胰腺癌细胞中5-脂氧合酶mRNA和蛋白的表达

胰腺癌预后差,早期诊断困难,发病率于近年来逐步上升,且传统治疗效果不理想.因此,深入研究胰腺癌的发病机制对探索更为有效的预防、诊断和治疗方法具有重要意义.近年来研究结果表明,5-脂氧合酶(5-lipoxygenase, 5-LOX)代谢途径与胰腺癌的发生和发展关系密切.为此,我们应用RT-PCR和免疫组织(细胞)化学技术检测胰腺癌细胞株SW1990和Capan2中5-LOX的表达情况.     

5-脂氧合酶抑制剂齐留通对胰腺癌细胞SW1990的生长抑制作用

目的观察5-脂氧合酶(5-LOX)在胰腺癌细胞SW1990中蛋白、mRNA水平的表达,探讨5-LOX特异性抑制剂齐留通对胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响及可能机制。方法2003-05-10—2004-05-25,南通大学附属医院消化实验室采用半定量反转录-聚和酶链反应(RT-PCR)法和免疫细胞化学方法检测5-LOX在胰腺癌细胞SW1990中的表达,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪检测齐留通对细胞的生长抑制作用。结果胰腺癌细胞SW1990中5-LOXmRNA及蛋白表达阳性,齐留通明显抑制胰腺癌细胞生长,并呈时间、浓度依赖性。结论5-LOX特异性抑制剂齐留通对胰腺癌细胞有显著的生长抑制作用,为胰腺癌的防治提供了一个新的实验依据。     

雷公藤内酯醇对5-LOX代谢通路和胰腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TL)通过抑制5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)代谢通路对胰腺癌细胞生长增殖及凋亡的影响.方法:台盼蓝染色检测TL对胰腺癌细胞PANC-1、ASPC-1和SW1990的杀伤作用;流式细胞术分析凋亡率;Real-time PCR和Western blot检测TL对5-LOX表达的影响;ELISA检测5-LOX下游产物LTB4的含量.构建5-LOX表达质粒,筛选稳定转染的Sw1990细胞株(SW1990/5-LoX),western blot检测野生型、转染空质粒、转染5-LOX基因的SW1990细胞5-LOX蛋白表达水平,并检测胰腺癌细胞高表达5-LOX对TL诱导凋亡的影响.结果:TL能诱导胰腺癌细胞凋亡,TL 50 μg/L作用24 h后活细胞比例为PANC-1 70.5%±6.8%,ASPC-1 61.2%±5.6%,SW1990 52.8%±5.3%,比对照组显著减少(P<0.05);凋亡细胞数12 h组与对照组相比,有差异(24.2±3.23vs 9.5±2.18,P<0.05).TL能显著抑制5-LOX表达及LTB4生成.稳定转染后,细胞内5-LOX蛋白表达量是Wt组的4倍左右,培养上清中LTB4表达水平也显著高于Wt组(P<0.01).过表达5-LOX使SW1990细胞增强了对TL诱导凋亡的抵抗作用,细胞死亡和凋亡率均明显低于对照组(P<0.01或0.05).结论:TL可以在体外诱导胰腺癌细胞增殖抑制和细胞凋亡,该效应与TL抑制5-LOX代谢通路的活性可能有直接关系,提示TL可能开发成临床治疗胰腺癌的有效药物.     

5-脂氧合酶抑制TNF-α诱导的胰腺癌细胞凋亡

目的:检测胰腺癌细胞中5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)及其代谢产物的表达情况,分析高表达5-LOX及LTB4对胰腺癌细胞生长凋亡的影响.方法:体外培养人胰腺癌细胞株ASPC-1,PANC-1和SW1990,并构建5-LOX基因稳定转染细胞株.用RT-PCR和Western blot检测细胞5-LOX mRNA和蛋白的表达,ELISA检测细胞培养上清中LTB4的含量,采用流式细胞仪、Annexin V/PI双染法检测TNF-α诱导细胞的细胞凋亡.结果:三种胰腺癌细胞株均表达5-LOX mRNA和蛋白,细胞上清中也都检测到一定量LTB4分泌.5-LOX基因稳定转染细胞株表达5-LOX和LTB4的水平上升.TNF-α(20μg/L)处理野生型SW1990细胞,12和24 h后凋亡率分别为25.4%±3.65%和43.5%±5.23%,但该效应在高表达5-LOX的细胞株中明显减弱,分别为13.2%±2.01%和21.7%±3.65%.在野生型SW1990细胞培养中加入外源性LTB4(10 nmol/L)能抑制TNF-α诱导的细胞凋亡,野生型与处理组细胞24 h后凋亡率有显著性差异(47.6%±5.32%vs 18.5%±5.69%,P<0.01).用LTB4受体阻断剂处理5-LOX高表达细胞株,能恢复其对凋亡诱导的敏感性.结论:胰腺癌细胞均能表达5-LOX并产生LTB4,高表达5-LOX能抑制TNF-α诱导的胰腺癌细胞凋亡.     

