glycoprotein with M(r)=61,000, pI approximately 3.8 and 6% sugar. BjussuSP-I shows high proteolytic activity upon synthetic substrates, such as S-2238 and S-2288. It also shows procoagulant and kallikrein-like activity, but is unable to act on platelets and plasmin. These activities are inhibited by specific inhibitors of this class of enzymes. The complete cDNA sequence of BjussuSP-I with 696bp encodes open reading frames of 232 amino acid residues, which conserve the common domains of thrombin-like serine proteases. BjussuSP-I shows a high structural homology with other thrombin-like enzymes from snake venoms where common amino acid residues are identified as those corresponding to the catalytic site and subsites S1, S2 and S3 already reported. In this study, we also demonstrated the importance of N-linked glycans to improve thrombin-like activity of BjussuSP-I toxin. 相似文献
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Nget Hong Tan 《Comparative biochemistry and physiology. Toxicology & pharmacology : CBP》2010,151(1):131-136
A thrombin-like enzyme, purpurase, was purified from the Cryptelytrops purpureomaculatus (mangrove pit viper) venom using high performance ion-exchange and gel filtration chromatography. The purified sample (termed purpurase) yielded a homogeneous band in SDS-polyacrylamide gel electrophoresis with a molecular weight of 35,000. The N-terminal sequence of purpurase was determined to be VVGGDECNINDHRSLVRIF and is homologous to many other venom thrombin-like enzymes. Purpurase exhibits both arginine ester hydrolase and amidase activities. Kinetic studies using tripeptide chromogenic anilide substrates showed that purpurase is not fastidious towards its substrate. The clotting times of fibrinogen by purpurase were concentration dependent, with optimum clotting activity at 3 mg fibronogen/mL. The clotting activity by purpurase was in the following decreasing order: cat fibrinogen > human fibrinogen > dog fibrinogen > goat fibrinogen >> rabbit fibrinogen. Reversed-phase HPLC analysis of the products of action of purpurase on bovine fibrinogen showed that only fibrinopeptide A was released. Indirect ELISA studies showed that anti-purpurase cross-reacted strongly with venoms of most crotalid venoms, indicating the snake venom thrombin-like enzymes generally possess similar epitopes. In the more specific double-sandwich ELISA, however, anti-purpurase cross-reacted only with venoms of certain species of the Trimeresurus complex, and the results support the recent proposed taxonomy changes concerning the Trimeresurus complex. 相似文献
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Expression of gloshedobin,a thrombin-like enzyme from the venom of Gloydius shedaoensis,in Escherichia coli 总被引:2,自引:0,他引:2
Gloshedobin, a thrombin-like enzyme from the venom of Gloydius shedaoensis, was expressed in Escherichia coli using expression vector pET-32a(+). The gene was expressed under T7 promotor with a fusion partner of Thx.Tag and a 6xHis.Tag at its 5 terminal. After induction by IPTG for 6 h, the recombinant enzyme was expressed in the cytoplasm. Expression at 25°C gave twice the amount of recombinant gloshedobin in cytoplasm than at 37°C. 相似文献
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蕲蛇酶对动物实验性血栓的防栓和溶栓作用 总被引:12,自引:1,他引:12
采用大鼠颈动脉-颈外静脉回路循环形成的血小板性动脉血栓,用兔脑粉浸出液诱导的大鼠下腔静脉血栓以及用凝血酶诱导的兔耳缘静脉血栓,作为实验性动脉及静脉血栓模型,并分别用阿斯匹林和尿激酶作为阳性对照药,以观察蕲蛇酶对血栓形成的影响。不同剂量的蕲蛇酶(600,300和150μg/kgiv)能使大鼠动脉和静脉血栓形成减少,并呈量效关系。蕲蛇酶对家兔耳缘静脉血栓形成亦表现抑制作用并促进血栓消褪。300和600μg/kg对家兔已形成的动脉和静脉血栓,能促使消褪,提示蕲蛇酶亦有溶栓作用 相似文献