5-脂氧合酶抑制TNF-α诱导的胰腺癌细胞凋亡

目的: 检测胰腺癌细胞中5-脂氧合酶(5-lipoxygenase, 5-LOX)及其代谢产物的表达情况, 分析高表达5-LOX及LTB4对胰腺癌细胞生长凋亡的影响. 方法: 体外培养人胰腺癌细胞株ASPC-1, PANC-1和SW1990, 并构建5-LOX基因稳定转染细胞株. 用RT-PCR和Western blot检测细胞5-LOX mRNA和蛋白的表达, ELISA检测细胞培养上清中LTB4的含量, 采用流式细胞仪、Annexin V/PI双染法检测TNF-alpha诱导细胞的细胞凋亡. 结果: 三种胰腺癌细胞株均表达5-LOX mRNA和蛋白, 细胞上清中也都检测到一定量LTB4分泌. 5-LOX基因稳定转染细胞株表达5-LOX和LTB4的水平上升. TNF-alpha(20 mug/L)处理野生型SW1990细胞, 12和24 h后凋亡率分别为25.4%±3.65%和43.5%±5.23%, 但该效应在高表达5-LOX的细胞株中明显减弱, 分别为13.2%±2.01%和21.7%±3.65%. 在野生型SW1990细胞培养中加入外源性LTB4(10 nmol/L)能抑制TNF-alpha诱导的细胞凋亡, 野生型与处理组细胞24 h后凋亡率有显著性差异(47.6%±5.32% vs 18.5%±5.69%, P<0.01). 用LTB4受体阻断剂处理5-LOX高表达细胞株, 能恢复其对凋亡诱导的敏感性. 结论: 胰腺癌细胞均能表达5-LOX并产生LTB4, 高表达5-LOX能抑制TNF-alpha诱导的胰腺癌细胞凋亡.     

12-脂氧合酶在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的 检测胰腺癌组织和胰腺癌细胞株SW1990和PANC1的12-脂氧合酶(12-lipooxygenase,12-LOX)表达,探讨其与胰腺癌临床病理参数的关系.方法 分别应用免疫组化染色、RT-PCR和蛋白质印迹法检测胰腺癌组织、癌旁正常胰腺组织及胰腺癌细胞株SW1990和PANC1中12-LOX mRNA和蛋白的表达.分析胰腺癌组织12-LOX表达与临床病理参数的相关性.结果 30例胰腺癌组织12-LOX表达阴性8例,弱阳性7例,强阳性15例,总阳性率为73.3％.SW1990和PANC1细胞均表达12-LOX.阳性表达的胰腺癌组织及两株胰腺癌细胞株均表达12-LOX mRNA,而癌旁正常胰腺组织不表达12-LOX mRNA及蛋白.胰腺癌组织12-LOX强阳性表达与肿瘤TNM分期、肿瘤病理分级和淋巴结转移相关(P＜0.05),而与患者年龄、性别无关.结论 12-LOX在胰腺癌中表达上调,与胰腺癌的恶性生物学行为有关.     

5-脂氧合酶基因沉默后裸鼠胰腺癌移植瘤相关基因的变化

目前认为,5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)代谢途径异常是促进多种肿瘤发生、发展的重要原因之一.其机制为促进细胞过度增殖、抑制凋亡;促进恶性肿瘤血管生成;提高恶性肿瘤发生及转移的潜能、增加肿瘤细胞的侵袭力;抑制5-LOX能使多种恶性肿瘤细胞增殖减低并诱导细胞凋亡[1].本实验利用基因芯片检测靶向5-LOX的shRNA真核表达载体导入SW1990细胞形成的裸鼠皮下移植瘤内并联合雷公藤内酯醇(TL)治疗后移植瘤组织基因表达谱的变化,探讨沉默5-LOX基因表达治疗胰腺癌的应用价值.     

雷公藤内酯醇诱导胰腺癌细胞凋亡及对5-脂氧合酶和凋亡基因表达的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇(TL)在胰腺癌化学预防和治疗中的应用价值.方法 采用人胰腺癌细胞株SW1990作为研究对象,MTT法和吖啶橙(AO)染色分别检测SW1990细胞的增殖和凋亡,采用半定量RT-PCR法检测5-脂氧合酶(5-LOX) mRNA、bcl-2 mRNA和bax mRNA的表达.结果 10 μg/ml的TL对SW1990细胞生长的抑制率达30%以上,0.1 μg/ml TL处理24 h后,SW1990细胞凋亡指数达38.5%,显著高于对照组的14.97%.5-LOX、bcl-2、bax mRNA表达从0.7160 ± 0.0251,0.2446 ± 0.0311和0.0260 ± 0.0065分别变化为0.2400 ± 0.0316,0.0700 ± 0.0158和0.0700 ± 0.0158.结论 TL能抑制胰腺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,其凋亡机制可能与下调5-LOX mRNA和bcl-2 mRNA、上调bax mRNA基因表达有关.     

脂氧合酶对胰腺癌细胞增殖和凋亡的调节作用

目的观察5-脂氧合酶（LOX）及12-LOX在人胰腺癌中的表达，并初步探讨LOX的作用底物——多不饱和脂肪酸（PUFA）及LOX抑制剂对胰腺癌细胞增殖及凋亡的调节作用。方法用免疫组织（细胞）化学、逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法研究5-LOX及12-LOX在胰腺癌组织和细胞株SW1990中的表达，用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法及溴脱氧尿嘧啶（BrdU）标记法研究不饱和脂肪酸包括花生四烯酸（AA）、二十二碳六烯酸（DHA）和二十碳五烯酸（EPA）以及5-LOX抑制剂MK-886和12-LOX抑制剂Baicalein对SW1990细胞增殖的影响；并用末端脱氧核苷酰转移酶介导的d-UTP-生物素缺口末端标记法（TUNEL）及流式细胞术方法研究上述物质对SW1990细胞凋亡的影响。结果5-LOX及12-LOX在胰腺癌组织和SW1990人胰腺癌细胞呈高表达，显著高于人正常胰腺组织对照。AA促进胰腺癌细胞株SW1990的增殖，且呈剂量依赖性；而DHA及EPA抑制SW1990细胞增殖，均呈剂量依赖性，DHA及EPA尚可促进SW1990细胞凋亡。MK-886及Baicalein均能抑制胰腺癌细胞株SW1990的体外增殖，并呈剂量依赖性，两者均可促进SW1990细胞凋亡，作用24h后凋亡细胞比例增高。结论5-LOX及12-LOX在胰腺癌中表达上调，PUFA对胰腺癌细胞增殖与凋亡存在调节作用，并且不同脂肪酸作用存在差异。从促进胰腺癌细胞增殖，而DHA及EPA抑制其增殖，促进其凋亡。LOX抑制剂体外可抑制胰腺癌细胞增殖，并诱导细胞凋亡。LOX可能是胰腺癌生物化学治疗的新靶点。     

超声内镜在胰腺癌诊治中的应用进展

超声内镜(endoscopic ultrasound,EUS)技术发展迅猛,特别是超声内镜下介入性诊断和治疗是目前该技术的发展方向之一,由于其对胰腺实质及胰管的良好显示,现在越来越多地应用于胰腺疾病尤其是胰腺癌的诊断和治疗。现就近年来超声内镜在胰腺癌诊治中的应用进展作一综述。     

5-脂氧合酶特异性抑制剂对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

流行病学和动物研究表明，胰腺癌的发生发展与亚油酸、花生四烯酸（AA）等多聚不饱和脂肪酸的摄人有关。5-脂氧合酶（5-lipoxygenase，5-LOX）是催化AA转化为5-羟二十碳四烯酸（5-HETE）和白三烯（Ⅱ）的关键酶。齐留通（zileuton）其化学名为N-[1-（苯并[b]噻吩基）-2-乙基]-N-羟基，通过抑制5-LOX活性而抑制AA转化为LTB4，是特异性5-LOX抑制剂。我们应用齐留通阻断5-LOX代谢途径，研究对胰腺癌细胞SW1990凋亡及凋亡相关基因bcl-2 mRNA和bax mRNA的影响，从而为胰腺癌的治疗寻找一种新的有效途径。     

齐留通在急性坏死性胰腺炎腺泡细胞凋亡中的作用

5-脂氧合酶(5-Lipoxygenase,5-LOX)是脂肪酸氧化代谢的重要酶类,近年的大量研究已经证实,5-LOX在许多肿瘤的发生和发展中都起到重要作用.而关于急性胰腺炎(AP)时,5-LOX在胰腺腺泡细胞凋亡中作用的研究却鲜有报道.本文旨在探讨5-LOX抑制剂与AP腺泡细胞凋亡的关系和意义.     

5-脂氧合酶抑制剂齐留通对胰腺癌细胞SW1990的生长抑制作用

目的 观察5-脂氧合酶（5-LOX）在胰腺癌细胞SW1990中蛋白、mRNA水平的表达，探讨5-LOX特异性抑制剂齐留通对胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响及可能机制。方法2003—05—10-2004—05—25，南通大学附属医院消化实验室采用半定量反转录-聚和酶链反应（RT—PCR）法和免疫细胞化学方法检测5-LOX在胰腺癌细胞SW1990中的表达，采用四甲基偶氮唑盐（M1Tr）法和流式细胞仪检测齐留通对细胞的生长抑制作用。结果胰腺癌细胞SW1990中5-LOXmRNA及蛋白表达阳性，齐留通明显抑制胰腺癌细胞生长，并呈时间、浓度依赖性。结论 5-LOX特异性抑制剂齐留通对胰腺癌细胞有显著的生长抑制作用，为胰腺癌的防治提供了一个新的实验依据。     

雷公藤内酯醇诱导胰腺癌细胞凋亡及对5-脂氧合酶和凋亡基因表达的影响

目的探讨雷公藤内酯醇(TL)在胰腺癌化学预防和治疗中的应用价值。方法采用人胰腺癌细胞株SW1990作为研究对象,MTT法和吖啶橙(AO)染色分别检测SW1990细胞的增殖和凋亡,采用半定量RT-PCR法检测5-脂氧合酶(5-LOX)mRNA、bcl-2 mRNA和bax mRNA的表达。结果10μg/ml的TL对SW1990细胞生长的抑制率达30%以上,0.1μg/mlTL处理24h后,SW1990细胞凋亡指数达38.5%,显著高于对照组的14.97%。5-LOX、bcl-2、bax mRNA表达从0.7160±0.0251,0.2446±0.0311和0.0260±0.0065分别变化为0.2400±0.0316,0.0700±0.0158和0.0700±0.0158。结论TL能抑制胰腺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,其凋亡机制可能与下调5-LOXmRNA和bcl-2mRNA、上调bax mRNA基因表达有关。     

5-LOX基因沉默对人胰腺癌细胞SW1990裸鼠移植瘤生长的影响

目的 观察裸鼠的人胰腺癌细胞SW1990移植瘤内注射靶向5-脂氧合酶(5-LOX)的短发夹RNA(shRNA)对移植瘤以及瘤组织5-LOX和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其临床应用价值.方法 将胰腺癌细胞SW1990接种至裸鼠背部皮下,待移植瘤生长至100 mm3左右后随机分为shRNA1组、shRNA2组、阴性对照shNC组和脂质体组.每组6只,雌雄各半.实验组瘤内注射相应shRNA 50μg/次,1次/3 d,共7次.对照组瘤内注射脂质体液100 μl/只.每3 d测体重及移植瘤长、短径一次.第29天处死动物,取肿瘤组织,称瘤重.应用免疫组化和RT-PCR法检测移植瘤组织5-LOX、VEGF的mRNA和蛋白的表达.结果 shRNA1组、shRNA2组、shNC组和脂质体组的瘤重分别为(32.5±19.0)mg、(30.1±14.1)mg、(50.5±15.6)mg和(71.7±25.4)mg,shRNA1组、shRNA2组、shNC组抑瘤率分别为54.7%、58.0%和29.5%,shRNA1组、shRNA2组较shNC组和脂质体组相差显著(P值均＜0.05).shRNA1组和shRNA2组移植瘤的5-LOX、VEGF mRNA和蛋白的表达较shNC组和脂质体组均显著减少,但两治疗组之间未见明显差异,shNC组和脂质体组之间也无明显差异.结论 靶向5-LOX的RNA干扰治疗通过直接抑制5-LOX的表达、间接抑制VEGF的表达而抑制SW1990裸鼠移植瘤的生长.     

胰腺癌的蛋白质组学研究进展

胰腺癌高居于癌症致死病的第四位,诊断后5年生存率小于5%,需要寻找新型生物标志物来提高早期诊断,并发现有效的治疗新靶点。蛋白质组学技术的发展提供了更好的分辨率和灵敏度,有助于在蛋白水平上更好地理解肿瘤发病机制,进而提高早期诊断和治疗的能力。近来在胰腺组织、胰液、血清、血浆、细胞株的蛋白质组学诸多研究鉴定了胰腺癌的差异表达蛋白,并发现新的潜在诊断生物标志物。本文就近年来胰腺癌的蛋白质组学研究结果及局限性做一综述。     

靶向5-LOX的siRNA诱导胰腺癌细胞的凋亡

目的:采用RNA干扰技术(siRNA)阻断5-LOX基因的表达,观察其抑制人胰腺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用.方法:构建靶向5-LOx的siRNA质粒表达载体,采用Lipofectamine-2000转染人胰腺癌细胞株SW1990,采用RT-PCR检测RNA干扰后5-LOX mRNA表达,MTT法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:靶向5-LOX序列特异性的三条siRNA(组1、组2、组3)可以有效地抑制SW1990细胞5-LOX基因表达,其表达抑制率分别为19.6%±1.9%、55.4%±2.6%和55.2%±2.7%.转染靶向5-LOX siRNA的三个质粒表达载体可以显著抑制SW1990细胞的增殖, 细胞接种24 h后,三组增殖抑制率分别为5.37%±1.19%、11.63%±1.25%和13.67%±1.04%:48 h后其增殖抑制率分别为16.13%±1.5%、26.63%±1.22%和25.47%±1.67%, 各siRNA组增殖抑制率高于空白组和阴性对照组(均P<0.05),转染后24 h和48 h三组细胞凋亡率分别为5.56%±1.05%、11.45%±1.44%、12.13%±1.36%和7.37%±1.23%、18.75%±1.5%和22.02%±1.45%,均高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05).结论:所构建的靶向5-LOX的siRNA质粒表达载体可以有效阻断SW1990细胞5-LOX基因表达,显著地抑制SW1990细胞增殖,并在一定程度上诱导其凋亡.     

循环microRNA在胰腺癌中的临床价值研究进展

循环microRNA(miRNA)是可以在血液或体液中稳定存在的miRNA。研究表明,循环miRNA在胰腺癌患者中表达失调并与患者预后、化疗敏感性等因素相关,有望作为胰腺癌患者的新型肿瘤标志物。本文就近年来不同循环miRNA在胰腺癌患者中的表达情况及其在诊断和治疗方面的研究进展作一概述。     

胰腺癌早期诊断与治疗的研究进展

胰腺癌的发病率不断升高,早期诊断困难,临床治疗效果差,是目前预后最差的恶性肿瘤. 遗传因素和环境因素在胰腺癌的发生中具有重要作用,胰腺上皮内瘤变(pancreatic intraepithelial neoplasia,PanIN) 是胰腺癌的癌前病变. CT 、MRI 、超声内镜、ERCP 和血清标志物检测为胰腺癌诊断提供了有效手段,手术与辅助化疗、放疗以及分子靶向治疗等综合治疗有望改善胰腺癌患者的预后. 建立灵敏高效的预警和早期诊断体系,加强多学科合作开展综合治疗,是提高胰腺癌临床诊疗水平的主要途径.     

2011版《NCCN胰腺癌临床实践指南》中若干问题的探讨

《NCCN胰腺癌临床实践指南》2011中国版已修订完成,新版指南在原有内容基础上结合近年来临床研究进展,在胰腺癌的诊断和治疗路线、原则、循证医学证据上进行了细微更新,并在理念上有了新的阐述,本文就更新中的相关问题进行探讨。《NCCN胰腺癌临床实践指南》2011版中针对胰腺癌的诊断提出了多学科评估的理念,治疗上重视肿瘤可切除性判定标准,化疗中对于体力状态好的患者可选用FOLFIRINOX方案,强调了吉西他滨和5－氟尿嘧啶（5一－U）均作为胰腺癌化疗的Ｉ类证据。